Efectele a patru extracte din plante chinezești asupra celulelor de carcinom pulmonar cu celule mici sensibile la medicamente și multirezistente la medicamente

David SadavaJulie Ahn Mei Zhan Mei-Lin PangJane DingSusan E. Kane

Scop abstract:Am examinat farmacologia, biologia celulară și biologia moleculară a celulelor de carcinom pulmonar cu celule mici tratate cu patru extracte deMedicamente chinezești pe bază de plante. Mulți bolnavi de cancer iau aceste medicamente, dar efectele lor la nivel celular sunt în mare parte necunoscute. Am fost interesați în special de efectele asupra celulelor rezistente la medicamente, deoarece rezistența este o problemă clinică semnificativă încancer pulmonarr. Metode: Celulele epiteliale pulmonare sensibile la medicamente (H69), multi-rezistente la medicamente (H69VP) și normale (BEAS-2) au fost expuse la extracte din două plante utilizate în medicina pe bază de plante chineză pentrucancer de plamani: Glycyrrhiza glabra (GLYC) și Olenandria diffusa (OLEN) și la extracte din două combinații disponibile comercial deMedicamente chinezești pe bază de plante, SPES (15 ierburi) și PC-SPES (8 ierburi). Citotoxicitatea a fost măsurată în termeni de inhibare a creșterii celulare (IC50). Cinetica fragmentării ADN-ului după expunerea la extractele din plante a fost măsurată prin etichetare BudR urmată de ELISA. Apoptoza a fost măsurată prin testul TUNEL urmat de citometrie în flux. Expresia genelor legate de apoptoză și ciclul celular a fost măsurată prin transcrierea inversă a ARNm urmată de hibridizarea pe filtru la rețele de sonde și detectarea prin chemiluminiscență. Rezultate: în fiecare caz, cele patru extracte din plante au fost în mod egal citotoxice pentru H69 și H69VP și mai puțin citotoxice pentru BEAS-2. Toate cele patru extracte au indus fragmentarea ADN-ului în celulele carcinomului pulmonar. Cinetica a arătat fragmente de ADN eliberate în mediu (o indicație de necroză) în culturile expuse la GLYC, dar în interiorul celulelor (o indicație de apoptoză) în culturile expuse OLEN-, SPES- și PC-SPES. Analiza TUNEL a confirmat că expunerea la ultimele trei extracte, dar nu la GLYC, a dus la apoptoză. În comparație cu celulele netratate și tratate cu GLYC, celulele H69 și H69VP tratate cu OLEN, SPES și PC-SPES au prezentat o expresie crescută a unui număr de gene implicate în cascada apoptotică, similar cu celulele tratate cu etoposid și vincristină.

Concluzie:TheMedicina pe bază de plante chinezăextractele OLEN, SPES și PC-SPES sunt citotoxice atât pentru rezistente la medicamente, cât și pentru sensibile la medicamentecancer de plamanicelule, care prezintă o anumită specificitate a celulelor tumorale în comparație cu efectul lor asupra celulelor normale și sunt proapoptotice, măsurate prin rupturi de ADN și expresia genelor. Reacția celulelor tumorale la aceste extracte a fost similară cu reacția lor la medicamentele chimioterapeutice convenționale.

Cistanche, un prețiosMedicina pe bază de plante chineză, are ca efect sporirea imunității șicancer de plamani. Cistanche are o lungă istorie de utilizare medicinală. A fost înregistrat pentru prima dată în „Shen Nong’s Materia Medica”. Shennong a gustat tot felul de ierburi. Eficacitatea și rolul Cistanche sunt semnificative în revigorarea rinichilor și esența hrănitoare, ameliorarea oboselii, umezirea intestinelor și defecația, hrănirea yangului și hrănirea yinului etc., așa că a fost consemnat în carte. În timpul dinastiei post-Tang, Cistanche a fost inclusă ca unul dintre cele nouă tipuri de iarbă din zânele chinezești. Cercetările moderne asupra acesteia au fost efectuate de mai bine de 60 de ani. , Anti-îmbătrânire, ajută la îmbunătățirea memoriei și a imunității etc.

Cuvinte cheie:Cancer de plamani, Rezistenta la medicamente,Medicamente chinezești pe bază de plante,cistanche

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com

Introducere

Cu celule micicancer de plamani(SCLC) reprezintă aproximativ 20 la sută din totalcancere pulmonareși este agresiv, cu o rată de supraviețuire 5-an la diagnosticare mai mică de 10% [19]. Pacienții prezintă de obicei boală diseminată și, prin urmare, tratamentul se face prin chimioterapie, cu combinații care implică în mod obișnuit cisplatină, etoposidă, doxorubicină, 5-fluorouracil și taxol [12]. Din păcate, acest tratament devine în cele din urmă ineficient, deoarece majoritatea tumorilor SCLC dezvoltă rezistență la mai multe medicamente [18]. Deoarece există multe mecanisme de rezistență [15], depășirea rezistenței este o provocare clinică majoră.

În fața îngrijirilor paliative, mulți pacienți cu cancer folosesc medicamente alternative, inclusiv terapii pe bază de plante [6, 23]. Dintre aceste terapii, medicina tradițională chineză este probabil cea mai bine stabilită și codificată, datând de câteva mii de ani. Baza teoretică a acestui sistem medical se referă la forțele opuse ale yin și yang, ciclurile generative și distructive și o forță de viață, sau qi [2]. Extractele de plante specifice și combinațiile au fost concepute pentru a trata boli specifice, inclusiv cancere [11, 27]. Deși există unele dovezi empirice că plantele medicinale sunt eficiente în tratarea cancerului, mecanismele lor de acțiune la nivel celular sunt în mare parte necunoscute. Acest lucru capătă o importanță suplimentară dacă pacienții combină utilizarea lor cu chimioterapia convențională. De asemenea, efectele extractelor din plante asupra rezistenței la medicamente nu au fost raportate.

Am investigat efectele celor patruMedicamente chinezești pe bază de plantepe trei linii celulare: SCLC, SCLC multirezistent și epiteliu pulmonar normal. Două dintre cele patru extracte proveneau din plante individuale prescrise adesea pentru cancerul pulmonar, Glycyrrhiza glabra (GLYC) și Olenandria diffusa (OLEN). Celelalte două proveneau din combinații de plante medicinale disponibile comercial numite SPES și PC-SPES. OLEN (numele chinezesc Bai Hua she cao) are activități antitumorale, antimutagene și imunostimulatoare [1, 25, 29]. GLYC (numele chinezesc gan car) este antiinflamator, antitumorigenic și antimutagenic [7, 11]. SPES, dezvoltat de BotanicLabs (Brea, California), este sub formă de capsule care conțin extracte liofilizate din 15 ierburi chinezești și s-a dovedit că reduce durerea la pacienții cu cancer avansat [14]. Printre ierburile din SPES se numără stimulentul imunitarCistanchedeserticola, agentul antitumoral Rabdosia rubescens și agentul antiinflamator Zanthoxylum iridium [1, 11]. PC-SPES, preparat și de BotanicLabs, conține opt plante, inclusiv antiandrogenul Serenoa repens care inhibă hiperplazia de prostată [21], inhibitorul proteinei kinazei C Scutellaria baicalensis [13], agentul antitumoral Panax ginseng [30] și Glycyrrhiza glabra ( Vezi deasupra). Deși lipsesc dovezi riguroase pentru eficacitatea clinică antitumorală a GLYC, OLEN și SPES, există unele dovezi pentru eficacitatea PC-SPES. Atât în ​​celulele canceroase de prostată, cât și în modelele animale, PC-SPES este proapoptotic și citotoxic [8, 9, 10, 28]. Studiile clinice au indicat că este eficientă în scăderea nivelurilor de antigen specific prostatei și în oprirea creșterii tumorii atât în ​​cancerul de prostată androgeni-dependent, cât și în androgeni-independent [4, 5, 17, 20, 26].

Deși pacienții cu cancer folosesc fără îndoială extracte din plante, există puține date preclinice sau clinice cu privire la efectele acestor extracte asupra SCLC. Scopul nostru a fost să începem această analiză cu o examinare a farmacologiei (citotoxicitate), a biologiei celulare (metoda de moarte celulară) și a biologiei moleculare (expresia genei) în celulele SCLC sensibile și rezistente la medicamente.

Materiale și metode

Extracte și substanțe chimice

GLYC și OLEN au fost obținute ca plante uscate de la Jen-On Medical Group (Monterey Park, California). Pentru prepararea unui extract, 0,5 g a fost măcinat până la o pulbere fină cu un mojar și pistil și a fost suspendat în 30 ml apă distilată. În medicina chineză, extractele de plante sunt consumate ca ceaiuri după încălzire. Prin urmare, suspensia a fost incubată cu agitare la 70 de grade timp de 18 ore. După centrifugare la 1500 g timp de 10 minute, supernatantul a fost sterilizat prin filtrare printr-un filtru de 0,45-lm folosind o seringă. Extractul rezultat a fost ajustat cu apă distilată la 17 mg/ml pe baza materialului vegetal original. Extractele au fost păstrate la 4 grade timp de până la 1 săptămână până la utilizare.

SPES și PC-SPES au fost obținute de la BotanicLabs (Brea, California) sub formă de capsule. Metoda de extracție utilizată a fost folosită în studiile anterioare ale acestor preparate [8, 9, 10]. Conținutul unei capsule (320 mg) a fost dizolvat în 1 ml etanol 95 la sută și suspensia a fost incubată cu agitare la 37 de grade timp de 1 oră. După centrifugare la 3000 g timp de 10 minute, supernatantul a fost sterilizat pe filtru ca mai sus. Concentrația finală a fost de 300 mg/ml pe baza materialului vegetal original. Extractele au fost păstrate la -20 de grade timp de până la 1 săptămână până la utilizare.

Culturi celulare și măsurarea citotoxicității

Celulele SCLC NCI-H69 au fost crescute la 37 de grade într-o atmosferă care conține 5% CO2 sub formă de suspensie în mediu fără ser AIM-V (Life Technologies, Grand Island, NY). O linie celulară multirezistentă (H69VP) selectată în etoposid [16] a fost, de asemenea, crescută în AIM-V și a prezentat rezistență încrucișată la etoposidă (9-ori), doxorubicină (20- ori) și vincristină (10-ori) (datele nu sunt afișate). Aceste celule au mecanisme multiple de rezistență la medicamente, inclusiv modificări ale topoizomerazei II și expresia pompelor membranare, MDR1 și MRP. Celulele epiteliale pulmonare normale BEAS-2 [22] au fost crescute în DMEM-F12 suplimentat cu 10% ser fetal bovin.

Pentru testarea citotoxicității, extractele au fost adăugate așa cum este indicat la celulele cu creștere logaritmică în culturi de 1-ml care conțineau 6000 de celule/ml. După 4 zile de expunere continuă, celulele au fost numărate într-un contor Coulter Z-1. Numărările au fost validate microscopic cu hemocitometru după colorarea cu albastru tripan. Toate experimentele au fost făcute în trei exemplare și repetate de cel puțin trei ori. Valorile IC50, definite ca concentrația de extract care a redus numărul de celule în ziua 4 cu 50 la sută, au fost calculate în comparație cu martorii cu solvenți. Valorile medii au fost calculate și comparate prin ANOVA pentru cele trei linii celulare pentru acel extract.

Teste de moarte celulară

Mecanismul de citotoxicitate a fost investigat prin cinetica fragmentării ADN-ului celular (kit Boehringer-Mannheim, Indianapolis, Ind.). Pe scurt, 5.105 celule/ml au fost incubate timp de 16 ore la 37 de grade într-o atmosferă care conține 5% CO2 în mediu AIM-V care conține 10 lM BudR. Celulele au fost spălate și resuspendate la 105/ml în mediu fără BudR, iar 200 l din această cultură au fost incubate cu extract de plante la 2·IC50 pentru timpul indicat, după care 100 l din mediu de cultură au fost îndepărtați pentru cuantificarea ADN-ului. fragmente prin ELISA. Aceasta este o măsură a necrozei celulare. Fragmentele de ADN din celule, generate prin apoptoză, au fost măsurate în urma lizei celulare în albumină serică bovină (BSA)/Tween 20 la 21 de grade timp de 30 de minute. După centrifugare, lizatul a fost utilizat pentru ELISA.

ELISA a fost efectuată într-o placă de microtitrare cu fund rotund acoperită cu anticorp anti-ADN (monoclonal anti-ADN uman de șoarece, clona MCA-33) peste noapte la 4 grade. După blocarea cu BSA, la godeurile acoperite s-au adăugat 100 lili de soluție de fragment de ADN marcat, urmată de incubare timp de 90 de minute la 21 de grade. ADN-ul a fost fixat și denaturat prin iradiere cu microunde la 500 W timp de 5 minute. S-a adăugat anti-BudR de șoarece (BMG monoclonal de șoarece 6HB) conjugat cu peroxidază și, după incubare la întuneric timp de 120 de minute la 21 de grade, reacția a fost oprită prin adăugarea a 500 ui H2SO4 concentrat. Culoarea rezultată a fost cuantificată prin absorbanță la 450 nm. Probele tratate cu extract au fost comparate cu martori netratate ca fundal.

Apoptoza a fost confirmată prin analiza TUNEL. Celulele cu creștere logaritmică au fost expuse la extract de plante la 1·IC50 timp de 3 ore. Au fost apoi spălate de două ori în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) care conține 1% BSA și resuspendate în PBS/BSA la 5·105 celule/ml. La 500 ll celule, s-au adăugat 100 ll 4% paraformaldehidă și celulele au fost fixate la 21 de grade timp de 1 oră. După spălare în PBS, celulele au fost resuspendate în 100 ll tampon de permeabilizare la rece (0,1% Triton X-100, 0,1% citrat de sodiu) timp de 2 minute la 4 grade. Celulele au fost spălate de două ori în PBS și apoi resuspendate într-un amestec TUNEL de 50 ll care conține deoxiribonucleotide-idil transferază terminală (TdT) și fluorescein-dUTP (kit Boehringer-Mannheim). După incubare la întuneric la 37 de grade timp de 1 oră, celulele au fost contracolorate cu iodură de propidiu și analizate prin citometrie în flux.

Analiza expresiei genelor

Culturile (6 ml) de celule cu creștere logaritmică (5·105 celule/ml) au fost incubate într-un mediu care conține extract de plante la 1·IC50 la 37 grade într-o atmosferă care conține 5% CO2 timp de 3 ore. După spălarea de două ori în PBS, peletele celulare au fost congelate la -70 de grade peste noapte. ARN a fost izolat prin protocolul RNeasy Mini (Qiagen, Valencia, California). În general, această metodă a dat 0,5 LG ARN. Această cantitate de ARN a fost transcrisă invers la ADNc și marcată cu biotină-dUTP și hibridizată cu sonde denaturate la gene legate de apoptoză și ciclul celular pe filtre. Hibridizarea a fost detectată prin legarea fosfatazei alcaline-streptavidină la ADNc folosind un substrat chemiluminescent, CDP-Star (SuperArray, Bethesda, Md.), urmată de expunerea la film cu raze X, în general timp de 1-2 minute.

Țintele genei de control de pe fiecare filtru au inclus b-actina și GAP-DH ca martori pozitivi și pUC18 ca control negativ. Următoarele gene legate de ciclul celular și de apoptoză au fost ținte de hibridizare: bad, bcl-2, BCL-w, BCL-x, caspaze 1–10, c-myc, E2F, fas, fas ligand, gadd45, iNOS , mdm2, NFkB, p21Waf1, p53, pig7, pig8, Rb, DR5, trail, Casper, CRADD, DAXX, IAP-1, IAP-2, NIK, TNFR2, TRAF2, TRAF3, TRAF5 și DR5. Intensitateade hibridizare a fost notat vizual în pete duplicat tandem de pe filtru în raport cu martorii pozitivi.

Rezultate

Experimentele noastre inițiale au testat citotoxicitatea extractelor de plante chinezești pe celule SCLC sensibile și rezistente la medicamente, precum și pe celulele epiteliale pulmonare normale. După cum se arată în Tabelul 1, cele patru extracte din plante au fost citotoxice la concentrații scăzute. Aceste constatări sunt similare cu cele găsite pentru SPES și PC-SPES în alte linii de celule tumorale [8]. În fiecare caz, valorile IC50 pentru celulele multirezistente (H69VP) nu au fost diferite de cele pentru celulele sensibile la medicamente (H69). De asemenea, valorile IC50 pentru celulele epiteliale pulmonare normale au fost semnificativ mai mari decât cele pentru liniile de celule tumorale.

Apoi am investigat mecanismul citotoxicității folosind cinetica fragmentării ADN-ului ca indicație a apoptozei (fragmente formate lent în celule) sau necrozei (fragmente formate și eliberate rapid din celulele deteriorate). Celulele au fost incubate în extract de plante între 30 min și 8 ore, iar apoi fragmentele de ADN au fost estimate prin ELISA atât în ​​mediul de cultură, cât și în lizatele celulare. Figura 1 prezintă date reprezentative pentru celulele H69 expuse la cele patru extracte timp de 90 de minute. Cu trei dintre extracte (SPES, PC-SPES, OLEN), majoritatea fragmentelor de ADN au provenit din interiorul celulelor (lizate), indicând apoptoza. Cu toate acestea, cu GLYC, fragmentele au fost eliberate în mediu din celulele deteriorate, indicând necroză. Rezultate similare au fost obținute cu celulele H69VP (datele nu sunt prezentate).

Aceste experimente de citotoxicitate au fost urmate de testele TUNEL ale rupturii ADN in situ. În comparație cu controalele netratate (1–3 la sută celule apoptotice în patru experimente), celulele SCLC tratate cu SPES (58–85 la sută), PC-SPES (63–77 la sută) și OLEN (49–81 la sută) au arătat pozitivitate TUNEL, în timp ce celulele tratate cu GLYC nu au făcut (1-2 la sută) (Fig. 2). Rezultate similare au fost obținute cu celulele H69VP (datele nu sunt prezentate).

Am analizat transcripția genelor ca răspuns la extractele din plante folosind GeneArrays. Aceste matrice au gene aranjate în tandem legate de ciclul celular și apoptoză. Am efectuat aceste experimente de două ori cu rezultate similare. Figura 3 prezintă diagrame reprezentative arrayautora ale celulelor H69 expuse la etoposid sau SPES. Rezultatele noastre pentru celulele H69 sunt rezumate în Tabelul 2. În timp ce controalele netratate au avut o expresie detectabilă doar a câtorva dintre genele studiate, celulele tratate cu medicamente chimioterapeutice convenționale (etoposid și vincristină) au prezentat semnale puternice pentru un număr de gene implicate în ciclul celular. reglare și apoptoză. Celulele tratate cu OLEN, SPES și PC-SPES au prezentat un model similar cu cel obținut cu cele două medicamente. În general, celulele tratate cu GLYC nu par să prezinte acest model de transcripție și, în schimb, au arătat o expresie puternică a genei antiapoptozei, BCL-2.

Discuţie

Am întreprins aceste studii din două motive. În primul rând, există o tradiție străveche a medicinei pe bază de plante chineze care se bazează pe propriile teorii și filozofie [2] și am vrut să începem să înțelegem în termeni medicali occidentali efectele remediilor pe bază de plante. Aceste ierburi sunt folosite ca amestecuri și, deși s-au înregistrat unele progrese în descompunerea lor în constituenți chimici individuali[11], studiile noastre s-au concentrat asupra lor, deoarece sunt utilizate în practica tradițională. A doua noastră motivație a fost că mulți pacienți cu cancer folosesc aceste plante împreună cu tratamentele convenționale [6, 23], iar înțelegerea efectelor celulare ale plantelor ar putea oferi informații importante pentru luarea deciziilor clinice.

Datele de citotoxicitate (Tabelul 1) au arătat că cele patru extracte din plante au fost într-adevăr citotoxice pentru celulele tumorale, mai mult pe bază de dozare decât pentru celulele epiteliale pulmonare normale, indicând o anumită specificitate tumorală și posibil un indice terapeutic favorabil. Asemănările în IC50 între celulele sensibile la medicamente și cele mai rezistente la medicamente indică faptul că aceste extracte nu sunt afectate de mecanismele de rezistență la medicamente afișate în celulele H69VP, inclusiv supraexprimarea a doi transportatori de medicamente, MDR1 și MRP.

Cinetica fragmentării ADN-ului a arătat că extractele SPES, PC-SPES și OLEN au fost proapoptotice, în timp ce GLYC a fost pron erotic (Fig. 1). Acest lucru a fost confirmat prin colorarea TUNEL in situ (Fig. 2). Cele mai multe medicamente chimioterapeutice convenționale sunt proapoptotice [3], iar un grup de gene apoptotice și de reglare a ciclului celular este suprareglat în celule ca răspuns la medicamente [24]. Am descoperit că modelul de expresie al unora dintre genele exprimate ca răspuns la cele trei aplicații pro la extracte din plante a fost similar cu cel observat în aceste celule după expunerea la medicamente chimioterapeutice convenționale (Fig. 3, Tabelul 2). Răspunsul la GLYC singur a părut a fi diferit, cel puțin la momentul analizat în aceste experimente. Interesant, GLYC face parte din PC SPES, care a fost proapoptotic, în timp ce GLYC singur nu a fost. Poate că alte componente ale PC-SPES sunt responsabile pentru activitatea sa proapoptotică. Deși aceste rezultate nu arată modul în care extractele din plante au deteriorat celulele, ele sugerează că celulele H69 răspund la daune la niveluri moleculare (transcripție) și celulare (apoptoză) într-un mod similar cu răspunsul lor la chimioterapie.

Studiile noastre indică utilitatea potențială a acestor extracte din plante chinezești în tratamentul SCLC, în special a bolii rezistente la medicamente.

MulțumiriÎi mulțumim lui L. Brown pentru asistența neprețuită cu colegii citometriei și lui R. Lingeman pentru asistența cu protocoalele de biologie moleculară. Celulele BEAS-2 au fost furnizate cu generozitate de Dr. I. Laird-Offringa, Universitatea din SouthernCalifornia, Centrul pentru Cancer Norris. SPES și PC-SPES au fost un cadou de la Dr. S. Chen, Colegiul Medical din New York. Această cercetare a fost susținută de Fundația Familiei Pritzker și Fundația WM Keck.

Cistanche ca medicament chinezesc din plante poate îmbunătăți imunitatea și poate lupta împotriva cancerului, faceți clic aici pentru a afla mai multe

Referințe

1. Boik J (1996) Cancer și medicina naturală: un manual de știință de bază și cercetare clinică. Oregon Medical Press, Princeton, p. 221

2. Chan K (1995) Progrese în medicina tradițională chineză. Trends Pharmacol Sci 16:182–187

3. Chu E, DeVita V Jr (2001) Principiile managementului cancerului: chimioterapie. În: DeVita V Jr, Hellman S, Rosenberg SA (eds) Cancer: principii și practici de oncologie. Lippincott Williams și Wilkins, Philadelphia, pp. 289–306

4. De la Taille A, Hayek OR, Buttyan R, Bagiella E, Burchart M, Katz AE (1999) Efectele unui agent fitoterapeutic, PC-SPES, asupra cancerului de prostată. BJU Int 84:845–850

5. DiPaola RS, Zhang H, Lambert G, Meeker R, Licitra E, Rafi M, Spaulding H, Goodin S, Toledano M, Gallo M (1998) Activitatea clinică și biologică a unei combinații de plante estrogenice (PC-SPES) în prostată cancer. New Engl J Med 339:785–791

6. Eisenberg DM, Davis RB, Ettner SL (1998) Tendințe în utilizarea medicinei alternative în SUA: 1990–1997: rezultatele unui sondaj național de urmărire. JAMA 280:1569–1575

7. Fenwick GR, Lutomski J, Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: compoziție, utilizări și analiză. Food Chem 38:119–143

8. Halicka HD, Ardelt B, Juan G, Mittleman A, Chen S, Traganos F, Darzynkiewicz Z (1997) Apoptoza și efectele ciclului celular induse de extracte din preparatul chinezesc din plante PC-SPES. Int J Oncol 11:437–448

9. Hsieh T, Chen SS, Wang X, Wu J (1997) Reglarea receptorului androgenului și a expresiei antigenului specific prostată în celulele LNCaP de prostată umană sensibile la androgeni prin extracte etanolice din preparatul din plante chinezești PC-SPES. Biochem Mol Biol Int 42:535–544

10. Hsieh T, Ng C, Chang, C, Chen SS, Mittleman, A, Wu J (1998) Inducerea apoptozei și reglarea în jos a BCL-6 în celulele Mutu tratate cu extracte etanolice ale suplimentului din plante chinezești PC-SPES. Int J Oncol 13:1199–1202

11. Huang KC (1999) Farmacologia ierburilor chinezești, 2^ndedn. CRC Press, Boca Raton

12. Kalemkerian GP, ​​Worden FP (2000) Therapeutic advances in SCLC. Expert Opin Invest Drugs 9:65–79

13. Kimura Y, Okuda H, Yokio K, Matsushita N (1997) Efectele baicaleinei izolate din Scutellaria baicalensis asupra producției de activator tisular de plasminogen indus de interleukina 1b și TNF și inhibitor de activator de plasminogen-1 în celulele endoteliale ale venei ombilicale cultivate . Phytother Res 11:363–367

14. Lin C (1996) O observație asupra utilizării combinate a chimioterapiei și a medicinei tradiționale chineze pentru ameliorarea durerii cauzate de cancer. J Tradit Chin Med 16:267–269

15. Mattern J, Volm M (1995) Mecanisme de rezistență în cancerul pulmonar uman. Invasion Metastasis 15:81–94

16. Minato K, Kanzawa F, Nishio K, Nakagawa K, Fujiwara Y, Saijo N (1990) Caracterizarea unei linii umane de cancer pulmonar cu celule mici rezistente la etoposide. Cancer Chemother Pharmacol 26:313–327

17. Moyad MA, Pienta KJ, Montie JE (1999) Utilizarea PC-SPES, un supliment disponibil comercial pentru cancerul de prostată, la un pacient cu boală naivă de hormoni. Urologie 54:319–324

18. Nishio K, Nakamura T, Koh Y, Suzuki H, Fukumoto N, Saijo N (1999) Rezistența la medicamente în cancerul pulmonar. Curr Opin Oncol 11:109–115

19. Pass H, Mitchell JB, Johnson DH, Turrisi AT, Minna J (2000) Cancer pulmonar: principii și practică. Lippincott, Philadelphia

20. Pfeifer BL, Pirani JF, Hamann SR, Klippel KF (2000) PC SPES: un supliment alimentar pentru tratamentul cancerului de prostată refractar la hormoni. BJU Int 85:481–485