Efectul Tanshinone IIA asupra răspunsului inflamator indus de LPS într-o manieră dependentă de inflamazom ROS-NLRP3 în celulele RAW264.7

Pentru mai multe informatii:emily.li@wecistanche.com

Repere

Tan IIA ar putea inhiba răspunsul inflamator și expresia NLRP3 stimulată de LPS sau LPS plus ATP. Acetilcisteina (N-acetil-l-cisteina, NAC), un inhibitor ROS, ar putea inhiba LPS plus creșterea indusă de ATP a nivelului NLRP3. Mecanismul care stă la baza efectelor Tan IIA poate implica reglarea căii ROS-NF-kB/ P38-NLRP3. Acest studiu a caracterizat în continuare mecanismul molecular al Tan IIA și a oferit noi gânduri la terapia sa clinică.

Abstract

Dovezile emergente au demonstrat că Tanshinone IIA (Tan IIA) previne leziunile cardiomiocitelor, fibroblastele cardiace și ateroscleroza. Cu toate acestea, mecanismul molecular care stă la baza efectelor Tan lA este încă neclar. Pentru a investiga rolul lui Tan ll A în răspunsul inflamator într-o manieră dependentă de inflamazom ROS-NLRP3. Celulele RAW264.7 stimulate cu LPS au fost recrutate pentru a produce un model celular de răspuns inflamator. Rezultatele noastre au indicat că producția de NO a crescut semnificativ după ce a fost stimulată de LPS. și Tan IIA tratat a scăzut semnificativ nivelul de NO. Expresia ARNm a NLRP3. IL-1B și TNF-a au fost inhibate semnificativ de Tan LLA în comparație cu celulele tratate cu LPS. Expresia proteinei NLRP3. IKBa, pp65/p65 și pp38/p38 au fost semnificativ scăzute de Tan IIA, în comparație cu grupurile stimulate cu LPS sau LPS plus ATP. Între timp. Tan IA a inhibat semnificativ nivelul de ROS indus de LPS plus ATP. Și NAC, un inhibitor ROS, ar putea, de asemenea, inhiba expresia proteinei NLRP3. Pe baza acestor constatări, s-ar putea specula că mecanismul care stă la baza efectului Tan IIA poate implica reglarea căii ROS-NF-kB/ P38-NLRP3. Acest studiu a caracterizat în continuare mecanismul molecular al Tan IA și a oferit noi gânduri la terapia sa clinică.

Cuvinte cheie: Tanshinone IIA,Inflamaţie, NLRP3 inflamazom, ROS

Beneficiile produselor Cistanche

fundal

Macrofagele joacă un rol important în menținerea homeostaziei cardiace și în orchestrarea reparării țesuturilor, precum și în remodelare. Îninimaeșecpacienți, citokinele proinflamatorii serice crescute ar trebui să fie biomarkeri predictivi ai rezultatelor clinice înrăutățite șiinflamaţiepoate contribui la progresia insuficienței cardiace [1]. Deşiinflamaţiea apărut ca o țintă terapeutică pentru tratarea bolilor cardiovasculare, totuși, se pare că imunodepresia generală nu a reușit să îmbunătățească rezultatele clinice nici după infarctul miocardic (IM) sau în insuficiența cardiacă [2,3].

Mai multe studii clinice au arătat că inhibarea aninflamatorcale, cum ar fiinflamatorcitokina, IL-1, ar putea reduce eficient evenimentele cardiovasculare recurente [4, 5]. Se poate specula că imunomodularea răspunsului inflamator are o semnificație diagnostică și terapeutică importantă în procesul bolilor cardiovasculare.

Inflamazomul NLRP3 este cel mai amplu studiat dintre toate tipurile de inflamazomi. S-a documentat că inflamazomul NLRP3 joacă un rol crucial în multe boli, cum ar fi scleroza multiplă (SM), boala Alzheimer (AD), ateroscleroza, obezitatea și diabetul zaharat de tip 2 [6] și tot mai multe dovezi indică faptul că NLRP3 inflamazomul este, de asemenea, implicat în ischemia miocardică/leziunea de reperfuzie (MI/RI) [7,8]. Mecanismele de activare a NLRP3 pot include generarea de specii reactive de oxigen (ROS), efluxul de potasiu și eliberarea de catepsine în citosol după destabilizarea lizozomală. Când celulele au fost stimulate de agenți patogeni sau de semnale de pericol, NLRP3 a fost activat și recrutat pro-caspaza-1 prin intermediul proteinei adaptoare ASC. NLRP3. ASC și pro-caspaza-1 au făcut un ansamblu complex inflamazom NLRP3. Sub acțiunea inflamazomului NLRP3, pro-caspaza-1 a fost activată pentru a fi caspază-1, ducând în cele din urmă la secreția de IL-1 și IL{-18 și provocând o serie de reacții inflamatorii [9,10].

Tan IIA este un constituent liposolubil al Danshen (Sahia miltiorrhiza Bge), care posedă diverse proprietăți biologice și participă la o serie de reacții biochimice. Tan IA areanti-inflamator, antioxidantși promovează efectul de angiogeneză și a fost, de asemenea, utilizat pe scară largă pentru tratamentul bolii sistemului cardio-cerebrovascular [1, 12]. Dovezile emergente au demonstrat că Tan IIA previne leziunile cardiomiocitelor, fibroblastele cardiace, ateroscleroza șineuroinflamație[13-16]. Cu toate acestea, mecanismul molecular care stă la baza efectelor Tan IIA este încă neclar.

În timpul leziunilor de ischemie/reperfuzie, monocitele/macrofagele, neutrofilele și celulele endoteliale inițiazăinflamatorrăspuns, inducând eliberarea unei varietăți deinflamatorcitokine și rezultând permeabilitate vasculară crescută, edem tisular și deteriorare. Macrofagul este un tip important de celule de reglare a inflamației printre toateinflamatorspecii de celule și joacă un rol crucial în procesul de infarct miocardic [17]. Monocitele/macrofagele recrutate în miocardul deteriorat pot elibera în continuare ROS, mediatori inflamatori și proteaze care agravează leziunile miocardice [18].

Deoarece macrofagele joacă un rol important în menținerea homeostaziei cardiace și în orchestrarea reparării țesuturilor, am recrutat celule RAW264.7 stimulate cu LPS pentru a produce un model celular de răspuns inflamator. Prezentul studiu a investigat dacă Tan IIA are un efect asupra macrofagelor stimulate cu LPS și mecanismele care stau la baza efectelor Tan ⅡA asupra macrofagelor într-o manieră dependentă de inflamazomul ROS-NLRP3.

Materiale și metode

Cultură și tratament celular

Celula RAW264.7 a fost achiziționată de la Centrul de Cultură celulară al Academiei Chineze de Științe Medicale (Beijing, China). Celulele au fost cultivate în mediu DMEM (glucoză ridicată), s-au adăugat 10 procente de ser fetal bovin (FBS), 1{00 U/mL penicilină și 100 ug/mL streptomicina. Celulele au fost cultivate la 37 de grade într-o atmosferă complet umidificată cu 5% CO2. Pentru toate experimentele, celulele au fost tratate la 80-90 procente de confluență celulară. Celulele au fost tratate cu diferite concentrații de Tan IIA (la 10,1 și 0,1 uM) pentru timpi diferiți, cu sau fără 1 ug/mL LPS. Între timp, celulele din grupul de control au fost tratate cu volum egal 0,1% DMSO.

Măsurarea producției de NO

Kitul de testare NO (Beyotime, China) a fost utilizat pentru a măsura producția de NO conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, standardele au fost diluate cu DMEM plus 10% FBS și s-au adăugat 50 μL standard sau supernatant de cultură celulară în fiecare godeu al plăcii de godeuri 96-. Apoi 50 uL de reactiv Griess I și II au fost pipetați în fiecare godeu al plăcii și densitatea optică (OD) a fost detectată de către cititorul de microplăci multimod Varioskan LUX la 540 nm.

Extracția ARN

Celulele RAW264.7 au fost placate la o densitate de 1×106 celule/godeu cu 10% FBS DMEM în plăci cu șase godeuri. 24 de ore mai târziu, mediul a fost îndepărtat și adăugat în schimb cu mediu DMEM fără ser, fără antibiotice. Celulele RAW264.7 au fost tratate cu DMSO (martor), LPS (1 ug/mL) și LPS plus Tan IIA (10,1 și 0,1 uM timp de 6 ore. Apoi ARN total a fost extras pentru a detecta nivelul de ARNm al NLRP3, IL{{ {18}} și TNF-. ARN-ul total a fost extras prin utilizarea reactivului TRIzol (Ambion). ARN-ul a fost măsurat prin concentrații Va un spectrofotometru de ultramicrofluorescență (DeNovix). Kitul de sinteză a ADNc HiFiScript (cwbiotech) a fost utilizat pentru transcrierea inversă conform cu instrucțiunile producătorului.1 ug de probe de ARN a fost transcris invers, iar etapele de reacție au fost după cum urmează: 42 grade C timp de 50 min, 85 grade C timp de 5 min și apoi menținute la 4 grade.

RT-PCR

Testul PCR ouantitativ (OPCR) a fost efectuat cu un instrument O-PCR (Lightcycler 96, Roche), folosind amestecul UltraSYBR (cwbiotech). Protocolul PCR a fost de 95 de grade timp de 10 minute, urmat de 40 de cicluri de 95 de grade pentru 10 secunde, 56 pentru 30 de secunde și 72 pentru 32 de secunde. Primerii utilizați pentru qRT-PCR sunt prezentați după cum urmează: GADPH-Forward: 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3';GADPH-Reverse:5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3',NLRP3-Forward: 5'-ATGCTGCTTCGACATCTCCT-3'NLRP3-Revers:5'-AACCAATGCGAGATCCTGAC{-3';IL{-1 -Înainte: 5'-GCCCATCCTCTGTGACTCAT-3';IL{ {32}}Revers:5'-AGGCCACAGGTATTTTGTCG-3':TNF- -Înapoi:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3'TNF-a-Reverse:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3 ! Nivelul de expresie genică a fost calculat utilizând metoda 2-AACt.

Western blot

Western blot a fost efectuată cu următoareleanticorpi: anticorp anti-NLRP3 (CST), anticorp anti-pp38 (CST), anticorp anti-p38 (CST), anticorp anti-pp65 (CST), anticorp anti-GADPH (tehnologia proteinelor), anticorp anti- -tubulină (tehnologia proteinelor), anticorpul anti- HMGB1 (tehnologia proteinelor), anticorpul anti- p65 (tehnologia proteinelor), anticorpul anti- IKB (tehnologia proteinelor). Fracțiile de proteine ​​au fost extrase din lizatele celulelor cultivate și a fost utilizat un kit de testare a proteinelor BCA îmbunătățit (Beyotime, China) pentru a măsura concentrațiile de proteine. Proteinele au fost denaturate și rezolvate pe SDS-PAGE, apoi transferate pe o membrană PVDF. După blocarea cu QuickBlockTMBlocking Buffer (Beyotime, China) timp de 1 oră, membranele PVDF au fost apoi incubate cu anticorpi primari peste noapte la 4 grade. Apoi membranele au fost spălate cu Western Wash Buffer (Beyotime, China) de trei ori și incubate cu anticorpi secundari conjugați cu HRP timp de 1 oră la temperatura camerei. Un kit BeyoECL Plus (Beyotime, China) a fost utilizat pentru a detecta proteinele conform instrucțiunilor producătorului. Un C-DiGit 3600 (Li-Cor, SUA) a fost folosit pentru imagine, iar benzile au fost cuantificate de Image J Software.

Măsurarea acumulării de ROS

Un kit de testare a speciilor reactive de oxigen cu sondă DCFH-DA (Beyotime, China) a fost utilizat pentru a măsura nivelurile intracelulare de ROS în celulele RAW264.7 conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, DCFH-DA a fost diluat cu mediu DMEM fără ser și concentrația finală a fost ajustată la 10μM/L. După incubare cu 10 μM colorant DCFH-DA timp de 30 de minute la 37 grade C, celulele RAW264.7 au fost spălate de trei ori cu mediu DMEM fără ser, astfel încât să se îndepărteze excesul de DCFH-DA. Pentru control pozitiv, s-au adăugat la celule 1μL de Rosup. Fluorescența a fost cuantificată folosind un microscop inversat Nikon IX73. Imaginile celulelor au fost măsurate folosind software-ul Image J.

Analize statistice

Toate experimentele au fost repetate de cel puțin trei ori. Software-ul SPSS a fost folosit pentru toate analizele, iar pentru desenul grafic a fost realizat GraphPad Prism 5. Toate rezultatele au fost date ca valoare medie ± SD. ANOVA unidirecțională a fost utilizată pentru a analiza datele între grupuri și pentru compararea pereche folosind testul SNK-q. O valoare P< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">

Figura 1. Tan IIA a avut un efect de reglare asupra producției de NO, NLRP3, IL-1, ARNm de TNF

expresie

A. RAW264.7 Celulele NO producție de diferite grupuri. Celulele au fost pretratate cu Tan IIA 10 uM, 1 uM şi

{{0}}.1µM timp de 30 min și stimulat cu LPS (1 ug/mL) timp de 24 de ore. * P < 0,05="" față="" de="" ctrl,="" #="" p="">< 0,05="" față="" de="" lps.="" bd.="" tan="">

a avut un efect reglator asupra expresiei ARNm a TNF-, NLRP3 și IL-1. Celulele au fost pretratate cu Tan IIA

Rezultate

Efectul asupra producției de celule RAW264.7 NO a tratamentului Tan IIA

NO, o moleculă a doua mesager, îndeplinește diverse funcții în procesele fiziologice și patologice celulare. NO secretat de macrofage joacă un rol important în reacțiile inflamatorii, imune și antivirale [19, 20]. Datorită acestora, NO poate fi utilizat pentru a estima efectele LPS asupra răspunsurilor imune și inflamatorii. Celulele au fost tratate cu diferite concentrații de Tan IIA (la 10, 1 și 0,1 μM) cu sau fără 1 ug/mL LPS timp de 24 de ore, iar celulele din grupul de control au fost tratate cu un volum egal de 0,1 procente DMSO. După cum se arată în Figura 1A, în comparație cu grupul de control, în grupul model stimulat cu LPS timp de 24 de ore, producția de NO a crescut semnificativ (P<0.05); and="" various="" concentrations="" of="" taniia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" no="" production=""><0.05) of="" the="" cells="" stimulated="" with="">

Efectul asupra expresiei NLRP3, IL-1 și TNF-mARN a tratamentului Tan IIA

Celulele RAW264.7 stimulate cu LPS ar putea induce activarea răspunsului inflamator și ar putea fi ameliorat de Tan IIA, inclusiv expresia ARNm a NLRP3, IL{3} și TNF-. După cum se arată în Figura 1B-D, în comparație cu grupul de control, în grupul model stimulat cu LPS, expresia ARNm a NLRP3, IL-1 și TNF- a fost semnificativ crescută (P <{{1{{14} }}}.05);="" și="" diferite="" concentrații="" de="" tratament="" cu="" tan="" iia="" (la="" 10,="" 1="" și="" 0,1="" μm)="" au="" scăzut="" semnificativ="" expresia="" arnm="" a="" nlrp3,="" il-1="" și="" tnf-="" (p=""><0,05) în="" celulele="" stimulate="" cu="">

Efectul asupra expresiei proteinei NLRP3 a tratamentului Tan IIA

ATP, o a doua moleculă semnal, este un activator necesar pentru activarea inflamazomului NLRP3. Deci, ATP a fost utilizat pentru a induce activarea NLRP3 [21, 22]. Rezultatele noastre au arătat că LPS plus ATP au indus activarea expresiei proteinei NLRP3 și ar putea fi ameliorat de Tan IIA. După cum se arată în Figura 2, în comparație cu grupul de control, în grupul model indus de LPS plus ATP, nivelul de exprimare a proteinei al NLRP3 a fost semnificativ crescut (P <{8}}.05); și="" tratamentul="" cu="" taniia="" (la="" 10μm)="" a="" scăzut="" semnificativ="" expresia="" proteinei="" nlrp3="" (p=""><0,05) în="" celulele="" stimulate="" cu="" lps="" plus="">

Activarea indusă de LPS a căii NF-kB și p38 ar putea fi inhibată de Tan IIA

După cum se arată în Figura 2, în comparație cu grupul de control, în celulele stimulate cu LPS sau LPS plus ATP, expresia proteinei IKB, pp65/p65 a fost semnificativ crescută (P <{3}},05); și="" tratamentul="" cu="" tan="" iia="" (la="" 10μm)="" a="" scăzut="" semnificativ="" supraregularea.="" nivelul="" de="" proteină="" al="" pp38/p38="" a="" fost="" reglat="" în="" sus="" în="" celulele="" stimulate="" cu="" lps="" plus="" atp,="" iar="" reglarea="" a="" fost="" inhibată="" de="" tan="" iia="" (10μm)="" (figura="" 2).="" cu="" toate="" acestea,="" nivelul="" de="" proteine="" ​​al="" pp38/p38="" nu="" s-a="" schimbat="" semnificativ="" în="" celulele="" stimulate="" cu="" lps.="" în="" plus,="" expresia="" proteinei="" hmgb1="" a="" fost,="" de="" asemenea,="" îmbunătățită="" în="" celulele="" induse="" cu="" lps="" sau="" lps="" plus="" atp,="" dar="" nu="" a="" arătat="" nicio="" diferență="" statistică.="" aceste="" rezultate="" sugerează="" că="" activarea="" indusă="" de="" lps="" sau="" lps="" plus="" atp="" a="" căii="" nf-kb="" și="" p38="" poate="" fi="" inhibată="" de="" tan="">

Tan IIA a avut un efect de reglementare asupra ROS

Pentru a confirma dacă Tan IIA ar putea elimina ROS intracelular, producția de ROS intracelular a fost evaluată prin microscopie cu fluorescență folosind un kit de testare a speciilor reactive de oxigen. Celulele RAW264.7 au fost expuse la LPS timp de 6 ore și s-a adăugat 1 mM ATP cu 30 de minute înainte ca celulele să fie recoltate. Celulele pozitive pentru ROS au fost vizualizate ca pete verzi strălucitoare, iar tratamentul cu LPS plus ATP a crescut semnificativ nivelul ROS intracelular, în comparație cu cel din grupul de control (Figura 3). Între timp, tratamentul cu Tan IIA a inhibat semnificativ creșterea ROS intracelulară indusă de LPS plus ATP (Figura 3). Aceste rezultate au sugerat că Tan IIA a avut capacitate antioxidantă.

Figura 3. Tan IIA a avut efect de reglare asupra expresiei ROS (bară de scară 50μm)

Celulele au fost pretratate cu Tan IIA 10µM timp de 30 min și stimulate cu LPS (1 ug/mL) timp de 5,5 ore. ATP a fost adăugat cu 30 de minute înainte ca celulele să fie recoltate. A. Imagini de fluorescență reprezentative ale expresiei ROS celulare. B. Date cantitative ale mediei în trei experimente separate. * P < 0,05="" față="" de="" ctrl,="" #="" p="">< 0,05="" față="" de="" lps/lps="" plus="">

Figura 4. NAC a avut un efect de reglare asupra expresiei proteinei NLRP3.

Celulele au fost pretratate cu Tan IIA 10µM timp de 30 min și stimulate cu LPS (1 ug/mL)/LPS (1 ug/mL) plus NAC (1 mM) timp de 5,5 ore. ATP a fost adăugat cu 30 de minute înainte ca celulele să fie recoltate. A. Western blot reprezentativ al NLRP3. B. Date cantitative ale mediei în trei experimente separate. * P < 0,05="" față="" de="" ctrl,="" #="" p="">< 0,05="" față="" de="" lps="" plus="">

NAC a avut un efect de reglementare asupra NLRP3

Acetilcisteina (N-acetil-l-cisteina, NAC), un captator al ROS, ar putea inhiba expresia proteinei NLRP3. După cum sa menționat anterior, expresia proteinei NLRP3 a crescut semnificativ după stimularea cu LPS plus ATP timp de 6 ore, iar tratamentul cu Tan IIA a inhibat creșterea indusă de LPS plus ATP a nivelului de proteină NLRP3. În plus, tratamentul cu NAC ar putea, de asemenea, inhiba semnificativ creșterea LPS plus ATP indusă de ATP a nivelului de proteină NLRP3 (Figura 4). Aceste rezultate au arătat că efectul de reglementare al Tan IIA asupra NLRP3 poate depinde de o cale ROS-NLRP3.

Discuţie

Macrofagele participă la procesul de răspuns inflamator și joacă un rol crucial în procesul de infarct miocardic. Monocitele/macrofagele recrutate în miocardul deteriorat pot elibera în continuare ROS, mediatori inflamatori și protează, ceea ce agravează leziunea miocardică [23]. Celulele RAW264.7 au fost considerate ca un model de macrofage experimental dominant și joacă un rol important în cercetarea căilor de semnalizare inflamatorie relevante pentru macrofage [24]. Macrofagele joacă un rol vital în menținerea homeostaziei cardiace și în orchestrarea reparării țesuturilor, precum și în remodelare. Celulele RAW264.7 stimulate de LPS au fost utilizate pe scară largă pentru a studia medicamentele care posedă proprietăți antiinflamatorii și mecanisme de bază [25,26].

Inflamazomul NLRP3 este un mediator vital al răspunsurilor inflamatorii și au existat dovezi tot mai mari că inflamazomul NLRP3 joacă un rol crucial în bolile de inimă. În vasele arteriale umane, expresia ridicată a NLRP3 a fost corelată cu factorii de risc ai bolilor aterosclerotice și severitatea bolii coronariene [27], iar nivelul genelor asociate cu inflamazomul NLRP3 a fost asociat cu placa aterosclerotică [28]. Activarea inflamazomului NLRP3 a fost, de asemenea, asociată cu remodelarea cardiacă adversă. NLRP3 a fost activat în cardiomiocite în modelul de remodelare cardiacă adversă indusă de constricția aortică transversală (TAC) la șoareci, iar activarea inflamazomului NLRP3 a dus la transformarea pro-caspazei-1 în forma sa activă [29]. MCC950.a Inhibitorul inflamazomului NLRP3 ar putea inhiba efectul aterosclerotic, probabil într-un mod de inhibare a aderenței monocitelor și de reducere a acumulării de macrofage intraplacă [30].

Tan IIA este un monomer major extras din Danshen, având diverse proprietăți biologice. Tan ⅡA areanti-inflamator, antioxidantși promovează efectul de angiogeneză și a fost utilizat pe scară largă pentru tratamentul bolilor sistemului cardio-cerebrovascular [11]. Dovezile emergente au demonstrat că Tan A a prevenit leziunile cardiomiocitelor, fibroblastele cardiace, ateroscleroza șineuroinflamație[13-16]. Studiile noastre anterioare au arătat că Tan IIA a exercitat un efect antiinflamator prin inhibarea căii de semnalizare TLR4-MyD{88-NF-KB și prin ajustarea expresiei miARN asociate în celulele RAW264.7 stimulate de LPS [31] . În plus, Tan IIA ar putea promova polarizarea macrofagelor de la un fenotip M1 proinflamator spre un fenotip M2 antiinflamator [32]. Cu toate acestea, mecanismul molecular care stă la baza efectelor Tan IIA a fost încă neclar.

Rezultatele noastre au arătat că producția de NO a crescut semnificativ în celulele RAW264.7 stimulate cu LPS, iar tratamentul cu Tan IIA (la 10, 1 și 0,1 uM) a scăzut semnificativ producția de NO a celulelor. Celulele RAW264.7 stimulate cu LPS ar putea induce activarea răspunsului inflamator și ar putea fi ameliorat de Tan IIA, inclusiv expresia ARNm a NLRP3, IL-1 și TNF-.ATP este o a doua moleculă semnal de Activarea inflamazomului NLRP3. În studiu, ATP a fost folosit pentru a induce activarea NLRP3. Rezultatele au arătat că LPS plus ATP au indus activarea expresiei proteinei NLRP3 și ar putea fi ameliorat de Tan IIA. În celulele stimulate cu LPS sau LPS plus ATP, expresia proteinei IKBa, pp65/p65 a fost semnificativ crescută; și tratamentul Tan IA (la 10μM) a scăzut semnificativ reglarea în sus. Nivelul de proteină al pp38/p38 a fost suprareglat în celulele stimulate cu LPS plus ATP, iar suprareglarea a fost inhibată de Tan IA (10uM). În plus, expresia proteinei HMGB1 a fost, de asemenea, îmbunătățită în celulele induse cu LPS sau LPS plus ATP, dar nu a arătat nicio diferență statistică. Aceste rezultate au sugerat că activarea indusă de LPS sau LPS plus ATP a căii NF-kB și p38 ar putea fi inhibată de Tan IIA.

Tratamentul cu LPS plus ATP a crescut semnificativ nivelul ROS intracelular, iar Tan IIA a inhibat semnificativ creșterea indusă de LPS plus ATP a ROS intracelular. Acetilcisteina (N-acetil-I-cisteina, NAC) este un captator de ROS. NAC ar putea inhiba IPS plus creșterea indusă de ATP a nivelului de proteină NLRP3 în mod semnificativ. Aceste rezultate au sugerat că Tan IIA a avut capacitatea antioxidantă și că efectul reglator al Tan IIA asupra NLRP3 ar putea depinde de o cale ROS-NLRP3.

În concluzie. Tan IIA ar putea inhiba răspunsul inflamator și expresia NLRP3 stimulată de LPS sau LPS plus ATP, iar NAC ar putea inhiba LPS plus creșterea indusă de ATP a nivelului NLRP3. Prin aceasta, s-ar putea specula că mecanismul care stă la baza efectelor Tan IIA poate implica reglarea căii ROS-NF-kB/ P38-NLRP3. Acest studiu a caracterizat în continuare mecanismul molecular al Tan IA și a oferit noi gânduri la terapia sa clinică.

Referințe

1 M.DeBerge.SJ. Shah, L. Weilbacher și colab. Macrofage în insuficiența cardiacă cu fracțiune de ejecție redusă versus conservată. Trends Mol. Med 2019, 25: 328-340.

2. GH. Gislason, S. Jacobsen, JN Rasmussen și colab. Risc de deces sau de reinfarct asociat cu utilizarea inhibitorilor selectivi de ciclooxigenază-2 și a medicamentelor antiinflamatoare nesteroidiene neselective după infarct miocardic acut. Circulație 2006, 113: 2906-2913

3. DM McNamara, R. Holubkov, RCStarling, et al. Studiu controlat al imunoglobulinei intravenoase în cardiomiopatia dilatativă cu debut recent. Circulație 2001, 103:2254-2259.

4. PM Ridker, BMEverett, T.Thuren, et al. Terapie antiinflamatoare cu canakinumab pentru boala aterosclerotică. N Engl J Med 2017,377:1119-1131. PMRidker, JG MacFadyen, T. Thuren, et al.

5. Efectul inhibării interleukinei-1beta cu canakinumab asupra cancerului pulmonar incident la pacienții cu ateroscleroză: rezultate exploratorii dintr-un studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. Lancet 2017,390:1833-1842. H. Guo, JB Callaway, JP Ting.

6. mecanism de acțiune, rol în boală și terapie. Nat Med 2015,21:677-687.

7. L.Minutoli.D.Puzzolo,M.Rinaldi, et al. Activarea inflamazomului NLRP3 mediată de ROS în creier. inima. rinichi și leziuni de ischemie/reperfuzie testiculară.Oxid Med Cell Longley 2016.2016:2183026.

8. M.KawaguchiM.TakahashiTHata, et al. Activarea inflamazomală a fibroblastelor cardiace este esențială pentru ischemia miocardică/leziunea de reperfuzie. Circulație 2011, 123:594-604. G. Trendelenburg. Reglarea moleculară a destinului celular

9. în ischemia cerebrală: rolul inflamazomului și căilor conexe. J Cereb Blood Flow Metab 2014,34:1857-1867.

10.C. Jin, RAFlavell. Mecanismul molecular de activare a inflamazomului NLRP3.J Clin Immunol 2010,30:628-631.

11.A. Cai. W, Zhang, Z.Chen, et al. Perspective recente asupra activităților biologice și sistemelor de administrare a medicamentelor ale tanshinonelor. Int J Nanomedicine 2016,11:121-130.

12. M.Akaberi, M.Iranshahi, S. Mehri. Căile de semnalizare moleculară din spatele efectelor biologice ale diterpenelor speciilor de salvia în neurofarmacologie și cardiologie. Phytother Res2016.30:878-893.

13. D. Wang, Y.Liu, G.Zhong, et al. Compatibilitatea tanshinonei IIA și astragalozidei IV în atenuarea leziunii cardiomiocitelor induse de hipoxie. Etnofarmacol 2017,204:67-76.

14. W. Chen, X.Li, S.Guo, et al.Tanshinone IIA armonizează diafonia autofagiei și polarizarea în macrofage prin calea miR-375/KLF4 pentru a atenua ateroscleroza. Int Immunopharmacol 2019,70:486-497.

15. YT Tsai, SHLoh, CY Lee și colab. Tanshinona A inhibă sinteza mare de colagen indusă de glucoză prin factorul 2 asociat factorului eritroid nuclear 2-din fibroblastele cardiace. Cell Physiol Biochem 2018,51:2250 2261.

16.N. Huang, Y.Li, Y. Zhou, et al. Efectul neuroprotector al celulelor mezenchimale incubate cu tanshinonă IA se bazează pe 5C indus de Abeta25-35-Asupra neuroinflamării.Behav Brain Res 2019,365:48-55.

17.T. Heidt. G Courtoazie, P Dutta, et al. Contribuția diferențială a monocitelor la macrofagele cardiace în starea de echilibru și după infarctul miocardic. Circ Res 2014,115:284-295.

18. S. Steffens,F. Montecucco, F. Mach. Răspunsul inflamator este o țintă pentru reducerea ischemiei miocardice și a leziunii de reperfuzie. Thromb Haemost 2019,102:240-247.

19.J. MacMicking, OW Xie. C. Nathan Oxidul nitric și funcția macrofagelor Annu Rev Immunol 1997,15: 323-350.

20.SHHH. W, WU NU la locul de muncă.Cell 1994.78: 919-925.

21. L. Franchi, T. Eigenbrod, R. Munoz-Planllo și colab. The inflammasome: a caspaze-1-activation platform that regulates imune responses and disease pathogenesis. Nat Immunol 2009,10:241-247.

22. X. Dong Z. Zheng, P. Lin și colab. ACPA-urile promovează producția de IL-1beta în artrita reumatoidă prin activarea inflamazomului NLRP3. Cell Mol Immunol 2019.

23. PJ. Murray, TA Wynn. Funcțiile protectoare și patogene ale subgrupurilor de macrofage. Nat Rev Immunol 2011,11:723-737.

24. G Pascual, AL Fong, S. Ogawa, et al. O cale dependentă de SUMOilare mediază transreprimarea genelor de răspuns inflamator de către PPAR-gamma. Nature 2005,437:759-763.

25.X. Zhang G.Wang, ECGurley, et al. Apigenina flavonoidă inhibă răspunsul inflamator indus de lipopolizaharide prin mecanisme multiple la macrofage. PLoS One 2014,9:e107072.

26. Z. Yuan, MA Syed, D. Panchal, et al. Modulația epigenetică mediată de curcumină inhibă expresia TREM-1 ca răspuns la lipopolizaharide. Int J Biochem Cell Biol 2012,44:2032-2043.

27.F.Zheng.S, Xing. Zhong și colab. Inflamazomii NLRP3 prezintă o expresie ridicată în aorta pacienților cu ateroscleroză. Heart Lung Circ 2013, 22:746-750.

28. G Paramel Varghese, L. Folkersen, RJ Strawbridge, et al. Exprimarea și activarea inflamasomului NLRP3 în ateroscleroza umană. J Am Heart Assoc 2015,5.

29.T. Suetomi, A. Willeford, CSBrand, er al Inflamația și activarea inflamazomului NLRP3 inițiate ca răspuns la suprasolicitarea de presiune prin semnalizarea protein kinazei II delta dependentă de Ca(2 plus)/calmodulin-dependent în cardiomiocite sunt esențiale pentru remodelarea cardiacă adversă. Circulație 2018, 138:2530-2544.

30. T. van der Heijden, E. Kritikou, W. Venema, et al. Inhibarea inflamazomului NLRP3 de către MCC950 reduce dezvoltarea leziunilor aterosclerotice la șoarecii cu deficit de apolipoproteină E - raport scurt. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2017,37:1457-1461.

31. G Fan.X. Jiang. X. Wu, e1 al. Activitatea antiinflamatoare a tanshinonei IIA în macrofagele RAW264.7 stimulate de LPS prin miARN și calea TLR4-NF-kappaB. Inflamație 2016,39: 375-384.

32. S. Gao, Y. Wang, D. Li, et al. Tanshinone IIA atenuează răspunsul inflamator și dirijează polarizarea macrofagelor în celulele RAW264.7 stimulate de lipopolizaharide. Inflamație 2019, 42: 264-275.