Studiu Experimental al Mecanismelor Biect de Oboseală Anti-Sportiva Cistanche Deserticola

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

YANG Hong-Xin, YANG Yong², YAN Xiao-hong'

Abstract:Obiectiv Studierea efectuluicistanche deserticolaasupra izoenzimei lactat dehidrogenazei (LDH), a glicogenului și a oxidului nitric sintetaza 3 (NOS3) a ficatului la șoareci, înotă și explorează mecanismele moleculare relevante.anti-oboseala sportiva. Metodă Șoarecii au fost împărțiți în grupul de control normal, grupul de control sportiv și grupul de controlcistanche deserticolagrup experimental. Fiecare șoarece din grupul de control normal și grupul de control sportiv a primit soluție salină 0,2 ml pe zi. Fiecare șoarece din grupul experimental de cistanche deserticola a primit decoct de apăcistanche deserticola0.2 mL(3 g/kg pe zi. Administrarea a fost de 15 zile. Sarcina de înot timp de 90 de minute a fost efectuată pe șoareci din grupul de control sportiv șicistanche deserticolagrup experimental la 1 oră după ultima administrare. Ficatii șoarecilor au fost îndepărtați după 10 ore de înot. O parte a ficatului a fost fixată în lichidul neutru de formol pentru a pregăti secțiunile de parafină, iar celelalte au fost utilizate pentru măsurarea activității LDH. Structura ficatului a fost observată prin colorarea HE, iar glicogenul hepatic a fost măsurat prin colorarea glicogenului. NOS3 a fost examinat prin metoda imunohistochimică SP. Rei Structura hepatică a grupului de control sportiv a fost grav rănită, izoenzimele LDH4 și LDH5 au fost mai mari, glicogenul hepatic a fost scăzut, NOS3 a fost scăzut în comparație cu grupul de control normal (P<0.05). the="" liver="" structure="" of="" the="" cistanche="" deserticola="" experimental="" group="" was="" good,="" ldh5="" isoenzyme="" was="" low,="" the="" glycogen="" was="" rich="" and="" expression="" of="" nos3="" was="" upregulated="" compared="" with="" the="" sport="" control="" group=""><0.05). conclusion:="">Cistanche deserticolaar putea scădea LDH5, proteja ficatul de povara șoarecilor de înot și accelera acumularea de glicogen prin creșterea expresiei NOS3 pentru a proteja ficatul și a îmbunătăți recuperarea capacității fizice.

Cuvinte cheie; cistanche deserticola;glicogen hepatic; oxid nitric sintaza 3; soareci

Cistanche, cunoscută și sub numele de Dayun, este o plantă parazită de doi ani din familia Lydanaceae. Are tulpini uscate cărnoase cu solzi. Este produs în principal în soluri nisipoase și pajiști seminisipoase din Mongolia Interioară, Gansu, Xinjiang și Qinghai.Cistancheîn Mongolia Interioară are cea mai bună calitate dintre zonele de producție.Cistancheeste dulce, sărat și cald în natură. Intră în rinichi și meridianul intestinului gros. Funcția sa principală este de a revigora rinichii și de a întări yang-ul, de a hrăni esența și sângele și de a hrăni intestinele. Este adesea folosit pentru a trata impotența, infertilitatea, slăbiciunea taliei și a genunchilor, slăbiciunea mușchilor și a oaselor, intestinele uscate și constipația. . Scopul acestui studiu este de a observa efecteleCistancheasupra lactat dehidrogenazei hepatice (LDH), glicogenului hepatic și oxid nitric sintetaza 3 (NOS3) la șoareci care înotă cu greutate, printr-un test de înot cu sarcină la șoareci și să exploreze mecanismul său de protecție asupra ficatului, să ofere o bază teoretică pentru cercetarea aprofundată, dezvoltarea și utilizareaCistancheîn alimentația sănătoasă pentru sport.

1 Material experimental

1.1 Animale 30 șobolani Kunming masculi, grad curat, greutate (20±0,5) g, furnizați de Centrul pentru animale al Universității din Mongolia Interioară.

1.2 Medicina Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma) este produs în Ejina Banner, Mongolia Interioară și a fost identificat. Conform materialului medicinal original: apă=100g: 400 ml, se înmoaie timp de 30 de minute, se încălzește și se fierbe, apoi se decocează la foc cald timp de 30 de minute, se toarnă soluția medicinală și se re-decorează în proporție de 100 g: 200 ml. Se amestecă cele două decocturi împreună, se filtrează cu două straturi de tifon, apoi se concentrează până la echivalentul a 1 g de materiale medicinale originale per mililitru de decoct original și se păstrează la frigider la 4 grade. 1.3 Reactivi și instrumente Anticorpul policlonal NOS3 a fost achiziționat de la Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd. Kitul SP a fost achiziționat de la Fujian Maixin Reagent Company. Trusa de izoenzime lactat dehidrogenază a fost achiziționată de la Inner Mongolia Tongri Reagent Co., Ltd (deținută în totalitate de Nissan). Analizor de imagini color Nanjing JD-80. Sistem american de analiză a imaginii cu gel UVP.

Anti obosealasupliment cistanche

2. Metode experimentale

2.1 Gruparea și administrarea Șoarecii Kunming au fost împărțiți aleatoriu în grup de control normal, grup de control pentru exerciții șiCistanchegrup experimental, fiecare cu 10 șoareci. Grupul de control normal și grupul de control cu ​​exerciții fizice au primit soluție salină normală o dată pe zi, 0,2 ml/timp; celCistanchegrupului experimental i s-a administrat un decoct de cistanche (luați 3 ml din decoct de apă original și adăugați apă la 10 ml), o dată pe zi, 0 ．2 ml/timp, o doză zilnică de 3 g/kg, administrare continuă timp de 15 zile. La o oră după ultima administrare, șoarecii din grupul de control al exercițiilor și din grupul de experiment Cistanche au fost încărcați cu o greutate de plumb de 1 g pe coadă și au fost plasați într-o piscină cu o înălțime de 50 cm, o lungime de 50 cm și un latime de 35 cm pentru a inota. Temperatura a fost menținută la (30±0,5) grade și menținută constantă. Observati mouse-ul, daca se constata ca mouse-ul inceteaza sa inoate, folositi un bat de lemn pentru a-i stimula miscarea timp de 90 de minute. După exerciții fizice, mâncați o dietă normală, odihniți-vă timp de 10 ore și ucideți șoarecii împreună cu șoarecii grupului de control normal prin metoda de decodare, scoateți ficatul, fixați o parte cu formaldehidă neutră 10%, deshidratați, transparent, înmuiați în ceară , și încorporați pentru a face 4 felii continue groase, utilizați metoda de colorare HF pentru a observa structura țesutului hepatic al fiecărui grup: cealaltă parte a fost spălată cu soluție salină normală, congelată la 20 de grade, dezghețată la temperatura camerei în timpul măsurării, uscată cu hârtie de filtru și cântărit, iar apoi omogenatul de ficat a fost preparat cu soluție salină normală, 3500r Centrifugă timp de 15 min la /min și se ia supernatantul pentru a măsura activitatea izoenzimei lactat dehidrogenazei prin electroforeză.

2.2 Determinarea activității lactat dehidrogenazei Folosind electroforeza pe gel de poliacrilamidă, izoenzimele LDH sunt separate în funcție de diferențele lor de mobilitate electroforetică. Concentrația gelului de separare a probei este de 7 procente, pH 8,9, iar concentrația de gel concentrat este de 4 procente, pH 6,8,10. Proba se amestecă cu 1 picătură de glicerină și indicator de albastru de bromofenol. Tamponul pentru electrod este Tris-Glycină (pH 8,7), începeți să stabilizați presiunea la 1o0-150V, adăugați-o la 2o{0-250V după 30 de minute și efectuați electroforeza timp de 4 ore. După electroforeză, a fost colorat cu Kitul de izoenzime lactat dehidrogenază, colorat la 37 de grade timp de 30 de minute, prezentând o bandă albastră de izoenzimă de lactat dehidrogenază, apoi clătit cu apă, fixat cu acid acetic glacial și utilizat sistemul de analiză a imaginii cu gel UVP. Efectuați analiza datelor .

2,3 Secțiuni seriale de colorare cu glicogen de 4um grosime sunt deparafinizate în mod convențional în apă, se pun în soluție de acid periodic 1% la 37 de grade timp de 15 minute, se clătesc în apă curentă, se pun în soluție Schiff timp de 60 de minute, se clătesc cu apă curentă, se deshidratează prin gradient. etanol, xilenul este transparent, neutru Montați lamele cu gumă și observați rezultatele colorării la microscop.

2.4 Secțiunea de colorare imunohistochimică a fost deparafinizată în mod obișnuit în apă, iar antigenul a fost reparat cu un tampon de acid citric cu microunde, iar peroxidaza endogenă a fost îndepărtată cu lichidul A timp de 10 minute și apoi blocată cu lichid B (ser de capră diluat) timp de 10 minute. Se adaugă anticorpul primar peste noapte la 4 grade într-o cutie umedă, se spală cu soluție PBS pH 7,4 timp de 5 min × 3 ori în a doua zi, se adaugă soluția marcată cu biotină C (soluție secundară de lucru cu anticorpi) timp de 10 minute, se spală cu soluție PBS timp de 5 min × 3 ori și se adaugă soluția D marcată cu peroxidază de hrean, a fost incubată timp de 10 minute, spălată cu soluție PBS de 5 minute x 3 ori și, în final, dezvoltată în soluție DAB timp de 5 minute, spălată cu apă de la robinet, colorată cu HE, deshidratată cu alcool gradient, transparent cu xilen, și montat cu gumă neutră. După montarea filmului, observați la microscop cu lumină. În fiecare lot de experimente, soluția salină tamponată cu fosfat (PBS) a fost utilizată ca martor negativ în locul anticorpului primar.

2.5 Analiza exprimării oxidului nitric sintetazei 3 Observat preliminar prin metoda vizuală semi-cantitativă la microscop cu lumină, produsul pozitiv al NOS3 este maro închis sau galben maroniu, iar produsul pozitiv este localizat în citoplasma hepatocitelor sau între hepatocite . În citoplasma celulelor endoteliale, fundalul albastru este negativ. Apoi, sistemul de analiză a imaginii color este utilizat pentru a măsura valoarea gri a reactantului pozitiv, iar parametrii celor 4 câmpuri vizuale sunt măsurați aleatoriu pentru fiecare film sub o lentilă obiectiv de 40-ori, iar valoarea medie este Luat. Acest parametru este utilizat pentru a reflecta modificarea intensității colorantului NOS3. 2.6 Metode statistice Toate datele sunt reprezentate de. SPSS11.0 Pachetul software statistic este utilizat pentru testul t, iar P<0.05 is="" considered="" a="" significant="">

Anti oboseala

3. Rezultate

3.1 Observarea structurii țesuturilor la microscopul luminos În grupul de control normal, structura lobulilor hepatici este clară, cordoanele celulare sunt aranjate ordonat, sinusoidele hepatice sunt normale, celulele hepatice nu au leziuni evidente și structura nucleară este clară. În grupul de control al efortului, structura normală a țesuturilor a dispărut, lobulii au fost neclari, cordoanele celulare au fost dezordonate, majoritatea sinusoidelor hepatice au dispărut, iar hepatocitele au fost degenerare vacuolară extinsă, manifestată prin creșterea volumului celular, citoplasmă liberă, colorare ușoară, și chiar clar și transparent. Unele celule hepatice au prezentat o modificare tipică ca un balon, cu o cantitate mică de necroză focală sau punctată. Celulele hepatice aleCistanchegrupul experimental au fost ușor tulburi, dar au fost aranjați în mod regulat, nu au existat vacuole și legături evidente în celule, cordoanele celulare au fost aranjate ordonat și structura nucleului era clară.

3.2 Efecte asupra activității izoenzimelor lactat dehidrogenazei hepatice la șoareci sub efort de sarcină (vezi tabelul 1)

Tabelul 1 EfectulCistanchepe izoenzima lactat dehidrogenază hepatică a Xiaofeng încărcat (x±s)

Notă: În comparație cu grupul de control normal, P<0, 05;="" compared="" with="" the="" exercise="" control="" group,=""><0.05 (the="" same="">

3.3 Observarea la microscop cu lumină a colorării cu glicogen hepatic. Deși conținutul de glicogen al grupului normal de control nu este mare, există glicogen distribuit uniform în fiecare celulă hepatică fără vacuole; grupul de control al exercițiilor fizice are mai puțin glicogen, împrăștiat în celule hepatice, vacuole apărute în unele zone; celCistancheGrupul experimental a fost bogat în glicogen, dar a adunat mult pe o parte a celulei. 3.4 Observarea exprimării oxidului nitric sintetazei 3 cu microscopul luminos și analiza cantitativă a imaginii. Citoplasma hepatocitelor normale de control a arătat o expresie pozitivă puternică în distribuția difuză, în special în celulele binucleare, și expresie pozitivă în celulele endoteliale. . Expresia în citoplasmă a hepatocitelor și a celulelor endoteliale din grupul de control a fost slăbită. Grupul de experiment cistanche a arătat expresie pozitivă în citoplasma hepatocitelor și expresie pozitivă puternică în celulele endoteliale. Rezultatele analizei analizorului de imagini color sunt prezentate în Tabelul 2.

Tabelul 2 Comparația diferenței de expresie a №s3 în hepatocite și celule endoteliale (x±s)

4 Discutați

Că organismul uman are nevoie de energie pentru exerciții fizice, iar corpul are nevoie și de energie în procesul de metabolism. Metabolismul celular folosește direct energia din descompunerea adenozin trifosfatului (ATP). Energia necesară pentru sinteza ATP este în cele din urmă furnizată în principal de catabolismul zahărului. Studiile au arătat că, după exerciții fizice intense, organismul va produce o cantitate mare de H', radicali liberi, acid lactic și alte substanțe care afectează metabolismul normal al celulelor. În același timp, lipsa de glucoză în celule duce laoboseala exercițiuluiși deteriorarea celulelor. Rezultatele acestui studiu arată că deteriorarea structurii țesutului hepatic este foarte gravă după un număr mare de exerciții și afectează, de asemenea, sinteza celulelor, cum ar fi reducerea sintezei de glicogen hepatic. După o mulțime de exerciții, șoareci iauCistanchepoate observa reducerea leziunilor hepatice, în principal datorită reducerii LDH5, iar conținutul de glicogen hepatic este semnificativ mai mare decât cel al grupului de control al efortului, ceea ce sugerează că Cistanche poate obține protecția ficatului și poate menține fiziologia normală prin reducerea funcției LDH5. Din rezultatele colorării cu glicogen.

Conținutul de glicogen al lotului experimental de Cistanche este mai mare decât al grupului de control normal. Cistanche crește stocul de glicogen în ficat înainte de exercițiu sau accelerează sinteza glicogenului în condiții de stres după exercițiu. Pentru că nu există control fără exercițiuCistancheîn experiment. Este imposibil să trageți o concluzie și trebuie confirmată în pasul următor, dar de protecțieefectul Cistancheasupra ficatului și promovarea sintezei glicogenului după o mulțime de exerciții sunt evidente. N{{0}} este o substanță cu moleculă mică care a fost foarte apreciată de comunitatea sportivă în ultimii ani. NOS este principalul factor de limitare a ratei pentru producerea de N0. S-a confirmat că NOS are trei tipuri de izoenzime, iar NOSI se numește oxid nitric sintază neuronală.

Enzima, care există în celulele neuronale, celulele musculare scheletice etc., este implicată în principal în procesele de neurodezvoltare, neurosecreție, învățare și memorie: NOS2 este o sintază de oxid nitric inductibilă, care se găsește în principal în celulele musculare netede, macrofage și limfocite. această enzimă este indusă, poate continua să sintetizeze NO până la epuizarea substratului sau moartea celulelor. În prezent este considerat a fi implicat în deteriorarea celulelor; „NOS3 este o sintază endotelială de oxid nitric, care este distribuită în principal în celulele endoteliale și hepatocite, producând NO, implicată în principal în funcțiile fiziologice. Rezultatele acestui studiu arată că după o mulțime de exerciții, expresia NOS3 în celulele endoteliale și hepatocite este slăbită, iar N0 rezultat scade, astfel încât vasele de sânge nu pot fi extinse în mod eficient, fluxul sanguin este redus, iar materiile prime pentru sinteza glicogenului nu pot fi transportate la celulele hepatice, astfel încât sinteza glicogenului este redusă. ;Cistanchepoate regla în sus expresia NOS3 în celulele endoteliale și celulele hepatice, extinde vasele de sânge în mod reactiv, crește fluxul sanguin, accelerează capacitatea de a transporta materii prime pentru sinteza glicogenului, accelerează sinteza glicogenului și menține organismul la un nivel metabolic fiziologic normal. Prin urmare, reducerea LDH5 pentru a proteja ficatul și reglarea în sus a expresiei NOS3 pentru a promova gluconeogeneza acidului lactic poate fi un mecanism important pentruCistanchepentru a proteja ficatul și pentru a promova recuperarea fizică. Această cercetare oferă baza experimentală științifică pentru dezvoltarea și utilizarea ulterioară aCistancheîn domeniul medicinei sportive și, de asemenea, pune bazele dezvoltării și epurăriiefectul lui Cistanchesubstante.