De ce Herba Cistanches poate fi folosită pentru a trata sindromul de deficiență renală?

Profilul metabolic dezvăluie efectele terapeutice ale Herba Cistanches într-un model animal de „sindrom de deficiență renală” indus de hidrocortizon

Contact: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang și Wei Jia

Abstract

fundal

Herba Cistanches(Roucongrong) este eficient în tratarea lui Shenxu Zheng ('sindromul de deficiență renală'). Cu toate acestea, mecanismele și răspunsurile metabolice sistemice la intervenția pe bază de plante sunt neclare.

Metode

Folosind profilarea metabolică bazată pe GC-MS, am investigat răspunsurile metabolice laHerba Cistanchesintervenție într-un model de șobolan al "indusă de hidrocortizon"sindromul de deficiență renală'.

Rezultate

Profilurile metabolice ale șobolanilor după injectarea cu hidrocortizon au deviat de la starea metabolică pre-doză în diferite momente, variind de la ziua 1 până la ziua 10, în timp ce profilurile metabolice ale șobolanilor tratați atât cu hidrocortizon, cât și cu extract apos deHerba Cistanchesa revenit la starea anterioară dozei în ziua 10.

Concluzie

Intervenția luiHerba Cistanchesa provocat o recuperare sistemică de la perturbarea metabolică indusă de hidrocortizon la șobolani. Acest studiu demonstrează, de asemenea, că profilarea metabolică este utilă în studierea mecanismelor terapeutice ale medicamentelor pe bază de plante.

fundal

Prin modularea reacțiilor biochimice, a mecanismelor de control și a activităților enzimatice, multe medicamente sau substanțe chimice provoacă fluctuația metaboliților prezenți în celulele individuale, țesuturile sau fluidele corporale [1]. Profilarea metabolică, adică sondarea metaboliților cu greutate moleculară mică (MW < 1000="" da)="" prin="" intermediul="" unui="" instrument="" analitic="" avansat="" cuplat="" cu="" statistici="" multivariate,="" poate="" arăta="" răspunsuri="" sistemice="" ale="" sistemelor="" vii="" la="" xenobiotice.="" de="" asemenea,="" este="" fezabilă="" din="" punct="" de="" vedere="" tehnic="" să="" catalogăm="" toate="" profilurile="" metabolice="" multifactoriale="" ereditare="" și="" influențate="" de="" mediu="" ale="" unui="" organism,="" inclusiv="" consecințele="" fiziopatologice="" ale="" tulburărilor="" sau="" dezechilibrelor="" induse="" de="" toxine="" și/sau="" boli="" în="" rețeaua="" de="" reglare="" metabolică="" la="" nivel="" sistemic.="" până="" în="" prezent,="" profilul="" metabolic="" a="" fost="" stabilit="" în="" screening,="" diagnostic,="" prognosticul="" bolilor="" [2–4]="" și="" evaluarea="" siguranței="" anumitor="" medicamente="" și="" substanțe="" chimice="">

Rezonanța magnetică nucleară (RMN) [12] și spectrometria de masă (MS) [13], aplicate singure sau în combinație, au fost utilizate în profilarea și caracterizarea consecințelor metabolice ale toxinelor și/sau tulburărilor induse de boală. RMN, care nu necesită o preprocesare obositoare a probei, este o metodă rapidă și simplă pentru a obține informații intrinseci din probe biologice complexe și intacte. Pe de altă parte, aplicarea largă a MS cu cratime în profilarea metabolică se datorează sensibilității și disponibilității sale ridicate [14, 15]. În special, profilarea metabolică bazată pe GC-MS a fost utilizată în descoperirea mecanismelor de medicamente și erbicide in vivo, biomarkeri ai bolilor [16] și efectele modificării expresiei genelor asupra metabolismului și monitorizarea performanței organismelor în aplicații biotehnologice [17-20] .

Herba Cistanches(Roucongrong), o plantă tonică chineză comună care crește în deșert, prezintă activități marcate pentru îmbunătățirea memoriei [21] și/sau potenței sexuale [22], eliminarea radicalilor liberi, anti-îmbătrânire [23–26] și neuroprotecție [27] , 28]. De secole,Herba Cistanchesa fost utilizat eficient în tratarea Shenxu Zheng ('sindromul de deficiență renală') [29]. RecentHerba Cistanchessa demonstrat că a ameliorat tulburările renale induse de hidrocortizon [30]; cu toate acestea, consecințele sale metabolice nu sunt clare. Studiul nostru anterior [31] a constatat că profilurile metabolice ale șobolanilor expuși la hidrocortizon la doze mari (adică un model animal pentru "sindromul de deficiență renală') [32], a arătat un model biochimic unic de metaboliți endogeni în urină. Aceste rezultate ne-au inspirat să studiem mecanismele modificărilor biochimice consecvente în urma modificării hidrocortizonului, folosind profilul metabolic bazat pe GC-MS pentru a investiga dacă Herba Cistanches ar putea inversa sau contracara efectele metabolice aberante ale hidrocortizonului.

Cistanche poate îmbunătăți funcția rinichilor

Metode

Materiale și instrumente

Herba Cistanchesa fost achiziționat de la Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (China) și identificat ca Cistanche deserticola YC Ma de către Dr. Mengyue Wang (Laboratorul de Farmacognostică, Școala de Farmacie, Universitatea Shanghai Jiao Tong) conform unui protocol standard [33]. Soluția injectabilă de hidrocortizon (0,5 la sută) a fost achiziționată de la Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (China). Reactivii de derivatizare au fost N-metil-N-trimetilsilil trifluoroacetamidă (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, SUA) și trimetiliodosilan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, SUA) amestecate într-un raport de 1000:1. Toți reactivii utilizați în experiment au fost de calitate analitică. Apa ultra-pură a fost preparată cu un sistem de purificare Millipore (18,2 MΩ, SUA). Cuștile metabolice au fost achiziționate de la Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (China).

Prepararea extractului de Herba Cistanches

Cinci sute de grame de material vegetal pulverizat grosier au fost refluxate cu 2 L de apă ultrapură timp de 2 ore. După filtrare, extractul a fost evaporat la aproximativ o zecime din volumul inițial pe un evaporator rotativ Buchi și a fost diluat la 250 ml într-un balon cotat cu apă ultrapură. Concentrația finală a țițeiuluiHerba Cistanchesextractul a fost de 2 g/ml.

Dozare și prelevare de probe

Manipularea tuturor animalelor din acest studiu a fost conformă cu ghidurile naționale și a fost efectuată la Centrul pentru Animale de Laborator, Universitatea de Medicină Tradițională Chineză din Shanghai, Shanghai, China. Un total de 19 șobolani Wistar masculi în vârstă de nouă săptămâni au fost achiziționați de la Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (China). Toate animalele au fost ținute într-un sistem de barieră cu temperatură reglată (20–22 grade ) și umiditate (60 ± 10 la sută ) și într-un ciclu de întuneric/lumină de 12 ore cu luminile aprinse la 8:00 dimineața. Șobolanii au primit hrană și apă ad libitum. După două săptămâni de aclimatizare, animalele au fost transferate în cuști metabolice individuale și împărțite aleatoriu în trei grupuri: (1) grup de tratament (n=7) în care hidrocortizon (5 la sută) a fost injectat ip la 1,5 mg/100 g. de greutate corporală urmată de administrare orală deHerba Cistanchesextrage timp de 10 zile; (2) grup model (n=7) în care hidrocortizon (5 la sută) a fost injectat ip la 1,5 mg/100 g o dată pe zi timp de 10 zile; și (3) grupul de control (n=5) în care vehiculul a fost injectat ip la aproximativ 0,6 ml timp de 10 zile [31].Herba Cistanchesa fost administrat grupului de tratament la o doză de 20 g/kg, conform recomandării lui Shen et al. [30]. Au fost colectate probe de urină de douăzeci și patru de ore la intervale de timp specifice: înainte de doză (-24 – 0 h), ziua 1 (0 – 24 h), ziua 3, ziua 7 și ziua 10. Toată urina probele au fost centrifugate (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, China) timp de 10 minute pentru a îndepărta resturile suspendate și stocate imediat la -80 grade pentru analiza GC-MS ulterioară.

Pregătirea probei și GC-MS

GC-MS a fost efectuat conform studiului nostru anterior cu modificări minore [31]. Pe scurt, fiecare alicotă de 0,5 μL de analit derivat de trimetilsilil (TMS) a fost injectată într-o coloană capilară cu silice topită (17 m × 220 μm diametru interior, 0,11 μm grosimea peliculei; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, SUA). GC-MS a fost efectuată pe o cromatografie de gaze PerkinElmer cu cratimă și pe un spectrometru de masă XL cu sistem TurboMass-Auto (PerkinElmer Inc, SUA).

Procesarea datelor și analiza multivariată

Datele GC-MS au fost convertite în format NetCDF prin DataBridge (PerkinElmer Inc, SUA). Scripturile personalizate au fost executate în MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, SUA) pentru a efectua corecția liniei de bază, deconvoluția și alinierea vârfurilor, excluderea standardului intern și normalizarea la suma totală a cromatogramei. Matricea 3-dimensională rezultată care cuprinde indicele de vârf arbitrar (timpul de retenție împerecheat-m/z), eșantioanele (observații) și zonele de vârf normalizate (variabile) au fost importate în software-ul SIMCA-P 11.0 pachet (Umetrics, Suedia) pentru analiza multivariată.

Centrarea medie a fost efectuată pe coloană pentru a elimina decalajele. Toți metaboliții măsurați au fost tratați la un nivel egal cu scalare automată (scalată la varianța unității) înainte de analiza multivariată. Analiza componentelor principale (PCA) a fost efectuată utilizând software-ul SIMCA-P 11.0 pentru a dezvălui gruparea generală, gruparea și tendințele dintre subiecți fără cunoștințe prealabile. Prima componentă principală (PC1) reprezintă cea mai mare variație a datelor. A doua componentă principală (PC2) este ortogonală cu PC1 și reprezintă cantitatea maximă de varianță neexplicată de PC1. Componentele principale rămase au fost construite în același mod. Între timp, traiectorii medii ale scorurilor PCA au fost utilizate pentru a oferi o indicație dinamică pentru debutul, progresia și/sau recuperarea sindromului în timp. Coeficienții de corelație din cele mai mici pătrate parțiale – analiza discriminantă (PLS-DA) au fost utilizați pentru a clasifica importanța fiecărei variabile pentru a capta în continuare metaboliții exprimați diferențial responsabili pentru separarea între grupuri. PLS-DA este derivat din metoda celor mai mici pătrate parțiale (PLS), care este o metodă de regresie multiplă generalizată care se ocupă cu predictori coliniari multipli și variabile de răspuns [34]. PLS-DA a fost realizat folosind software-ul SIMCA-P 11.0 [35]. A fost efectuată o 7-validare încrucișată tipică. O șapte din eșantioane au fost excluse din model în fiecare rundă pentru a valida modelul. Această procedură a fost repetată într-o manieră iterativă pentru validare încrucișată până când fiecare probă a fost exclusă o dată.

Herba Cistanches poate fi utilizat pentru a trata sindromul de deficiență renală

Analiza univariată

Metaboliții exprimați diferențial identificați din analiza multivariată au fost, de asemenea, verificați în software-ul MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, SUA) prin testul neparametric Kruskal-Wallis cu un nivel de semnificație la P < 0.05 .

Rezultate si discutii

Interpretarea spectrelor GC-MS

Cromatogramele tipice ale curentului ionic total (TIC) GC-MS ale urinei de șobolan în ziua 10 din grupul de tratament, grupul model și grupul de control sunt prezentate în Figura 1. Utilizând protocolul nostru optimizat de analiză GC-MS în asociere cu un vârf bazat pe software procedura de deconvoluție, un total de 117 metaboliți individuali au fost detectați în mod constant în cel puțin 90 la sută din probele de urină. Identificarea compusă a vârfurilor de interes a fost efectuată prin compararea fragmentului spectral de masă cu bibliotecile de referință NIST (Institutul Național de Standarde și Tehnologie), bibliotecile Wiley și standardele de referință. Am putut verifica 23 din cei 117 metaboliți (20 la sută), dintre care majoritatea au fost aminoacizi, poliamine, acizi grași, purine și hormoni suprarenali care sunt implicați în principal în metabolismul energetic, metabolismul lipidelor și metabolismul aminoacizilor.

Figura 1 Cromatograme tipice GC-MS cu curent de ioni total (TIC) ale urinei în ziua 10 din grupul de tratament (A), grupul model (B) și grupul de control (C).

Modificări dependente de timp ale probelor de urină

Traiectorii medii ale scorurilor PCA derivate din grupul model și grupul de tratament au fost ilustrate în Figura 2. Schimbarea tranzitorie în graficul traiectoriei a relevat progresul dinamic al "sindromul de deficiență renală' indus de hidrocortizon singur sau în combinaţie cuHerba Cistanchestratament. În grupul model, modelele metabolice din ziua 1 și ziua 3 au fost diferite de cele din ziua 7 și ziua 10, sugerând că rețeaua de reglare metabolică din ziua 1 și ziua 3 ar fi putut suferi o perioadă tranzitorie cu fluctuații mari și că rețeaua perturbată ar fi putut fi restabilit în ziua 7 și ziua 10, ceea ce a condus în cele din urmă la un model stabil aproape de starea pre-doză. În mod analog, faptul că modelul metabolic din ziua 1 și ziua 3 a deviat în mod evident de cel al pre-dozei în grupul de tratament a indicat dominantul "sindromul de deficiență renală' stat. În această perioadă, efectele hidrocortizonului au fost probabil dominante față de cele aleHerba Cistanchesextrage. Aceste constatări au fost în concordanță cu observația generală conform căreia șobolanii din ambele grupuri au prezentat mai puțină activitate în ziua 1 și în ziua 3. Interesant, modelele metabolice din ziua 7 și ziua 10 s-au apropiat treptat și semnificativ de starea pre-doză, sugerând căHerba Cistanchesa avut unele efecte contracarante sau terapeutice asupra șobolanilor expuși la hidrocortizon. Aceste rezultate susțin constatările clinice careHerba Cistancheseste eficient în tratarea "sindromul de deficiență renală'. În general, ambele traiectorii oferă o imagine vizuală, generală și dinamică a debutului, progresiei și recuperării "sindromul de deficiență renală'.

Figura 2 Traiectoria medie a scorurilor PC1 vs PC2 pentru probele de urină din grupul model (-●-) și grupul de tratament (--●{--). Fiecare punct indică un scor mediu la diferite momente de timp, adică înainte de doză, zilele 1, 3, 7 și 10. Bara de eroare reprezintă abaterea standard pentru fiecare punct de timp obținut de prima componentă principală.

Analiza metabolică comparativă a probelor de urină

Pentru a înțelege mai bine efectele metabolice ale hidrocortizonului, am comparat profilurile metabolice obținute de la grupurile de control, model și tratament. Gruparea generală a celor trei grupuri poate fi observată cu ușurință la diferite momente de timp, adică înainte de doză, ziua 3 și ziua 10 (Figura 3). Deși nu există nicio tendință de separare în profilurile de urină pre-doză, profilurile metabolice au deviat de cele ale grupului de control în ziua 3 după expunerea la hidrocortizon. Perturbarea metabolică de către hidrocortizon a apărut atât în ​​grupul model, cât și în grupul de tratament. Cu toate acestea, după un tratament consecutiv de 7-zi cuHerba Cistanches, profilurile metabolice ale grupului de tratament au devenit din nou comparabile cu cele ale grupului de control, indicând faptul căHerba Cistanchesa restabilit eficient metabolismul perturbat.

Figura 3 Comparația profilurilor metabolice din grupul de control (diamant negru), grupul model (diamantul roșu) și grupul de tratament (diamantul albastru) în diferite momente: înainte de doză (A), ziua 3 (B) și ziua 10 (C). Fiecare punct din graficul scorurilor PCA reprezintă datele obținute de la un șobolan.

Identificarea diferențială a profilurilor metabolice

Un model PLS-DA validat încrucișat a fost utilizat pentru a identifica metaboliții cheie în diferite profiluri metabolice pentru o diferențiere mai ușoară între șobolanii din grupul de control și șobolanii din grupul model (adică indus de hidrocortizon) cu sau fără.Herba Cistanchestratament în ziua 3 (Tabelul 1). Au fost determinate modificări ale concentrației relative a fiecărui metabolit cheie între grupuri și s-a produs vizualizarea corespunzătoare a modificărilor dintre grupuri la pre-doză, ziua 3 și ziua 10 (Figura 4). După cum se arată în Figura 4 și Tabelul 1, în timp ce majoritatea metaboliților endogeni au crescut sau au scăzut semnificativ în grupul model, cei din grupul de tratament au suferit o perioadă tranzitorie așa cum sa observat în ziua 1 și ziua 3 și s-au apropiat treptat de nivelul de control (normal). . De exemplu, în comparație cu variația ușoară (1,1-1,5 ori) a metaboliților din grupul de tratament în ziua 10, nivelurile mult crescute (1,7-3,0 ori) de tirozină urinară, tiramină, dopamină și noradrenalina au fost observate în grup model pe parcursul experimentului. Studiul nostru anterior a arătat că metabolismul îmbunătățit al catecolaminelor indus de glucocorticoizi a dus la un consum excesiv de funcții imunitare, conducând astfel la „sindromul de deficiență renală' [31]. Herba Cistanches, o planta tonica care imbunatateste sistemul imunitar [36], poate contracara unele efecte ale hidrocortizonului.Herba Cistanchespoate fi, de asemenea, capabil să restabilească o rețea normală de reglare metabolică. Sunt necesare experimente suplimentare cu diferite abordări, cum ar fi biologia moleculară, biologia celulară și chimia plantelor, pentru a delimita acțiunileHerba Cistanches(și constituenții săi) în "sindromul de deficiență renală'.

Tabelul 1 O listă de metaboliți incluși în profilul metabolic al prezentului studiu

Din: Profilarea metabolică relevă efecte terapeutice aleHerba Cistanchesîntr-un model animal de hidrocortizon indus"sindromul de deficiență renală'

Notă: Coeficienții de corelație (coeficii de cor) ai tuturor compușilor au fost calculați dintr-un model PLS-DA validat încrucișat (Q2Ycum=0.899, un model satisfăcător folosind două componente) în ziua 3 între grupul de control și grupul model cu sau fărăHerba Cistanchestratament. În plus, modificările pliurilor au fost testate prin testul neparametric Kruskal-Wallis. Kw (P) reprezintă valorile P ale testului. H=grup de control, M=grup model, D=grup de tratament. De exemplu, H/M/0 reprezintă modificările relative ale orificiilor (de la model la control) la starea pre-doză.

Figura 4 Modificări de ori ale metaboliților cheie. Culoarea roșie denotă concentrații relativ crescute (modificări de ori > 1,5), în timp ce culoarea verde denotă concentrații relativ reduse (modificări de ori < -1,5).="" modificările="" de="" pliere="" care="" variază="" de="" la="" -1,5="" la="" 1,5="" sunt="" considerate="" a="" fi="" variații="" fiziologice.="" o="" schimbare="" de="" ori="" (m/h,="" d/h)="" este="" raportul="" de="" concentrație="" al="" grupului="" model="" sau="" al="" grupului="" de="" tratament="" față="" de="" grupul="" de="">

Concluzie

Prezentul studiu de profilare metabolică folosind GC-MS a arătat căHerba Cistanchesa provocat o recuperare sistemică de la perturbarea metabolică indusă de hidrocortizon la șobolani, un model animal pentru "sindromul de deficiență renală'. Acest studiu demonstrează, de asemenea, că profilarea metabolică este o metodă utilă pentru a studia efectele terapeutice ale medicamentelor pe bază de plante.

Abrevieri

MS: spectrometrie de masă

GC-MS: cromatografie gazoasă-spectrometrie de masă

RMN: rezonanță magnetică nucleară

PCA: analiza componentelor principale

PLS-DA: cele mai mici pătrate parțiale – analiză discriminantă

Referințe

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: „Metabonomics”: Înțelegerea răspunsurilor metabolice ale sistemelor vii la stimuli patofiziologici prin analiza statistică multivariată a datelor spectroscopice RMN biologice. Xenobiotica. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Diagnosticul rapid și neinvaziv al prezenței și severității bolii coronariene folosind 1H -Metabonomica bazată pe RMN. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10,1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Aplicarea spectroscopiei de rezonanță magnetică nucleară combinată cu analiza componentelor principale în detectarea erorilor înnăscute ale metabolismului folosind pete de sânge: O abordare metabonomică. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Vizualizarea modificărilor metabolice în țesutul cancerului de sân folosind spectroscopie 1H-RMN și hărți de auto-organizare. RMN Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Utilizarea metabonomicelor pentru a identifica metabolismul afectat al acizilor grași ca mecanism al toxicității induse de medicamente. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: RMN și studii de recunoaștere a modelelor asupra efectelor metabolice legate de timp ale -naftilizotiocianatului asupra ficatului, urinei și plasmei la șobolan: un metabonomic integrativ abordare. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: O investigație metabonomică integrată a toxicității acetaminofenului la șoarece folosind spectroscopie RMN. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Expunerea la materiale derivate din tutun induce supraproducția de proteinaze secretate în mastocite. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Deconvoluția metabonomică a toxicității încorporate: aplicarea la hepato- și nefrotoxicitatea tioacetamidei. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomics in toxicology: O review. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toxic/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: High-throughput toxicology: Practical considerations. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomics: O platformă pentru studierea toxicității medicamentului și a funcției genelor. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Aplicarea metabolomicei la discriminarea genotipului plantelor folosind statistici și învățarea automată. Bioinformatica. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: Cromatografia lichidă de înaltă rezoluție „ultra-performanță” cuplată la spectrometria de masă oa-TOF ca instrument pentru profilarea căilor metabolice diferențiale în studii genomice funcționale. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: O strategie pentru identificarea diferențelor în serii mari de probe metabolomice analizate prin GC/MS. Anal Chim. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Diagnosticul chimic al sindromului Lesch-Nyhan folosind cromatografie gazoasă-detecție prin spectrometrie de masă. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Profiling metabolit for plant functional genomics. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Analizele combinate de proteom și metaboliți de profilare dezvăluie perspective surprinzătoare asupra metabolismului sulfului de drojdie. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: biblioteci GC-MS pentru identificarea rapidă a metaboliților în probe biologice complexe. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identificarea odorantelor corporale reglate prin complexul major de histocompatibilitate prin analiza statistică a unui experiment comparativ de cromatografie în gaz/spectrometrie de masă. Anal Chim. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Îmbunătățirea amintirii șoarecilor de glicozide feniletanoide ale Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Efectul extractului etanolic de Cistanche deserticola asupra conținutului de neurotransmițători monoamine în creierul șobolanului. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Peroxidarea antilipidă și acțiunea antiradiație a glicozidelor înherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Phytochemical investigation and antioxidant activity of Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Trei noi glicozide feniletanoide din Caryopteris incana și activitatea lor antioxidantă. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, un nou glicozid feniletanoid cu activități antimicrobiene și de eliminare a radicalilor liberi din Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Efectul protector al tubulozidei B asupra apoptozei induse de TNF alfa în celulele neuronale. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Efectele neuroprotective ale glicozidelor feniletanoide din salsa Cistanches împotriva 1-metil-4-fenil{-1, 2, 3, 6- tetrahidropiridina (MPTP) a indus toxicitate dopaminergică la șoarecii C57. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Întărirea rinichilor și susținerea yangului acțiunii cistanche deserticola YC Ma înainte și după preparare. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Efectul Cistanche deserticola asupra șobolanilor Shen-yang normali și cu deficiență. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Studiu metabonomic asupra profilurilor biochimice ale unui model animal indus de hidrocortizon. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Modelele animale și medicamentele pentru deficiența de Yin și deficiența de Yang. Metodologia experimentală a cercetării farmacologice în medicina tradițională chineză. Editat de: Chen Q. 1993, Beijing: Editura People's Health, 982-984.

33. Comitetul Național de Farmacopee: Farmacopeea Republicii Populare Chineze. 2005, Beijing: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Analiza datelor cu mai multe și megavariate Partea I: Principii și aplicații de bază, a doua ediție revizuită și extinsă. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. SIMCA-P și SIMCA-P plus 11 Ghid de utilizare. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_userguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Studiu asupra efectelor farmacologice ale Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

De la: Medicină chineză volumul 3, numărul articolului: 3 (2008)