Efectele saponinei din semințele de Litchi Chinensis Sonn asupra TGF-β1, FN și SOCS-1 în celulele epiteliale tubulare renale sub glucoză ridicată

Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hai-Yang Nie, Rui Chen, Hong-Na Zhang, Zhi Pan

1 Universitatea de Medicină Chineză din Changchun, Changchun, China.

2 Spitalul Shunyi din Beijing Spitalul chinez de Medicină, Beijing, China.

Evidențiază

Saponina din semințele de Litchi chinensis Sonn reduce apoptoza celulelor epiteliale tubulare renale și secreția de TGF-β1 și FN.

Abstract

Obiectiv: Pentru a investiga efectul saponinei din semințele de Litchi chinensis Sonn (SLS) asupra creșterii și apoptozeiomenescrinichicelule epiteliale (HKC) cultivate în glucoză ridicată. Metode: HKC au fost cultivate în mediu DMEM/F12 suplimentat cu 30 mmol/l glucoză și tratate cu sau fără SLS. În grupul normal, s-a adăugat un mediu izometric DMEM/F12 cu glucoză de 5,5 mmol/l. Secreția de TGF-β1 și fibronectină (FN) au fost detectate prin ELISA. Apoptoza celulară a fost detectată prin metoda de colorare dublă anexain V-FITC/PI. Western blot a fost folosit pentru a detecta nivelul de supresoare de citokine semnalizare-1 (SOCS-1).

Rezultate: Rezultatul elisa a arătat că secreția de TGF-β1 și FN a fost scăzută în grupele SLS în comparație cu cele din grupurile tratate cu glucoză de 30 mmol/l (P< 0.05).="" there="" were="" more="" cells="" apoptosis="" in="" the="" 30="" mmol/l="" glucose="" treated="" group="" than="" that="" in="" the="" normal="" group="" (p="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" 30="" mmol/l="" glucose="" treated="" group,="" the="" apoptosis="" of="" hkc="" was="" significantly="" decreased="" in="" sls="" groups="" (p="">< 0.01).="" western="" blot="" showed="" that="" the="" level="" of="" socs-1="" in="" the="" high="" glucose="" +="" sls="" group="" was="" decreased="" (p="">< 0.01),="" compared="" with="" the="" high="" glucose="">

Concluzie: SLS poate reduce secreția de TGF-β1 și FN în HKC prin reducerea depunerii matricei extracelulare. SLS, de asemenea, a redus semnificativ apoptoza HKC prin inhibarea nivelului de SOCS-1. Aceste rezultate sugerează rolul SLS în prevenirea progresului sclerozei glomerulare.

Cuvinte cheie: Saponin, Semințe de Litchi chinensis Sonn, Glucoză,Rinichicelule epiteliale, TGF-β1, Fibronectin, Apoptoza

cistanchepoate trataboli de rinichiîmbunătățifuncția renală

Fond

Nefropatie diabetică (DN)este una dintre cele mai grave complicații ale diabetului zaharat cu incidență ridicată și letalitate, caracterizată prin scleroză glomerulară și fibroză interstițială renală. Omenescrinichicelulele epiteliale (HKC) sunt țintele majore din DN și secretă un număr mare de citokine, cum ar fi TGF-β1 și fibronectina (FN), ceea ce duce la apariția glomerulosclrozei și a fibrozei interstițiale renale. Între timp, s-a raportat că glucoza ridicată poate accelera apoptoza HKC prin creșterea nivelului de supresor al semnalizării citokinelor-1(SOCS-1)[1,2]. Prin urmare, inhibarea nivelului de TGF-β1, FN și SOCS-1 este importantă pentru prevenirea progresului sclerozei glomerulare. Semințe de Litchi chinensis Somm (SLS), este o planta chinezesc distribuit în principal în Guangdong. Provinciile Fujian și Guangxi din China au fost înregistrate pentru prima dată în Bencaogangmu în dinastia Ming din China (1518 d.Hr.-1593 d.Hr.). Saponina este ingredientul activ al semințelor de Litchi chinensis Sony. Pe baza studiului nostru anterior, acest studiu explorează în continuare efectul SLS asupra nivelului de TGF-β1 și FN în HKC cultivat cu glucoză ridicată, apoptoza HKC și mecanismul de bază privind prevenirea și terapia glomerulosclerozei [3].

cistanchepoate tratainsuficiență renală acută

Materiale și metode Materiale

SLS cu o puritate de peste 98% a fost achiziționat de la Xianqingle Biological Co., LTD (Xi'an, China). HKC a fost cumpărat de la Shanghai Fuxiang Biotechnology Co, Ltd (Shanghai, China). DMEM/F12 mediu, ser fetal standard bovine, și tripsină au fost de la Hyclone (SUA). Subfamilia dimetilului era din Sigma (SUA). Kitul ELISA a fost achiziționat de la Shanghai Longton Biotechnology Company (Shanghai, China). Anexain V-FITC / PI Apoptoza Kit de detectare a fost de la Nanjing Kaiji Biotehnologie Co, Ltd (Nanjing, China).

Cultura celulelor

HKC au fost menținute în DMEM/F12 cu 10% ser de vițel fetal și au fost cultivate la 37 ° C într-o atmosferă umidificată de 95% aer și 5% CO. Celulele au fost digerate cu 0,25% tripsină după 2-3 zile pentru utilizare.

Testul imunosorbant legat de enzime

HKC au fost împărțite în șase grupe, inclusiv grupul de control (DMEM cu glucoză 5.5mmo/L), grupul de glucoză mare (DMEM cu glucoză 30mmol/L), grupul de doze mici SLS (5mg/ml, S1+30mmol/L glucoză), grupul de doze medii SLS (10mg/ml, S2+30mmol/L glucoză), grupul de doze mari SLS (20mg /ml, S3+30mmol/Lglucoză) și grupul de ton martor (DMEM fără celule).

48 de ore mai târziu, supernatantul fiecărui grup a fost colectat, iar conținutul de TGF-β1 și FN a fost detectat prin ELISA. Operația a fost efectuată conform manualului. Valoarea OD a fost citită la 450nm de un cititor de microplate. Concentrațiile de TGF-β1 și FN au fost determinate în conformitate cu curba standard.

acteosidîncistancheau efecte bune asuprarinichi

Citometrie de flux

Grupurile experimentale au fost aceleași ca mai sus. Celulele apoptozei au fost detectate prin citometrie de flux cu anexain V-FITC/PI colorare dublă. Cadranul din stânga sus reprezenta procentul de celule necrotice, cadranul din dreapta sus reprezenta procentul de celule de apoptoză târzie, cadranul din stânga jos reprezenta procentul de celule viabile, iar cadranul din dreapta jos reprezenta procentul de celule apoptozei timpurii.

Analiza western blot

HKC a fost tratat cu 10* mol/L de angiotensie (Ang)II.,20mg/Lof SLS și 10*mol/L ofAngII., DMEM/F12 mediu, 20mg/L de SLS și 25mmol/L de glucoză și, respectiv, 25mmol/L de glucoză.

Proteinele de lizat celular au fost rezolvate pe electroforeza gelului dodecyl sulfat-poliacrilamidă de sodiu și transferate în membranele PVDF. Fiecare membrană a fost incubată cu un anticorp monoclonal, urmată de incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază și detectarea chemiluminescenței.

Analiza statistică

Toate analizele statistice au fost efectuate folosind SPSS versiunea 19.0. Diferența dintre grupurile de date experimentale a fost analizată de ANOVA unidirecțională, iar diferența cea mai puțin semnificativă a fost utilizată între grupuri. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

Rezultatele

Efectele SLS asupra secreției de TGF-B1 și FN În comparație cu grupul ridicat de glucoză, SLS ar putea inhiba nivelurile de TGF-B1 și FN în HKC (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

Comparativ cu grupul de glucoză ridicat: * P<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

Efectul SLS asupra apoptozei HKC Rezultatul citometriei fluxului a arătat că apoptoza grupului ridicat de glucoză a fost semnificativ mai mare decât grupul normal (P< 0.01).="" compared="" with="" the="" high="" glucose="" group,="" the="" apoptosis="" rate="" of="" hkc="" was="" negatively="" correlated="" with="" concentrations="" of="" sls="" (p="">< 0.01)="" (figure="">

Efectul SLS asupra nivelului socs-1 Nivelul proteinei SOCS-1 din grupul AngII a fost semnificativ mai mare decât cel din grupul normal (P< 0.01).="" the="" level="" of="" socs-1="" in="" the="" angii+sls="" group="" was="" lower="" than="" that="" in="" the="" angii="" group="" but="" still="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" level="" of="" socs-1="" protein="" in="" the="" high="" glucose="" group="" was="" increased="" (p="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" high="" glucose="" group,="" the="" protein="" level="" of="" the="" high="" glucose+sls="" group="" was="" decreased="" (p="">< 0.01)="" (figure="">

Figura 4 Efectul SLS asupra expresiei SOCS-1 a. Grupa AngII: 10-6 mol/L Angiotensie II., b. Grupul AngII+SLS: 20mg/L SLS și 10-6 mol/L AngII., c. Grup de control: mediu DMEM/F12, d. Grup ridicat de glucoză+SLS: 20mg/L SLS+25mmol/L glucoză, e. Grup de control: mediu DMEM/F12, f. Grupa mare de glucoză: 25mmol/L glucoză. SOCS-1, supresor de citokine semnalizare-1. SLS, Semințe de Litchi chinensis Sonn.

Discuție

Depunerea matricei extracelulare și a apoptoza epiteliului tubular renal este principala modificare patologică în dezvoltarea DN. În condiții normale, morfologia și numărul de HKC au rămas relativ stabile. Dar într-o varietate de factori de stimulare, cum ar fi inflamația, HKC poate prolifera în mod semnificativ [4]. Glucoza ridicată duce la secreția ridicată de TGF-β1 și FN de HKC și accelerează apoptoza HKC, care este un factor direct în promovarea apariției DN. În acest experiment, glucoza ridicată a fost folosită ca stimul. S-a constatat că SLS ar putea inhiba secreția de TGF-β1, FN și ar putea reduce apoptoza HKC prin scăderea nivelului de SOCS-1.

Litchi chinensis Sonn este distribuit în principal în provinciile Guangdong, Fujian și Guangxi din China. S-a raportat că SLS poseda activități antihiperglicemice, antihiperlipidemice, antiagregante și antivirale [5]. Conform înregistrării bencaogangmu în dinastia Ming din China (1518 d.Hr. - 1593 d.Hr.), SLS poate "ușura setea". În ultimii ani, mulți cercetători au făcut o mulțime de cercetări cu privire la efectele sale farmacologice și compoziția chimică. Principalele componente chimice ale SLS sunt compuși, cum ar fi saponine lychee, flavonoide, polifenoli, dălți, aminoacizi, acizi grași și componente volatile. SLS este principalul ingredient activ. SLS este utilizat pe scară largă în diabet și nefropatie diabetică, cu hipoglicemiant, hipolipidemică, inhibarea efectelor inflamației imune [6]. Studiile experimentale moderne au confirmat, de asemenea, că SLS are un efect hipoglicemic [7]. Cu toate acestea, mecanismul acestui efect nu este clar.

În acest studiu, nivelul de TGF-β1 și FN în HKC a fost crescut semnificativ după stimularea cu glucoză ridicată, iar nivelul de TGF-β1 și FN au scăzut semnificativ după tratamentul SLS într-o manieră dependentă de doză. Nivelul proteinelor SOCS-1 a scăzut semnificativ după tratamentul cu SLS. Acest studiu a fost oferit o bază teoretică pentru aplicarea clinică a SLS.

Cistanchepoate scutiboli de rinichi

Referinţe

1 Zhang AH, Huang SM, Ding GX, et al. JNK-c-Jun/AP-1 Signal Pathway reglementate AngiotensinII.-induse de proliferarea celulelor mesangial umane. Acta Nanjing Med Univ 2004, 24 (1): 4-8.

2. Nishimoto N, Kishimoto T, Yoshizakik. Tratamentul anticorpilor receptorilor anti-interleukina6 în boala reumatică. Ann Rheum Dis 2000, 59 (suplu1): 121.

3. Lou ZM, Tian XJ, Wang WX, et al. Efectul extractului total de saponină din miezul litchi asupra nivelului de glucoză din sânge al șoarecilor diabetici. Zhejiang Med J 2007, 29 (6): 548-550.

4. Kolset SO, Reinholt FP, Jenssen T. Nefropatie diabetică și matrice extracelulară. J Histochem Cytochem 2012, 60 (12): 976-986.

5. Li JW. Chineză Medical Dictionary (a doua ediție). Beijing: Editura People's Med 2013, 1184. 6. Zhang YJ, Zhang C. Progresul semințelor litchi asupra principalelor ingrediente active și efecte farmacologice. J Guangdong Pharm Univ 2014, 30(6):792-797. 7. Jiang ZG, Ren K, Lin Z, et al. Studiu pe partea eficientă a Litchi chinensis reducerea glicemiei. J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011, 27(1):14-16.