Echinacozidul ameliorează leziunile hepatice diabetice

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *

ABSTRACT

Obiective:Echinacozidul (ECH) este un compus natural extras din tulpina plantei Cistanche deserticola, are proprietăți biologice semnificative, inclusiv proprietăți antioxidante, antiinflamatorii, neuroprotectoare, antitumorale, hepatoprotectoare și imunomodulatoare. În acest studiu, ne-am propus să explorăm efectele și mecanismele protectoare ale ECH asupra leziunilor hepatice diabetice la șoarecii DB/DB.

Principalele metode:În general, 6-șoarecii DB/DB de o săptămână (n=20) au fost alocați aleatoriu în 2 grupuri: grup model diabetic (grup DB/DB, administrare intragastrică de soluție salină normală, n=10 ) și grupul tratat cu ECH (DB/DB plus grupul ECH, n=10). În plus, grupul de control normal a inclus șoareci db/m în vârstă de 6-săptămână (grup db/m, administrare intragastrică de soluție salină normală, n=10). ECH a fost administrat o dată pe zi timp de 10 săptămâni. Greutatea și glicemia a jeun (FBG) au fost măsurate la două săptămâni. Colorația HE și colorația Oil O au fost utilizate pentru a evalua modificările patologice ale țesutului hepatic și, respectiv, acumularea de lipide. Colorarea prin imunofluorescență, Western blot și analiza RT-PCR au fost utilizate pentru a detecta expresia componentelor axei de semnalizare AMPK/SIRT1.

Descoperiri cheie:Rezultatele au arătat că administrarea de echinacozidă timp de 10 săptămâni ar putea îmbunătăți semnificativ leziunile hepatice și rezistența la insulină la șoarecii DB/DB (p < 0.01).="" de="" asemenea,="" tratamentul="" cu="" echinacozide="" a="" ajutat="" la="" reducerea="" lipidelor="" din="" sânge="" și="" a="" glicemiei="" (p="">< 0,01).="" în="" plus,="" semnalizarea="" ampk/sirt1="" activată="" de="" ech,="" receptorul="" activat="" de="" proliferator="" peroxizomal="" activat="" coactivator="" gamma="" 1="" alfa="" (pgc-1),="" receptor="" activat="" de="" proliferator="" (ppar),="" carnitin="" palmitoiltransferaza-1a="" (cpt1a)="" la="" șoarecii="" db/db="" (p=""><>

Semnificaţie:Efectul ECH poate fi provocat de activarea căii hepatice AMPK/SIRT1 și a factorilor săi din aval pentru a îmbunătăți adipozitatea, rezistența la insulină și dislipidemia.

cistanche redditse îmbunătățeșteadipozitate, rezistență la insulină și dislipidemie.

1. Introducere

Diabetul zaharat de tip 2 (T2DM) este o boală metabolică cronică și o amenințare gravă pentru sănătatea fizică și psihică a omului. Poate provoca leziuni de organe multiple, inclusiv leziuni hepatice. Boala ficatului gras non-alcoolic (NAFLD) este cea mai frecventă leziune hepatică [1,2]. Acumularea excesivă de lipide în hepatocite perturbă procesul metabolic și provoacă inflamație, fibroză hepatică și chiar cancer hepatic [3,4]. Patogenia bolii rămâne neclară. Deși există o prevalență ridicată a complicațiilor hepatice semnificative clinic la pacienții cu DZ2, acestea sunt adesea trecute cu vederea în cadrul tratamentului. Agenții utilizați în prezent pentru tratarea diabetului includ metformină, sulfoniluree, tiazolidindionă (TZD) și inhibitori de dipeptidil peptidază-4 (DPP-4). Cu toate acestea, majoritatea acestor agenți provoacă disfuncție hepatică și nu sunt recomandați la pacienții cu insuficiență hepatică, ceea ce implică necesitatea de a investiga agenți cu eficiență terapeutică și un profil scăzut de evenimente adverse. Studiile au demonstrat proprietăți antioxidante, antiinflamatorii, antitumorale, hepatoprotectoare și imunomodulatoare ale echinacozidei (ECH), componenta principală a Cistanche deserticola [5]. Mai mult, calea protein kinazei activate de AMP (AMPK) a fost recunoscută ca principalul comutator al metabolismului energetic celular asociat cu reglarea lipidelor în ficat și o țintă terapeutică pentru NAFLD. AMPK îmbunătățește activitatea proteinei regulatoare de tăcere-1(SIRT1) la mamifere prin creșterea nivelurilor celulare de NAD plus, rezultând deacetilarea și modularea activității țintelor SIRT1 din aval care includ receptorul-coactivator 1 activat de proliferatorul peroxizomal (PGC{). {20}} ) [6]. Datorită multor funcții pozitive atât în ​​boala ficatului gras alcoolic (AFLD) cât și în NAFLD, SIRT1 a fost studiat pe scară largă în familia SIRT. Proteina este un regulator cheie al metabolismului lipidelor și glucozei și poate îmbunătăți sensibilitatea la insulină a ficatului și a altor țesuturi și poate reduce steatoza hepatică [7]. PPAR- aparține PPAR-urilor, o subfamilie de receptori hormonali nucleari, PPAR- îmbunătățește metabolismul lipidelor prin beta-oxidarea mitocondrială și a peroxidazei acizilor grași, mediată prin CPT1A. Șoarecii Db/DB sunt șoareci obezi spontani cu diabet zaharat de tip 2. Pe măsură ce acești șoareci cresc, poate exista o manifestare treptată a afecțiunilor diabetice, cum ar fi bulimia, obezitatea, hiperglicemia evidentă, hiperlipidemia și rezistența la insulină [8]. Patogenia este similară cu cea observată la pacienții cu DZ2. Acest studiu a emis ipoteza efectului terapeutic al ECH asupra leziunii hepatice induse de T2DM și medierea acestui efect prin activarea căii AMPK/SIRT1 și a efectorilor săi din aval. Șoarecii DB/DB au fost utilizați ca model de leziune hepatică T2DM și ECH a fost administrat intragastric.

2. Materiale și metode

2.1. Animale experimentale

Ficatul șoarecilor DB/DB diabetici de tip 2 a fost considerat model pentru leziuni hepatice spontane T2DM, șoarecii db/m au fost utilizați ca grup de control, iar șoarecii diabetici db/db au fost utilizați ca grup model și grupul tratat cu ECH (masculi , 6 săptămâni, grad SPF) cu 10 șoareci în fiecare grup. Toți șoarecii au fost achiziționați de la Universitatea Nanjing (Institutul de Biomedicină Nanjing, China; Certificat de producție animală nr.: SCKK (Dum.) 2015–0001). Animalele (n=5 per cușcă) au fost găzduite în camera centrală pentru animale de laborator a Spitalului Renmin al Universității din Wuhan (SPF) în condiții standard de temperatură (22 ◦C ± 2 ◦C), umiditate relativă (60 la sută) , și ciclu lumină/întuneric (12 h/12 ​​h), cu acces ad libitum la apă potabilă și furaje în perioada experimentală de 10 săptămâni. Experimentele au fost efectuate conform ghidurilor de etică experimentală a animalelor recomandate de Spitalul Renmin al Universității Wuhan.

2.2. Principalele instrumente și reactivi

Glucometru și benzi de testare pentru glicemie OneTouch Ultra (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); anticorp monoclonal anti-uman de iepure SIRT-1 (#9475; Compania CST din Statele Unite); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934) și GAPDH (Ab37168; toate de la Abcam Company); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); Kit de detectare a concentrației proteinei BCA (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); Kit de preparare a gelului SDS-PAGE (Google Biotechnology Co., Ltd.); și trusa de transcripție inversă RT-PCR (Takara, Japonia) au fost utilizate pentru experimente.

2.3. Gruparea și administrarea animalelor

Înainte de a începe experimentul, șoarecii în vârstă de {{0}}săptămâni au fost puși în carantină timp de 1 săptămână și hrăniți adaptiv timp de 1 săptămână. Șoarecii Db/DB au fost numerotați aleatoriu și alocați fie grupului model diabetic (grup db/db, n=10), fie grupului tratat cu echinacozidă (db/db plus grupul ECH, n =10) și 10 db/m șoareci au fost alocați grupului de control normal (grup DB/m, n=10). La vârsta de 8 săptămâni, șoarecilor din grupul de control normal și model diabetic li s-a administrat intragastric soluție salină normală (0,05 ml/10 g), iar șoarecilor din grupul tratați cu ECH li s-a administrat intragastric 300 mg/kg/zi ECH. În această perioadă, șoarecilor li s-a permis accesul ad libitum la hrană și apă timp de 10 săptămâni.

2.4. Starea generală și glicemia a jeun

În timpul experimentului au fost observate condițiile de sănătate, consumul de alimente și apă de băut și strălucirea blănii. Începând din prima săptămână a experimentului, greutatea corporală a șoarecilor a fost măsurată la fiecare 2 săptămâni. Probele de sânge pentru a testa glicemia a jeun au fost obținute din vena cozii. După 10-săptămâna de tratament ECH, a fost efectuat testul oral de toleranță la glucoză (OGTT). După postul peste noapte, șoarecilor li s-a administrat glucoză (2 g/kg greutate corporală), iar concentrațiile de glucoză din sânge au fost evaluate înainte (0 min.) și la 15, 30, 60 și 120 de minute după administrarea de glucoză. Aria de sub curbă (AUC) a fost determinată utilizând GraphPad Prism 7.0.

2.5. Colectie de mostre

După 10 săptămâni de intervenție, hrana, dar nu apa a fost reținută timp de 12 ore, animalele au fost anesteziate pentru a obține probe de sânge din plexul retro-orbital. Serul din sângele colectat a fost separat rapid și depozitat la -80 ◦C pentru determinarea indicelui biochimic. După obținerea probelor de sânge, șoarecii au fost uciși și perfuzați cu soluție salină normală. Ficatul a fost disecat și cântărit. Indicele hepatic (LI) a fost calculat folosind următoarea formulă: LI=[greutatea ficatului (g)/greutatea corporală (g)] × 100 la sută. O parte din țesutul hepatic proaspăt a fost reținută pentru analiza patologică, iar restul țesutului hepatic a fost plasat în azot lichid timp de 1 oră și apoi depozitat la -80 ◦ C pentru detectarea ulterioară a proteinei și reacția cantitativă în lanț a polimerazei în timp real ( PCR).

experiență cistancheextrage

2.6. Examenul histopatologic al ficatului

Țesutul hepatic proaspăt a fost separat rapid și o secțiune a fost fixată în paraformaldehidă 4% timp de 24 de ore, urmată de deshidratare și încorporare în parafină. Secțiunile au fost deparafinate cu xilen și rehidratate prin gradient de etanol în apă. Nucleul și citoplasma au fost colorate cu hematoxilină și eozină (HE) și etanșate cu gumă neutră după deshidratare. O altă parte a țesutului a folosit felii încorporate de compus cu temperatură de tăiere optimă (OTC) pentru colorarea Oil Red-O.

2.7. Detectarea indicilor biochimici ai serului și țesutului hepatic

Probele de ser au fost trimise la Departamentul de Laborator al Spitalului Renmin al Universității Wuhan pentru analize biochimice automate. Indicii lipidici din sânge au inclus trigliceride (TG), colesterol total (TC), colesterol cu ​​lipoproteine ​​cu densitate mare (HDL-C), colesterol cu ​​lipoproteine ​​cu densitate joasă (LDL-C). Indicii funcției hepatice au inclus transaminaza glutamică piruvică (ALT) și transaminaza glutamică oxaloacetică (AST). Nivelurile de insulină a jeun (FINS) au fost determinate folosind trusa ELISA (Meimian Biological Inc. China). O curbă standard a fost construită pe baza concentrației probei standard și a densității optice (OD); concentrația probei a fost apoi calculată din curba standard. În final, indicele de sensibilitate la insulină (ISI) și indicele de rezistență la insulină (HOMA-IR) a fost calculat după cum urmează: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22,5.

2.8. Expresiile AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1, PPAR- și CPT1A în țesutul hepatic au fost detectate utilizând Western blot

Țesutul hepatic congelat a fost tăiat în secțiuni. Pentru extracția totală a proteinei, 1 mL lizat RIPA a fost adăugat într-o secțiune de 50 g și supus centrifugării la 13,000 rpm la 4 °C timp de 5 minute, urmat de o colectare a supernatantului. Concentrația de proteine ​​a fost determinată utilizând trusa de determinare a concentrației de proteine ​​BCA. Aproximativ 40 ug de proteină au fost prelevate din fiecare grup și transferate pe membrana de fluorură de poliviniliden (PVDF). Membranele au fost marcate cu anticorpii secundari indicați la temperatura camerei timp de 1 oră și dezvoltate. Au fost analizate valorile gri ale fiecărei benzi de proteine ​​și GAPDH a fost folosit ca referință internă pentru analiza semi-cantitativă.

2.9. Expresiile p-AMPK și SIRT1 în țesutul hepatic au fost detectate prin colorare prin imunofluorescență

Țesuturile hepatice au fost fixate în paraformaldehidă 4%, încorporate în parafină și apoi secţionate în felii de ficat groase de 10- μm. Adăugați 3% BSA timp de 30 de minute. Se incubează lamele cu anticorp primar peste noapte la 4 ◦C. Acoperiți țesutul obiectiv cu anticorp secundar, incubați la temperatura camerei timp de 50 de minute în condiții de întuneric. Se incubează apoi cu soluție DAPI la temperatura camerei timp de 10 minute, păstrată la loc întunecat. Se adaugă reactiv de stingere a fluorescenței spontane pentru a incuba timp de 5 minute. Detectarea prin microscopie și colectarea imaginilor prin microscopie fluorescentă.

2.10. Expresiile ARNm SIRT-1, PGC{-1, PPAR- și CPT1A în țesutul hepatic au fost detectate prin RT-PCR

A fost folosit aproximativ 100 mg de țesut hepatic stocat la -80 ◦C din fiecare grup. ARN total a fost extras folosind kitul Trizol; metoda de absorbție a ultravioletelor (UV) a fost utilizată pentru a determina calitatea ARN, iar acest ARN a fost apoi transcris invers în cADN. qPCR verde SYBR a fost rulat pe sistemul de detecție PCR în timp real Bio-Rad CFX96 Touch (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, SUA). Secvențele de primer ale SIRT-1, PGC-1, PPAR- și CPT1A au fost proiectate de software-ul Primer Premier5.0 și sintetizate de Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., cu gena menajeră GAPDH servind ca referință internă. Condițiile de amplificare au fost următoarele: pre denaturare la 95 ◦C, denaturare la 95 ◦C și recoacere la 60 ◦C (30 s), cu un total de 40 de cicluri. La sfârșitul reacției, specificitatea amplificării PCR a fost determinată prin analiza curbei de dizolvare, valoarea Ct a fost citită și expresia relativă a mARN-ului genei țintă a fost calculată prin metoda 2-ΔΔCt. Secvențele de primer sunt prezentate în tabelul 1.

2.11. metode statistice

Software-ul statistic SPSS22.0 a fost folosit pentru procesarea datelor și analiza statistică și GraphPad Prism7.0 pentru desen. Datele distribuite în mod normal sunt prezentate ca medie ± abatere standard (varianță x ± s). Comparația în perechi între grupuri a fost efectuată prin analiza de varianță cu un singur factor. Semnificația diferențelor dintre grupuri a fost identificată fie cu testul LSD (omogenitatea variațiilor) fie cu testul t Dunnett (neomogene) pentru comparații multiple. Dacă datele nu s-au conformat cu distribuția normală, au fost utilizate diferența mediană și quartile, precum și testul neparametric (testul Kruskal-Wallis). Valoarea AP a<0.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche beneficii masculinepentrurinichi

3. Rezultate

3.1. ECH îmbunătățește starea generală de sănătate și LI a șoarecilor db/db

Pe tot parcursul experimentului, șoarecii din grupul db/m au fost sănătoși și activi și au afișat strălucire a blănii. Șoarecii din grupul db/db au demonstrat consum excesiv de apă și hrană, obezitate, letargie și ghemuire și păr aspru și închis la culoare. În comparație cu șoarecii din grupul db/db, șoarecii din grupul db/db plus ECH au demonstrat condiții îmbunătățite în toate studiile. Mai mult, indicele lor de greutate corporală și hepatică a fost mai mic decât cel al șoarecilor din grupul model diabetic (P < 0.05)="" (tabelul="">

Tabelul 1 Primeri PCR cantitativi cu fluorescență RT.

Tabelul 2 Greutatea corporală, greutatea umedă a ficatului și indicele hepatic la șoarecii din fiecare grup.

3.2. ECH reduce glicemia a jeun și rezistența la insulină și crește toleranța la glucoză și sensibilitatea la insulină la șoarecii db/db

Pe măsură ce experimentul a progresat, comparativ cu grupul db/m, glicemia a jeun din grupul db/db a crescut semnificativ (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">

3.3. ECH ameliorează tulburarea structurală a ficatului și atenuează modificările patologice, cum ar fi acumularea de lipide la șoarecii db/db

Colorația HE a arătat că mărimea și morfologia hepatocitelor în grupul db/m au fost normale, iar structurile lobulilor hepatici și sinusoidelor au fost clare. A existat o degenerare extinsă a hepatocitelor în grupul db/db, volum crescut al hepatocitelor, dimensiune nucleară variată, necroză focală a celulelor și infiltrare a celulelor inflamatorii în zona portalului. În grupul db/db plus ECH, au existat o scădere semnificativă a picăturilor de lipide și a celulelor inflamatorii, leziunea celulelor necrotice a fost atenuată (Fig. 2A). Analiza microscopică a țesutului hepatic colorat cu O roșu ulei a evidențiat o aranjare ordonată a celulelor, fără picături de lipide sau modificări patologice, în grupul db/m. În grupul db/db, celulele aveau un aranjament dezordonat și un număr mare de particule de grăsime de diferite dimensiuni erau prezente în citoplasmă. Comparativ cu grupul db/db, numărul de picături de lipide din grupul db/db plus ECH a fost semnificativ mai mic, sugerând posibilul efect protector al ECH asupra ficatului (Fig. 2B, C).

Fig. 1. ECH a îmbunătățit toleranța la glucoză și a atenuat rezistența la insulină a șoarecilor db/db.

3.4. ECH îmbunătățește metabolismul lipidelor și funcția hepatică la șoarecii db/db

În comparație cu grupul db/m, nivelurile de lipide din sânge ale TC, TG și LDL au crescut semnificativ, iar HDL a scăzut semnificativ în grupul db/db (P <{{0}}.{{4} }1).="" cu="" toate="" acestea,="" nivelurile="" de="" tc,="" tg="" și="" ldl="" au="" scăzut,="" iar="" nivelul="" hdl="" a="" fost="" crescut="" în="" grupul="" db/db="" plus="" ech="" comparativ="" cu="" grupul="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (fig.="" 3a).="" comparativ="" cu="" grupul="" db/m,="" nivelurile="" alt="" și="" ast="" au="" fost="" semnificativ="" crescute="" în="" grupul="" db/db="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" nivelurile="" ast="" și="" alt="" au="" fost="" semnificativ="" mai="" mici="" în="" grupul="" db/db="" plus="" ech="" decât="" în="" ​​grupul="" db/db="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01)="" (fig.="" 3b,="">

Fig. 2. Tulburare structurală a țesutului hepatic atenuat ECH și acumulare de lipide la șoareci cu NAFLD.

3.5. Efectul ECH asupra activării căii AMPK/SIRT1 la șoareci de diferite grupuri

Conform rezultatelor Western blot, în comparație cu grupul db/m, nivelurile de proteine ​​p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR- și CPT1A din țesutul hepatic au fost semnificativ mai mici în grupul db/db ( P < 0.01).="" cu="" toate="" acestea,="" nivelurile="" de="" proteine="" ​​au="" fost="" semnificativ="" mai="" mari="" în="" grupul="" db/db="" plus="" ech="" decât="" în="" ​​grupul="" db/db="" (p=""><0,01) (fig.="" 4a,="" b).="" în="" plus,="" colorarea="" prin="" imunofluorescență="" a="" arătat="" că="" expresia="" p-ampk="" și="" sirt1="" a="" fost="" găsită="" în="" mod="" evident="" în="" țesutul="" hepatic="" al="" șoarecilor="" tratați="" cu="" ech="" decât="" grupul="" db/db="" (fig.="">

3.6. Efectul echinacozidei asupra expresiei mARN-ului căii SIRT1 în ficatul șoarecilor din diferite grupuri

Conform rezultatelor RT-PCR, nivelurile SIRT1, PGC-1, PPAR- și CPT1A au scăzut semnificativ în grupul db/db comparativ cu grupul db/m. Cu toate acestea, aceste niveluri au crescut semnificativ în grupul db/db plus ECH comparativ cu grupul db/db (Fig. 5).

Fig. 3. Indicii legați de ser la șoarecii din fiecare grup.

4. Discutie

Diabetul este o preocupare medicală majoră în lume, iar numărul persoanelor cu diabet este de așteptat să crească la aproximativ 592 de milioane până în 2035 [9]. Rata de prevalență a diabetului zaharat, predominant T2DM, în China, arată o tendință de creștere semnificativă [10,11]. Există o relație complexă între T2DM și boala hepatică, iar NAFLD, caracterizată prin depunerea excesivă de grăsime în ficat, este cea mai frecventă leziune hepatică cauzată de DZ2 și cea mai frecventă boală hepatică cronică din lume [12,13]. Cercetările clinice de testare genetică sugerează că gena asociată cu T2DM este asociată cu IMC crescut, hipercolesterolemie și HDL-C scăzut, care conferă un risc mai mare de NAFLD [14]. NAFLD este strâns legată de rezistența la insulină și dislipidemie și, prin urmare, este foarte răspândită la pacienții cu DZ2 și/sau obezitate. Deși mai mulți factori metabolici par a fi legați de dezvoltarea NAFLD, patogeneza acesteia rămâne în mare parte neclară și complexă [15]. Cistanche deserticola este o plantă parazită perenă care crește pe rădăcinile plantelor fixatoare de nisip. Conform Farmacopeei Chineze, Cistanche deserticola este folosită ca medicament tradițional pentru a trata bolile renale și infertilitatea [16,17]. În ultimii ani, studiile au confirmat că Cistanche deserticola poate inhiba semnificativ creșterea nivelului de glucoză din sânge și postprandial la șoarecii diabetici, poate îmbunătăți rezistența la insulină și dislipidemia și poate ajuta la pierderea în greutate [18]. Ca componentă principală a Cistanche deserticola, ECH este de așteptat să contribuie în continuare la îmbunătățirea leziunilor hepatice asociate cu DZ. Rezultatele noastre experimentale au arătat că obezitatea și diabetul ar putea provoca leziuni hepatice la șoareci, caracterizate prin creșteri semnificative ale nivelurilor serice de ALT și AST și modificări histopatologice tipice. ECH a redus semnificativ LI și glucoza din sânge, a scăzut TC, TG și nivelurile de LDL au crescut nivelul HDL și a îmbunătățit sensibilitatea la insulină. Examenul histopatologic a evidențiat o degenerare redusă a steatozei hepatocitelor și infiltrarea celulelor inflamatorii la șoarecii tratați cu ECH, confirmând că agentul poate îmbunătăți leziunile hepatice la șoarecii obezi, diabetici.

AMPK este o protein kinază foarte conservată, distribuită pe scară largă în organisme și este numită receptor de metabolism energetic. Joacă un rol în atenuarea stresului oxidativ, a inflamației, a proliferării și a apoptozei [19]. Activarea enzimei de către activatori indirecti atrage atenția științifică pentru a trata diabetul, obezitatea, cancerul și alte tulburări metabolice conexe [20,21]. Poate regla metabolismul lipidelor prin mai multe abordări, cum ar fi inhibarea sintezei acizilor grași și a trigliceridelor, inhibarea sintezei colesterolului și promovarea oxidării și descompunerii acizilor grași [22]. În ficat, AMPK reglează metabolismul lipidelor prin fosforilare.

Când raportul intracelular AMP-ATP crește, AMPK este activat, crescând p-AMPK/AMPK și reglarea în sus a expresiei SIRT1 prin creșterea nivelurilor celulare NAD plus [23,24]. S-a demonstrat recent că SIRT1, o deacetilază dependentă de NAD, este legată de patofiziologia NAFLD [25]. Enzima este implicată în diferite procese fiziologice celulare, cum ar fi homeostazia lipidelor și glucozei și sensibilitatea la insulină și este un regulator cheie al metabolismului [26]. Pacienții obezi, în special cei cu rezistență la insulină, diabet și NAFLD, au niveluri mai scăzute de SIRT1 [27,28]. Price și colab. au examinat rolul SIRT1 în prevenirea steatozei hepatice și au constatat că expresia SIRT1 este scăzută la pacienții cu NAFLD [29]. Alte studii au arătat că knockout-ul specific hepatocitelor a SIRT1 poate reduce oxidarea acizilor grași și poate induce steatoză și inflamație în ficat, în timp ce supraexprimarea SIRT1 poate îmbunătăți metabolismul lipidelor prin calea PGC-1 [30]. SIRT1 reglează activitatea PGC-1 și ambele sunt cruciale pentru menținerea homeostaziei energetice celulare. Prin urmare, SIRT1 și factorii din aval PGC-1 pot fi ținta cheie a leziunilor hepatice. Coactivatorul PGC este o proteină care se poate lega la factorii de transcripție sau la receptorii nucleari pentru a crește activitatea transcripțională [31]. Majoritatea factorilor de transcripție au nevoie de coactivatori, în special PPAR-, în principal în țesuturile oxidate, cum ar fi ficatul, miocardul și mușchiul scheletic. Poate activa transcripția genelor care promovează transportul și oxidarea acizilor grași, producția de cetone și gluconeogeneza [32,33]. CPT1A este o enzimă cheie limitatoare de viteză în oxidarea acizilor grași. Expresia sa este reglată de mecanisme transcripționale complexe, implicând mai mulți factori de transcripție și coactivatori, inclusiv SIRT1, PGC-1 și PPAR [34]. În acest studiu, am constatat că sub concentrația mare de glucoză din sânge în grupul db/db, acumularea de lipide în hepatocite a crescut odată cu reglarea în jos a factorilor din aval ai expresiei căii de semnalizare AMPK/SIRT1; în grupul tratat cu ECH, expresiile p AMPK/AMPK, SIRT1 și PGC-1 au fost semnificativ crescute, iar expresiile factorilor din aval PPAR și CPT1A au fost semnificativ crescute, indicând faptul că axa semnalului AMPK/SIRT1 și factorii săi din aval joacă un rol benefic în tratamentul leziunii hepatice diabetice (Fig. 6). Cu toate acestea, datele furnizate aici s-au bazat pe experimente in vivo; astfel, sunt necesare studii in vitro suplimentare pentru a confirma impactul ECH asupra căilor de semnalizare AMPK/SIRT1 și proteinelor efectoare.

În general, ECH poate regla glicemia și metabolismul lipidelor prin reglarea expresiei AMPK/SIRT1 și a factorilor săi din aval, îmbunătățind astfel leziunile hepatice diabetice.

ECH cistanchepoate sareglează glicemiașimetabolismul lipidic.

Pentru mai multe informații, vă rugăm să faceți clic aici.