Studiu experimental al efectului protector al pretratamentului cu glicozide de Cistanche asupra leziunilor de reperfuzie-ischemie renală

pentru mai multe informații:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Departamentul de Chirurgie, Spitalul Districtual de Medicină Tradițională Integrată Chineză și Vestică Baoshan, Shanghai 201900)

【Abstract】Obiectiv Stabilirea unui model de resuscitare a șocului hemoragic la șobolani și observarea efectului protector alCistancheglicozide totale (CTG) asupra leziunii renale de ischemie-reperfuzie. Metode Sobolanii SD au fost împărțiți aleatoriu în 3 grupuri: grup de operație simulată, grup experimental (grup de resuscitare cu șoc), grup de tratament CTG, 10 șobolani în fiecare grup. Grupul experimental și grupul de tratament CTG au stabilit modele de ischemie-reperfuzie renală. Șobolanii din grupul de tratament au fost injectați cu CTG 400 mg/kg intraperitoneal, iar grupul experimental și grupul cu operație simulată au fost injectați cu ser fiziologic. Conținutul miocardic din sânge, conținutul de azot ureic și cistatina C din fiecare grup au fost detectate pentru a determina funcția renală, analiza citometriei în flux a fost utilizată pentru a detecta rata de apoptoză a celulelor renale; Testul imunologic legat de enzime (ELISA) a fost utilizat pentru a detecta legătura cromozomului X la șobolanrinichițesut Expresia inhibitorului X-linked al proteinei apoptozei (XIAP). Rezultate Comparând grupul CTG cu grupul experimental, Cr sanguin, BUN și cistatina C au fost semnificativ reduse (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheau un efect protector asupra leziunii renale de ischemie-reperfuzie la șobolani, care poate fi legat de promovarea exprimării XIAP.

[Cuvinte cheie] rinichi; leziune de ischemie-reperfuzie; glicozide totale de cistanche; inhibitor legat de cromozomi al proteinei apoptozei; apoptoza; şobolan

[Numărul de clasificare a bibliotecii chineze] R692 [Codul de marcare a documentului] A [Numărul articolului] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Click pentru Cistanche EXTRACT POWDER pentru rinichi

Leziunea ischemie-reperfuzie (I/R) este un fenomen fiziopatologic comun de afectare renală în procesul de șoc hemoragic, traumatism sever,rinichitransplant, șirinichichirurgie tumorală. Studiile au arătat că apoptoza este o parte importantă a afectarii funcției renale cauzate de leziuni I/R (1). Inhibitorul X-linked al proteinei apoptozei (XIAP) este unul dintre cei mai puternici inhibitori ai apoptozei endogene găsite până acum (2). Există puține studii privind efectul anti-apoptotic al XIAP în țesutul renal după leziuni I/R.Cistancheglicozide totale (CTG) este un compus feniletanoid de glicozide totale extras dinCistanche, care are diverse funcții biologice. Există puține studii asupra protecției sale renale după leziuni I/R. . Acest studiu a stabilit un model de resuscitare cu șoc hemoragic la șobolani și a stabilit un model de leziune sistemică I/R pentru a explora efectul protector al glicozidelor totale ale herniei de carne asuprarinichide la leziunea I/R și să exploreze posibilul său mecanism.

1 Materiale și metode

1.1 Animale și grupare

Există 30 de șobolani masculi curați și sănătoși furnizați de Centrul Experimental al Universității de Medicină Tradițională Chineză din Shanghai, cântărind (320 ± 30) g. Împărțit aleatoriu în 3 grupuri: grup de operație simulată, grup experimental (grup de resuscitare cu șoc), grup CTG, fiecare cu 10 șobolani.

1.2 Principalii reactivi și instrumente

Glicozidele totale ale orezului glutinos (număr de lot: 20081516) au fost achiziționate de la Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; pentobarbital de sodiu, Hoechst 33258 și iodură de propionil au fost achiziționate de la Sigma, SUA; Kitul de testare a proteinelor inhibitor de apoptoză legat de cromozomul X de șoarece (XIAP) și trusa ELISA au fost achiziționate de la Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; cititorul de microplăci a fost achiziționat de la Thermo Company, SUA; detector fiziologic multi-parametric a fost achiziționat de la Nihon Kohden Company, Japonia; citometrul de flux BDFACSAria a fost achiziționat de la Becton, SUA - Compania Dickinson; Trocarul 24G a fost achiziționat de la Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Metoda experimentală

1.3.1 Prepararea modelului animal de șobolani SD au fost postați cu 12 ore înainte de experiment și anesteziați prin injectare intraperitoneală cu pentobarbital de sodiu (50 mg/kg).

Șobolanul a fost fixat în decubit dorsal, s-a făcut o incizie de 3 cm în abdomenul inferior stâng, s-a separat artera femurală, s-a introdus un trocar 24G și s-a conectat un detector fiziologic multiparametric. Tensiunea arterială medie a șobolanului a fost măsurată ca (113 ± 15) mmHg, 20 ml heparină seringă. Tensiunea arterială a fost scăzută la 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) cu un dispozitiv cu trei căi de conexiune chimică. S-a considerat că a început șocul, iar tensiunea arterială a fost menținută timp de 90 de minute. Volumul de sânge a fost de (13 ± 3) ml, apoi sângele autolog din seringă Reinfuzia lentă durează aproximativ 30 de minute, iar tensiunea arterială revine la mai mult de 90 la sută din valoarea de bază, iar resuscitarea este considerată reușită (3) . Trocarul a fost scos, artera femurală a fost ligată și incizia a fost suturată. După ce șobolanii s-au trezit, au fost înapoiați în cușcă pentru observație și au fost liberi să mănânce și să bea. La 24 de ore de la resuscitare, s-a folosit injecție intraperitoneală cu pentobarbital de sodiu (50 mg/kg) pentru anestezie, laparotomie, s-au recoltat 5 ml sânge din vena cavă inferioară, șobolanii au fost sacrificați imediat, iar rinichii stângi și drepti au fost scoși pt. utilizare.

1.3.2 Metode de medicație Grupului de tratament cu CTG i sa administrat CTG cu 2 ore înainte de sângerarea șobolanilor și a fost injectat în cavitatea abdominală la o doză de 400 mg/kg. Grupul experimental a fost injectat intraperitoneal cu 3 ml de soluție salină normală cu 2 ore înainte de sângerare; grupul de operație simulată a suferit doar anestezie, laparotomie și separarea arterei femurale, plasarea unui trocar și sutura inciziei, dar fără sângerare sau resuscitare. Restul au fost la fel ca grupul experimental.

1. 4 indicatori și metode de detecție

1.4.1 Determinarea conținutului de BUN, Cr și cistatina C din sânge Cistatina C este un marker endogen al modificărilor ratei de filtrare glomerulară. Când funcția renală este afectată, rata de filtrare glomerulară scade, concentrația de cistatina C în sânge poate crește de 10 ori, iar acuratețea diagnosticului cistatinei C este semnificativ mai bună decât cea a intoxicației musculare serice. Conținutul de sânge BUN, Cr și Cystatin C au fost transmise la laboratorul spitalului nostru pentru determinare.

1.4.2 Determinarea ratei de apoptoză celulară Citometria în flux a fost utilizată pentru a detecta viteza de apoptoză a celulelor renale. Luați rinichiul și tăiați-l cu o lamă, adăugați puțin PBS și transferați-l într-o eprubetă. Se adaugă 0,3 la sută tripsină pentru a digera într-o baie de apă de 37 P, se incubează 20 min, când conținutul din eprubetă devine tulbure, se adaugă de 2 ori PBS pentru a opri digestia, se filtrează cu o plasă de nailon cu ochiuri de 300, aruncați impuritățile și centrifugați într-o centrifugă la temperatură joasă. Raza de centrifugare 8 cm, 12,000 r/min, centrifugare timp de 5 minute, aruncați supernatantul, ajustați concentrația celulară la 1 ~ 1,5 x 106/ml, luați 0,4 ml din suspensia celulară de mai sus și adăugați 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), închis la culoare 37 t: se incubează într-o baie de apă, se închide eprubeta, se clătește cu PBS după 5 min, raza centrifugei 8 cm, 12 000 r/min, se centrifugă timp de 5 min. , aruncați supernatantul, clătiți din nou în același mod. Se adaugă 0,4 ml de PI, se colorează timp de 5 minute și se detectează procentul de celule normale, necrotice și apoptotice din rinichi. Conform afinității celor doi coloranți ai diferitelor tipuri de celule, se știe că numai celulele colorate PI sunt celule moarte, doar celulele colorate Hoechst 33258 sunt celule apoptotice și niciunul dintre ele nu este celule vii normale colorate.

1.4.3 Test imunologic legat de enzime (ELISA) pentru a detecta expresia XIAP în țesuturile rinichilor de șobolan Luați fiecare grup de rinichi și tratați țesuturile renale proaspete cu lizat de țesut. Se centrifugă într-o centrifugă la temperatură joasă la 12 000 r/min timp de 5 min. Luați supernatantul și operați conform instrucțiunilor trusei XIAP ELISA Kit. Universitatea Jiaotong din Shanghai Fenghe Technology Co., Ltd. este responsabilă pentru testare.

1.5 Prelucrare statistică

Datele experimentale ale fiecărui grup sunt reprezentate de sol Yuan și SPSS 17. Software-ul 0 este utilizat pentru analiza statistică. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche poate îmbunătăți funcția sexuală

2 rezultate

Valorile indicilor funcției renale Cr, BUN și Cystatin C au fost semnificative statistic (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabelul 1 Indicii funcției renale Cr, BUN și valorile Cystatin-C la șobolani din fiecare grup Tab. 1 Indicii funcției renale în trei grupuri

Comparativ cu grupul de operațiuni simulate, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mecanismul leziunii renale ischemie-reperfuzie este foarte complicat. Este un proces patologic care apare în multe moduri sub acțiunea diverșilor factori, precum supraîncărcarea cu ioni de calciu, deteriorarea peroxidării lipidelor, apoptoza și necroza celulară, printre care apoptoza celulară dependentă de caspază este una dintre principalele forme de celule epiteliale tubulare renale. leziuni induse de leziuni renale I/R (4). Familia inhibitorului proteinei apoptozei (IAP) este singurul inhibitor endogen al caspazei găsit până acum în celulele de mamifere, care poate preveni în mod eficient apariția apoptozei celulare. XIAP este membrul cu cel mai puternic efect inhibitor asupra caspazei din familia IAP. Poate inhiba apoptoza celulară cauzată de o varietate de stimuli patologici și poate juca un efect protector asupra organelor deteriorate (5).

În prezent, cele mai multe dintre metodele de stabilire a modelelor animale de leziuni renale I/R sunt de a îndepărta un rinichi și de a fixa cealaltă parte a pediculului renal sau a arterei renale ⑹ pentru a simula starea transplantului de rinichi. Acest studiu folosește un model de șoc hemoragic/resuscitare, care este mai apropiat de procesul fiziopatologic de ischemie-reperfuzie sistemică care apare în șocul traumatic clinic. În acest experiment, nivelurile sanguine de BUN, Cr și cistatină C la șobolanii SD Îmbunătățirea semnificativă, funcția renală sever afectată, este un model animal ideal pentru studierea leziunii renale I/R.

CTG este un ingredient medicinal important al pastei de fete de carne din medicina tradițională chineză. Pasta de vinete, care este de natură caldă, dulce și sărată, revine la meridianul rinichilor și intestinului gros și a fost conținută inițial în Materia Medica a lui Shennong. „Ben Sutra”: Principalele cinci munci și șapte răni, hrănesc mijlocul, hrănesc cele cinci organe interne, întăresc yin, hrănesc esența și qi-ul;Cistanchea fost folosit în țara mea de două mii de ani. Se situează pe locul 1 în formulele de creștere a puterii în trecut și pe locul 2 în formulele hrănitoare după ginseng. Studiile au arătat căCistanchepoate saîmbunătățirea funcției sexuale, reglează neuroendocrină, șiîmbunătățirea funcției imunitare. , Antioxidanți, promovează metabolismul material, protejează miocardul ischemic și alte funcții. Ca principal ingredient medicinal al piureului familiei de carne, CTG are multe funcții. Cercetările asupra modelelor de ischemie-reperfuzie cerebrală au descoperit că CTG poate reduce aminoacizii excitatori din țesutul cerebral după ischemie-reperfuzie și poate proteja țesutul cerebral al șobolanilor SD (7). CTG are unefect antioxidantasupra țesuturilor de șoarece și are un anumit efect protector asupra hipoxiei cerebrale acute la șoareci și asupra leziunilor musculare cardiace la șoareci (9). CTG poate îmbunătăți semnificativ neurocomportamentulParkinsonmodelează șoarecii și inhibă scăderea numărului de neuroni dopaminergici din substanța neagră (9). Prin îmbunătățirea activității enzimelor de captare a radicalilor liberi, prevenirea peroxidării lipidelor, inhibarea depunerii peptidei B-amiloid în creier și inhibarea apoptozei celulelor cerebrale, CTG îmbunătățește semnificativ învățareaBoala Alzheimerșoareci cauzați de peptida B-amiloid Capacitate de memorie w. Acest studiu a arătat că, după aplicarea pretratamentului CTG, conținutul sanguin de BUN, Cr și cistatina C la șobolani a scăzut semnificativ, iar afectarea renală a fost redusă. CTG a crescut proteina XIAP care inhibă apoptoza în țesutul renal lezat I/R și a blocat apoptoza celulară. Apariția morții are un efect protector asupra afectarii rinichilor.