Elastină constituie proteina elastică a țesuturilor conjunctive epidermice cu colagen

Vă rog contactațioscar.xiao@wecistanche.compentru mai multe informatii

Abstract:O nouă glicozidă de xantonă, 135,6-tetrahidroxixantona-C-4-D-glucopiranozidă a fost izolată din extractul metanolic de frunze de Mangifera Indica (Anacardiaceae) care crește în Egipt. Structura a fost clarificată prin date spectroscopice 1D și 2D-RMN. Proprietățile fizico-chimice ale compusului, cum ar fi lipofilitatea, solubilitatea și considerațiile de formulare au fost prezise prin tehnica ADMET in silico folosind serverul SwissADME. Această tehnică a oferit regula lui Lipinski de cinci, cum ar fi absorbția GIT, distribuția, metabolismul și permeația pielii. Au fost evaluate activitățile inhibitoare in vitro împotriva enzimelor mediate de îmbătrânire, cum ar fi colagenaza, elastaza, hialuronidază și tirozinaza. Compusul a prezentat efecte remarcabile anti-colagenază, anti-elastaza, anti-hialuronidază și anti-tirozinază cu valori IC50 de 1,06, 419,10, 1,65 și, respectiv, 0,48 ug/mL, în comparație cu controlul pozitiv. Compusul a arătat o solubilitate apoasă prognozată promițătoare și o penetrare rezonabilă în piele, sugerând adecvarea compusului pentru formularea topică ca agent anti-îmbătrânire pentru preparatele cosmetice.

Cuvinte cheie:xantonă; Mangifera indica; îmbătrânire; ceolagenază; elastaza; tirozinaza; hialuronidază; in silico ADMET

1. Introducere

Procesul de îmbătrânire este un proces biochimic complex asociat cu stresul oxidativ determinat de radicalii liberi endogeni de oxigen și azot generați în timpul speranței de viață, care pot contribui la progresia manifestărilor asociate vârstei [1]. Patologiile de îmbătrânire a pielii, cum ar fi ridurile, hiperpigmentarea, petele de îmbătrânire, ridurile, melasma, pistruii, lentigoul, efelidele, nevurile, brunificarea și melanomul sunt procedate de activarea speciilor reactive de oxigen (ROS) [2]. Radicalii liberi sau ROS ar putea induce o schimbare în compoziția structurală a celulelor pielii și ar putea deteriora membranele celulare prin stimularea oxidării lipidelor și proteinelor, ducând la deteriorarea ADN-ului și moartea celulelor [3,4]. Mai mult, ROS joacă un rol semnificativ în procesul de îmbătrânire a pielii prin deteriorarea proteinelor majore ale pielii, cum ar fi colagenul și elastina, prin activarea enzimelor colagenazei și elastazei. Mai mult, radicalii liberi provoacă degradarea acidului hialuronic prin activarea hialuronidazelor, ceea ce duce la hidratarea necorespunzătoare a pielii [5,6]. Anticiparea acestor procese dinamice este considerată o problemă cheie pentru zona dermo-cosmetică și se cheltuiește o muncă substanțială de cercetare pentru a descoperi noi formulări de protecție[7]. Antioxidanții sunt enzimele naturale de apărare prezente în piele și contracarează radicalii liberi excesivi produși în organism. Cu toate acestea, echilibrul oxidativ poate fi perturbat de mai mulți factori, inclusiv dieta și poluarea aerului, care duc la stres oxidativ. În acest stres oxidativ, încărcătura de radicali liberi din organism este semnificativ mai mare decât antioxidanții naturali. Prin urmare, este foarte important să folosiți antioxidanți externi din surse precum dieta, cosmeticele sau produsele farmaceutice pentru a neutraliza radicalii liberi și a contracara procesul de îmbătrânire a pielii [5,8]. Studiile moderne au relevat faptul că mai mulți metaboliți secundari naturali, în principal flavonoide și polifenolici, contribuie semnificativ la activitatea antioxidantă totală a multor plante [9]. Acest lucru a condus la interesul pentru investigarea activității antioxidante a multor plante [10]. Fructele au fost raportate pentru bogăția lor în acești fenolici și flavonoide, precum și în vitamine [11].

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

Elastină constituie proteina elastică a țesuturilor conjunctive epidermice cu colagen și reprezintă un rol substanțial în prevenirea ridurilor și fermității pielii[12]. În timpul îmbătrânirii celulare, metaloproteinazele matriceale, cum ar fi colagenaza, elastaza și hialuronidaza, sunt reglate în sens pozitiv [13]. Suprimarea acestor enzime este una dintre cele mai eficiente strategii terapeutice pentru a gestiona deteriorarea afecțiunilor pielii în timpul îmbătrânirii [14]. Compușii fenolici derivați din plante au fost descriși ca mediatori potenți de albire datorită proprietăților lor inhibitoare ale tirozinazei [15] și unii (dintre ei ar putea juca un rol în remodelarea matricei printr-un efect inhibitor al elastazei [16].

Mangifera indica L. este una dintre cele mai importante plante comestibile care aparține familiei Anacardiaceae răspândită în multe țări, în special în regiunile tropicale [17]. Fructele de mango au manifestat un rol imperativ în domeniul agricol, alimentar, farmaceutic și nutraceutic de peste 4000 de ani [18]. Mai mult, fructele de mango se situează pe locul 2 în rândul culturilor industriale, după balană, în ceea ce privește producția și acoperirea [19]. Diferite părți ale Mangifera indica reprezintă o sursă bogată de diferiți fitoconstituenți, inclusiv flavonoide, xantoide, acizi fenolici și triterpenoizi cu valoare potențială ca molecule funcționale [18]. În plus, fructele furnizează corpului uman componente vitale, cum ar fi carbohidrați, proteine, grăsimi, minerale, vitamine, aminoacizi esențiali, carotenoizi, fibre alimentare și fenolici [20]. În mod tradițional, diferite culturi au raportat că infuzia de frunze a fost utilizată pentru mai multe afecțiuni, cum ar fi diaree, dizenterie sângeroasă, anemie, astm, bronșită, hipertensiune, insomnie, reumatism, indigestie, hepatită, tetanos, avort spontan și hemoragie [21]. În plus, fumul frunzelor arzând au fost inhalați pentru sughiț și afecțiuni ale gâtului [18]. Scoarța era folosită ca diuretic și în pansamente antireumatice. Semințele sunt bine cunoscute pentru tratamentul răcelilor, astmului, diareei și sângerărilor. Au fost raportate activități antioxidante, concentrații fenolice totale (TPC), conținuturi totale de flavonoide (TFC), 2,{10}}difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) și capacitatea de inhibiție linoleică a părților plantei Mangifera indica [ 22].

Cistanche poate anti-imbatranire

Acest studiu a fost conceput pentru a investiga proprietățile inhibitoare in vitro ale unui nou compus de xantonă obținut din extractul metanolic de 70% din frunze de Mangifera indica L. împotriva colagenazei, elastazei, tirozinazei și hialuronidazei. În plus, proprietățile farmacocinetice cum ar fi absorbția, distribuția, metabolismul și toxicitatea (predicția in silico ADMET) au fost efectuate folosind SwissADME și regula lui Lipinski de cinci pentru a evalua solubilitatea medicamentului, permeabilitatea și necesitățile formulării.

2.Rezultate și discuții

2.1. Elucidarea structurii compusului izolat

Compusul a fost obţinut sub formă de cristale galbene (18,29 mg). Analiza cromatografică a evidențiat o pată galben-portocaliu pal pe TLC sub lumină UV lungă (365 nm) în sisteme de solvenți DCM:MeOH (7:3) și BAW. Când pata a fost tratată cu soluție de clorură ferică metanolică 1%, a devenit verde închis și a dat un galben cu soluție de amoniac pulverizat. Datele spectrale lH-RMN, APT și HMBC ale compusului sunt compilate în tabelul 1. Analiza spectrală lH-RMN (DMSO-dg, temperatura camerei) (Figurile Sl și S2) a evidențiat prezența a două semnale dublete aromatice în jos la oH 7.57 și 6.79 cu o constantă de cuplare de 8,24 Hz indicând prezența a doi protoni orto-cuplați. Mai mult, regiunea aromatică a spectrului H-RMN a arătat prezența unui semnal singlet la Su 5,96, indicând prezența unui singur proton în inelul aromatic. Protonul anomeric al unității C-glucozil a fost detectat la Su 4,60 ppm cu o valoare constantă de cuplare de 7 Hz atribuită pentru -anomer. Acest model de protoni aromatici din spectrul H-RMN al compusului izolat seamănă cu structura xantonei. În plus, prezența unui proton -anomeric la 4,60 cu schimbări chimice caracteristice ale glucozei la 3,21 la 4,60 de lH-RMN (regiunea zahărului) a indicat că există o legătură C-glicozidică între zahăr și xantonă. După cum se arată în Figura S3, spectrul APT al compusului a relevat prezența a nouăsprezece semnale de carbon, reprezentând xantona și structura C-glucozidă.comentarii cistanche tubulosaExperimentul APT a identificat trei grupe CH (C-8,131,95;C-7,115,10;C-2, 95,35 ppm) în fragmentul xantonă și C-1' anomer a C-glucozei la SH75,13 ppm. Am efectuat experimente RMN bidimensionale (HMBC; Figura S4) pentru a confirma legătura glicozidică a C-glucozei la C-4xantonei. Semnalele abundente de corelare a intervalului logaritmic 2,3JCH au coroborat coloana vertebrală xantonă cu vârfuri încrucișate observate de la H-1'(6) 4,60) la C{-4(6c 104,13 ppm) și C-3 (6c 158,95).bioflavonoide din citricePentru fragmentul xantonă, a fost detectată, de asemenea, o corelație pe distanță lungă de 2,3JCH de la H-2(8) la C{-4(6c 104,13 ppm), C-3 (8c 158,95), și C-4b(6c 107,45). În plus, a fost detectată o 2-37-corelație pe distanță lungă de la H-8(8)7,57)la grupa carbonil C-9( 6c 195,14), C-8a(6c 131,22) și C-6 （6c161,87）. Pentru același inel, aJcH semnalează de la H-7（6μ 6,79) la C{ {39}}a（6c 131,22） au fost observate. Aceste corelații sunt ilustrate în structura compusului din Figura 1. HSQC a compusului a arătat corelații 1JcH între fiecare proton și carbonul său localizat, așa cum se arată în Figura S5. Experimentul H,H COSY (Figura S6) a dezvăluit o corelație puternică încrucișată între H-7 （δu 6,79） și H{-8（8H7,57）. În plus, compusul a dezvăluit un pic de ion pseudomolecular [MH]- la m/z 421, indicând o formulă moleculară a CgHngOrin în modul negativ al analizei ESI-MS (Figura S7). Datele de la 1H-RMN, APT, IH, H COSY, HMBC și HSQC ne-au determinat să postulăm că compusul ar putea fi 1,3,5,6-tetrahidroxixanton-C-4- -D-glucopiranozid. Acest lucru a fost confirmat prin compararea cu datele RMN raportate ale izomangiferinei în literatură [23,24].

2.2.Predicția farmacocinetică in silico a compusului izolat

Serverul online SwissADME a fost utilizat pentru a evalua capacitatea medicamentului a compusului izolat prin estimarea regulii lui Lipinski de cinci (RO5) pentru asemănarea medicamentului[25]. Lipinski a raportat că 90% dintre medicamentele active pe cale orală care au atins starea clinică de faza II au MWT mai mică sau egală cu 500,logp Mai mică sau egală cu 5, donatorii de legături H Mai puțin sau egali cu 5 și acceptorii de legături H Mai puțin de sau egal cu 10[26].SwissADME prezice încă șase parametri fizico-chimici asociați cu asemănarea medicamentului, cum ar fi lipofilitatea [27], mărimea, polaritatea [28], solubilitatea [29,30], flexibilitatea și saturația [31,32] așa cum este ilustrat în Figura 2 și Tabelul 2.cistanche UKGraficul SWISSADME de asemănare cu medicamentul compusului izolat a arătat că majoritatea proprietăților fizico-chimice ale compusului sunt în intervalul dorit [33], cu excepția numărului de acceptori ai legăturilor H, a donatorilor de legături H și a polarității compusului, deoarece valoarea PSA este 201,28 A2 (interval de dorit (între 20 și 130 A2)[28]. Această polaritate ridicată poate fi atribuită prezenței unui fragment de zahăr. Compusul izolat a prezentat log S(Ali) de solubilitate apoasă topologică promițătoare. ] și Log S (ESOL)[30].Acest lucru va facilita formularea viitoare a acestui compus.Farmacocinetica prezisă a arătat că compusul are o absorbție GIT prevăzută scăzută, fără permeație la BBB conform modelului Dania de ou fiert [34] adoptat de serverul online SwissADME[33].cistanche wirkungÎn plus, compusul nu a prezentat efecte inhibitoare asupra a cinci izoforme ale citocromului P450 (1A2,2C19,2C9,2D6 și 3A4) [35], indicând o posibilitate scăzută de interacțiuni medicament-medicament. Permeabilitatea prezisă a pielii este calculată printr-un model de regresie liniară multiplă care corelează dimensiunea moleculară și lipofilitatea cu permeabilitatea pielii [36]. Cu cât este mai negativ log Kp (cu Kp în cm/s), cu atât molecula este mai puțin permeabilă [33,36].extract de cistanche tubulosaLog Kp de permeație a pielii estimat în cm/s este de -9,14 cm/s.

2.3.Evaluarea proprietăților anti-îmbătrânire a pielii

2.3.1.Determinarea activităților anti-colagenază și anti-elastaza

Colagenul și elastina sunt proteine ​​structurale vitale ale epidermei care susțin elasticitatea, tonusul capilar și rezistența shkin-ului împreună cu acidul hialuronic [39]. În timpul procesului de îmbătrânire, stresul oxidativ și expunerea excesivă la lumina UV duc la activarea enzimelor hidrolizante, cum ar fi elastaza, colagenaza și hialuronidaza, prin urmare, rezistența și flexibilitatea pielii se pierd și apar ridurile[40] . Inhibarea activităților colagenazei și elastazei este una dintre strategiile eficiente de protejare a pielii de manifestările de îmbătrânire a pielii [41]. După cum s-a clarificat în Figura 3A, compusul a prezentat o proprietate anti-colagenază moderată cu o valoare ICso de 419,10 ug/mL, în comparație cu fenantrolina (IC50=182.80ug/mL) ca standard. În ceea ce privește efectul inhibitor al elastazei (Figura 3B), acesta a arătat un efect remarcabil cu o valoare ICso de 1,06 ug/mL, în timp ce controlul pozitiv, N-metoxisuccinil-Ala-Pro-Val-clorometilcetonă, a exercitat o valoare ICso de 0,63 ug. /mL. În conformitate cu aceste rezultate, un studiu anterior a raportat că extractul de frunze cu metanol de mango a fost un inhibitor de 10-ori mai puternic al elastazei decât tocoferolul standard atribuit proprietății de inhibare necompetitivă a mangiferinei[42]. Mai mult, rapoartele anterioare au demonstrat activitatea anti-elastazică a compușilor polifenolici datorită prezenței grupărilor hidrofile precum hidroxil sau carboxil care ar putea influența pozitiv inhibarea competitivă a enzimelor [43].

2.3.2.Determinarea activităților antihialuronidază și antitirozinazică

Acidul hialuronic este glicozaminoglicanul predominant al pielii care își păstrează conținutul de umiditate[44]. Este hidrolizată enzimatic de hialuronidază, ducând la distrugerea integrității structurii pielii și la perturbarea permeabilității țesuturilor [45]. Suprimarea hialuronidazei menține integritatea pielii, întârzie progresia îmbătrânirii pielii și menține hidratarea pielii [13]. Studiile anterioare au informat că inhibitorii naturali de hialuronidază ar putea servi bine ca agenți anti-îmbătrânire pentru dezvoltarea de produse legate de sănătatea pielii[46]. După cum este ilustrat în Figura 4A, compusul izolat ar putea atenua remarcabil activitatea hialuronidazei cu o valoare ICso de 1,65 ug/mL, în comparație cu 6-O-palmitoil acid L-ascorbic ca martor pozitiv (2,55 ug/mL).

Printre manifestările clinice ale senescenței pielii, hiperpigmentarea pielii poate fi accelerată de enzima tirozinază în prezența speciilor reactive de oxigen (ROS)[46]. Tirozinaza, o glicoproteină care conține cupru, joacă o funcție crucială în sinteza melaninei prin hidroxilarea L-tirozinei la 3,4-dihidroxifenilalanină (DOPA), urmată de oxidarea DOPA la DOPAchinonă [47]. Prin urmare, suprimarea activității tirozinazei poate reduce hiperpigmentarea pielii [48]. Din această perspectivă, compusul a inhibat potențial tirozinaza cu o valoare ICso de 0.48 ug/mL, în comparație cu acidul kojic ca martor pozitiv (0.82 ug/mL), așa cum se arată în Figura 4B. Un studiu anterior asupra extractului de semințe de Mangifera indica a arătat rezultate remarcabile anti-tirozinaze și anti-hialuronidază corelate cu conținutul de polifenolici [47]. La nivel molecular, atât tirozina cât și DOPA conțin grupări hidroxil care se exprimă ca donatori de protoni esențiali pentru activarea tirozinazei [49]. De asemenea, compusul conține patru fragmente hidroxil în scheletul său care se pot comporta ca inhibitori competitivi prin reacția ca substraturi la tirozinază.

3.Material și Metode

3.1.Materiale vegetale

Frunzele proaspete ale frunzelor de Mangifera indica L. au fost obținute în stadiul de fructificare dintr-o grădină privată din zona Abo-Zabal (N 30 grad 1743.5336"E 3128.254), guvernul Qualiobya, Egipt, la 20 iulie 2021. Au fost autentificate cu amabilitate de către Dna Treize Labib, specialist în taxonomie la Grădina Botanică El-Orman, Giza, Egipt. Exemplare de voucher cu codul PHG-P-MI-362 au fost plasate la galeria Departamentului de Farmacognozie, Facultatea de Farmacie, Universitatea Ain Shams.

3.2.Extractie si Izolare Cromatografica

Frunzele uscate la aer ale Mangifera indica L. (1,56 kg) au fost percolate în 70 procente de metanol (27L) timp de 5 zile, apoi filtrate. Filtratul a fost evaporat total in vacuo la 47 de grade până la uscare pentru a produce un reziduu uscat (90,36 g; 5,79 procente g/g); randamentul de extracție a fost calculat ca următoarea ecuație: [greutatea totală a extractului uscat/greutatea totală a plantei de prospăt] × 100. Apoi, extractul obținut a fost aplicat pe fracționarea Diaion HP-20. S-a utilizat gradientul de eluare (apă/metanol). Au fost obținute cinci fracții majore: 100% apă, 25% metanol, 50% metanol, 75% metanol și 100% metanol. Fracția 50% solubilă în metanol (26,38 g) a fost expusă la poliamidă și a fost eluată inițial cu 100% apă, apoi a fost eluată în gradient cu apă/metanol (de la 100:0 la 0:100, w/o) pentru a obține șase subfracții: 100 la sută apă, 20 la sută, 40 la sută, 60 la sută, 80 la sută și 100 la sută metanol. Subfracția de 40% solubilă în metanol (2,36 g) a fost aplicată pe Sephadex LH-20 folosind MeOH (eluție izocratică).Fracțiuni similare au fost combinate și evaporate pentru a obține patru subfracții principale (A{1-A4), subfracția A3(0.86 g) a fost aplicat pe plăci de cromatografie preparativă în strat subțire (TLC) utilizând acid butanolacetic: apă (BAW;4:1:5) ca dezvoltator de fază mobilă pentru a izola compusul sub formă de lumină. pulbere amorfă galbenă.

3.3.Spectrometru de rezonanță magnetică nucleară (RMN).

Un spectrometru Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Elveția) a fost utilizat la Centrul de Descoperire, Cercetare și Dezvoltare a Medicamentului, Facultatea de Farmacie, Universitatea Ain Shams. 3.4.Spectrometrie de masă

Pentru analiza spectrometrică de masă a fost utilizat un spectrometru de masă Finnigan LCQ-DECA (San Jose, CA, SUA) conectat la un detector PDA. Probele au fost dizolvate în HzO:MeOH sub formă de amestec și injectate direct în sistemul HPLC/ESI-MS. Ambele moduri de ionizare ESI negativă și pozitivă au fost aplicate în următoarele condiții: gaz de uscare și nebulizare, N2; temperatura capilară, 250 de grade; tensiune de pulverizare,4,48 kV; tensiune capilară, 39,6 V; tensiunea lentilei tubului,10.00 V; și modul de scanare completă în intervalul de masă m/z 100-2000. Analiza ESI-MS pentru compusul izolat a fost efectuată pe un spectrometru de masă Waters Xevo TQD cu modul UPLC Acquity (Milford, CT, SUA) la Centrul de Descoperire, Cercetare și Dezvoltare a Medicamentului, Facultatea de Farmacie, Universitatea Ain Shams.

3.5.Predicția farmacocinetică in-silico

Regula lui Lipinski de cinci parametri fizico-chimici, cum ar fi lipofilitatea, solubilitatea și proprietățile farmacocinetice cum ar fi absorbția GIT, distribuția, metabolismul și permeația cutanată a compusului izolat au fost efectuate folosind serverul online SwissADME [36]. 3.6. Evaluarea proprietăților anti-îmbătrânire a pielii

3.6.1.Determinarea activității anti-colagenază

Capacitatea inhibitoare a compusului izolat împotriva activității colagenazei a fost evaluată utilizând un kit de screening fluorometric al inhibitorilor de colagenază (BioVision, catalog nr. # K833-100) conform metodei descrise anterior [50]. Martorul de referință a fost (1,10)-fenantrolină. Compusul testat și controlul de referință au fost preparate în concentrații de 1,10,100 și 1000 ug/mL pentru analiză. Compusul testat a fost preparat într-o placă de 96-godeuri cu fund plat. În primul rând, substratul de colagenază a fost dizolvat în tampon de testare colagenază (CAB). Proba pentru analiză a fost preparată prin amestecarea compusului atât cu colagenază, cât și cu CAB. Pregătirea probelor de control inhibitor a fost efectuată prin amestecarea inhibitorului ((1,10)-fenantrolină (80 mM)) cu enzima colagenază diluată și tampon CAB. Controlul enzimatic a fost preparat prin amestecarea colagenazei diluate cu CAB. Tamponul CAB a fost utilizat ca control de fond. Toate probele au fost incubate la temperatura camerei timp de 15 minute. În acest timp, amestecul de reacție a fost preparat prin amestecarea colagenazei cu CAB. În etapa următoare, amestecul de reacție a fost amestecat bine cu probele preparate. Fluorescența a fost măsurată imediat la o lungime de undă de excitare de 490 nm și o lungime de undă de emisie de 520 nm folosind un cititor de microplăci (FilterMax F5, Thermo Fisher). Măsurarea a fost efectuată în modul cinetic la 37 de grade timp de 60 de minute. Probele au fost preparate în duplicat și efectul inhibitor al colagenazei al compusului testat a fost calculat aplicând următoarea ecuație:

3.6.2.Determinarea Activitatii Anti-Elastazei

Activitatea anti-elastazică a compusului a fost investigată utilizând kitul de testare EnzChek§Elastase (E-12056) conform metodei raportate anterior [51]. Compusul testat și controlul de referință au fost preparate în concentrații de 0.1,10 și 100 ug/mL pentru analiză. Compusul a fost preparat în 96-plăci de godeuri cu funduri transparente pentru testul fluorometric. Pe scurt, soluțiile de enzime de elastază, substratul de elastază și controlul inhibitorului au fost preparate conform recomandărilor. Soluția de elastază diluată a fost apoi adăugată în godeuri. Compusul testat, controlul inhibitorului și controlul enzimei au fost adăugate în godeurile ulterioare. Probele au fost amestecate pe un agitator și apoi incubate timp de 5 minute la 37 de grade. Tamponul de testare a fost amestecat cu substratul pentru a prepara amestecul de reacție fluorometric, care a fost apoi adăugat și amestecat bine cu fiecare probă. Fluorescența a fost măsurată imediat la o lungime de undă de excitație de 400 nm și o lungime de undă de emisie de 505 nm folosind un cititor de microplăci (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, SUA). Măsurarea a fost făcută în modul cinetic la 37 de grade timp de 30 de minute protejat de lumină. Toate probele testate au fost preparate și testate în duplicat și efectul inhibitor al elasstazei al compusului testat a fost calculat aplicând următoarea ecuație:

Unde:

△RFU=o modificare a unităților relative de fluorescență EC=controlul enzimei

3.6.3.Determinarea activității anti-tirozinaze

Activitățile inhibitoare ale uleiurilor au fost testate împotriva colagenazei utilizând kitul de testare colorimetrică de screening pentru inhibitori Abcam@Tyrosinase (număr de catalog ab204715). Testul a fost efectuat conform manualului furnizat. Inhibitorul standard al tirozinazei a fost acidul kojic. Compusul testat a fost preparat în concentrații cuprinse între 0,1 și 10 ug/mL pentru analiză. Aproximativ 2 uL de tirozinază furnizată au fost amestecați cu 48 uL de tampon de testare a tirozinazei. Probele de uleiuri esențiale sau stand (20 uL) au fost amestecate cu amestecul de enzime (50 μL) și incubate la 25 de grade timp de 10 minute. Apoi, 30μL de soluție de substrat de tirozinază au fost adăugate în godeurile de uleiuri esențiale și standard. Ulterior, placa a fost măsurată spectrofotometric la o lungime de undă de 510 nm timp de 30-60 min la 25 de grade.

3.6.4.Determinarea activității antihialuronidază

Activitatea hialuronidazei a fost evaluată spectrofotometric prin măsurarea cantității de N-acetilglucozamină formată din hialuronat de sodiu [52]. Compusul testat și controlul de referință au fost preparate în concentrații variind de la 0,1 la 10 ug/mL pentru analiză. Cincizeci de microlitri de hialuronidază bovină (7900 unități mL-1, (Sigma, St. Louis, MO, SUA) dizolvate în tampon acetat 0,1 M (pH=3,5) au fost amestecate cu 100 μL dintr-un produs desemnat concentrația compusului dizolvat în 5% DMSO și apoi incubat într-o baie de apă la 37 de grade timp de 20 min. Grupul de control a fost tratat cu 100 μL de 5% DMSO în loc de probă. Densitatea optică a amestecului de reacție a fost măsurată la 585 nm prin spectrofotometrie.

3.7.Analiza statistică

Toate experimentele au fost efectuate în trei exemplare. Datele pentru ICso a activității de inhibiție a enzimei au fost examinate statistic utilizând o analiză unidirecțională a varianței (ANOVA). Analizele statistice au fost efectuate folosind GraphPad Prism 5.0. 4. Concluzii și perspective de viitor

Produsele naturale derivate din plante sunt la mare căutare pe piața globală pentru dezvoltarea de noi agenți pentru modele cosmeceutice[4]. În acest studiu, un nou compus de xantonă, 1.3.5,6-tetrahidroxixantona-C-4- -D-glucopiranozida, a fost izolat din extractul de frunze de M. indica. Pe baza testelor de inhibiție a enzimelor, acest compus ar putea prezenta proprietăți bune anti-colagenază, anti-elastaza, anti-hialuronidază și anti-tirozinază, conferind astfel un efect de atenuare cuprinzător împotriva enzimelor legate de îmbătrânirea pielii. În plus, un parametru fizico-chimic in silico și un studiu ADME susțin încorporarea acestuia în formele de dozare topice, deoarece prezintă o solubilitate apoasă promițătoare și o penetrare rezonabilă în piele. Prin urmare, acest compus ar putea fi aplicat ca un agent bioactiv multifuncțional de bun augur pentru formulări nutraceutice și cosmeceutice. Cu toate acestea, evaluările toxicologice și clinice sunt potențial promițătoare.

Acest articol este extras din Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules