Efectul Ramiprilului asupra rinichilor, plămânilor și inimii ACE2 la un model de șoareci diabetici

edmund.chen@wecistanche.com

ABSTRACTContext: sindromul respirator acut sever coronavirus 2 (SARS-CoV-2) este responsabil pentru actuala boală coronavirus 2019 (COVID-19). Principalul organ afectat în această infecție este plămânul, iar virusul folosește enzima de conversie a angiotensinei 2 (ACE2) ca receptor pentru a pătrunde în celulele țintă. În acest context, a fost ridicată o controversă cu privire la utilizarea blocanților sistemului renină-angiotensină (RAAS), deoarece aceste medicamente ar putea crește expresia ACE2 în unele țesuturi și ar putea crește riscul de infecție cu SARS-CoV-2. Acest lucru este îngrijorător în special la pacienții cu diabet, deoarece diabetul este un factor de risc pentru COVID-19. Metode: 12-șoarecii diabetici de o săptămână (db/db) au fost tratați cu ramipril sau vehicul martor timp de 8 săptămâni. Șoarecii nediabetici db/m au fost incluși ca martori. Expresia și activitatea ACE2 au fost studiate în plămâni,rinichiși inimile acestor animale. Rezultate:RinichiActivitatea ACE2 a fost crescută la șoarecii db/db în comparație cu db/m (143,2% ± 23% față de 100% ± 22,3%, p=0.004), în timp ce ramiprilul nu a avut un efect semnificativ. În plămân, nu s-au găsit diferențe în ACE2 când se compară șoarecii db/db cu db/m, iar ramiprilul nu a avut nici un efect semnificativ. În inimă, diabetul a scăzut activitatea ACE2 (83% ± 16,8%, față de 100% ± 23,1% p=0,02), iar ramiprilul a crescut semnificativ ACE2 (83% ± 16,8% față de 98,2% ± 15%, p=0.04). Concluzii: Într-un model de șoarece cu diabet zaharat de tip 2, ramiprilul nu a avut un efect semnificativ asupra activității ACE2 nici înrinichisau în plămâni. Prin urmare, este puțin probabil ca blocanții RAAS sau cel puțin inhibitorii enzimei de conversie a angiotensinei să crească riscul de infecție cu SARS-CoV-2 prin creșterea ACE2.

Cuvinte cheie:COVID-19; Diabet; blocada RAAS; Plămân; boli renale; rinichi

CISTANCHE VA AMUNĂȚI BOLILE RENALILOR/RENALILOR

IntroducerePandemia cauzată de sindromul respirator acut sever coronavirus 2 (SARS-CoV-2), care a început în decembrie 2019 în Wuhan, China, a dus la o criză sanitară la nivel mondial. Plămânul este principalul organ afectat în boala coronavirus-19 (COVID-19). SARS-CoV-2 utilizează proteina transmembranară enzima de conversie a angiotensinei 2 (ACE2) ca unul dintre receptorii pentru a pătrunde în celulele țintă (Hoffmann et al., 2020), o caracteristică comună cu SARS-CoV (virusul care a provocat epidemia de SARS în 2002) (Li et al., 2003). ACE2 este o carboxipeptidază care transformă angiotensina-I (Ang-I) și angiotensina-II (Ang-II) în angiotensină-1-9 (Ang{-1-9) și angiotensin{-1-7 (Ang{{23) }}), respectiv. Această enzimă face parte din calea alternativă a sistemului renină-angiotensină-aldosteron (RAAS). Activarea sa are efecte vasodilatatoare per se și reglează în mod negativ brațul clasic al RAAS (vasoconstrictor) (Obukhov și colab., 2020; Romero și colab., 2015). ACE2 este exprimat pe scară largă în celulele tubulare proximale alerinichi(Lely et al., 2004). Într-o măsură mai mică este exprimată și în plămân (în pneumocite tip 2) (Hamming și colab., 2004; Serfozo și colab., 2020) și inimă (în cardiomiocite) (Oudit și colab., 2009). Perspectivele oferite de prima pandemie de SARS-CoV din 2002 au arătat că infecția cu SARS-CoV a indus o scădere a expresiei ACE2 în plămân. În leziunea pulmonară acută, deficiența ACE2 a fost legată de leziuni tisulare îmbunătățite, care pot fi atribuite unei supraactivari a brațului vasoconstrictor al RAAS (axa receptorului de tip 1 ACE/Ang-II/Angiotensin-II) (Kuba și colab. , 2006). Prin urmare, RAAS pare să joace un rol important în severitatea leziunilor pulmonare legate de infecția cu SARS-CoV-2. În plus, dereglarea RAAS este observată în mod clasic în diabet și modificări în expresia ACE2 au fost identificate înrinichiși inima pacienților diabetici (Reich și colab., 2008). Datele meta-analizei au arătat că pacienții infectați cu SARS-CoV-2 nu au o prevalență mai mare a diabetului, deși pacienții diabetici prezintă un risc crescut de a suferi forme severe de infecție cu SARS-CoV{-2 și rezultate mai proaste. (Fadini și colab., 2020). Aproximativ 40 la sută dintre pacienții cu diabet de tip 2 sunt hipertensivi („Hypertension in diabetes study (HDS): I. Prevalența hipertensiunii la pacienții cu diabet de tip 2 nou prezentați și asocierea cu factorii de risc pentru complicații cardiovasculare și diabetice,” 1993) și, prin urmare, sunt tratați cu blocanți ai RAAS: inhibitori ai enzimei de conversie a angiotensinei (IECA) sau blocanți ai receptorilor angiotensinei II de tip 1 (ARA). În plus, aceste medicamente sunt, de asemenea, utilizate pe scară largă pentru a trata hipertensiunea non-diabetică și proteinuria în mai multeboli renale(García-Carro și colab., 2019).

În timpul primului val al pandemiei de COVID-19, a apărut o controversă cu privire la utilizarea blocanților RAAS, deoarece unele studii pe modele experimentale au arătat că tratamentul cu aceste medicamente a crescut expresia ACE2 în țesutul cardiac (Ferrario și colab., 2005). ; Ishiyama et al., 2004; Ocaranza et al., 2006) și înrenalvascularizație (Soler și colab., 2009). Datorită acestor dovezi preclinice, s-a sugerat că tratamentul cu blocanți RAAS ar putea crește susceptibilitatea la infecția cu SARS-CoV-2 creând un paradox, deoarece nivelurile crescute de ACE2 sunt în mod normal considerate protectoare tisulare (Aleksova și colab., 2020). ; Sparks și colab., 2020; Wang și colab., 2020). În ciuda rezultatelor studiilor menționate mai sus (Ferrario și colab., 2005; Ishiyama și colab., 2004; Ocaranza și colab., 2006; Soler și colab., 2009) nu există suficiente dovezi pentru a afirma că aceste medicamente promovează expresia ACE2 ca alți autori care folosesc modele experimentale similare nu au observat modularea ACE2 indusă de blocanții RAAS (Burchill și colab., 2012; Burrell și colab., 2005). În plus, efectele blocanților RAAS asupra modulării ACE2 pulmonare au fost puțin evaluate. Într-un raport recent, Wysocki și colaboratorii au descris modularea ACE2 înrinichiși plămânul șoarecilor (C57BLKS/J) tratați cu blocanți RAAS (telmisatan sau captopril) (Wysocki și colab., 2020). Aici studiem efectele unui IECA (ramipril) asuprarinichiACE2, plămâni și inimii într-un model de șoarece de diabet de tip 2.

CISTANCHE VA AMUNĂȚI INFECȚIA RENICALE/RENALE

2. Materiale și metode

2.1.Proceduri pentru animaleȘoarecii diabetici masculi cu deficiență de receptori de leptină în vârstă de opt săptămâni (db/db) și tovarășii heterozigoți nediabetici (db/plus) au fost achiziționați de la Charles River (BKS.Cg-Dock7m plus/plus Lepr"J.Strain Code: 607 ).Șoarecii au fost găzduiți în grupuri de câte 4 per cușcă, cu acces ad libitum la șoareci obișnuiți Chow și apă sub un ciclu de 12 ore de lumină: 12 ore de întuneric. După 4 săptămâni (12-șoareci cu o săptămână) a un grup de db/db (n =7) au fost tratați cu ramipril (8 mg/kg/zi) diluat în apă de băut (20 mg/L) timp de 8 săptămâni. Vehicul db/db (n=7 )și db/m (n=7) au fost folosite ca martori. Greutatea și glicemia au fost monitorizate de două ori pe săptămână și tensiunea arterială înainte și după tratament (vezi metode suplimentare). După perioada de tratament, animalele au fost sacrificate sub sodiu Anestezie cu pentobarbital.Șoarecii au fost apoi perfuzați cu PBS rece 1x și s-a obținut sânge integral prin puncție cardiacă.Probele de sânge au fost colectate în tuburi cu gel activator de coagulare (41.1378.005, Sarstedt, Germania) pentru a obține s. erum. După aceea,rinichi,inima și plămânul au fost îndepărtate, congelate rapid în azot lichid și menținute la -80 grade C până la utilizare. În plus, o porțiune derinichiiar inima a fost fixată în 10% formol și parafină încorporate pentru analize histologice. Protocolul experimental a fost aprobat de Comitetele Etice de Experimentare pe Animale ale Institutului de Cercetare Vall d'Hebron (47,18 CEEA). îngrijirea animalelor utilizate pentru cercetare și alte scopuri științifice (2010/63/UE).

2.2. Analiza ACE2Expresia genei și proteinei ACE2, precum și activitatea ACE2, au fost analizate înrinichi, plămâni și extracte de inimă. În ser, a fost evaluată doar activitatea ACE2. Expresia genei ACE2 a fost măsurată prin RT-qPCR și metoda A△Cr a fost aplicată pentru cuantificarea relativă folosind Hypo-xanthine Phosphoribosyltransferase 1 (HPRT) ca genă de întreținere. Nivelurile proteinei ACE2 au fost evaluate prin Western blot și activitatea ACE2 a fost determinată printr-un test enzimatic fluorescent utilizând un substrat fluorogen stins ACE2-(Mca-Ala-Pro-Lys (Dnp)-OH: Enzo Life-Sciences) așa cum este descris anterior (Riera et al.2016). În plus, înrinichiiar în inimă am detectat ACE2 prin imunohistochimie. Metodologia este detaliată în metodele suplimentare.

2.3. analize statisticeDistribuția normală a fost verificată prin compararea datelor noastre cu distribuția normală prezisă prin diagrama quantil-quantil (QQ) și confirmată cu teste de normalitate (Shapiro-Wilk și/sau Kolmogorov-Smirnov). Grupurile au fost comparate (db/m vs db/db). și db/db vs db/db plus Ramipri) prin testele t Welch când normalitatea a fost îndeplinită sau prin testul Mann-Whitney când datele au urmat o distribuție nenormală. Datele sunt întotdeauna exprimate ca medie ± abatere standard (SD). Valorile p sunt detaliate pentru a estima încrederea comparațiilor și semnificația statistică a fost luată în considerare atunci când p Mai mic sau egal cu 0.05. Toate analizele statistice și graficele au fost efectuate cu GraphPad Prism Versiunea 8.2.1.

3. Rezultate

3.1. Ramipril scade tensiunea arterială la șoarecii db/dbScopurile finale ale acestui studiu au fost de a evalua (1) modul în care contextul diabetic moduleazărenal, pulmonar și cardiac ACE2 (receptorul SARS-CoV-2 pentru a infecta celulele țintă) și (2) dacă tratamentul ACEi ar putea modifica comportamentul ACE2 în diabet. În acest scop, 12-șoarecii diabetici de o săptămână (db/db) au fost tratați cu ramipril (8 mg/kg/zi), un IECA, timp de 8 săptămâni. Vehicul db/db și șoarecii nediabetici (db/m) au fost incluși ca martori. După cum era de așteptat, toți șoarecii diabetici, atât tratați cu ramipril, cât și vehiculul, au prezentat hiperglicemie și greutate crescută la sfârșitul experimentului în comparație cu șoarecii db/m (Tabelul 1). În cadrul nostru experimental, șoarecii db/db au prezentat o scădere a tensiunii arteriale sistolice și diastolice în comparație cu șoarecii de control db/m (a se vedea tabelul 1). După cum era de așteptat, administrarea de Ramipril timp de 8 săptămâni a scăzut semnificativ tensiunea arterială sistolica în comparație cu vehiculul db/db și/sau grupul db/m (Tabelul 1), demonstrând că tratamentul cu ramipril a fost eficient.

3.2. ACE2 este crescut în rinichiul șoarecilor db/db care nu a fost modificat de ramiprilAm studiat modularea ACE2 înrinichide la db/m, vehiculul db/db și șoarecii db/db tratați cu ramipril folosind două abordări: (1) expresia genei ACE2 prin qPCR și (2) testul de activitate ACE2 folosind un substrat fluorescent. Șoarecii vehicul db/db au prezentat o expresie crescută a genei renale ACE2 în comparație cu db/m(1.011 ± 0.16 vs 1582 ± 0.18, p<0.0001), this="" effect="">

inversat cu administrarea de ramipril (1,280 ± 0,18, p=0,01) (Fig. 1, A). Activitatea renală ACE2 (100 la sută ± 14,2 la sută față de 114 la sută ± 31,9 la sută, p=0.2) a avut, de asemenea, tendința de a crește în vehicul db/db, cu toate acestea ramiprilul nu și-a modificat activitatea (114 la sută ± 31,9 la sută față de 109,3 la sută ± 18,6 la sută) (Fig. 1D)). În extractele de proteine ​​îmbogățite cu membrană, a devenit evident că animalele db/db au crescut activitatea ACE2 în comparație cu db/m (100% ± 22,3% față de 143,2% ± 23,1%, p=0,004) și , din nou, ramipril nu a modificat activitatea ACE2 înrinichiextracte îmbogățite cu membrană (Fig. 2A). Înrinichisecțiunile de țesut, expresia ACE2 a fost localizată în marginea periei a celulelor tubulare și colorarea a fost mai proeminentă în db/db în comparație cu db/m (Fig. 3). Nu am observat modificări majore în distribuția ACE2 înrinichia animalelor tratate cu ramipril în comparație cu db/db netratate (Fig. 3).

3.3. Ramipril nu a modificat ACE2 pulmonar la șoarecii db/db În plămân, am efectuat aceeași abordare ca și larinichipentru a studia ACE2. Nu am găsit diferențe între db/m și vehiculul db/db în ceea ce privește expresia genei ACE2 (Fig. 1, B) legate în principal de variabilitatea ridicată a expresiei ARNm ACE2 (0.97 ± {{6} }.8 vs 1.07 ± 0.71, p=0.63). Nu am putut găsi diferențe între activitatea pulmonară și ACE2 (nici în extractele de proteine ​​totale sau în extractele îmbogățite cu membrană) (Figurile 1E și 2B și, respectiv, Figura 1 și 2 suplimentară). În plus, în plămânul db/db, tratamentul cu ramipril nu a indus modificări ale expresiei și activității genei ACE2 (Fig. 1B și E, Fig. 2B și Figura suplimentară 1 și 2).

3.4 ACE2 este scăzut în inima d/d și ramiprilul normalizează nivelurile ACE2Am analizat, de asemenea, ACE2 în inimă. În țesutul cardiac, ACE2 a scăzut semnificativ în db/db față de db/m care se ocupă de ambele niveluri de ARNm (1.01±0.12ws {{8} }}.84±0.16,p=0.05)(Fig.1C) și ACE2activitatea （100% ±23.1% ws 83% ±16.8% ,p=0.02）（臣g.1F） .În extractele îmbogățite cu membrană, activitatea ACE2 a scăzut, de asemenea, semnificativ în db/db în comparație cu db/m (Fig. 2O. Tratamentul cu Ramipril a restabilit semnificativ activitatea ACE2 la șoarecii de control db/m observați (83 la sută ± 16,8 la sută v 98,2). procent ±15 la sută ,p=0.04)(Fig.1E). Cu toate acestea, ramiprilul nu a fost capabil să modifice expresia genei ACE2 în inimă (Fig, IC). În plus, am evaluat distribuția ACE2 în țesutul cardiac unde ACE2 colorația a arătat o distribuție difuză cu colorație ACE2 crescută în unele zone.Am observat că intensitatea colorării a fost mai ușoară în db/db în comparație cu db/m.Ramipril pare să restabilească intensitatea colorării (Hig 3).

3.5 Activitatea serică a ACE2 este crescută în db/db și nu a fost modificată de ramiprilÎn cele din urmă, am măsurat activitatea ACE2 în probe de ser ale db/m, db/db și db/db tratate cu ramipril. Activitatea serică a ACE2 a crescut semnificativ în db/db în comparație cu db/m (99,9 la sută ± 29,3 la sută ws 146 la sută ± 57,2 la sută, p= 0,03), iar ramiprilul nu a atenuat acest efect (146 la sută). ±57,2 la sută față de 128 la sută ±55,7 la sută ,p= 0.5)(Fig.4).

4. Discutie

Pandemia actuală cauzată de SARS-CoV-2 a stârnit o controversă legată de utilizarea blocanților RAAS la pacienții cu COVID-19. În ciuda beneficiilor demonstrate ale utilizării ACEi sau ARB la pacienții cardiovasculari (Fegan și colab., 2000; Romero și colab., 2015), s-a sugerat că aceste medicamente pot crește expresia ACE2, receptorul pentru SARS-CoV{{ 7}} și, prin urmare, crește riscul și severitatea COVID-19 (Aleksova și colab., 2020; Sparls și colab., 2020; Wang și colab., 2020).

Prin acest studiu ne-am propus să aruncăm lumină asupra acestei controverse și, în acest scop, am analizat ACE2 în probe de rinichi, plămâni, inimă și ser ale unui model de șoareci diabetic (db/db) tratați cu ramipril timp de 8 săptămâni. Am folosit un model diabetic pentru a determina efectul blocării RAAS, deoarece mediul diabetic este un factor de risc pe mare pentru un prognostic prost la pacienții cu COVID-19 (Fadini și colab., 2020; Williamson și colab., 2020). Am găsit o expresie și activitate crescută a genei ACE2 de rinichi în extractele de membrană la șoarecii db/db (Figurile 1A și, respectiv, 2A). Studiile anterioare au demonstrat, de asemenea, creșterea tubulară renală a ACE2 la șoarecii diabetici db/db (Wysocki și colab., 2006; Yeet al, 2004, 2006), precum și în alte modele de șoareci cu diabet zaharat (Riera și colab., 2016; Wysocki și colab., 2006). ). Ramipril a reușit să inverseze creșterea ACE2 la nivelul expresiei genelor, sugerând că administrarea sa a fost de protecție împotriva efectului dăunător al diabetului în rinichi. Descoperirile noastre în rinichi contrastează cu rezultatele publicate în raportul recent al lui Wysocki și colaboratorilor (Wysocldi et al.2020), deoarece au descris blocarea RAAS la șoarecii C57BLKS/J, promovează o scădere a expresiei ACE2 împreună cu internalizarea proteinei. În studiul nostru folosind modelul de șoareci db/db, nu am constatat că ramipril a redus activitatea ACE2 în rinichi (Fig. 1D și 2A) și nici nu am observat internalizarea proteinei (Fig, 3). Chiar și așa, am constatat că tratamentul cu ramipril a indus o scădere a expresiei genei ACE2 în db/db (Fig, 1A). Expresia genei și a proteinei poate să nu se coreleze din cauza momentelor diferite dintre sinteza și degradarea proteinelor, dar rezultatele obținute în exprimarea genei ACE2 (Fg.1A) sugerează că blocarea RAAS ar promova o scădere a ACE2 în rinichi, așa cum au sugerat Wysocki și colaboratorii ( Wysocldi et al.2020). Abordarea noastră, spre deosebire de studiul lui Wysocki și cols. (Wysocldi et al.2020), a imitat pacienții cu diabet care primesc de obicei blocante RAAS pentru a întârzia progresia nefropatiei diabetice (Garcia-Carro et al..2019). În linie, un wark recent al lui Batchu și colab. a demonstrat clar în rinichii și plămânii șoarecilor cu diabet comorbid (îmbătrânire, dietă bogată în grăsimi și diabet indus de streptozotocină) că ACE2 este suprareglat. cu toate acestea, blocada RAAS nu a reușit să o modifice (Batchu et al.2020). Prin urmare. cel putin pentru rinichi. rezultatele noastre nu susțin ideea că blocarea RAAS ar favoriza supraexprimarea ACE2. La oameni, două studii independente au descris că expresia tubulară a genei ACE2 și a proteinei au fost scăzute la diabetici

nefropatie în comparație cu indivizii sănătoși (Mizuiri și colab., 2008; Reich și colab., 2008), deși un alt autor nu a putut găsi nicio diferență (Lelyet al.2004). În ceea ce privește efectul blocării RAAS la oameni, există unele dovezi că acesta afectează expresia ACE2 în rinichi (Lely și colab., 2004; Reich și colab., 2008).

De asemenea, am analizat ACE2 în țesuturile pulmonare și cardiace, unde prezența ACE2 este mult mai mică decât în ​​rinichi (Figura suplimentară S1 și S2). În ceea ce privește plămânul, am obținut o variabilitate interindividuală ridicată în expresia genei ACE2 (Fig.1), care ar putea fi parțial explicată prin faptul că expresia ACE2 în plămân este foarte scăzută și limitată la pneumocite de tip 2 (Ziegler et al, 2020). Am obținut rezultate solide când ACE2 a fost estimat prin măsurarea activității enzimatice. Activitatea ACE2 pulmonară a fost similară între controlul db/m și db/db diabetic și nu s-au observat diferențe în db/db tratat cu ramipril în comparație cu vehiculul db/db (Fgs.IE și 2B). Deși ACE2 în plămân nu a fost studiat pe scară largă pe modele animale, s-a raportat că șoarecii NOD și tovarășii lor nediabetici au activitate similară ACE2 în plămân (Roca-Ho et al.2017). Dimpotrivă, streptozotocina și șoarecii diabetici induși de dietă bogată în grăsimi au prezentat o activitate pulmonară crescută ACE2 în comparație cu șoarecii nediabetici (Batchu și colab., 2020). În ceea ce privește efectul blocării RAAS asupra ACE2 pulmonar, rezultatele noastre sunt în concordanță cu rapoartele lui Wysockiet al și ale lui Batchu și colab. deoarece nici nu au găsit diferențe, inclusiv activitatea ACE2 atunci când șoarecii au fost tratați cu ARB sau ACEi (Batchu și colab. 2020; Wysocldi și colab. 2020). La oameni, un studiu pe 1051 de pacienți a arătat că expresia genei ACE2 pulmonară a fost reglată în jos de către tratamentul pe termen lung cu ACEi, în timp ce nu a fost modificat de ARB (Milne et al, 2020), deși nu au fost disponibile date privind nivelurile sau activitatea proteinei ACE2.

Expresia și activitatea genei cardiace ACE2 au fost semnificativ scăzute în microfonul db/db în comparație cu db/m (Fig. 1Cand F, respectiv F). În acest caz, tratamentul cu ramipril a crescut activitatea ACE2 (Fig. 1F. Aceste rezultate sugerează că, în modelul db/db, profilul diabetic promovează o scădere a ACE2 cardiac, care este restabilită sub blocarea RAAS. La șoarecii diabetici db/db, scăderea ACE2 cardiac pare să se producă în timp, așa cum o fac animalele mai tinere (în vârstă de 8 săptămâni). nu prezintă o activitate scăzută a ACE2 în inimă (Ye et al, 2004). ACE2 cardiac a scăzut, de asemenea, la șobolanii diabetici induși de streptozotocină (Qiao et al, 2015; Shin e al.2017), deși alte modele de șoareci diabetici arată creșterea ACE2 cardiacă în comparație cu tovarășii lor nediabetici (Patel și colab., 2012; Roca-Ho și colab., 2017). Chiar și așa, experimentele in vitro sugerează că glucoza poate regla în mod direct ACE2 în celulele musculare netede vasculare cardiace (Lavrentyev și Malik). , 2009).Modularea ACE2 în inimă precum și efectul blocului RAAS Kade a fost studiat mai ales în infarctul miocardic (IM), atât la modele de șobolan, cât și la om. Într-un model de șobolan MI, Ocaranza și colaboratorii au arătat că activitatea inimii ACE2 a fost scăzută în MI și blocarea RAAS

cu enalapril a inversat-o (Ocaranz et al, 2006), similar cu ceea ce se întâmplă în studiul nostru. Cu toate acestea, alte studii efectuate pe modele similare de șobolani MI nu au ajuns la aceleași concluzii (Burrell și colab., 2005; Ishiyama și colab., 2004). La om, ACE2 pare să fie crescut în inimă după IM (Burrell și colab., 2005) și în cardiomiopatia idiopatică și ischemică (Goulter și colab., 2004). Din cunoștințele noastre, efectul blocării RAAS asupra expresiei cardiace ACE2 nu a fost studiat la om. În cele din urmă, am analizat activitatea ACE2 în ser. ACE2 poate fi găsit atât în ​​membranele celulare ale celulelor tisulare, cât și solubil (sACE2); care provine din eliminarea ACE2 legată de membrană de către domeniul metalopeptidazei ADAM 17 (ADAM17) (Lambert et al, 2005). ACE2 funcționează doar ca receptor pentru SARS-CoV-2 la nivel de organ, dar s-a sugerat că sACE2 ar putea diminua capacitatea de infectare a virusului acționând ca o momeală (Balle și colab., 2020; Monteil și colab., 2020; Wysocl et al, 2021), deși nivelurile scăzute ale sACE2 din sânge ar produce cu greu acest efect benefic. Chiar și așa, este interesant de știut dacă nivelurile serice ale ACE2 sunt modulate (sau nu) în diabet sau de către blocanții RAAS, deoarece ar putea fi un semnal al variațiilor ACE2 tisulare. În acest sens, s-a postulat că ADAM17 ar putea juca un important rol de contracarare prin concurând pentru scindarea ACE2 cu serin-proteaza Transmembrane Serine Protease 2 (TMPRSS2), o protează fundamentală pentru internalizarea SARS-CoV-2 (Palau et al.2020). Am descoperit că ACE2 seric a crescut în db/db în comparație cu db/m și ramipril nu a inversat acest efect (Fg,.3). Alte studii au descris, de asemenea, creșterea ACE2 din sânge la modelele de șoareci diabetici (Riera et al.2016; Roca-Hoet al,2017;

Wysocki și colab., 2013) și la pacienții cu diabet zaharat de tip 1 (Soro-Paavonen și colab.2012), deși efectul blocării RAAS nu a fost studiat pe scară largă. În acest sens, la om, dovezile nu sunt omogene. În studiul lui Soro-Paavonen și cols. (Soro-Paavonen și colab., 2012), terapia ACEi a crescut nivelurile sanguine ACE2 atât la bărbați, cât și la femei, iar tratamentul ARB numai la femei. În schimb, într-o preprint recentă, s-a observat o ușoară scădere a ACE2 din sânge cu tratamentul ARB, dar ACEi nu a indus nicio schimbare (Emilsson și colab., 2020).

CISTANCHE VA Ameliora DURILE DE RINCHI/RENALI

Datorită discrepanțelor menționate mai sus în ceea ce privește modularea ACE2 între diferite modele de animale diabetice și la oameni, este dificil de a obține un răspuns definitiv la întrebarea: „Blocada RAAS induce supraexprimarea ACE2?”. Într-o imagine de ansamblu, ținând cont de datele noastre și de dovezile altor autori, impresia este că contextul diabetic în majoritatea cazurilor modifică expresia ACE2 atât în ​​rinichi, cât și în inimă (regulează în jos sau în creștere, în funcție de model sau specie. ) și că blocarea RAAS: (1) scade sau nu modifică ACE2 renal (atât în ​​modelele experimentale, cât și inumane), (2) nu modifică ACE2 pulmonar (deși sunt necesare mai multe dovezi aici), (3) promovează exprimarea ACE2 în inima (în majoritatea modelelor experimentale) și (4) are efecte variabile asupra nivelurilor ACE2 din sânge (în funcție de cohortă și de tipul blocantului RAAS). Prin urmare, premisa plană „Blocada RAAS induce supraexpresia ACE2 și, în consecință. crește riscul de infecție cu SARS-CoV-2” nu rămâne adevărată pentru inimă, rinichi și, mai important, nu pentru plămâni. . Deși, această ipoteză este un punct discutabil, deoarece oferă doar o viziune simplistă a reglementării exprimării ACE2 și nu ia în considerare faptul că ACE2 este protector în majoritatea contextelor (Batlle et al, 2012; Oudit et al, 2010; Zhong et al. , 2010). Sa demonstrat că ACE2 este benefic în modelele experimentale de leziuni pulmonare induse de virusul gripal H7N9 (Yang et al, 2015) sau LPS (Ye și Liu, 2020). Într-un model de șoareci cu leziuni pulmonare, SARS - Infecția cu CoV a scăzut expresia ACE2 pulmonară, dar tratamentul cu losartan a ameliorat leziunea pulmonară și expresia ACE2 a crescut în același timp (Kuba și colab., 2005), sugerând că ACE2 a fost benefic pentru a rezolva infecția virală. Mai mult, contextul inflamator, cum ar fi furtuna de citokine care are loc la un subgrup de pacienți cu corvid-19 (Mehta și colab., 2020) poate, de asemenea, regla expresia ACE2, deși nu este clar în ce direcție (de Lang et al., 2006). În orice caz, atât reglarea în sus, cât și reglarea în jos a ACE2 ar putea fi dăunătoare în timpul infecției cu SARS-CoV-2, sugerând că nivelurile ACE2 ar trebui să fie într-un interval de echilibru (South et al.2020).

În concluzie, aici demonstrăm într-un model de șoareci diabetici că inhibarea ACE produce doar o reglare pozitivă a ACE2 în inima diabetică, unde ACE2 este scăzut secundar diabetului. Acest lucru nu se întâmplă în rinichi sau în plămâni, întărind ideea că în majoritatea țesuturilor blocarea RAAS nu crește nivelurile de expresie a ACE2. Chiar și rezultatele pe care le-am obținut în inimă, este discutabil dacă tratamentul cu ARB sau ACEi conferă un risc real de creștere a infecției cu COVID-19 și a înrăutățit prognosticul acesteia. Blocarea RAAS are beneficii cardiovasculare clare (Fegan și colab., 2000; Romero și colab., 2015), în timp ce este puțin probabil ca nivelurile scăzute de ACE2 să fie benefice pentru rezolvarea COVID-19.