Efectul polizaharidei Cistanche Deserticola asupra proliferării limfocitelor

Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, Li Xiaohong, Yang Meihua, Shi Yue

(Institutul de Plante Medicinale, Colegiul Medical al Uniunii Peking, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing 100193)

ObiectivTo studiază efectulpolizaharidă Cistanche deserticola(CDPS) asupra proliferării limfocitelor la șoareci. 

MetodeTestul MTT a fost utilizat pentru a detecta proliferarea limfocitelor splenice la șoareci. Ciclofosfamida (Cy) a fost utilizată pentru a replica modele animale de animale imunodeprimate și au fost măsurați indicii splinei și timusului animalelor normale și imunodeprimate. Activitatea interleukinei-2 (IL-2) a fost măsurată prin testul de proliferare a timocitelor. Rezultatepolizaharidă Cistanche deserticolaa promovat în mod semnificativ proliferarea limfocitelor activate cu mitogen (ConA și LPS) și a celulelor normale neactivate și a promovat secreția de IL-2 în limfocite. Administrarea intraperitoneală a arătat căpolizaharidă Cistanche deserticolaa crescut semnificativ indicele splinei la șoareci normali și imunocompromiși și a avut, de asemenea, un efect antagonic semnificativ asupra reducerii indicelui timusului cauzat de Cy. Concluziepolizaharidă Cistanche deserticolapoate promova în mod semnificativ proliferarea limfocitelor splenice la șoareci, ceea ce poate fi legat de promovarea secreției IL-2.

Cistanche vie în deșert

[Cuvinte cheie]polizaharidă Cistanche deserticola; indicele splinei; indicele timusului; Proliferarea limfocitelor; interleukina-2

Polizaharidele vegetale au atras atenția pe scară largă datorită efectelor imunomodulatoare extinse și toxicității relativ scăzute [1].Cistanche deserticola ma, cunoscut sub numele de „Ginsengul deșertului”, este tulpina solzoasă, uscată și cărnoasă a Cistanche deserticola, o plantă a Orobaceae, care are efecte farmacologice extinse.Decoctul său de apă poate crește semnificativ procentul fagocitar și indicele fagocitar al macrofagelor.Studii ulterioare au arătat că baza sa materială este polizaharida totală de Cistanche deserticola[3]. Zeng Qunli și colab. [4] au constatat că o singură componentă apolizaharidă Cistanche deserticolaare un efect proliferativ semnificativ asupra limfocitelor timice de șoarece in vitro. Efectulpolizaharidă Cistanche deserticolaasupra proliferarii limfocitelor s-a observat in vivo si in vitro.

Formula moleculară a Cistanche deserticola

1. Material și metode

1.1 Medicamente și reactivi

Polizaharida de la Cistanche deserticola este asigurată de Departamentul de Plant și Chimie a Institutului de Medicină și Plantare, Colegiul Medicilor. Este extras dinPudră de extract de Cistanche, iar conținutul de polizaharide este de 87 la sută .

Pudră de extract de Cistanche

Înainte de a utiliza experimente in vivo, se dizolvă și se diluează cu soluție salină fiziologică la concentrația necesară și se fierbe pentru sterilizare. Înainte de utilizarea experimentelor in vitro, mediul de cultură RPMI-1640 a fost dizolvat și diluat și a fost efectuată sterilizarea la presiune înaltă. Lipopolizaharida (LPS), concanavalina (ConA), dexametazona (DEX) și MTT sunt toate produse ale Sigma Corporation. Ciclofosfamida, un joint venture chino-american al Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Serul fetal bovin, mediul de cultură RPMI1640 și tripsina sunt toate produse Gibco. Alți reactivi sunt reactivi analitici domestici.

1.2 Animale

Șoarecii tineri BALB c (nivel SPF) sunt furnizați de Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Animalele de calitate SPF sunt crescute într-o cameră și se hrănesc și beau liber.

1.3 Aparatură

Marker enzimatic Multikan Ascent, un produs al Thermo Electron Company, SUA. pH-metru de precizie Leici PHS-3B, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd. Incubator de dioxid de carbon Napco 5410, NAPCO, SUA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. Microscop inversat XDS-1B, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metoda

1.4.1 Efectul asupra proliferării limfocitelor [5]:

Prepararea de rutină a limfocitelor splinei de la șoareci BALL c, folosind RPMI-1640 pentru a ajusta concentrația celulară la 1 × 107 mL, inoculate pe o placă de cultură cu 96 de godeuri, cu 100 de suspensii de celule adăugate în fiecare godeu μ 50. A fost co. -cultivat cu diferite concentraţii depolizaharidă Cistanche deserticola(concentrația finală apolizaharidă Cistanche deserticolapentru proliferarea limfocitelor neactivate a fost de 6,25, 12,5, 25, 50 și 100 mg/L în ordine; concentrarea finală apolizaharidă Cistanche deserticolapentru proliferarea limfocitelor T activate de ConA a fost de 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 și 62,5 mg/L în ordine; iar concentrarea finală apolizaharidă Cistanche deserticolapentru proliferarea limfocitelor B activate cu LPS a fost de 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 și 25 mg/L în ordine) și ConA sau LPS, mediu RPMI-1640 a fost utilizat ca martor. Volumul total al fiecărei găuri este de 200 μ L, când se adaugă mitogen ConA și LPS (controlul este RPMI-1640 care conține concentrațiile corespunzătoare de ConA sau LPS), concentrațiile finale ale ambelor sunt 2,5 mg L și 10 mg L, respectiv. Au fost făcute trei găuri paralele pentru diferite tratamente. Se plasează placa de cultură într-un incubator cu umiditate saturată de 37 de grade, 5% CO2 timp de 68 de ore, se adaugă MTT și se continuă cultivarea timp de 4 ore. Măsurați valoarea A540 nm cu un marker enzimatic folosind metoda MTT pentru a detecta proliferarea. Când comparați fiecare grup, convertiți valoarea A540nm în rata de proliferare a limfocitelor conform următoarei formule:rata de proliferare a limfocitelor=O probă A martor × 100 la sută .

Efectele Cistanche—Îmbunătățește imunitatea

1.4.2 Efectul asupra greutății organelor imune la șoarecii normali [6,7]:

Șoarecii tineri BALB c (masculi, 4-săptămâni, cu o greutate corporală de 10-15 g) au fost împărțiți aleatoriu într-un grup martor (soluție salină) și diferite grupuri de dozare (125 mg (kg · bw) și 250 mg (kg · bw)), cu 11 șobolani în fiecare grup. Medicamentul a fost administrat intraperitoneal o dată pe zi timp de 7 zile consecutive. Șoarecii au fost uciși după luxația cervicală. Au fost prelevate splina și timusul, s-au îndepărtat grăsimea și țesutul fasciei, iar lichidul de suprafață a fost uscat cu hârtie de filtru. După cântărire, indicele splinei=100 × Greutatea splinei (mg) Greutatea corporală (mg); Indicele timusului=100 × Greutatea timusului (mg) Greutatea corporală (mg) Calculați indicele splinei și, respectiv, indicele timusului pentru fiecare 100 mg de greutate corporală.

1.4.3 Efectul asupra greutății organelor imune la șoarecii imunocompromiși [7,8]:

Șobolanii tineri BALB c (masculi, 6 săptămâni, greutate corporală 15-20 g) au fost împărțiți aleatoriu în 12 grupuri în funcție de greutatea corporală. Cu excepția grupului de control normal (injectare intraperitoneală a unui volum echivalent de soluție salină fiziologică), celorlalte grupuri li s-a injectat Cy 50 mg (kg · bw) zilnic intraperitoneal, iar soluția de medicament testat a fost administrată intraperitoneal [125 și 250Mg (kg · bw) bw)], grupului de control normal și grupului model au primit același volum de soluție salină fiziologică timp de 13 zile consecutive, o dată pe zi. Modificările în greutatea animalului au fost observate în timpul experimentului. La 24 de ore de la ultima administrare, s-au măsurat şi calculat indicii splinei şi timusului folosind aceeaşi metodă ca la 1.4.2.

1.4.4 Impactul asupra activității IL-2:

① Inducerea IL-2 [9]: se adaugă 50 la fiecare godeu dintr-o placă celulară de 96-godeuri μ L Concentrații diferite depolizaharidă Cistanche deserticola(concentrațiile finale în ordinea: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, se adaugă 50 mg/L în godeul de control μ L mediu de cultură) și 50 μ L ConA (concentrația finală 5 mg/L), se adaugă 1 mai mult pe godeu × 106 celule splinei. Se incubează într-un incubator cu umiditate saturată de 37 de grade, 5% CO2 timp de 24 de ore, se centrifugă timp de 20 de minute la 2500 r min și se ia supernatantul celular și se depozitează la - 20 grade pentru așteptare. ② Detectarea activității IL-2 [9,10]: Metoda de bază se bazează pe literatură [9], iar ajustările corespunzătoare sunt făcute conform literaturii [10]. Prepararea convențională a suspensiei de timocite de șoarece BALB c, placă de cultură celulară cu 96 de godeuri, 1 inoculare per godeu × 106 timocite, în timp ce se adaugă 50 de celule per godeu μ L ConA (concentrație finală 2,5 mg/L), apoi se adaugă IL{34 preparată }} supernatant 50 μ L (adăugați 50 la soluția de cultură în gaura martor de control μ L), incubați împreună timp de 54 de ore, adăugați MTT, continuați incubarea timp de 4 ore, centrifugeți timp de 10 până la 15 minute la 1000 r min, aruncați supernatantul, și adăugați DMSO 100 per godeu μ L, agitați cu un microoscilator timp de 8 minute și măsurați valoarea A540 nm cu un marker enzimatic.

1.5 Analiză statistică

Datele au fost exprimate ca medie și abatere standard (x ± s). S-a folosit software-ul Microsoft Excel pentru a colecta datele și a fost efectuat un test t. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2.Rezultate

2.1 Efectul asupra proliferării limfocitelor

După cum se poate vedea din Tabelul 1, adăugândpolizaharidă Cistanche deserticolala mediul de cultură al limfocitelor splinei de șoarece cultivate in vitro la o concentrație mai mare de 25 mg/L poate stimula semnificativ proliferarea limfocitelor, indicând faptul căpolizaharidă Cistanche deserticolaîn sine are un efect mitotic. În același timp,se poate observa din Tabelul 2 și Tabelul 3 că CDPS are un efect semnificativ de promovare asupra proliferării limfocitelor T induse de ConA sau limfocitelor B induse de LPS.

Tab.1 Influențapolizaharidă Cistanche deserticolaprivind proliferarea limfocitelor neactivate (x ±s, n =3)

Notă: în comparație cu grupul de control,＊P <0.05. 

Tab.2 Influenţapolizaharidă Cistanche deserticolaprivind proliferarea limfocitelor T indusă de ConA (x ±s, n =3)

Notă: în comparație cu grupul ConA,＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Influențapolizaharidă Cistanche deserticolaprivind proliferarea blinfocitelor induse de LPS (x ±s, n =3)

Notă: în comparație cu grupul LPS,＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 Efectul asupra greutății organelor imune la șoarecii normali

După cum se poate observa din tabelul 4,polizaharidă Cistanche deserticolapoate crește semnificativ indicele splinei la șobolanii tineri BALB c normali, dar nu are niciun efect asupra glandei timusului.

2.3 Efectul asupra greutății organelor imune la șoarecii imunocompromiși

Din tabelul 5,se poate observa că indicii organelor splinei și timusului șoarecilor din grupul imunosupresor Cy sunt mai mici decât cei din grupul de control șipolizaharidă Cistanche deserticola(125, 250 mg/kg) poate îmbunătăți semnificativ indicii splinei și timusului.

2.4 Efectul asupra activității IL-2

După cum se poate observa din tabelul 6,când doza depolizaharidă Cistanche deserticolaatinge 7,82 mg/L, poate crește semnificativ eliberarea IL-2 din celulele splinei de șoarece.

Tab.4 Efectul depolizaharidă Cistanche deserticolaasupra greutății organelor imune la șoarecii normali (x ±s, n =11)

Notă: în comparație cu grupul de control,＊＊P <0.01.

Tab.5 Efectul depolizaharidă Cistanche deserticolaasupra greutății organelor imune la șoarecii imunodepresivi (x ±s, n =12)

Notă: în comparație cu grupul de control,## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Tab.6 Influențapolizaharidă Cistanche deserticolaasupra producției de IL-2 de către limfocitele splenice la șoareci (x ±s, n =3)

Notă: în comparație cu grupul de control,＊＊P <0.01. 

3. Discuție

Proliferarea limfocitelor splenice indusă de ConA și LPS la șoareci este un experiment in vitro pentru a detecta funcția limfocitelor T și B și este un indicator important al capacității imune specifice. Studiile au arătat că atunci când concentrația finală apolizaharidă Cistanche deserticolaeste peste 25 mg/L, poate promova semnificativ proliferarea limfocitelor, indicând faptul că are un anumit efect mitotic. În prezența mitogenului (ConA sau LPS), o doză mai mică depolizaharidă Cistanche deserticolapoate îmbunătăți imunitatea organismului, afișează o activitate proliferativă semnificativă. Știm că ConA și LPS induc în principal proliferarea limfocitelor T sau, respectiv, a limfocitelor B. Studiile au aratatBeneficii pentru sănătatea pudrei de cistanche: polizaharidă Cistanche deserticolapoate promova atât proliferarea limfocitelor T, cât și proliferarea limfocitelor B, dar efectul său proliferativ asupra limfocitelor B este semnificativ mai puternic decât cel asupra limfocitelor T.

Beneficii pentru sănătatea pudrei de Cistanche—Improvizațiee imunitatea

Faceți clic aici pentru a vedea produsele Cistanche Improve Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Timusul și splina sunt principalele organe imunitare la animale. Celulele imune din splină sunt în principal limfocite B mature, în timp ce timusul este în principal limfocite T imature. Indicii timusului și splinei pot reflecta dezvoltarea organelor imune și starea funcțională a celulelor imune. Injectarea intraperitoneală de polizaharidă Cistanche deserticola poate crește semnificativ indicele splinei la șoareci normali și imunodeprimați și are un efect antagonic semnificativ asupra atrofiei timice induse de Cy la șoareci.polizaharidă Cistanche deserticolanu are un efect semnificativ asupra indicelui timic la animalele normale, ceea ce este în concordanță cu rezultatele experimentelor in vitro în carepolizaharidă Cistanche deserticolapromovează mai degrabă proliferarea limfocitelor B decât a limfocitelor T.

Csupliment istanche lângă mine — Îmbunătăţireimunitate

IL-2 este o citokină produsă de limfocitele T din faza G1 a ciclului celular până la faza S. Este un factor major de creștere a celulelor T care acționează ca un factor de creștere autocrin. În plus, IL-2 poate promova proliferarea celulelor B și sinteza anticorpilor [11,12].polizaharidă Cistanche deserticolapromovează eliberarea IL-2 din limfocite, care este evident legată depolizaharidă Cistanche deserticolafavorizând proliferarea limfocitelor splenice.

Cercetările medicale arată că Cistanche conține polizaharide,Echinacozide și Acteozide, care poate activa limfocitele și imîmbunătăţeşte imunitatea organismuluiy; Componentele funcționale ale glicozidelor feniletanoide cistanche au un efect semnificativ asupra recuperării celulelor după deteriorarea razelor gamma 60 Co și, de asemenea, pot îmbunătăți funcția imunitară împotriva daunelor radiațiilor.Luarea zilnică a suplimentului de Cistanche deserticola poate obține efectul de îmbunătățire a imunității.

Csupliment istanche lângă mine — Îmbunătățește imunitatea

referinţă

[1] Schepetkin IA,Quinn MT .Polizaharide botanice: Imunomodularea macrofagelor și potențialul terapeutic [ J ] . Int Immunopharmacol, 2006,6(3):317-333.

[2] He Wei, Shu Xiaofen, Zong Guizhen și colab. Studiu asupra efectelor Cistanche deserticola asupra tonificării rinichilor și promovării yangului înainte și după prelucrare [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 1996, 21 (9): 534-537

[3] Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan și colab. Activarea macrofage a polizaharidelor Cistanche deserticola[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2009, 25 (6): 421-424

[4] Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lv Zhiliang. Activitatea imunologică și mecanismul polizaharidei Cistanche deserticola [J]. Jurnalul Universității Zhejiang (ediție medicală), 2002, 31 (4): 284-287

[5] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Metodologie experimentală farmacologică [M]. Ediția a 3-a, Beijing: Editura People's Health, 2002, 1427-1428

[6] Zhang Xu, Zhang Guorong, Che Wei și colab. Efectul chelatului de crom (Ⅲ) polipeptid de colagen asupra imunității șoarecilor cu diabet [J]. Chinese Journal of Experimental Animals, 2008, 16 (1): 10-14

[7] Chen Qi. Metodologia de cercetare farmacologică a medicinei tradiționale chineze [M]. Prima editie. Beijing: Editura Sănătăţii Poporului, 1993:779

[8] Guo Jing, Xu Jianning, Wang Quankai și colab. Efectul extractului de soia (CKBN) asupra funcției imune la șoarecii imunocompromiși [J]. Chinese Journal of Comparative Medicine, 2008, 18 (12): 45-49

[9] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Metodologie experimentală farmacologică [M]. Ediția a 3-a, Beijing: Editura People's Health, 2002: 1440-1441

[10] Zhou Daohong, Shen Yuanshan, Zhao Manrui. O nouă metodă pentru determinarea transformării limfocitelor și a activității interleukinei 2 de șoarece - analiza colorimetrică MTT [J]. Jurnalul Chinez de Imunologie, 1986, 2 (1): 39-43

[11] Wang MQ, Guilbert LJ, Li J, și colab. Un extract de proprietate din ginsengul nord-american (Panax quiquefolium) îmbunătățește producția de IL-2 și IFN în celulele splinei murine induse de Con-A [J]. Int Immunopharmacol ,2002, 4(2):311-315.

[12] Tingjun H, Rongliang Z. Promovarea polizaharidei sophora subprosrate pe producția de oxid nitric și interleukin-2 în limfocitele T murine: Ca 2 plus implicat și protein kinaza C [J] .Int Immunopharmacol ,2004 , 4(1):109-118.