Îmbunătățirea producției de echinacozide și acteozide prin elicitare în două etape în cultura de suspensie celulară a Cistanche Deserticola

pentru mai multe informații:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen și colab

Abstract

La concentrații adecvate, poliaminele au favorizat creșterea calusului șiechinacozidconținutulCistanche deserticolaîn timp ce Ag plus a crescut conţinutul deechinacozidșiacteozid. Într-o perioadă de cultură de 20-zi, când putrescină (25 lM) și Ag plus (10 lM) au fost adăugate în ziua 8 și, respectiv, ziua 16,echinacozidproducție(1,7 gl–1) șiacteozidproducția (0,4 gl–1) a atins valoarea maximă, care au fost de 1,4-ori și 1,5-ori din acele tratamente cu putrescină unică, de 1,6-ori și 1.4-ori din cele din un singur Ag plus tratament, respectiv. Putrescina exogenă a îmbunătățit viabilitatea celulară și activitatea enzimatică antioxidantă în mod semnificativ, astfel încât a crescut biomasa finală. Ag plus adăugarea a crescut semnificativ conținutul de H2O2 și activitatea fenilalaninamoniac-lază, ceea ce a condus la o creștere mai mare.echinacozidșiacteozidcontinuturi.

Cuvinte cheieActeozid,Cistanche deserticola, Echinacozidul, Elicitor, Cultura suspendării

Abrevieri

APOX Ascorbat peroxidază

CAT Catalase

H2O2 Peroxid de hidrogen

PAL Fenilalanina amoniac-lază

PeG Glicozide feniletanoide

Specii reactive de oxigen ROS

SOD Superoxid dismutază

Cistanche deserticola

Faceți clic pentru produse Cistanche UK și Cistanche extract

Introducere

Cistanche deserticolaYC Ma este utilizat pe scară largă în medicina tradițională chineză. Glicozidele feniletanoide (PeG) sunt constituenți bioactivi majori în această plantă. Printre PeG,echinacozidșiacteozidsunt principalele componente pentru îmbunătățirea potenței sexuale, reglarea funcției imunitare, eliminarea radicalilor liberi și proprietățile anti-îmbătrânire (Song et al. 2003). Datorită supraexploatării, cultivării dificile și mediului deteriorat, sălbatic Cistanche deserticolaplantele sunt pe cale de dispariție. Cultura de celule vegetale poate fi o alternativă atractivă pentru obținerea acestor componente bioactive. Principalele probleme întâmpinate în cultura vitro deCistanche deserticolaau biomasă scăzută și conținut scăzut de PeG. S-a raportat că mulți elicitori stimulează sinteza PeG (Cheng și colab. 2005, 2006; Lu și Mei 2003; Ouyang și colab. 2003a; Xu și colab. 2005), dar, din păcate, majoritatea elicitorilor au scăzut biomasa celulară.

În ultimii ani, combinația de diferiți elicitori este explorată în cultura în suspensie a celulelor vegetale. Datorită acțiunilor diferite ale diferiților elicitori, combinația de diferiți elicitori poate obține un efect sinergic. Elicitorii se pot adăuga în același timp, de exemplu, în cultura de suspensie a Taxus spp. (Yuan și colab. 2002) și ginseng (Bae și colab. 2006). Pe de altă parte, adăugarea diferiților elicitori în stadiul de creștere a biomasei și, respectiv, în faza de producție a metabolitului secundar a dat producția maximă de biomasă și taxol în cultura suspensiei de Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Cu toate acestea, sunt disponibile puține rapoarte cu privire la utilizarea elicitorilor de combinare în cultura celulară a Cistanche deserticola.

EhcinacosideînCistanche deserticola

Rapoarte anterioare despreCistanche deserticolaconcentrat pe creșterea conținutului de PeG, dar elicitorii precum poliaminele pentru promovarea biomasei au fost parțial ignorați. Poliaminele pot promova biomasa calusului prin creșterea proliferării celulare și atenuarea senescenței celulare (Bais și Ravishankar 2002). S-a raportat recent că poliaminele au fost implicate în interacțiunea cu etilena și toleranța la stres abiotic, în timp ce etilena și speciile reactive de oxigen (ROS) din stresul abiotic au dus la senescența și moartea celulelor (Cona et al. 2006). Pe de altă parte, stresul oxidativ cauzat de elicitori a dus la acumularea de ROS, inclusiv peroxid de hidrogen (H2O2) și anion superoxid (O2–), care au fost raportate că mediază prin moartea celulară programată și sinteza metabolitelor secundare ca molecule semnal (Yuan et al. 2001). Xu și Dong 2005). De exemplu, H2O2 a indus expresia genică a fenilalaninei amoniac-liazei (EC 4.3.1.5), o enzimă cheie pentru răspunsul de apărare și metabolismul secundar (Desikan și colab. 1998), care a reglementat producția de PeG în cultura celulară aCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). Având în vedere stresul oxidativ, unii ioni metalici, cum ar fi Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, au promovat eficient sinteza metabolitului secundar în multe plante (Zhao et al. 2005). Poate că aceștia pot îmbunătăți activitatea PAL și producția de PeG. În acest studiu, poliaminele și ionii metalici, precum și combinația acelor elicitori, au fost aplicate pentru a îmbunătăți creșterea calusului,echinacozid, șiacteozidconținutul Cistanche deserticola. În plus, a fost investigată relația dintre elicitori și conținutul de H2O2, precum și efectele acestora asupra activităților PAL și ale enzimelor antioxidante.

Materiale și metode

Materiale vegetale

Cistanche deserticolalinii celulare au fost induse din tulpină. După sterilizare, tulpina a fost tăiată în bucăți de aproximativ 1 cm3 și cultivată pe un mediu B5 (Gamborg și colab. 1968) care conține 5 lM acid naftalenacetic (NAA), 9 lM 6-benzil adenină (6-BA), 4 lM 2,4-acid diclorofenoxiacetic (2,4-D) și 30 g zaharoză l–1. După 30 de zile, calusul galben deschis a fost scos și subcultivat pe mediu B5 cu 5 lMNAA, 9 lM 6-BA și 1 lM 2,{4-D, iar suspensia celulară a fost stabilită conform metodelor ofOuyang et al. (2003b).

Cultura calusului

Aproximativ 1,5 g calus proaspăt (0,125 g DW) din cultura în suspensie de 20-ziCistanche deserticolaa fost inoculat într-un balon Erlenmeyer de 250-ml conţinând 50 ml mediu B5. Mediul B5 a fost suplimentat cu 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D și 30 g zaharoză l-1 la un pH de 5,6 înainte de autoclavare. Toate experimentele au fost efectuate cu trei replicări la 25 de grade în întuneric pe un agitator rotativ (110 rev min-1) timp de 20 de zile.

ActedosieînCistanche deserticola

Tratamente elicitor

Într-un singur experiment de elicitare, soluții sterilizate pe filtru de putrescină (Put), spermină (Spm), spermidină (Spd), nitrat de argint și clorură de cobalt au fost adăugate la mediu la concentrații proiectate pentru a investiga efectele lor asupra creșterii calusului și conținutului de PeG. Cu tipul de elicitor și concentrația optime, a fost investigat efectul timpului de hrănire. Apoi, pe baza concentrației optime și a timpului de hrănire, combinația de diferiți elicitori a fost proiectată pentru a îmbunătăți producția de PeG într-un experiment de elicitare în două etape. Cultura calusului fara elicitori actioneaza ca control. Pentru a investiga mecanismul de acțiune al elicitorilor, calusul a fost scos la un moment proiectat după adăugarea de elicitor pentru o analiză ulterioară în experimentul de elicitare în două etape.

Teste biochimice

La un moment stabilit după adăugarea de elicitor, celulele au fost filtrate și spălate ușor cu apă distilată. Apoi, viabilitatea celulară a fost determinată prin colorare cu clorură de 2,3,5-trifenil tetrazoliu conform metodei lui Verleysenet al. (2004), Indicele de viabilitate este definit ca absorbanța măsurată pe gram de țesut proaspăt. Conținutul de H2O2 al celulelor proaspete a fost determinat conform metodei lui Velikova și colab. (2000). Determinarea activității fenilalaninei amoniac-liazei (PAL) (EC 4.3.1.5) sa bazat pe metoda lui Koukol și Conn (1961). Metodele utilizate pentru extracția superoxid dismutaza (SOD) (EC1.15.1.1), catalaza (CAT) (EC 1.11.1.6), extracția cu ascorbat peroxidază (APOX) și determinarea au fost aceleași cu cele ale lui Jebara și colab. (2005).

Măsurarea biomasei, echinacozidei și actozidei

Pentru determinarea greutății uscate (DW), calusul a fost filtrat și spălat cu apă distilată și apoi liofilizat până la greutatea constantă pentru a înregistra greutatea uscată.

Celulele uscate (20 mg) au fost extrase cu 10 ml 5{0 procente (v/v)metanol la temperatura camerei în ultrasunete (40 kHz, 160 W) timp de 15 minute. După filtrarea printr-un filtru de 0,22 µm, 20 µl de probe au fost injectate într-un sistem HPLC (Waters 2695) echipat cu o coloană C18 (Diamonsil, 250 mm · 4,6 mm, dimensiunea particulei 5 µm). Faza mobilă a constat din metanol și soluție de acid acetic-apă 0,05% (v/v) în raport de 35:65 (v/v). Debitul a fost de 1,0 ml min^–1, temperatura coloanei a fost de 30 de grade și lungimea de undă de detecție UV (Waters 2996) a fost de 334 nm.

Curbele de calibrare aleechinacozidșiacteozidau avut o liniaritate bună în intervalul {{0}},2–6,4 lg(r=0,9997) și 0,16–4,6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995), respectiv. Recuperările medii de echinacozidă și acteozidă (n=5) au fost de 98,7 la sută (RSD=1,5 la sută ) și 98,2 la sută (RSD=1 .28 la sută ), respectiv. Experimentele de precizie și acuratețe au arătat rezultate bune, abaterea standard relativă a fost mai mică de 2 la sută. Limitele de cuantificare au fost 0,04 și 0,06 lg pentru echinacozidă și actozidă, respectiv. Standardele de echinacozidă și actozidă au fost achiziționate de la NICPBP (Institutul Național pentru Controlul Produselor Farmaceutice și Biologice, Beijing, China). Producția de echinacozidă/acteozidă=conținut de echinacozidă/acteozidă (mg g–1 DW) x Biomasă (g DW l^–1).

analize statistice

Toate experimentele și determinările au fost repetate de trei ori și toate valorile au fost medii de triplicate ± SE. Datele au fost supuse analizei de varianță (one-wayANOVA, test Tukey) pentru a detecta diferențe semnificative prin PROC ANOVA a SAS versiunea 6.12.

Rezultate

Efectele poliaminelor asupra creșterii calusului,echinacozid, șiacteozidconţinut.

Tabelul 1 arată efectele poliaminelor asupra creșterii calusului,echinacozid, șiacteozidconținutulCistanche deserticola. Put și Spm au promovat creșterea calusului în mod semnificativ la concentrația adecvată. Aproximativ 25 lM Put a fost cel mai eficient, iar biomasa (11,2 g DW l–1) a fost de 1,3- ori mai mare decât controlul. Concomitent cu poliamine îmbunătățiteechinacozidcontinut semnificativ. Când s-a adăugat 25 lM Put,echinacozidconținutul a fost crescut cu 46 la sută în comparație cu controlul, în timp ce nu a fost găsită o creștere semnificativă a conținutului de actoside.

Efectele Ag plus și Co2 plus asupra creșterii calusului, echinacozidului și conținutului de actozid

Efectele ionilor metalici asupra creșterii calusului,echinacozid, șiacteozidconținutul este ilustrat în tabelul 2. Conținutul de echinacozidă și actozidă a fost promovat foarte mult de Ag plus, în timp ce creșterea calusului a fost ușor inhibată. Când s-a adăugat 10 lM Ag plus,echinacozidcontinut siacteozidconținutul a fost crescut cu 73 la sută, respectiv 62 la sută, comparativ cu martor. Simultan, nu a existat nicio diferență semnificativă în biomasă între tratament Ag plus și control. Co2 plus cu greu a arătat efecte pozitive asupra creșterii calusului și a conținutului PeG.

Efectele timpului de hrănire asupra creșterii calusului, a echinacozidei și a conținutului de actozide

Put (25 lM) și Ag plus (10 lM) au fost selectate pentru experimente ulterioare. Efectele timpului de hrănire asupra creșterii calusului,echinacozid, șiacteozidconținutul este prezentat în Tabelul 3. Când a fost adăugat Put (25 lM) în ziua 8, s-a obținut biomasa maximă (11,8 g DW l-1). Între timp,echinacozidconținutul a fost crescut la 107,2 mg g–1 DW în timp ceacteozidconținutul era aproape același cu cel al controlului.

Ag plus adăugarea la o perioadă mai devreme a condus la o biomasă mai mică. Adăugând Ag plus (10 lM) în ziua 16, ambeleechinacozidconținut (127,9 mg g–1 DW) șiacteozidconținutul (34,2 mg g–1 DW) a atins maximul, care a fost de 2,2-ori, respectiv de 1,4-ori față de cei din martor.

Efectele combinate ale Put și Ag plus asupra creșterii calusului, echinacozidei și producției de actozide

După cum se arată în rezultatele unor elicitori unici, adăugarea Put în stadiul incipient a îmbunătățit biomasa, iar Ag plus adăugarea în stadiul târziu a promovat conținutul de echinacozidă și actozidă, fără a scădea semnificativ biomasa. Așa că a fost conceput un protocol de elicitare în două etape. Put (25 lM) și Ag plus (10 lM) au fost adăugate în etapele optime respective.

Figura 1 arată efectele combinării adăugării Putand Ag plus asupra creșterii calusului,echinacozid, șiacteozidproducție în contrast cu controlul. Când a fost adăugat Put (25 lM) în ziua 8 și Ag plus (10 lM) a fost adăugat în ziua 16, biomasa optimă (11,4 g DW l-1), conținutul de echinacozid (152,4 mg g-1 DW) și conținutul de actozid (36,1). mg g–1 DW) au fost obținute în ziua 20 (Fig. 1). Theechinacozidproducție (1,7 gl–1) șiacteozidproducția (0,4 gl–1) s-a ridicat la 3,3-ori și, respectiv, de 2,1-ori cele din martor, care au fost mai mari decât cele din elicitarea unică (Tabelul 3) . Comparativ cu tratamentul cu un singur elicitor,echinacozidșiacteozidproducția prin combinarea elicitorilor a fost de 1,4-ori și 1,5-ori a celor din tratamentul cu un singur Put, 1,6-ori și 1,4-ori a acelor un singur Ag plus tratament , respectiv. Cultura prelungită a scăzut biomasa, producția de echinacozide și producția de actozide (Fig. 1)

Fig. 1 Profilele biomasei (A),echinacozid, șiacteozidproducție (B) cu/fără combinarea elicitorilor în cultură în suspensie deCistanche deserticola. Barele verticale reprezintă eroarea standard a trei replicări. Calus, 0,125 g DW, a fost inoculat în baloane Erlenmeyer de 250-ml conţinând 50 ml mediu B5. Put (25 lM) și Ag plus (10 lM) au fost adăugate în ziua 8 și, respectiv, în ziua 16. Experimentele au fost efectuate la 25 de grade în întuneric pe un agitator rotativ (110 rev min–1) timp de 20 de zile

Efectul Put și Ag plus asupra viabilității celulare, conținutului de H2O2 și activităților PAL și ale enzimelor antioxidante

Pentru a înțelege mecanismul de acțiune al elicitorilor asupra creșterii celulare și a metabolismului secundar alCistanche deserticola, modificările viabilității celulare, conținutului de H2O2 și activitățile enzimelor PAL și antioxidante după adăugarea Put și Ag plus au fost examinate în cultura de elicitare în două etape. Când Put a fost adăugat în ziua 8 (0 h în Fig. 2), conținutul de H2O2 a scăzut rapid, ceea ce a reprezentat doar 48,9 la sută din control la a 6-a oră, respectiv, și a revenit la nivelul controlului treptat după 24 de ore (Fig. .2A). Viabilitatea celulară a crescut până la 12 ore și apoi a scăzut constant, ceea ce a fost cu 26,9% și 16,7% mai mare decât controlul la 24 de ore și, respectiv, la 48 de ore (Fig. 2B). Activitățile SOD și APOX au crescut semnificativ după 6 ore, iar activitatea SOD a scăzut la un nivel similar al controlului după 24 de ore, în timp ce activitatea APOX era încă de 1.3-ori față de control (Fig. 2C, D). Putaddition nu a arătat nicio influență semnificativă asupra activității CAT (Fig. 2E). Scăderea conținutului de H2O2 și creșterea activității enzimelor antioxidante au însemnat mai puține daune oxidative și au menținut mai multe celule viabile decât martorul.

Fig. 2 Modificările conținutului de H2O2, viabilității celulare, activității APOX, SOD, CAT și PAL după adăugarea culturii în suspensie în ziua 8 deCistanche deserticola. Barele verticale reprezintă eroarea standard a trei replicări

Simultan, activitatea PAL a atins maximul la a 12-a oră și apoi a scăzut treptat până la un nivel similar celui de control după 48 de ore (Fig. 2F).

Celulele au fost cultivate continuu după adăugarea Put, iar Ag plus a fost adăugat la mediu în ziua 16 (0 h în Fig. 3). Conținutul de H2O2 a crescut rapid și a menținut un nivel semnificativ mai mare decât controlul până la 48 de ore (Fig. 3A). Cu toate acestea, viabilitatea celulară a fost inhibată semnificativ și a devenit mai mică (Fig. 3B). Activitatea APOX a menținut un nivel constant și a scăzut după 24 de ore (Fig. 3C). Activitățile SOD și CAT au crescut brusc după 3 ore și au atins valoarea maximă la 12 ore și, respectiv, 6 ore, care au fost de 1,6-ori și de 1,0-ori mai mari decât martorii, apoi au scăzut lent (Fig. 3D , E). Activitatea PAL a crescut la 2,1-ori față de control după 24 de ore, ceea ce a fost încă cu 22,5 la sută mai mare decât controlul după 48 de ore (Fig. 3F).

Fig. 3 Modificările conținutului de H2O2, viabilității celulare, activității APOX, SOD, CAT și PAL după Ag plus adăugarea în cultura în suspensie în ziua 16 deCistanche deserticolacu Put addition onday 8. Barele verticale reprezintă eroarea standard a trei replicări.

Discuţie

Poliaminele și ionii metalici au arătat influențe diferite asupra creșterii calusului și producției de PeGCistanche deserticola. La concentrații adecvate, poliaminele au sporit în principal creșterea calusului, în timp ce Ag plus a promovat producția deechinacozidșiacteozidsemnificativ. Când ambele Putand Ag plus la concentrație optimă au fost adăugate la momente diferite, au apărut unele efecte sinergice.

Pentru creșterea calusului, efectul de promovare sa bazat pe tipul de poliamine, concentrație și timpul de hrănire. 25 lMPut a fost cel mai eficient pentru creșterea calusului când a fost adăugat în ziua de 8. Elicitorul a arătat efectul optim de promovare în stadiul incipient de creștere. Deși s-a descoperit că Ag plus și Co2 plus îmbunătățesc metaboliții secundari în diferite plante (Zhaoet al. 2005), numai Ag plus a arătat un efect pozitiv asupra conținutului deechinacozidșiacteozid. Deoarece Ag plus ar putea inhiba viabilitatea celulară și proliferarea celulară, adăugarea Ag plus în ziua de 16 a îmbunătățit producția deechinacozidșiacteozidfără a reduce semnificativ biomasa.

Atunci când celulele plantelor sunt expuse la tratamentul cu elicitor, elicitorul inițiază transducția semnalului de la suprafața membranei plasmatice și producția de ROS, induce răspunsul de apărare a plantelor și îmbunătățește metabolismul secundar al plantei prin reglarea enzimelor cheie care catalizează biosinteza metaboliților secundari țintă (Zhao et al. 2005). Stresul oxidativ datorat tratamentului cu elicitor are ca rezultat acumularea de ROS și poate fi atenuat de enzimele antioxidante, inclusiv SOD, APX, CAT și POD. Când daunele oxidative depășesc funcțiile enzimelor antioxidante, celulele vegetale pot muri pe măsură ce viabilitatea celulară scade.

Se crede că H2O2, un tip de ROS, mediază cu moartea celulară programată și reglează sinteza metabolitului secundar prin inducerea exprimării multor gene de apărare și a genelor biosintetice ale metaboliților secundari, cum ar fi PAL. Se crede că H2O2, un tip de ROS, mediază cu moartea celulară programată și reglează sinteza metabolitului secundar prin inducerea exprimării multor gene de apărare și a genelor biosintetice ale metaboliților secundari, cum ar fi PAL.

Poliaminele au îmbunătățit toleranța la stres abiotic prin eliminarea eficientă a ROS, protejând acidul nucleic și membrana (Alca´zar și colab. 2006) și sporind activitatea enzimelor antioxidante (Tang și Newton 2005). Conform raportului lui Papadakis și Roubelakis-Angelakis (2005), Puts a arătat un efect de blocare mai bun asupra acumulării ROS decât Spd și Spm. După cum se arată în rezultatele noastre, tratamentul final cu biomasă a fost mai mare decât cel din tratamentele Spd și Spm. Puterea exogenă a redus conținutul de H2O2, a crescut activitățile enzimelor antioxidante și viabilitatea celulară în mod eficient. Probabil că o viabilitate celulară mai mare a contribuit la mai multă proliferare și la o biomasă mai mare. Apoi s-ar putea explica de ce adăugarea Ag plus la o perioadă mai devreme a dus la o biomasă mai mică pentru Ag plus acumularea sporită de H2O2 și a scăzut semnificativ viabilitatea celulară. Activitățile enzimelor antioxidante au fost îmbunătățite pentru a atenua stresul oxidativ fără a influența viabilitatea celulară. Ag plus adăugarea a promovat, de asemenea, activitatea PAL, precum și producția deechinacozidșiacteozidconsiderabil. Mecanismul ar putea fi în concordanță cu rezultatele lui Desiken și colab. (1998) şi Yuan şi colab. (2001). H2O2 ar putea juca un rol cheie în proliferarea celulară și producția de PeG. Pune activitate PAL crescută șiechinacozidconținut într-o anumită măsură, posibil într-un mod diferit pentru a pune conținut scăzut de H2O2.

În ultimii ani, majoritatea rapoartelor s-au concentrat pe efectul unui singur elicitor asupra creșterii calusului și a conținutului de PeG alCistanche deserticola. Cu toate acestea, mulți elicitori nu au sporit creșterea calusului la concentrație optimă, cum ar fi aschitosanul, elicitorul funerar (Fusarium solani), iasmonatul de metil și acidul salicilic (Cheng și colab. 2006; Lu și Mei2003; Xu și colab. 2005). Un amestec de elemente de pământ rare a îmbunătățit creșterea celulelor și producția de PeG, cu 26% și, respectiv, 167% mai mari decât cele ale controlului (Ouyanget al. 2003b). Elicitarea repetată cu un singur elicitor a sporit, de asemenea, considerabil producția de PeG (Cheng și colab., 2005, 2006). Este o alternativă bună pentru a obține o producție optimă de biomasă și PeG prin adăugarea diferiților elicitori în diferite etape. Când s-au adăugat 25 lM Put și 10 lM Ag plus în ziua 8 și, respectiv, în ziua 16,echinacozidproducția (1,7 gl–1) și producția de actozidă (0,4 gl–1) au atins maximul, care au fost mai mari decât cele de la Put unic sau Ag plus elicitare, precum și raportările anterioare.

Din: ' Îmbunătățireaechinacozidșiacteozidproducerea prin elicitare în două etape în cultura suspensiei celulare deCistanche deserticola' deWen-Hao Chen și colab

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Referințe

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Implicarea poliaminelor în răspunsul plantelor la stresul abiotic. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Productivitate îmbunătățită a ginsenozidelor printr-o combinație de etefon și jasmonat de metil în culturile de rădăcini accidentale de ginseng (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Rolul poliaminelor în ontogeneza plantelor și aplicațiile biotehnologice ale acestora. Cultul de organ al țesutului celular vegetal 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Elicitarea repetată îmbunătățește acumularea de glicozide feniletanoide în culturile de suspensie celulară deCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Îmbunătățirea biosintezei glicozidelor feniletanoide înCistanche deserticolaculturi de suspensie celulară prin elicitor de chitosan. J Biotechnol 121:253–260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funcțiile aminoxidazelor în dezvoltarea și apărarea plantelor. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin și peroxidul de hidrogen inițiază ambele moarte celulară programată, dar au efecte diferențiate asupra expresiei genelor de apărare în culturile de suspensie Arabidopsis. Biochem J 330:115–120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Cerințele nutritive ale culturilor în suspensie de celule de rădăcină de soia. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Modificări în
Activitățile de ascorbat peroxidază, catalază, guaiacol peroxidază și superoxid dismutază în nodulii de fasole comună (Phaseolus vulgaris) sub stres salin. J Plant Physiol 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Producția îmbunătățită de taxol prin combinarea factorilor inductori în cultura celulară în suspensie a Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolismul aromatic și proprietățile deaminazei fenilalaninei din Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692–2698
Lu CT, Mei XG (2003) Îmbunătățirea producției de glicozide feniletanoide de către un elicitor fungic în cultura suspensiei celulare deCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Formarea glicozidelor feniletanoide de cătreCistanche deserticolacalus crescut pe medii solide. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Efectele elementelor pământurilor rare asupra creșteriiCistanche deserticolacelulelor și producerea de glicozide feniletanoide. J Biotechnol 102:129–134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Poliaminele inhibă generarea de superoxid mediată de NADPH oxidază și putrescina previne moartea celulară programată indusă de peroxidul de hidrogen generat de poliaminoxidază. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Progrese în cercetarea activității farmacologice în plante deCistancheHoffing și Link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Poliaminele reduc daunele oxidative induse de sare prin creșterea activităților enzimelor antioxidante și scăderea peroxidării lipidelor la pinul Virginia. Regul de creștere a plantelor 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Stresul oxidativ și unele sisteme antioxidante în plantele tratate cu ploaie acidă au fost rolul protector al poliaminelor exogene. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Evaluarea tehnicilor analitice pentru a prezice viabilitatea după crioconservare. Plant Cell Tissue Organ Cult 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2– din explozia oxidativă indusă de elicitor este necesar pentru declanșarea activării fenilalaninei amoniac-liaze și sintezei catarantinei în culturile de celule Catharanthus roseus. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Efectele jasmonatului de metil și acidului salicilic asupra sintezei glicozidelor feniletanoide în culturi în suspensie deCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Calea de transducție a semnalului pentru explozia oxidativă și producția de taxol în culturile în suspensie de Taxus Chinensis var. mairei induse de oligozaharide din Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Căile de acțiune ale elicitorilor pe calea biosintezei Taxolului și efectul lor sinergic. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Transducția semnalului elicitor care duce la producerea de metaboliți secundari ai plantei. Biotechnol Adv 23:283–333