fundal.Acutleziuni renale(AKI) este o complicație frecventă a cirozei decompensate cu mortalitate crescută. Biomarkerii tradiționali, cum ar fi creatinina serică, nu sunt sensibili pentru detectarea leziunilor fără modificări funcționale. Emitem ipoteza că exozomii urinari pot transporta markeri care diferențiază tipul deleziuni renalela pacientii cirotici.

Metode.Acesta este un studiu prospectiv, unicentric și observațional al pacienților adulți cu ciroză. Grupurile de pacienți au inclus controale normale sănătoase, ciroză compensată cu normalăfunctia rinichilor, ciroza decompensata cu normalfunctia rinichilor, și ciroza decompensată cu AKI. Datele au fost extrase din fișa electronică de sănătate, inclusiv etiologia bolii hepatice, scorul MELD, istoricul decompensării, scorul Child-Turcotte-Pugh, istoricul AKI și expunerile la medicamente. Probele de urină au fost recoltate în momentul acordării consimțământului. Conținutul de proteine ​​​​exozomului din urină a fost analizat, iar datele proteomice au fost validate prin imunoblot. Analiza statistică a inclus analiză parțială cu cele mai mici pătrate-discriminante cuplată cu importanță variabilă în identificarea proiecției.

Rezultate.Au fost înrolați 18 subiecți cu ciroză și șase subiecți de control sănătoși au fost extrași din depozitul nostru biologic. Au fost izolați exozomi de urină și au fost identificate 1572 de proteine. Maltaza-glucoamilaza a fost cea mai importantă proteină discriminantă confirmată de western blot.

Concluzii. Pacienții cu ciroză și AKI au o reglare în sus a dizaharidazei marginii periei renale, MGAM, în exozomi urinari, ceea ce poate diferenția tipul deleziuni renaleîn ciroză; cu toate acestea, semnificația clinică a acestui lucru necesită o validare suplimentară.

Pentru mai multe informații, vă rugăm contactați:joanna.jia@wecistanche.com

Leziuni renale acutefi tratat decistanche

1. Introducere

Acutleziuni renale(AKI) apare la aproximativ 20% dintre pacienții internați cu ciroză [1, 2]. AKI la pacienții cirotici internați este frecvent progresivă, severă și un predictor negativ independent al mortalității [3]. * Cea mai frecventă cauză a AKI în ciroză este hemodinamică, reprezentând 70 la sută din cazuri. Necroza tubulară acută (ATN) reprezintă 30% din cazuri, iar cauzele postrenale sunt rare, reprezentând mai puțin de 1% din cazuri. Sindromul hepatorenal (HRS) este hemodinamic fără un identificabilleziuni renalesau boală și apare la aproximativ 20% dintre pacienții cu ciroză [4, 5].

Creatinina serică (Scr) este cel mai utilizat biomarker pentru evaluarefunctia rinichilorsi identificaleziuni renale. Cu toate acestea, SCR este suboptimal la pacienții cu ciroză pentru volumul de cercetare și practică de îngrijire critică Hindawi 2019, numeroase motive incluzând scăderea producției hepatice, pierderea musculară cu rezerve diminuate, volumul crescut de distribuție și malnutriția proteino-caloric. Valorile medii ale Scr sunt mai mici la pacienții cu ciroză comparativ cu populația generală, ceea ce duce la diagnosticarea întârziată a AKI pe baza definiției actuale a AKI [6]. În plus, Scr este un biomarker alfunctia rinichilorși nu este un marker sensibil de vătămare. Au apărut noi biomarkeri ai leziunii renale pentru a îmbunătăți detectarea AKI și pentru a ajuta la diferențierea etiologiei AKI.Leziuni renalebiomarkeri inclusivleziuni renalemoleculă-1 (KIM{-1), lipocalină asociată gelatinazei neutrofile (NGAL), interleukină-18, proteină de legare a acizilor grași hepatici (L-FABP), proteină de legare a factorului de creștere asemănător insulinei -7 (IGFBP-7) ​​și inhibitorul tisular al metaloproteinazei-2 (TIMP{-2) pot fi crescute înainte de o creștere a detecției de îmbunătățire a Scr aafectarea rinichilorfără modificare funcțională [7]. Studiile au demonstrat că acești biomarkeri pot diferenția etiologia AKI [8, 9]. Biomarkerii îmbunătățiți pentru detectarea și diferențierea AKI reprezintă nevoi clinice importante nesatisfăcute la pacienții cu ciroză.

Exozomii sunt nanovesicule care sunt eliberate din celulele vii ca mecanism de comunicare intercelulară [10]. * Conținutul de proteine ​​al exozomilor s-a dovedit a fi modificat remarcabil în condiții patologice sau de stres [11-13]. Înrinichi,exozomii sunt eliberați în urină de la toate tipurile de celule [14, 15], iar exozomii urinari pot fi considerați potențial semnătura biochimică a subiectului. Deoarece exozomii urinari nu sunt testați în mod obișnuit, aceștia pot furniza informații suplimentare nerecunoscute despre biomarkerii proteici ai AKI la pacienții cu ciroză.

Scopul acestui studiu a fost de a evalua proteomica exozomului urinar la pacienții cu ciroză și AKI comparativ cu subiecții sănătoși. Am emis ipoteza că conținutul de proteine ​​ale exozomului urinar diferă la pacienții cu ciroză compensată sau decompensată care se confruntă cu AKI în comparație cu subiecții normali sănătoși de control. În plus, am postulat că conținutul diferențial de proteine ​​​​exosomale urinare ar oferi o perspectivă asupra mecanismelorleziuni renaleîn ciroză.

2. Materiale și metode

Acesta este un studiu prospectiv, unicentric și observațional al pacienților adulți cu ciroză. Toți pacienții pentru studiu au fost recrutați din sistemul de sănătate UC San Diego între 1 iulie 2013 și 1 iunie 2014 și au furnizat consimțământul informat. Pacienții erau eligibili pentru includere dacă aveau un diagnostic de ciroză și erau capabili să furnizeze o probă de urină. Ciroza a fost determinată prin biopsie hepatică, imagistică transversală sau clinic (prin identificarea unui eveniment de decompensare determinat de un hepatolog). Datele au fost extrase din dosarele electronice de sănătate, inclusiv date demografice, antropometrie, semne vitale, probleme medicale comorbide, etiologia cirozei, complicații ale cirozei (ascita, varice, encefalopatie hepatică și carcinom hepatocelular), antecedente de AKI sauboală cronică de rinichiși expunerile la medicamente în termen de 30 de zile de la înscriere. Doar pacienții cu date clinice complete și teste de laborator în decurs de 30 de zile de la înscriere au fost eligibili pentru includerea în acest studiu. Pacienții au fost împărțiți în grupuri, după cum urmează:

(1) Grupa 0: controale normale sănătoase

(2) Grupa 1: ciroză compensată (Child-Turcotte- Pugh clasa A, MELD 10) fără antecedente de AKI și normalfunctia rinichilor

(3) Grupa 2: ciroză decompensată (Child-Turcotte- Pugh clasa B sau C) fără antecedente de AKI și normalfunctia rinichilor

(4) Grupa 3: ciroză decompensată (Child-Turcotte- Pugh clasa B sau C) și AKI

Normalfunctia rinichilora fost definită ca o RFG estimată > 60 ml/min/1,73 m2 (formula MDRD), fără albuminurie și fără antecedente de AKI. AKI a fost definită conform criteriilor AKIN: creșterea Scr de 0,3 mg/dl în 48 de ore sau creșterea cu 50% a Scr față de valoarea inițială [16]. Pacienții cu AKI au fost recrutați în timpul internărilor și consultațiilor din serviciul de hepatologie de spitalizare dacă aveau probe de sânge și urină obținute în timpul episodului de AKI. Al patrulea grup de controale sănătoase a fost extras dintr-un biodepozit normal sănătos la Centrul UCSD O'Brien pentru Cercetarea AKI de la UC San Diego School of Medicine. *Această lucrare a fost aprobată de Institutional Review Board al Universității din California, San Diego.

2.1. Prelevarea și prelucrarea urinei pentru izolarea exozomilor.

Urina a fost centrifugată la 3000 xg timp de 30 de minute. pH-ul supernatantului a fost ajustat la 7, alicotat și congelat la -80 grade C. Exozomii au fost preparați folosind precipitarea indusă de polietilen glicol (PEG-) [17]. *e Probele de urină amestecate cu PEG au fost păstrate la temperatura camerei timp de 2 ore și centrifugate la 10.000 ×g timp de 30 de minute. * peletul a fost resuspendat în Tris 10 mM cu sare EDTA-Na 1 mM. *Acest pas a fost repetat de două ori pentru a elimina impuritățile. SDS PAGE unidimensională a proteinelor exosomului a fost efectuată înainte de tripsinizarea în gel pentru a preveni confuzia [18].

2.2. Analiza proteomică.

Gelul a fost tăiat la 1 mm × 1 mm și colorat de 3 ori folosind 100 µL de bicarbonat de amoniu 100 mM timp de 15 minute, urmat de 100 µL de acetonitril (ACN) timp de 15 minute [19]. ]. *Supernatantul a fost liofilizat, iar peletul rezultat a fost redus cu 200 uL de bicarbonat de amoniu 100 mM -10 mM DTT și incubat la 56 de grade timp de 30 de minute. După îndepărtarea lichidului, bucăți de gel au fost adăugate la 200 uL de bicarbonat de amoniu 100 mM-55 mM iodoacetamidă. *a fost incubată la temperatura camerei timp de 20 de minute în întuneric. *Supernatantul a fost îndepărtat și spălat cu bicarbonat de amoniu 100 mM timp de 15 min. *ro, s-au adăugat 100 uL de ACN pentru a deshidrata bucățile de gel, iar soluția a fost liofilizată. S-a adăugat apoi tripsină rece cu gheață (0,01 pg/pl) în soluție de bicarbonat de amoniu 50 mM pentru a acoperi bucățile de gel pentru procesul de digestie și a fost pusă pe gheață timp de 30 de minute. Odată ce rehidratarea a fost completă, s-a adăugat bicarbonat de amoniu 50 mM proaspăt pentru a înlocui excesul. tripsină și lăsată peste noapte la 37 de grade. Extracția peptidelor a fost făcută de două ori prin adăugarea a 50 pl de acid formic 0,2 procente și 5 procente ACN și agitate timp de 30 de minute la temperatura camerei. După îndepărtarea supernatantului, s-au adăugat la probă 50 pl de acid formic 50% ACN-0,2%, agitat din nou timp de 30 de minute la temperatura camerei. *Supernatantul a fost îndepărtat și combinat cu supernatantul anterior de la prima extracție. Probele au fost analizate folosind Eksigent nano-LC-Ultra® 2D cu sistemul cHiPLC-nano flex (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, SUA) într-un mod trap-elute în combinație cu spectroscopie de masă în tandem folosind spectrometrul de masă QExactive (Thermo Fisher). Scientific, San Jose´, CA, SUA) cu ionizare electrospray [17].

2.3. Management de date.

În analiză a fost utilizat motorul de căutare SEQUEST (software Thermo Scientific Proteome Discoverer, versiunea 1.4). * Baza de date de proteine ​​pentru secvențele de peptide triptice pentru Homo sapiens de la Centrul Național pentru Informații Biotehnologice (NCBI) a fost utilizată pentru a compara spectrele noastre experimentale MS/MS. Pentru a identifica secvențele de peptide și proteinele înrudite, am folosit criterii publicate anterior [17]. Pentru a evalua semnificația statistică, s-au folosit căutări separate țintă și momeală și calculul ratelor de descoperire falsă (FDR) clasice bazate pe scor. În cele din urmă, am filtrat datele de ieșire SEQUEST pentru a atribui un scor final proteinelor. Valorile minime ale scorului de corelație (Xcorr) de 1,5, 2.0, 2,25 și 2,5 au fost alese pentru ionii încărcați cu un singur, dublu, triplu și, respectiv, cvadrupol. Parametrii publicați anterior au fost utilizați pentru a garanta o stringență ridicată [20], iar raportul de peptide fals pozitive a fost mai mic de 3 la sută.

2.4. Analize statistice.

Factorul de abundență spectrală normalizată (NSAF) a fost utilizat pentru a calcula abundența relativă a polipeptidelor [21]. Transformarea log și scalarea numărului de peptide au fost efectuate înainte de analiza statistică. Portalul web MetaboAnalyst 2.0 a fost folosit pentru a efectua testul t Student, analiza discriminantă parțială a celor mai mici pătrate (PLS-DA) și importanța variabilei în proiecție (VIP) cu un a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *="" raportul="" dintre="" proteinele="" individuale="" și="" concentrația="" totală="" a="" fost="" evaluat="" folosind="" testul="" t="" student="" pereche="" pentru="" fiecare="" grup.="" pls-da="" și="" vip="" au="" fost="" utilizate="" pentru="" a="" identifica="" proteinele="" discriminatorii="" [23].="" am="" selectat="" proteine="" ​​cu="" o="" rată="" de="" descoperire="" falsă="" (fdr)="" mai="" mică="" sau="" egală="" cu="" 10="" la="" sută="" pentru="" a="" valida="" utilizând="" western="">

2.5. Western Imunoblotting și cuantificare.

Anticorpul împotriva MGAM a fost achiziționat de la Proteintech Group, Inc., (Chicago, IL, SUA) și a fost utilizat pentru a elimina 100 ug de proteină din exozomii urinari ai fiecărui subiect. După separare, proteinele au fost transferate pe hârtie de nitroceluloză, blocate, incubate cu anticorp primar peste noapte înainte de spălare cu soluție salină tamponată cu Tris, incubate timp de 1 oră cu conjugat HRP-anticorp secundar și vizualizate prin dezvoltare așa cum este descris în publicațiile anterioare din laboratorul nostru. 24, 25]. Software-ul ImageJ (NIH) a fost utilizat pentru a cuantifica benzile de imunoblot de vest [24] și a fost reprezentat grafic (GraphPad Prism, San Diego, CA, SUA).

3. Rezultate

3.1. Caracteristicile clinice ale cirozei și subiecților de control sănătos.

Sase pacienti din fiecare grup cu date clinice complete au fost analizati si comparati cu sase martori sanatosi. Datele demografice și etiologia bolii hepatice sunt rezumate în Tabelul 1. După cum sa anticipat conform designului studiului, scorurile Child Turcotte-Pugh și MELD au variat semnificativ între grupurile de pacienți.

3.2. Analize proteomice ale exozomilor urinari de la pacienții cirotici și controale sănătoase.

În total, în toate cele 4 grupuri, au fost identificate 1572 de proteine ​​unice. Au fost 360 proteine ​​care erau comune tuturor grupurilor. Am găsit 83 de proteine ​​exosomale unice pentru grupul 0 (martori), 250 pentru grupul 1, 84 pentru grupul 2 și 212 pentru grupul 3 (Figura 1). Am efectuat în continuare PLS-DA multivariat pe proteine, care a arătat o separare clară între grupul de control sănătos și diferite subgrupuri de subiecți cirotici, așa cum se arată în Figura 2. Subiecții cirotici compensați și decompensați fărăleziuni renale(grupurile 1 și 2) au arătat o suprapunere considerabilă, în timp ce subiecții cirotici cu AKI (grupul 3) au arătat o separare clară de ceilalți subiecți cirotici și subiecții de control sănătoși. O ANOVA separată a proteinelor între cele patru grupuri a arătat că 126 de proteine ​​au fost modificate semnificativ (p < 0.05),="" dintre="" care="" 13="" au="" atins="" limita="" de="" rată="" de="" descoperire="" falsă="" (fdr)=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. Proteina Maltaza-Glucoamilază este crescută în exozomii de urină cirotică decompensată.

Datele proteomice au arătat o concentrație mai mare de MGAM în exozomii urinari ai pacienților cirotici decompensați, cu și fărăleziuni renale(grupele 2 și 3). Aceasta a fost proteina cea mai discriminatoare dintre toate cele patru grupuri cu un scor VIP de 4,35 (Figura 3). Western blotting de confirmare a acestor exozomi a demonstrat proteine ​​detectabile numai la pacienții cu cirozăleziuni renale(grupul 3) (Figura 4).

4. Discutie

Am efectuat o analiză proteomică a conținutului de exozomi urinari de la pacienți cu ciroză compensată, ciroză decompensată și ciroză decompensată cu AKI și i-am comparat cu martori sănătoși. Analiza proteomică a exozomilor urinari la pacienții cu ciroză a identificat câțiva biomarkeri potențial importanțileziuni renale, în special MGAM, o enzimă bifuncțională. Cele mai mari concentrații de MGAM le-am găsit în exozomii urinari ai pacienților cu ciroză și AKI. Mai mult decât atât, MGAM a fost crescut la pacienții cu ciroză, dar nu în măsura în care la cei cu AKI. MGAM a fost absent în grupul de control sănătos, evidențiind rolul său potențial ca biomarker al bolii critice.

Acest studiu are câteva alte constatări importante. În primul rând, după cunoștințele noastre, acesta este primul raport privind analiza descriptivă a conținutului de proteine ​​​​exozomului urinar la subiecții cirotici bine caracterizați. În al doilea rând, acesta este primul studiu care raportează creșterea dizaharidazei epiteliale tubulare înleziuni cirotice-renaleparadigmă. Datele proteomice ale exozomului din urină din cele 4 grupuri diferite au arătat că reglarea MGAM în grupul AKI cu ciroză este robustă și consecventă. Maltaza este principala dizaharidaza din membranele marginale ale periilor renale [26, 27], dar funcția precisă a acestei enzime nu este clar elucidată; cu toate acestea, a fost postulat un posibil rol pentru dizaharidazele aferente, zaharaza-izomaltaza și trehalaza în transportul zahărului [28]. La zece specii de mamifere, dizaharide înrudite cu MGAM au fost găsite în marginea periei renale [27]. Farquhar și colegii săi au demonstrat că maltaza este prezentă în microvilozitățile tubului contort proximal, funcționând probabil în reabsorbția și transportul glucozei; iar această capacitate de absorbție scade spre porțiunile mai distale ale nefronului [29]. S-a demonstrat că MGAM este prezent în exozomi și microparticule într-un model de șoarece de steatohepatită nealcoolică (NASH) [30], o cauză comună a cirozei. Deoarece pacienții cu ciroză au mai multe afecțiuni de bază care contribuie la scăderea Scr, detectarea AKI este problematică. În plus, etiologia leziunii este adesea necunoscută, iar diferențierea între sindromul hepatorenal și alte etiologii ale AKI este dificilă. Mai mult, fiziopatologia cirozei decompensate cu AKI este neclară deoarece poate reflecta modificări hemodinamice sau mediatori inflamatori în cazul insuficienței hepatice acute pe cronice [31]. Am argumentat că modificările structurale și funcționale pe care le produc ciroza și hipertensiunea portală le producfunctia rinichilorvariază ca severitate în funcție de severitatea cirozei. Aceste diferențe între boala hepatică compensată și decompensată culeziuni renalepoate fi înțeles prin studierea produselor din aval alerinichi, cum ar fi urina. Având în vedere încărcătura specifică stării celulelor nefronului a exozomului urinar, am emis ipoteza că analiza exozomului urinar conține informații cheie care sunt relevante pentru diferențierea AKI în ciroză. Acest raport este primul pas către testarea acestei ipoteze.

Designul acestui studiu a avut mai multe limitări. În primul rând, numărul de subiecți analizați per grup este mic. Dimensiunea mai mare a eșantionului poate să fi sporit și mai mult robustețea acestor date, iar proteinele suplimentare ar putea fi atins pragul unui FDR acceptabil de<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

În rezumat, am caracterizat diferențele de proteine ​​​​exozomale din urină la controalele sănătoase și subiecții cirotici compensați și decompensați cu și fără AKI prin metode proteomice. Lucrările din grupul Knepper arată că multe proteine ​​renale importante (de exemplu, acvaporine, policistine și podocină) sunt eliminate în exozomul urinar [32, 33]. Raportul nostru actual adaugă MGAM la acest grup de proteine ​​renale importante din punct de vedere funcțional identificate în exozomii din urină. Descoperirile noastre sugerează că MGAM poate diferenția leziunea tubulară proximală de alte tipuri de AKI la pacienții cu ciroză. Cu toate acestea, semnificația clinică a reglării MGAM la subiecții cu ciroză cu AKI trebuie stabilită în studiile viitoare.

Disponibilitatea datelor

Datele clinice și proteomice utilizate pentru a susține concluziile acestui studiu sunt restricționate de către consiliul de examinare instituțional UCSD pentru a proteja confidențialitatea pacientului.* Datele sunt disponibile de la Dr. Linda Awdishu (lawdishu@ucsd.edu) pentru cercetătorii care îndeplinesc cerințele criteriile de acces la datele confidențiale.

Conflicte de interes

Autorii declară că nu au conflicte de interese.

Mulțumiri

Cercetare susținută prin Grantul NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center DK0793337.

Autor

Linda Awdishu,^1,2 Shirley Tsunoda,¹ Michelle Pearlman,³ Chanthel Kokoy-Mondragon,²Majid Ghassemian,⁴Robert K. Naviaux,⁵Heather M. Patton,³Ravindra L. Mehta,²Bhavya Vijay,⁶și Satish P.Ramachandra Rao ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, SUA

2Laboratorul de biomarkeri, Centrul O'Brien pentruLeziuni renale acuteCercetare, Nefrologie-Hipertensiune arterială, UC San Diego, Departamentul de Medicină, San Diego, SUA

3UC San Diego, Departamentul de Medicină, Divizia de Gastroenterologie, San Diego, SUA

4UC San Diego, Departamentul de Chimie și Biochimie, Facilitatea de Spectrometrie Biomoleculară și Proteomică, San Diego, SUA

5UC San Diego, Departamentele de Medicină, Pediatrie și Patologie, San Diego, SUA

6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Bangalore, India

7UC San Diego, Departamentul de Medicină, Divizia de Boli Infecțioase, San Diego, SUA

Corespondența ar trebui adresată lui Satish P. Ramachandra Rao; Primit 30 octombrie 2018; Revizuit la 31 decembrie 2018; Acceptat 19 februarie 2019; Publicat 16 aprilie 2019 Editor academic: Antonio Artigas

Drepturi de autor © 2019 Linda Awdishu et al. Acesta este un articol cu ​​acces deschis distribuit sub,care permite utilizarea, distribuția și reproducerea fără restricții pe orice mediu, cu condiția ca lucrarea originală să fie citată în mod corespunzător.

Referințe

[1] F. Fabrizi și P. Messa, „Provocări în tratamentul insuficienței renale înainte de transplantul de ficat”,Clinici în Ficat Boala, vol. 21, nr. 2, p. 303–319, 2017.

[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye și N. Pannu, „Relevanța noilor definiții pentru incidența și prognosticul acutelorleziuni renalela pacienții spitalizați cu ciroză: un studiu de cohortă retrospectiv bazat pe populație",Plus unu, vol. 11, nr. 8, ID articol e0160394, 2016.

[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal et al., „Asocierea AKI cu mortalitatea și complicațiile la pacienții spitalizați cu ciroză”,hepatologie, vol. 57, nr. 2, p. 753– 762, 2013.

[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh și A. Viola, "Leziuni renale acuteîn ciroză"hepatologie, vol. 48, nr. 6, p. 2064–2077, 2008.

[5] R. Moreau și D. Lebrec, „Insuficiență renală acută la pacienții cu ciroză: perspective în vârsta MELD”,hepatologie, vol. 37, nr. 2, p. 233–243, 2003.

[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy și colab., „New consensus definition ofleziuni renale acuteprezice cu exactitate 30-mortalitatea zilnică la pacienții cu ciroză cu infecție,"Gastro-enterologie, vol. 145, nr. 6, p. 1280.e1–1288.e1, 2013.

[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw, et al., „Utilizarea potențială a biomarkerilor înleziuni renale acute: raport și rezumat al recomandărilor de la cea de-a zecea conferință de consens privind inițiativa de calitate a dializei acute,"RinichiInternaţional, vol. 85, nr. 3, p. 513–521, 2014.

[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani și JV Bonventre, "Leziuni renalemoleculă-1 (KIM-1): un biomarker nou pentru leziunea tubului proximal renal uman,"Rinichi Internaţional, vol. 62, nr. 1, p. 237–244, 2002.

[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg, et al., „Primul urinar post-operatorleziuni renalebiomarkeri și asocierea cu durata AKI în cohorta TRIBE-AKI",Plus unu, vol. 11, nr. 8, ID articol e0161098, 2016.

[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung, et al., „Profiling proteomic of human plasma exosomes identifies PPARc ca o proteină asociată cu exozomi”,Comunicări de cercetare biochimică și biofizică, vol. 378, nr. 3, p. 433–438, 2009.

[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade, et al., „Caracterizarea și profilarea completă a proteomelor exosomilor secretați de hepatocite”,Journal of Proteome Research, vol. 7, nr. 12, p. 5157–5166, 2008.

[12] GI Lancaster și MA Febbraio, „Exosome-dependent trafficking of HSP70,”Jurnalul de chimie biologică, vol. 280, nr. 24, p. 23349–23355, 2005.

[13] GI Lancaster și MA Febbraio, „Mecanismele eliberării HSP72 celulare induse de stres: implicații pentru creșterile induse de efort în HSP72 extracelular”Imunologie exercițiuluiRevizuire, vol. 11, p. 46–52, 2005.

[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber și BN Lambrecht, „Exosomes”, înProteomica funcțională, vol. 484, pp. 97–109, Humana Press, New York City, NY, SUA, 2008.

[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu, și colab., „Proteina de șoc termic 70 este secretată de celulele endoteliale printr-o cale non-clasică care implică exozomi”.Comunicări de cercetare biochimică și biofizică, vol. 387, nr. 2, p. 229–233, 2009.

[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah, et al., "Leziuni renale acuterețea: raportul unei inițiative de îmbunătățire a rezultatelor în injuria acută a rinichilor",Critic Îngrijire, vol. 11, nr. 2, p. R31, 2007.

[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., „Analiza proteomică a exosomilor urinari relevă răspunsul tubului renal la colonizarea leptospirală la șobolani infectați experimental”,PLoS Boli tropicale neglijate, vol. 9, nr. 3, articolul e0003640, 2015.

[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Li și M. Belting, „Exozomii celulelor canceroase depind de proteoglicanii de heparan sulfat de suprafață celulară pentru internalizarea lor.

și activitate funcțională”,Proceduri de cel Naţional Academia de Științe, vol. 110, nr. 43, p. 17380–17385, 2013.

[19] A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm și M. Mann, „Secvențierea spectrometrică de masă a proteinelor din geluri de poliacrilamidă colorate cu argint”,Chimie analitică, vol. 68, nr. 5, p. 850–858, 1996.

[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre, et al., „Profilul proteinei Shotgun al țesutului adipos uman și modificările sale în relație cu amiloidozele sistemice”,Journal of Proteome Research, vol. 12, nr. 12, p. 5642–5655, 2013.

[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato, et al., „Analiza proteomică cantitativă a complexelor mediatoare distincte de mamifere folosind factori de abundență spectrală normalizată”,Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 103, nr. 50, p. 18928–18933, 2006.

[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst și

DS Wishart, „MetaboAnalyst 2.0--un server cuprinzător pentru analiza datelor metabolomice”,Cercetarea acizilor nucleici, vol. 40, nr. W1, pp. W127–W133, 2012.

[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young și DS Wishart, „MetaboAnalyst: un server web pentru analiza și interpretarea datelor metabolomice”,Cercetarea acizilor nucleici, vol. 37, nr. S2, pp. W652–W660, 2009.

[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw și K. Sharma, „Profilarea subproteomelor celulelor mezangiale umane dezvăluie un rol al calmodulinei în absorbția glucozei”,Jurnalul AmericandeFiziologie-renală Fiziologie, vol. 292, nr. 4, p. F1182–F1189, 2007.

[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi, et al., „Pirfenidone is renoprotective inboala de rinichi diabetic,” Journal of the American Society of Nephrology, vol. 20, nr. 8, pp. 1765–1775, 2009.

[26] U. Reiss și B. Sacktor, "Rinichibrush border membrane maltase: purification and properties”, Arhivele de Biochimie și Biofizică, vol. 209, nr. 2, pp. 342–348, 1981.

[27] B. Sacktor, „Trehalase și transportul glucozei la mamiferrinichiși intestin,” Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 60, nr. 3, pp. 1007–1014, 1968.

[28] SJ Berger și B. Sacktor, „Izolarea și caracterizarea biochimică a marginilor de perie de la iepurerinichi," Jurnalul de biologie celulară, vol. 47, nr. 3, p. 637–645, 1970.

[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor și

MG Farquhar, „Microdomenii ale compoziției distinctive de glicoproteine ​​înrinichimarginea periei tubului proximal,"Jurnalul de biologie celulară, vol. 98, nr. 4, p. 1505–1513, 1984.

[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li și colab., „Veziculele extracelulare în circulație cu proteom specific și microARN-uri hepatice sunt potențiali biomarkeri pentru leziunile hepatice în boala experimentală a ficatului gras”,Plus unu, vol. 9, nr. 12, ID articol e113651, 2014.

[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau și P. Gine`s, „Acute-on-chronic hever failure: an update”,Intestin, vol. 66, nr. 3, p. 541–553, 2017.

[32] T. Pisitkun, R.-F. Shen și MA Knepper, „Identificarea și profilarea proteomică a exozomilor în urina umană”,Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 101, nr. 36, p. 13368–13373, 2004.

[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hoffert, și colab., „Large-scale proteomics and phosphoproteomics of urinary exosomes,”Jurnal de cel american Societate de Nefrologie, vol. 20, nr. 2, p. 363–379, 2009.