Efectele polizaharidei Cistanche Deserticola asupra celulelor imune și activității telomerazei la șoarecii în vârstă

Zhang Hongquan, Li Yuan, Song Yuanyuan (Institutul de Medicină, Universitatea Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)

Abstract: Obiectiv Să studieze efectele polizaharidei de Cistanche deserticola (PCD) asupra conținutului de malondialdehidă (MDA), activității telomerazei și funcției imune în țesutul șoarecilor în vârstă subacută. Metode Modelul de îmbătrânire subacută al șoarecilor a fost indus de D-galactoză. Conținutul de MDA a fost detectat prin colorimetrie cu acid tiobarbituric; Activitatea telomerazei a fost detectată prin PCR-ELISA; Reacția de proliferare a limfocitelor a fost măsurată prin metoda MTT; Funcția fagocitară a macrofagelor peritoneale de șoarece a fost măsurată prin test roșu neutru; Conținutul de IL-2 în ser a fost determinat prin test imunosorbent legat de enzime (ELISA). Rezultate Conținutul de MDA în inimă, ficat și creier al grupului model a crescut semnificativ, în timp ce activitatea telomerazei, reacția de proliferare a limfocitelor, fagocitoza macrofagelor peritoneale și conținutul de IL-2 din sângele periferic au scăzut semnificativ. După administrarea PCD, conținutul de MDA din inima, ficat și creierul șoarecilor a scăzut semnificativ, iar activitatea telomerazei în țesutul inimii și creierului, reacția de proliferare a limfocitelor, fagocitoza macrofagelor peritoneale și conținutul de IL-2 în sângele periferic au crescut semnificativ. Concluzie PCD poate antagoniza deteriorarea radicalilor liberi, poate îmbunătăți activitatea telomerazei în țesutul inimii și creierului și funcția imunitară a șoarecilor îmbătrâniți și poate îmbunătăți îmbătrânirea indusă de D-galactoză.

Cuvinte cheie: Cistanche deserticolapolizaharidă; Malondialdehidă; telomeraza;Imunizare; fi senil

Supliment Cistanche langa mine- Îmbunătățește imunitatea

Faceți clic aici pentru a vedea produsele Cistanche Enhance Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Clasificarea bibliotecii chineze nr.: R284 Cod document: A Nr. articol: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Cistanche deserticola este o tulpină cărnoasă uscată cu frunze fosforoase de Cistanche deserticola, care are funcția de a tonifica ficatul și rinichii și de a beneficia de esență și qi [1]. Polizaharida Cistanche deserticola este o polizaharidă brută separată de Cistanche deserticola, care este îndepărtată din impuritățile moleculare mici solubile în apă, deproteinizată prin metoda Sevag și tratată în mod repetat cu apă și alcool pentru a obține PCD [2]. Acest experiment începe cu teoria imunității și teoria telomerilor a îmbătrânirii și adoptă modelul șoarecelui de îmbătrânire cu D-galactoză pentru a observa efectul PCD asupra conținutului de malondialdehidă (MDA) și a activității telomerazei în inimă, ficat și creier și explora preliminar. mecanismul acestuia.

1.Material si metode

1.1 Animale, medicamente, reactivi și instrumente

3-Șoareci ICR de o lună, grad curat, 26-32g, jumătate mascul și jumătate femelă [Centrul pentru animale experimentale de la Universitatea Yangzhou, certificat de calitate a animalelor experimentale nr.: SCXK (Dum.) 2002-0009] . Temperatura camerei este de 20 ~ 25 de grade, iluminarea naturală, iar mediul este potrivit pentru hrănire timp de o săptămână înainte de experiment. PCD este furnizat de Nanjing Wildlife Research Institute și dizolvat în apă distilată; D-galactoză (D-Gal, Shanghai Second Reagent Factory); Kit de testare a activității telomerazei (MB Company, SUA); Kit de detectare MDA și kit ELISA IL-2 de șoarece (Institutul de Cercetare în Inginerie Biologică Nanjing Jiancheng). marker enzimatic ELX800UV (BIO-TEK, SUA); omogenizator de țesut PT-MR3100D (Polytron, Elveția); Centrifuga de congelare de birou MODEL550 (Eppendorf, Germania); Cantar electronic BP110S (Sartorius, Germania).

Cistanche deserticola- Îmbunătățește imunitatea

1.2 Gruparea animalelor, pregătirea modelului și administrarea

Modelul de șoarece îmbătrânit a fost pregătit conform metodei din literatură [3]. 10% D-Gal a fost preparat cu apă pentru injecție și 10 mL · kg-1 au fost injectați subcutanat în gâtul și spatele șoarecilor o dată pe zi timp de 6 săptămâni. Șoarecii au fost împărțiți aleatoriu în cinci grupuri: grupul de control normal, grupul de control model, grupuri PCD25, 50 și 100 mg · kg-1 (grupe PL, PM, PH), cu 12 șoareci în fiecare grup. Șoarecii din grupul model și grupul de administrare PCD au fost stabiliți conform legii, iar PCD25, 50 și 100 mg · kg-1 cu un volum de 20 mL · kg{-1 au fost administrate prin gavaj în fiecare zi. Șoarecilor din grupul de control normal li s-a injectat același volum de apă pentru injecție și li sa administrat același volum de soluție salină normală prin gavaj.

1.3 Determinarea conținutului de MDA și a activității telomerazei

La 24 de ore după ultima administrare, globul ocular a fost îndepărtat și s-a prelevat sânge, șoarecii au fost uciși, inima, ficatul și creierul au fost îndepărtați rapid și s-a efectuat omogenat de țesut proaspăt la temperatură scăzută, centrifugare și s-a prelevat supernatantul. Conținutul de MDA a fost determinat prin colorimetrie cu acid tiobarbituric. Activitatea telomerazei a fost detectată prin PCR-ELISA. Etapele de operare au fost efectuate conform instrucțiunilor de pe kit. Valoarea A a fost măsurată la 450 nm de markerul enzimei.

1.4 Determinarea reacției de proliferare a limfocitelor [4]

Scoateți splina de șoarece în mod aseptic în bancul de lucru ultra-curat, pregătiți suspensia de celule splinei de șoarece și ajustați densitatea celulelor la 1 × 109 · L-1, concanavalina A (ConA) a fost cultivată ca stimulator in vitro pentru 48 de ore, iar reacția de proliferare celulară a fost măsurată prin metoda MTT. Valoarea lui A a fost măsurată la lungimea de undă de 570 nm măsurată de linkerul enzimatic, iar rezultatul a fost exprimat ca valoarea medie a trei găuri complexe A.

1.5 Determinarea funcției fagocitare a macrofagelor peritoneale prin metoda roșu neutru

Cistanche beneficii masculine—Imdovedesc imunitatea

La 24 de ore după ultima administrare, șoarecii au fost decapitați și uciși. Lichidul peritoneal al șoarecilor s-a colectat aseptic și s-a centrifugat la 1000r · min{-1, celulele au fost spălate cu soluție Hanks de trei ori și suspensia de celule a fost preparată cu soluție de cultură 1640. Luați 3 ml și puneți-l într-un vas de cultură, cultură la 37 de grade și 5 la sută CO2 timp de 2 ore. Macrofagele aderă la suprafața recipientului, sufla și sug cu soluție Hanks de 4 grade, colectează celule aderente, numără pe placa de numărare a celulelor sanguine și ajustează densitatea celulelor la 2 × 109 celule · L-1, cultivate în într-un incubator de 37 de grade timp de 2 ore, supernatantul și celulele neaderente au fost aruncate. Luați macrofage aderente, adăugați 0,1% roșu neutru salin fiziologic, continuați cultura la 37 de grade timp de 30 de minute, aruncați roșu neutru, spălați în mod repetat macrofagele cu PBS la 37 de grade, diluați cu 50% acid acetic și 50% etanol în volum și măsurați. valoarea lui A.

1.6 Determinarea nivelului IL-2 seric

Luați sânge din globul ocular, centrifugați (3000r · min-1, 10 min) pentru a separa serul și determinați conținutul de IL-2 din ser prin test imunosorbant legat de enzime (ELISA). Funcționarea specifică este conform instrucțiunilor trusei. Nivelul IL-2 din serul șoarecilor din fiecare grup este detectat la 450 nm de markerul enzimatic.

1.7 Analiză statistică

Datele au fost procesate cu SPSS11.0, iar datele de măsurare au fost exprimate cu medie ± abatere standard (x ± s), folosind ANOVA unidirecțional și test t inter-grup.

Ginsengul din desert -Suntdovedesc imunitatea

2.Rezultate

2.1 Efectul PCD asupra conținutului de MDA din inima, creierul și ficatul șoarecilor în vârstă

A fost semnificativ mai mare decât cea a grupului de control normal (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 Efectul PCD asupra activității telomerazei în țesuturile inimii, creierului și ficatului la șoareci în vârstă

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (Tabelul 2). 2.3 Efectele PCD asupra reacției de proliferare a limfocitelor, fagocitozei macrofagelor peritoneale și conținutului de IL-2 seric la șoarecii în vârstă au fost semnificativ mai mici decât cele din grupul de control normal (P<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.Discuţie

Mecanismul exact al îmbătrânirii este încă neclar. De-a lungul anilor, oamenii de știință din țară și din străinătate au prezentat zeci de teorii ale îmbătrânirii, cum ar fi teoria radicalilor liberi. Oxigenul molecular este necesar pentru supraviețuirea organismelor, iar nutrienții din organism eliberează energie prin oxidare. Starea oxidativă a celulelor joacă un rol important în îmbătrânire, apariția tumorii și dezvoltarea. Cu toate acestea, radicalii liberi se vor forma în unele procese de oxidare, iar îmbătrânirea este strâns legată de reacțiile anormale ale radicalilor liberi. Când radicalii liberi se acumulează prea mult în organism, vor cauza peroxidarea acizilor grași nesaturați în organism, în special în membrana biologică, ducând la modificări ale structurii membranei celulare, deteriorarea funcției membranei și producerea de MDA. și lipofuscină (LPF) [5].

MDA este un agent de reticulare extrem de activ. Se poate lega covalent cu proteine, enzime și aminoacizi liberi de pe acizii nucleici pentru a forma baze Schiff. Din cauza legăturilor sale anormale, nu poate fi digerat de hidrolază după ce a fost înghițit de lizozomi și se poate aduna în celule pentru a forma lipofuscină, care poate otrăvi celulele, bloca transmiterea substanțelor și mesajelor în celule și poate duce la o accelerare nucleară a îmbătrânirea și moartea celulelor.

Prin urmare, MDA poate fi folosit ca un indicator de încredere al îmbătrânirii organelor și celulelor. Teoria telomerilor crede că lungimea cromozomului (telomerului) din partea superioară a cromozomului este strâns legată de îmbătrânire și durata de viață. Lungimea telomerului este de aproximativ 2 până la 15 kb. Din cauza problemei replicării terminale, ADN-ul telomerului va pierde 50 până la 200 bp de fiecare dată când ADN-ul este copiat. Odată cu creșterea numărului de diviziuni celulare, ADN-ul telomerului se va scurta treptat. Când este scurtat la o anumită limită, nu va menține stabilitatea colorării, iar celula își va pierde capacitatea de divizare și proliferare și va muri de îmbătrânire, această scurtare este un semn al îmbătrânirii [6]. Celula intră în stadiul de eșec proliferativ, iar celula continuă să supraviețuiască, dar nu se poate diviza și prolifera [7]. Prin urmare, telomerii sunt cunoscuți și ca „ceasul biologic” al celulelor, iar îmbătrânirea celulară determină îmbătrânirea întregului organism. Cercetările lui Bryma au descoperit că lungimea telomerului este legată de activitatea telomerazei. Cu cât activitatea telomerazei este mai mare, cu atât telomerul este mai lung, cu atât stabilitatea și integritatea cromozomilor sunt mai bune, cu atât timpii de diviziune celulară sunt mai mari și durata de viață este mai lungă.

Supliment de Cistanche lângă mine — Îmbunătățește imunitatea

Sistemul imunitar, ca sistem complet și autonom, joacă un rol important în menținerea și ajustarea activităților vieții, iar declinul funcției imunitare este cea mai proeminentă caracteristică a îmbătrânirii. Disfuncția imună poate accelera îmbătrânirea organismului[8]. Rezultatele acestui experiment au arătat căPCD ar putea reduce semnificativ conținutul de MDA în țesuturile inimii, creierului și ficatului, crește activitatea telomerazei în inimă și țesuturile cerebrale ale șoarecilor model în vârstă, precum și reacția de proliferare a limfocitelor, fagocitoza macrofagelor peritoneale și conținutul de IL{0 }} în sângele periferic al șoarecilor în vârstă. Se poate concluziona că PCD are un rol bun în antagonizarea daunelor radicalilor liberi, poate promova proliferarea limfocitelor, poate îmbunătăți imunitatea celulară nespecifică și funcția de reglare imună a organismului și joacă un rol în întârzierea îmbătrânirii organismului.

REFERINȚE

[1] MAZG.Different of Processed Cistanche sinensis G.Beck and Herba Cistanche by HPLCF ingerprints[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF, LINAP, ZHANGHQ,etal.Thee effect of polysaccgrides of Cistanche deserticola YCMa on spleen deficiency syndromers[ J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY, BIANRL, CHENX.Methodoldgy of Pharmacological Experiments)[ M] .Vol3.Beijing:People's Medical Publishing House, 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, etal. Efectul extracției cu cynomorium coccineum asupra funcției imunității și metabolismului radicalilor liberi la șoareci în vârstă[ J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ, WANGZL, XUESH.Progres în studiile mecanismului de îmbătrânire[ J] .Chin J Control Endem Dis=, 2008, 23(1):35-37.

[6] YANGJ, ZHANXH, SUNY, și colab. Efectul sijunzidecocției asupra conținutului de malondialdehidă și a activității telomerazei în țesuturile inimii, ficatului și creierului și șoareci model de îmbătrânire indusă de D-galactoză[ J] .ChinJ Integr Tradit Chin West Med=, 2005, 225 (6):531-533.

[7] ZHANGXH, ZHANGJN.Telomere, telomeraze, agingand cancer[ J] .IntJGenetics=, 2007, 30(1):69-71.

[8] SONGSX, LVZJ.Research Progress of T,B cell senescence and its mo lecularm echanism[ J] .JCell MolI mmunol, 2002, 18(3):306-308.