Kaempferol ameliorează daunele mitocondriale LD prin promovarea autofagiei: implicații în boala Parkinson Partea 1

Vă rog contactațioscar.xiao@wecistanche.compentru mai multe informatii

Abstract:Dovezile emergente indică faptul că depunerea și peroxidarea neașteptată a picăturilor de lipide (LD) pot accelera stresul organelelor și joacă un rol crucial în patogeneza bolilor neurodegenerative (NDD). În studiul nostru anterior, am confirmat că kaempferol (Ka), o moleculă mică de flavonoid natural. , au prezentat efecte neuroprotective asupra șoarecilor cu boala Parkinson (PD) indusă de LPS. În plus, studiile anterioare au arătat că autofagia joacă un rol important în reglarea depunerilor celulare de LD. În studiul actual, am arătat că Ka a protejat împotriva TH plus pierderea neuronală și deficitele comportamentale la șoarecii PD induse de MPTP/p, însoțite de stres oxidativ lipidic redus în substanța nigra pars compacta (SNpc). În celulele neuronale cultivate, Ka a prezentat un interval de concentrație relativ sigur și a suprimat semnificativ acumularea de LD și apoptoza celulară indusă de MPP plus. Studii ulterioare au indicat că efectul protector al Ka a fost dependent de autofagie, în special de lipofagie. În mod critic, Ka a promovat autofagia pentru a media degradarea LD în lizozomi, care apoi a atenuat depunerea și peroxidarea lipidelor și deteriorarea mitocondrială rezultată, reducând în consecință moartea neuronală. În plus, declanșarea Atg5 mediată de AAV-shAtg5-a abolit efectele neuroprotectoare ale Ka împotriva oxidării lipidelor la șoarecii PD. Această lucrare demonstrează că Ka previne degenerarea neuronală dopaminergică în PD prin inhibarea leziunii mitocondriale mediate de peroxidarea lipidelor prin promovarea autofagiei buzelor și oferă o potențială strategie terapeutică nouă pentru PD și NDD-urile asociate.

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

1. Introducere

Boala Parkinson (PD) este o boală neurodegenerativă comună (NDD) care este caracterizată patologic prin pierderea progresivă a neuronilor dopaminergici (DA) în substanța nigra pars compacta (SNpc)[]. Deși etiologia exactă și cursul natural al acestei boli nu au fost încă pe deplin clarificate, numeroase procese și disfuncții la nivel de sistem, inclusiv funcțiile mitocondriale, homeostazia dopaminei, neuroinflamația și autofagia, au fost implicate în patogeneza PD [1, 2]. Rapoarte recente au arătat că lipotoxicitatea legată de picăturile de lipide (LD) ar putea participa la patologia PD [3,4]. LD-urile sunt organite foarte dinamice care ies din membrana reticulului endoplasmatic (ER) și servesc în mod normal ca locuri intracelulare de stocare neutră a lipidelor [5]. S-a demonstrat recent că LD-urile joacă un rol mult mai larg decât stocarea acizilor grași (FA) și participă la multe boli. De exemplu, celulele mieloide, inclusiv macrofagele, leucocitele și eozinofilele, formează LD-uri ca răspuns la inflamație și stres, iar LD-urile sunt locuri de producere și stocare a citokinelor inflamatorii și sunt implicate în continuare în prezentarea antigenului și eliminarea patogenului [6]. Important, în ateroscleroză, s-a demonstrat că celulele spumoase bogate în LD sunt dăunătoare în toate etapele bolii [7].

Cistanche poate ajuta la îmbunătățirea imunității

Cu toate acestea, LD-urile nu au fost studiate pe larg în sistemul nervos central (SNC), cu puține lucrări care raportează prezența histologică a LD-urilor în țesutul creierului uman [8,9]. Chiar și așa, LD-urile pot avea funcții importante în creier, deoarece studiile recente au confirmat că LD-urile agregate în glia au accelerat neurodegenerarea într-un model de Drosophila [10]. Recent s-a raportat că la șoareci, celule roșii O-pozitive încărcate cu lipide, inclusiv neuroni, proteină acidă fibrilară glială (GFAP) plus astrocite și moleculă adaptor ionizat de legare a calciului-1 (IBA-1 ) microglia, sunt prezente în multe regiuni ale creierului și s-a demonstrat că participă la procesele asociate vârstei [11]. Lucrările noastre anterioare au demonstrat, de asemenea, acumularea crescută de LD în creier într-un model de șoarece PD [12]. Luate împreună, aceste studii sugerează că LD-urile pot fi implicate în patogeneza PD, precum și în alte NDD.

În mod normal, LD-urile intracelulare sunt degradate în lizozomi și livrează FA mitocondriilor pentru consumul lor ca sursă alternativă de energie în perioadele de epuizare a nutrienților [13]. Cu toate acestea, neuronii au o capacitate scăzută de consum mitocondrial de FA pentru producerea de energie [14]. Această caracteristică face neuronii deosebit de sensibili la acumularea și peroxidarea LD. În plus, acumularea de LD-uri sporește rata de oxidare a FA și impune o presiune persistentă asupra lanțului de transport de electroni mitocondrial, ceea ce crește producția de specii reactive de oxigen (ROS) de către complexele lanțului de transport de electroni I și II[15] pentru a amplifica stresul oxidativ. Supraîncărcarea cu lipide duce, de asemenea, la producerea de ROS de către surse extramitocondriale, cum ar fi nicotinamidă adenin dinucleotide fosfat (NADPH) oxidaze și alte enzime oxidative. Combinată cu expresia scăzută a enzimelor antioxidante și capacitatea scăzută de consum de FA în neuroni, acumularea de LD mediază stresul oxidativ și poate duce în continuare la leziuni mitocondriale, disfuncție lizozomală, autofagie defectuoasă și activarea răspunsurilor inflamatorii [16,17]. Cu excepția cazului în care LD-urile acumulate pot fi inhibate sau îndepărtate, neuronii extrem de activi suferă patofiziologie, dând naștere la neurodegenerare [17]. Dovezile indică faptul că procesul catabolic mediat de lizozomi numit autofagie joacă un rol esențial în menținerea homeostaziei LD celulare în mai multe țesuturi [17,18]. În detaliu, LD-urile pot fi sechestrate selectiv în autofagozomi și livrate la lizozomi pentru degradare de către lipazele acide lizozomale, un proces cunoscut în mod specific sub numele de lipofagie [19]. Prin urmare, țintirea LD-urilor și a căii lor de îndepărtare autofagică ar putea reprezenta o abordare nouă pentru gestionarea neurodegenerării.

Studiul produselor naturale și al agenților dietetici ca surse pentru potențiale tratamente și strategii NDD a câștigat un interes enorm în ultimii ani [20]. Kaempferol (Ka) este o moleculă mică polifenolică naturală care poate fi găsită într-un număr de plante medicinale chinezești și surse alimentare [21]. S-a raportat că Ka exercită efecte antibacteriene, anti-îmbătrânire și imunomodulatoare, precum și activități antioxidante și neuroprotectoare [20,22,23]. Anterior, s-a raportat că Ka inhibă inflamația în celulele microgliale BV2 in vitro [24] și crește rezistența neuronilor DA la neuroinflamație in vivo [25]. Cu toate acestea, efectul Ka asupra LD în PD nu a fost încă investigat.

Având în vedere importanța LD-urilor și legătura intimă dintre LD, mitocondrii și autofagie [16], care sunt toate implicate în PD, emitem ipoteza că Ka inhibă peroxidarea LD și previne neurodegenerarea DA în PD. În studiul de față, am demonstrat că Ka a protejat în mod semnificativ împotriva neurodegenerării într-un model de PD murin prin inhibarea acumulării LD. Studii ulterioare au arătat că Ka a declanșat autofagia și a redus acumularea de LD oxidate pentru a atenua disfuncția mitocondrială și producția de ROS mitocondrial (mtROS), prevenind astfel moartea apoptotică neuronală. Descoperirile obținute în acest studiu pot ajuta la direcționarea deciziilor clinice cu privire la utilizarea moleculei naturale Ka în NDD, cum ar fi PD.

2. Materiale și metode

2.1. Animale experimentale

Șoarecii C57BL/6J (masculi, 4-lună) au fost obținuți de la Nanjing Medical University Animal Core (Nanjing). Șoarecii au fost întreținuți și crescuți în Centrul de Resurse Animale al Facultății de Medicină, Universitatea Medicală Nanjing și în centrul pentru animale de la Spitalul Nanjing Drum Tower. Șoarecii au acces liber la hrană și apă într-o cameră cu o temperatură ambientală de 22 grade ± 2 grade și un ciclu de lumină/întuneric de 12:12 h. Toate procedurile pe animale au fost efectuate în strictă conformitate cu ghidul Ghidului National Institutes of Health pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator.

2.2. Reactivi

MPTP (M0896),3-MA (M9281), penicillin-streptomycin (V900929), sodium pentobarbital, and probenecid were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kaempferol (HPLC>95%)for in vivo treatment was purchased from Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China), kaempferol(HPLC>99.0 procente, 96.353) pentru experimentele in vitro a fost obținut de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SUA). BODIPY 493/503 (D3922), BODIPY 581/591 C11 (D3861), DHE (D11347) au fost achiziționate de la Thermo Fisher Scientific. Pentru experimentele pe animale, Ka a fost dizolvat într-o soluție de 10% DMSO în 16% SBE- -CD în soluție salină sterilă. Pentru experimentele cu celule, Ka a fost preparat în DMSO (Sigma-Aldrich) și PBS (concentrația finală de DMSO este de 0,01 la sută), pH 7,4.

2.3. Inducerea și tratamentul modelului de șoarece PD indus de metil-4-fenil{-1,2,3,6-tetrahidropiridină (MPTP)

Pentru a evalua efectele Ka în modelul PD de MPTP/p-toxicitate, șoarecii (masculi, în vârstă de 4-5 luni) au fost împărțiți aleatoriu în grupul tratat cu soluție salină, grupul tratat cu MPTP, MPTP plus Ka tratat. grup și grupul tratat numai Ka. În grupul tratat cu MPTP, șoarecii au primit administrare cronică de MPTP cu un protocol similar cu cel descris anterior [26]: MPTP a fost dizolvat în soluție salină și injectat subcutanat la 25 mg/kg urmat de 250 mg/kg probenecid (dizolvat în dimetil sulfoxid) injectare intraperitoneală (ip) la intervale de 1 oră la fiecare 3,5 zile pe o perioadă de 5 săptămâni. Șoarecii martor au primit injecție cu ser fiziologic și probenecid. În grupul tratat cu MPTP plus Ka, șoarecii au primit Ka (50 mg/kg, o singură injecție/zi în timpul experimentelor, Jingzhu Biotechnology, Nanjing, China) intraperitoneal (.p.) zilnic cu 3 zile înainte de tratamentul cu MPTP și peste 5 zile. săptămâni de injecție cu MPTP. La o săptămână după ultima injecție cu MPTP, șoarecii au fost supuși unor teste comportamentale orbiți pentru grupuri. După aceea, toți șoarecii au fost anesteziați cu 40 mg/kg pentobarbital de sodiu și sacrificați pentru detectarea proteinelor cerebrale și imuno-histochimie sau analiza qPCR.

2.4. Chirurgie stereotaxică in vivo și tratamente experimentale

Chirurgia stereotaxică sub anestezie cu pentobarbital de sodiu (40 mg/kg, ip) a fost efectuată conform descrierii [25]. Atg5 de șoarece și shRNA de control au fost transfectate cu vectori de ambalare (AAV-U6-CMV-shR-NA-EGFP) pentru a genera AAV. Pentru microinjectare, șoarecii anesteziați sunt plasați într-un aparat stereotaxic. Au fost injectați cu 1μLAAV cu un electrod de sticlă care vizează DG(AP:-0.3 mm; ML:±{0.13 mm; DV:{-0}.45 mm） la o rată de 0,25 μL/min. Apoi acul a fost reținut timp de 2-min.2 săptămâni suplimentare după microinjectarea virusului, șoarecii au fost supuși conducerii modelului PD indus de MPTP și (sau) tratamentului cu Ka.

shRNA Atg5 a fost obținut de la Hanbio Biotechnology (Shanghai, China) Co., Ltd. Pentru tăcerea Atg5, primerii au fost afișați în Tabelul suplimentar 1.

2.5. Analiza comportamentală

La o săptămână după injectarea finală de MPTP sau soluție salină, testul rotarod și testul polilor au fost efectuate așa cum s-a descris mai înainte [27]. Pentru testul rotativ, șoarecii au fost aclimatizați la rotarod în două încercări (6 minute cu o viteză accelerată de 12-20 rpm) pe zi timp de 2 zile consecutiv înainte de începerea experimentului. Apoi, șoarecii au fost testați la 20 rpm timp de 300 s pentru alte 3 zile consecutive. Latența de scădere a fost înregistrată folosind Rotarod Analysis System (Jiliang, Shanghai, China). Pentru testul pe stâlp, șoarecii au fost plasați cu capul în sus pe vârful unui stâlp vertical de lemn (cu suprafață aspră, înălțime 50 cm, diametru 1 cm). Toți șoarecii au fost obișnuiți cu aparatul cu 2 zile înainte de testare și apoi au fost testați de trei ori în a treia zi. Au fost înregistrate timpul total (T-total, până când mouse-ul a ajuns la podea cu cele patru labe) și timpul de întoarcere (T-turn, pentru ca mouse-ul să întoarcă complet capul în jos). Experimentul a fost orb pentru grupuri de șoareci pentru fiecare testare comportamentală și testul a fost efectuat de trei ori.

2.6. Colectarea de probe de creier

După testele comportamentale finale, șoarecii au fost anesteziați cu pentobarbital de sodiu (40 mg/kg, ip). Pentru qPCR, western blotting și analize prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), întregul creier a fost extras rapid de la animale, apoi mijlocul creierului și Țesuturile striatum au fost disecate rapid, pre-înghețate cu azot lichid. Toate probele au fost păstrate la -80 grade până la analiză.

Pentru analiza imunohistochimică, șoarecii au fost perfuzați trans-cardial cu 4% paraformaldehidă (PFA). Creierele au fost extrase, post-fixate, deshidratate, încorporate în OCT (Tissue-Tek), iar secțiunile seriale ale creierului au fost criosecționate (30 um pe felie) prin fiecare strat și mijlocul creierului întreg folosind un microtom de congelare (Leica CM1950, Nussloch, Germania). ). Toate secțiunile au fost colectate în șase serii separate, iar feliile de creier au fost depozitate în glicerină 50% și congelate în grad-20 până la analiză.

Pentru TEM, șoarecii au fost perfuzați cu 2,5% glutaraldehidă și 2% paraformaldehidă așa cum este descris 【12】. O porție mică （<1 mm³）="" of="" the="" mesencephalon="" was="" carefully="" sectioned="" and="" incubated="" in="" the="" same="" fixative="" for="" 2="" h="" at="" 4°c.="" specimens="" were="" postfixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide,="" stained="" in="" aqueous="" uranyl="" acetate,="" and="" then="" dehydrated="" and="" embedded="" in="" epoxy="" resin.="" ultrathin="" sections="" were="" stained="" using="" lead="" citrate="" and="" examined="" with="" a="" transmission="" electron="" microscope(jem-1010,="" tokyo,="">

2.6. Analiza imunohistochimică

Feliile de creier au fost clătite în PBS urmate de 3% H2O2 timp de 10 min, apoi incubate cu 0,3% Triton X{-100 în PBS suplimentat cu 5% BSA timp de 1 oră. După aceea, lamele au fost incubate cu anticorpii primari la 4 grade peste noapte în PBS care conține 5% BSA la 4 grade peste noapte, apoi spălate și incubate în anticorpi secundari timp de 1 oră la temperatura camerei, urmată de incubare cu diaminobenzidină (DAB) sau montare în DAPI (Life Technologies, Cat P36931) ca colorare imunofluorescentă timp de 5 minute. Pentru colorarea Nissl, lamele au fost combinate în soluție de violet de cresil (CV) (0,1 g violet de cresil, 99 ml H2O și 1% acid acetic 1 ml) timp de 30 de minute la temperatura camerei, apoi s-au deshidratat cu alcool și xilen. Imaginile au fost observate și fotografiile au fost capturate la un microscop Olympus BX52 (Olympus America Inc., Melville, NY, Statele Unite). Numărul total de neuroni TH-pozitivi și Nissl-pozitivi din SNpc a fost obținut serologic prin utilizarea metodei de fracționare optică cu software-ul MicroBrightField Stereo-Investigator (MicroBrightField, Williston, VT, SUA).

2.7. Analiză prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC).

Probele de striata de șoareci au fost omogenizate cu {{0}}.1 M acid percloric (1 mg țesuturi în 100 μL acid percloric) și 0,1 mM EDTA, tratat cu

2.17. Citometrie în flux

Celulele au fost digerate și clătite cu D-hank apoi colorate cu anexină V-FITC (5 ul diluat în 500ul PBS)/PI (0,1 ul diluat în 500 ul PBS) kit de apoptoză (CA1020, Solarbio, Beijing, Chian) conform protocolului producătorului. După aceea, celulele apoptotice au fost analizate utilizând citometrie în flux (guava easyCyteTM 8, Millipore, SUA). Măsurătorile ROS mitocondriale și ale potențialului membranei mitocondriale au fost efectuate așa cum este publicat 【12】. Celulele SH-SY5Y au fost colorate cu MitoSOX （2,5 μM, Invitrogen, SUA） sau ​​cu JCl（10 ug/ml, T-3168, Invitrogen, SUA ） la 37 °C timp de 30 min. După spălare cu PBS de două ori, celulele au fost apoi resuspendate în PBS rece care conține 1% FBS pentru analiza citometrică în flux. Datele au fost analizate cu software-ul FCS Express (Guava Easy CyteTM8, Millipore, Hayward, CA, SUA).

2.18. Testele respirației căluților de mare

Funcția respiratorie mitocondrială în celulele SH-SY5Y vii a fost măsurată folosind analizatorul de flux extracelular Seahorse (XFe96) (Agi-lent, Santa Clara, SUA) prin modificări ale ratei de consum de oxigen (OCR). Celulele SH-SY5Y însămânțate la 3 x 103 celule/godeu au fost lăsate să adere la plăcile de cultură de celule Seahorse și să atingă aproximativ 80 la sută confluență în momentul experimentului. În ziua următoare, celulele au fost pretratate cu Ka și apoi expuse la MPP plus pentru încă 24 de ore. OCR a fost detectat în condiții bazale, urmat de adăugarea secvențială a 1 μM oligomicină, 1 μM FCCP, precum și 1 μM rotenonă și antimicină A.

2.19. analize statistice

Datele au fost prezentate ca medie ± SEM. Semnificația diferenței a fost determinată de testul t Student, analiza bidirecțională a varianței sau analiza unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul post-hoc al lui Tukey. Diferența a fost considerată semnificativă la P<>

3. Rezultate

Rezultatul 1. Ka restabilește disfuncția motorie și crește nivelul de dopamină în striatul șoarecilor model MPTP/p PD

Pentru a investiga efectul neuroprotector al patogenezei Kaon PD, șoareci masculi C57BL/6 de 4-lună de vârstă au fost injectați cu neurotoxina MPTP pentru a stabili modelul MPTP/p PD și au fost tratați cu Ka (Fig. la). După inducția modelului, testul rotarod și testul polului au fost utilizate pentru a evalua performanța motrică și comportamentală a șoarecilor din diferitele grupuri. După cum se arată, timpul de performanță rotarod a fost redus semnificativ la șoarecii tratați cu MPTP, iar acest efect a fost prevenit de Ka (Fig. 1b). Ka a restabilit, de asemenea, deficitele comportamentale induse de MPTP, așa cum este indicat de reducerea timpului de întoarcere și a timpului total în testul pe pol (Fig.lc și d), fără a afecta greutățile corporale ale șoarecilor (Fig.1e). Mai mult, analiza HPLC a arătat că nivelul de dopamină din striat a fost semnificativ scăzut la șoarecii cu MPTP/p-provocați, iar acest nivel a fost restabilit prin tratamentul cu Ka (Fig. 1f). Tratamentul cu Ka a atenuat, de asemenea, reducerea indusă de MPTP/p a nivelurilor de acid dihidroxi-fenil acetic (DOPAC, un metabolit al dopaminei) în striat (Fig.1g). Aceste rezultate sugerează că Ka restaurează disfuncția motorie și crește nivelurile de dopamină în striat la șoarecii PD induși de MPTP.

Rezultatul 2. Ka atenuează pierderea neuronilor DA în SNpc la șoareci model MPTP/p PD

Apoi, pentru a evalua în continuare efectul neuroprotector al deteriorării neuronale DA indusă de Kaon MPTP/p, am examinat tirozin hidroxilaza (THD plus neuroni în SNpc murin prin imunocolorare. După cum se arată în Fig. 2a și b, MPTP/p a indus o reducere semnificativă). în numărul de neuroni TH plus, care a fost atenuat prin tratamentul cu Ka. În plus, numărul stereologic al totalului de neuroni din SNpc, așa cum este definit de Nissl

Fig. 1. Tratamentul cu Ka ameliorează disfuncția motorie și crește nivelul de dopamină în striatul șoarecilor model MPTP/p PD.

(a) Diagrama schematică a proiectului experimental. (b) Timpul pe tijă a fost măsurat pentru testarea tijei rotative pe trei zile consecutive. (cd) Timpul necesar pentru a se întoarce (timpul de întoarcere) și a coborî un stâlp (timpul de urcare) a fost înregistrat pentru testul pe stâlp. (e) Greutățile corporale ale șoarecilor au fost măsurate la sfârșitul studiului, (fg) Dopamina (DA) și acidul dihidroxi-fenil acetic (DOPAC) în striat au fost analizate prin cromatografie lichidă de înaltă performanță. Datele sunt exprimate ca medie ± SEM.n =9-10 pentru fiecare grup din (b, C, d); n=6-8 pentru fiecare grup în(f,g).ns, nesemnificativ,*P<><><0.001, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.="" mptp,="" 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine;="" ka,="">

colorarea, a verificat că pierderea celulelor THt reflectă moartea celulară, dar nu și reglarea în jos a expresiei TH și a arătat că tratamentul cu Ka a restabilit scăderea numărului de neuroni Nissl-pozitivi în SNpc la șoarecii tratați cu MPTP de la 43,3% la 25,4% ( Fig. 2c și d). În plus, Ka a ameliorat semnificativ reducerea indusă de MPTP a expresiei proteinei TH și DAT, măsurată prin Western blot (Fig. 2e-g). Aceste dovezi confirmă efectul neuroprotector al Ka asupra modelului de șoarece PD.

Rezultatul 3. Ka reduce acumularea de vacuole LD și stresul oxidativ în SNpc la șoarecii tratați cu MPTP/p

Dovezile tot mai mari au arătat implicarea LD-urilor în NDD [10], în mod constant, munca noastră anterioară a identificat LD-uri crescute în SNpc la șoarecii PD induși de MPTP [12]. LD-urile pot fi ușor identificate și prezintă structuri rotunde, de densitate scăzută, cu conținut amorf omogen [28]. În mod normal, LD-urile pot fi degradate prin autofagie pentru a evita acumularea [29]. Pentru a investiga dacă Ka ar putea regla LD-urile în PD, acumularea LD-urilor a fost analizată prin microscopie electronică de transmisie (TEM) în SNpc de control, MPTP/p și MPTP/p plus șoarecii Ka. După cum s-a arătat în munca noastră anterioară [12], numărul și dimensiunea LD-urilor au fost crescute la șoarecii MPTP/p în comparație cu martorii tratați cu soluție salină (Fig. 3a și b) și au fost reduse semnificativ la șoarecii tratați cu Ka (Fig. 3c- e). Mai mult decât atât, la șoarecii tratați cu Ka, LD-urile au fost observate mai frecvent în apropierea, închise în sau degradate de autolizozomi, care au fost definiți ca granule de lipofuscină dense de electroni. O colorare histologică suplimentară a neuronilor TH plus cu BODIPY, un colorant care etichetează în mod specific lipidele neutre și este utilizat în mod obișnuit pentru a detecta LD-urile [30], a arătat că atât numărul, cât și dimensiunea BODIPY plus LD-urilor în SNpc au fost mai mari la șoarecii PD decât la martori. și au fost semnificativ scăzute prin tratamentul cu Ka (Fig. 3f-h).

Dacă LD-urile nu pot fi degradate în timp util, LD-urile acumulate pot suferi peroxidare și pot contribui la stresul mediat de ROS mitocondrial [4], care amplifică neurotoxicitatea și progresia bolii. Prin urmare, am examinat în continuare profilurile de expresie ale genelor asociate cu protecția împotriva toxicității FA libere (Gpx8), a speciilor oxidative neutralizante, a radicalilor superoxid (Sod3) și a peroxidului de hidrogen (Cat) și a metabolismului FA (Acsbg1 și Dbi), așa cum a fost raportat [31] , toate acestea au fost scazute izbitor în SNpc-ul șoarecilor tratați cu MPTP în comparație cu martori, iar aceste efecte au fost ameliorate la șoarecii PD tratați cu Ka (Fig. 3i). În mod similar, MPTP/p a crescut, de asemenea, nivelurile de expresie ARNm

a subunităților NADPH oxidazei, cum ar fi Nox1, Nox2 și Nox4, în SNpc-ul șoarecilor MPTP/p, care au fost tociți în continuare prin tratamentul cu Ka (Fig.3j). Luate împreună, aceste date sugerează că Ka atenuează acumularea LD indusă de MPTP/p, peroxidarea și stresul mediat de ROS.

Acest articol este extras din listele de conținut disponibile pe pagina de pornire a revistei ScienceDirect Redox Biology: www.elsevier.com/locate/redox