Factorul inductibil de hipoxia pericitului renal reglează eritropoieza, dar nu fibroza renală
Mar 13, 2022
A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Szu-Yu Pan1,2,3 et al
Inhibitorii enzimei din domeniul prolil hidroxilazei (PHD) sunt eficienți în tratamentulboală cronică de rinichi(CKD) - anemie asociată prin stabilizarea factorului inductibil de hipoxie (HIF), crescând astfel eritropoietina și, în consecință, eritropoieza. Cu toate acestea, îngrijorarea pentru progresia CKD trebuie abordată în studiile clinice. Deși studiile preclinice au arătat un efect antiinflamator înrinichimodele de boală, efectul inhibitorilor PHD asuprarinichifibrozăa fost inconsecventă, probabil, deoarece efectele HIF sunt dependente de tipul de celule și de context. MaiorulrinichiCelulele producătoare de eritropoietină sunt pericite care produc eritropoietină prin transcripția genei dependente de HIF-2a. Preocuparea pentru impactul HIF în pericite asuprarinichifibrozăapare din faptul că pericitele sunt celulele precursoare majore ale miofibroblastelor în CKD. Deoarece celulele care exprimă Gli1 îndeplinesc criteriile morfologice și anatomice pentru pericite, am indus Gli1 plus stabilizarea HIF specifică celulei sau knockout pentru a studia impactul HIF în pericite asuprarinichipatologia șoarecilor cu sau fără leziune fibrotică indusă de obstrucția ureterală unilaterală. În comparație cu martorii, șoarecii cu stabilizare HIF specifică pericitului datorită proteinei von Hippel-Lindau sau knockout PHD2 au arătat o creștere a eritropoietinei serice și policitemie mai degrabă decât o diferență vizibilă înrinichifibroză. Comparativ cu Gli1la care se adaugapericitele sortate din martori littermate, Gli1la care se adaugapericitele sortate de la șoarecii knockout PHD2 au arătat o expresie crescută a genei eritropoietinei, mai degrabă decât modificări vizibile în expresia Col1a1 sau Acta2. Mai mult, knockout-ul specific pericitului HIF-1a sau HIF-2a nu a afectatrinichifibroză. Astfel, studiul nostru susține absența efectelor negative ale inhibitorilor PHD asuprarinichifibrozăde șoareci în ciuda stabilizării HIF în pericite.
CUVINTE CHEIE: eritropoietina;fibroză; factor inductibil de hipoxie; pericit
Cistancheeste bun pentrurenalfuncţie
Declarație translativă
Inhibitorii enzimei din domeniul prolil hidroxilazei (PHD) sunt eficienți în tratamentul anemiei încronicrinichiboala(CKD) prin factorul stabilizator inductibil de hipoxie (HIF), crescând astfel eritropoietina (EPO) și eritropoieza. Pericitele renale produc EPO prin HIF-2a în fiziologia normală, dar se diferențiază de miofibroblastele producătoare de cicatrici în CKD. Nu este clar dacă expresia HIF în pericitele renale are impactrenalfibroză. Prin modele murine preclinice de manipulare HIF și fibroză renală, arătăm că manipularea HIF specifică Gli1 plus pericit afectează producția de EPO și eritropoieza, dar nu.fibroza renala. Studiul nostru susține absența efectelor negative ale inhibitorilor PHD asupra fibrozei renale.
Principalul tratament pentru anemie la pacienții cucronicrinichiboala(CKD) sunt agenți de stimulare a eritropoiezei și suplimente de fier. 1,2 Recent, inhibitorul enzimei din domeniul prolil hidroxilazei (PHD) apare ca un agent terapeutic promițător pentru anemia asociată cu CKD, în principal prin stabilizarea factorului inductibil de hipoxie (HIF) și prin creșterea producției de eritropoietină (EPO).3–5. aplicarea inhibitorilor PHD sau a stabilizatorilor HIF la pacienții cu CKD este iminentă în viitorul apropiat dacă există preocupări cu privire la posibila angiogeneză, creșterea tumorii, metabolismul anormal al glucozei și scăderea accelerată arinichifuncția trebuie abordată în studiile clinice.
HIF este cea mai importantă mașină celulară de detectare a oxigenului.6,7 HIF-ul funcțional constă din subunități a și b. HIF-a este o subunitate labilă la oxigen care este rapid degradată într-o stare normoxică în prezența cofactorilor. HIF-b nu este reglat de tensiunea oxigenului. Degradarea HIF-a este precedată de hidroxilare și poliubiquitinare a prolinei. Hidroxilarea prolinei este catalizată de PHD în prezența oxigenului, fierului și 2-oxoglutaratului ca cofactori. Poliubiquitinarea este apoi catalizată de o ubiquitin ligază E3 compusă din complexul proteinei von Hippel Lindau (pVHL)-Elongin BC-CUL2. Nevoia de fier, PHD și pVHL pentru degradarea HIF face posibilă stabilizarea HIF în stare normoxică cu inhibarea sau scăderea oricăreia dintre aceste componente cheie.
Pericitele renale sunt încorporate în membrana bazală microvasculară și în contact strâns cu celulele endoteliale pentru a susține microvasculatura și a regla fluxul sanguin.8–13 Am raportat că pericitele renale sunt celule producătoare de EPO renale (REPC) care produc EPO prin HIF{{3 }}a-dependentă de transcripție a genei indusă de anemie sau hipoxie.14 S-a demonstrat că pericitele sunt sursa majoră de miofibroblaste producătoare de cicatrici în CKD,8,10,11,15,16, o constatare susținută de alte rapoarte independente.17, 18 Deși tranziția la miofibroblaste duce la reprimarea transcripției Epo, supraexprimarea HIF-2a restabilește parțial producția de EPO în miofibroblaste.14,17.
Studiile noastre au arătat căfibroza renalapoate fi atenuat prin întreruperea tranziției pericit-miofibroblast prin blocarea farmacologică a factorului de creștere transformator-b, 19 factor de creștere derivat din trombocite, 20 factor de creștere endotelial vascular, 21 sau căile WNT/b-cateninei.22
În ceea ce privește preocuparea pentru declinul accelerat alrinichifuncționarea la pacienții aflați sub tratament cu inhibitori PHD, se cunosc puține despre efectele activității HIF în pericite sau miofibroblaste asuprafibroza renala.23 În schimb, efectele supraexprimării HIF sau knockout-ul asuprafibroza renalaau fost studiate pe larg, fie neselectiv24–27, fie selectiv în celulele tubulare,28,29 celule endoteliale30 și podocite.31,32 Cu toate acestea, rezultatele au fost inconsecvente, probabil, deoarece efectele HIF sunt dependente de tipul de celule și de context.
Studiile in vitro folosind fifibroblaste renale umane izolate33 și celule interstițiale medulare renale de șobolan34 au sugerat un rol profibrotic al HIF-1a. Cu toate acestea, Souma și colab.17 au raportat că knockout-ul concomitent al PHD1, PHD2 și PHD3 în REPC-urile șoarecilor Tg(Epo-Cre) care exprimă recombinaza Cre sub controlul promotorului Epo nu afectează.fibroza renalaîn modelul obstrucţiei ureterale unilaterale (UUO). Cu toate acestea, expresia renală a Epo este scăzută și dimensiunea grupului de REPC este mică într-o stare de echilibru fără hipoxie sau anemie,35 sugerând că transgena Epo-Cre definește doar o mică fracțiune din REPC totale. Recent, celulele renale care exprimă Gli1-s-au dovedit a fi pericite și se diferențiază în miofibroblaste perinichileziunea.11,36 Ablația celulelor Gli1 plus ameliorează indusă de UUOrenalfibroză.11 Aici am folosit șoareci cu recombinază Cre sub controlul promotorului/amplificatorului Gli1 pentru a studia efectele stabilizării HIF specifice pericitului sau ale knockout-ului asuprarfibroza enalului.
cistanche este bun pentrurinichi
METODE
Șoareci
Gli1CreERT2/ plus, Tg(UBC-CreERT2), VhlF/F,ROSA26fstdTomato/fstdroșie, Hif1aF/Fși Hif2aF/F șoarecii au fost achiziționați de la Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Egln1F/F șoarecii au fost oferiți cu amabilitate de profesorul Guo-Hua Fong (Centrul de sănătate al Universității din Connecticut, Farmington, CT). Toate studiile au fost efectuate conform unui protocol aprobat de Comitetul instituțional pentru îngrijirea și utilizarea animalelor, Colegiul de Medicină al Universității Naționale din Taiwan (IACUC 20160499).
Obstrucție ureterală unilaterală
Procedura fusese detaliată într-un studiu anterior.14 Pe scurt, la șoarecii adulți cu vârsta cuprinsă între 7 și 9 săptămâni sub anestezie cu ketamina/xilazină (ketamină 100 mg/kg, xilazină 10 mg/kg), ureterele șoarecilor au fost expuse și legate cu sutură de nailon printr-o incizie pe flancul stâng. Data intervenției chirurgicale UUO a fost identificată ca fiind ziua 0 a experimentului.
analize statistice
Datele au fost exprimate ca mediela care se adaugaSD. Analizele statistice au fost efectuate folosind GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Semnificația statistică a fost determinată de testul t Student sau testul U Mann-Whitney, așa cum se arată în subtitrări.
Metode suplimentare
Metode complete, inclusiv șoareci, UUO, administrare de tamoxifen, reacție cantitativă a polimerazei în lanț, imunoblot, imunohistochimie, hibridizare ARN in situ, microscopie, citometrie în flux și izolarea celulelor Gli1 plus renale sunt în Metodele suplimentare.
REZULTATE
Creșterea producției de EPO și a eritropoiezei la șoareci cu Gli1 plus Knockout PHD2 specific pericitului
Pentru a demonstra că Gli1 plus pericitele au produs EPO înainte de a ne îndrepta spre studiul efectului manipulării HIF specifice pericitului asuprafibroza renala, am generat Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fșoarecii pentru a induce knockout PHD2 în Gli1 plus pericite în mod condiționat (Figura 1a). Comparativ cu littermate Egln1F/Fsoareci, Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fșoarecii au prezentat un nivel mai ridicat de EPO seric (Figura 1b), greutate mai mare a splinei (Figura 1c), mai mult TER-119la care se adaugadescendența eritroidică în splenocite până în ziua 14 după tamoxifen (Figura 1d), dar o modificare similară a greutății corporale după administrarea tamoxifenului (Figura suplimentară S1A). Hematocritul (Hct) a fost mai mare în Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fșoareci în ziua 21 (Figura 1e). Am analizat ARNm Epo renal și hemograma periferică la 14 zile după tamoxifen. Comparativ cu littermate Egln1F/Fsoareci, Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fșoarecii au crescut expresia Epo renală (Figura 1f) și reticulocitele periferice (Figura 1g), în timp ce numărul de globule albe periferice și numărul de trombocite nu au fost diferite (Figura suplimentară S1B și C). Pentru a identifica celulele renale responsabile de expresia Epo, am efectuat hibridizarea in situ a Epo perinichisecțiuni din Egln1F/F și Gli1CreERT2/la care se adauga; Egln1F/Fșoareci (Figura suplimentară S2A-F). Creșterea celulelor interstițiale care exprimă Epo ar putea fi identificată în principal în joncțiunea corticomedulară și, într-o măsură mai mică, în medularul și cortexul intern din Gli1.CreERT2/la care se adauga; Egln1F/Fsoareci. Aceste rezultate au sugerat că Gli1 plus knockout-ul PHD2 specific pericitului a indus producția de EPO renală și eritropoieza.
Pentru a determina dacă PHD2 reglează producția de EPO în tipuri de celule și organe, altele decât pericitele dinrinichi, am generat Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fșoarecii pentru a induce knockout global PHD2 (Figura suplimentară S3A). După administrarea tamoxifenului, knockout-ul genei Egln1 înrinichi, ficatul, splina, inima și plămânul ar putea fi detectate (Figura suplimentară S4). Înrinichi, expresia ARNm Egln1 a scăzut la 4 procente, indicând o eficiență ridicată a knockout-ului PHD2 (Figura suplimentară S3B). Ca în Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fşoareci, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fșoarecii au prezentat o creștere progresivă a Hct în comparație cu littermate Egln1F/Fșoareci (Figura suplimentară S3C). În special, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fșoarecii au prezentat o scădere a greutății corporale (Figura suplimentară S3D). Un nivel remarcabil de ridicat de EPO seric, în jur de 130,000 pg/ml, a fost găsit în Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F șoareci, care a fost mult mai mare decât cea obținută prin flebotomie (mai puțin de 5, 000 pg/ml) la șoarecii de tip sălbatic (Figura suplimentară S3E). Pentru a identifica sursa de EPO seric, am verificat nivelurile de ARNm Epo în diferite organe din Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F,şi şoarecii de control al lui littermate în ziua 15. La şoarecii de control al lui littermate, ARNm Epo a fost greu detectat în niciun organ. În 5 organe majore (rinichi, ficat, plămân, inimă, splină) de Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F soareci, doarrinichia arătat o creștere remarcabilă a ARNm Epo, ceea ce implicărinichica sursă majoră de EPO seric (Figura suplimentară S3F și G). Hibridizarea in situ a ARNm Epo perinichisecțiunile au arătat că celulele renale cu expresie Epo au fost celule interstițiale cu morfologie pericită în Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fșoareci (Figura suplimentară S5). Prin urmare, aceste date au confirmat că Gli1 renal plus pericitele au produs EPO la knockout PHD2, crescând astfel eritropoieza și Hct.
Gli1 plus knockout-ul pVHL specific pericitului duce la policitemie, dar nu are efect asupra fibrozei renale
În conformitate cu rapoartele anterioare,11,36 a crescut Gli1la care se adaugapericitele au fost prezentate în joncțiunea corticomedulară și medulară după leziunea UUO în Gli1CreERT2/la care se adauga; ROSA26fstdTomato/ fstdTomatoȘoareci reporter (Figura suplimentară S6), sugerând că Gli1 plus pericitele proliferează și contribuie considerabil la miofibroblaste în timpulfibroza renala.Prin urmare, am studiat efectul stabilizării HIF sau al knockout-ului în Gli1la care se adaugapericitele pefibroza renala.
Am folosit șoareci cu Gli1la care se adaugaKnockout specific pericit al pVHL, nu PHD2 din cauza posibilei redundanțe în 3 PHD diferite. Pentru a investiga efectul pe termen lung al stabilizării HIF specifice pericitului asuprarinichila șoareci fără CKD, Gli1CreERT2/la care se adauga; VhlF/Fşoareci, şi VhlF/Fcolegilor litierului li s-a administrat tamoxifen la vârsta de 6 săptămâni și apoi observați până la vârsta de 30 de săptămâni (Figura suplimentară S7A). O moarte neașteptată în Gli1CreERT2/la care se adauga; VhlF/Fșoarecii au avut loc la vârsta de 25 de săptămâni (rata de mortalitate de 14,3 la sută), dar nu au existat decese în VhlF/Ftovarăşi. Slăbiciune și scăderea creșterii în greutate corporală au fost găsite în Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fșoareci încă de la vârsta de 16 săptămâni (Figura suplimentară S7B). Din cauza slăvirii și a morții neașteptate, unii șoareci au fost eutanasiați înainte de vârsta de 30 de săptămâni. Patologia a evidențiat eritropoieza severă difuză în splină și congestia globulelor roșii din ficat, plămâni șirinichila vârsta de 18 săptămâni (Figura suplimentară S8). Cu excepția congestiei globulelor roșii, nu se observăfibrozăa fost observată în organe majore inclusivrinichi. Nivelurile de Hct și EPO seric au crescut la 87 plus -2,6 la sută și 1604 plus -141 pg/ml la vârsta de 30 de săptămâni (adică, la 24 de săptămâni după tamoxifen) (Figura suplimentară S9A și B)
Din cauza lipsei de discernământfibroza renalala șoareci cu Gli1 plus knockout pVHL specific pericitului, am indus UUO la șoareci și am evaluat severitatea fibrozei renale 7 sau 14 zile mai târziu (Figura 2a). Alelele Vhl șterse în Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fşoarecii au fost detectaţi înrinichiADN genomic prin reacția în lanț a polimerazei, indicând eliminarea pVHL în pericite (Figura suplimentară S10). Hct a fost crescută în Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fșoareci chiar și după operația UUO (Figura 2b). În special, expresia ARNm EPO a fost crescută atât în contralateral, cât și în UUOrinichide Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fșoarecii (Figura 2c), sugerând că stabilizarea HIF ar putea activa transcripția Epo atât în pericite, cât și în miofibroblaste. Cu toate acestea, nicio diferență înfibroza renalaintre Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fși tovarășul VhlF/F șoarecii au putut fi detectați, măsurat prin zona colorată cu roșu picrosirius (Figurile 2d și 3a și b) și expresia ARNm Col1a1 (Figura 2e) înrinichi. În plus, ARNm și nivelurile de proteine ale actinei a-musculare netede nu au fost diferite înrinichi(Figura 2f și g și Figura suplimentară S11). Pentru a confirma că miofibroblastele și-au păstrat capacitatea de exprimare a Epo după knockout pVHL, am efectuat hibridizarea in situ a Epo și Acta2 perinichisecțiuni (Figurile suplimentare S12 și S13). Expresia renală Acta2 a crescut drastic și comparabil după leziunea UUO în ambele Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fși VhlF/Fsoareci. Mai multe celule interstițiale care exprimă Epo au putut fi observate în Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fsoareci decat in VhlF/F șoareci, indiferent de prezența leziunii UUO. În plus, celulele cu expresia concomitentă a Acta2 și Epo ar putea fi identificate în UUOrinichidin Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fsoareci dar nu VhlF/Fsoareci. De fapt, cu greu am putut identifica celule care exprimă Epo în UUOrinichide la VhlF/Fsoareci. Aceste rezultate au sugerat că Gli1 plus knockout-ul pVHL restricționat de pericite au promovat expresia Epo, dar nu diferențierea miofibroblastelor sau producția de colagen chiar și după leziunea UUO.
Deoarece leziunea UUO are ca rezultat deteriorarea celulelor tubulare proximale și recrutarea macrofagelor, nivelurile ARNm de Havcr1 (codificarea)37rinichimolecula de leziune-1) (Figura 4a) și Adgre1 (codând factorul de creștere endotelial care conține un modul de tip receptor de hormon asemănător mucinei 1, cunoscut și ca F4/80) (Figura 4b) a crescut în UUOrinichi, dar nu a putut fi detectată nicio diferență între Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fși tovarășul VhlF/F soareci. Nivelurile de ARNm de Vegfa, Hmox1, Egln1 și Egln3 (codifică factorul de creștere A celulelor endoteliale vasculare, hemoxigenază-1, PHD2 și, respectiv, PHD3) înrinichinu au fost modificate (Figura 4c–f), reflectând probabil că aceste transcrieri nu au fost produse în mod predominant de Gli1 plus pericite sau nu au fost modificate după knockout VHL cu Gli1 plus pericite restricționate. Am evaluat leziunea tubulointerstițială în acid periodic colorat cu Schiffrinichisecțiuni și nu a fost detectată nicio diferență între Gli1-CreERT2/ plus; VhlF/F,și tovarășul VhlF/Fșoareci (Figurile 4g și 5a și b). Deoarece se raportează că tamoxifenul se atenueazăfibroză,38,39 am prelungit perioada de eliminare dintre ultima administrare de tamoxifen și intervenția chirurgicală UUO de la 2 săptămâni la 4 săptămâni (Figura suplimentară S14A). Din nou, nu a fost detectată nicio diferență între Gli1CreERT2/ plus; VhlF/F și tovarășul VhlF/F șoareci (Figura suplimentară S14B-E). Aceste constatări au indicat că Gli1 plus knockout-ul pVHL specific pericitului duce la producerea de EPO și policitemie, dar nu are niciun efect asuprarenalfibroză.
cistanche este bun pentrurinichi
Gli1 plus knockout-ul PHD2 specific pericitului crește producția de EPO, dar nu și producția de colagen sau diferențierea miofibroblastelor
Pentru a confirma efectele stabilizării HIF în Gli1 plus pericite la nivel celular, am sortat celulele tdTomato plus dinrinichide Gli1CreERT2/ plus; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoși Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoșoareci după rănirea UUO (Figurile suplimentare S15 și S16). La examinare microscopică, celulele sortate au emis fluorescență portocalie-roșu la excitare (Figura suplimentară S17A-C). Comparativ cu cei de la Gli1CreERT2/ plus; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoșoareci, nivelul ARNm Egln1 în tdTomato plus celule sortate din contralateral și UUOrinichide Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoșoarecii la 7 zile după rănirea UUO s-au redus la 46 la sută și, respectiv, la 33 la sută (Figura suplimentară S17D și E).
Am analizat nivelurile de ARNm de Epo, Col1a1, Col3a1 și Acta2 în tdTomato plus Gli1 plus pericite din Gli1.CreERT2/ plus;ROSA26fstdTomato/fstdTomatoși Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatosoareci. În conformitate cu rezultatele obținute de la șoareci cu knockout pVHL specific pentru Gli1 plus pericite, knockout PHD2 în Gli1 plus pericite a dus la o expresie crescută a Epo, dar nu a avut niciun efect asupra expresiei Col1a1, Col3a1 și Acta2 la nivel celular (Figura 6) , confirmând efectul neutru al stabilizării HIF asupra proprietăților profibrotice ale pericitelor/miofibroblastelor.
Knockout-ul HIF specific pericitului Gli1+ nu afectează fibroza renală
Deoarece aceste experimente au confirmat efectul neutru al stabilizării HIF asupra proprietăților profibrotice ale pericitelor/miofibroblastelor, am generat Gli1CreERT2/plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F șoareci pentru a studia efectul knockout-ului HIF în pericite/miofibroblaste asuprafibroza renala(Figura 7a). Ștergerea lui Hif1a și Hif2a înrinichiar putea fi detectat înrinichiADN genomic după administrarea tamoxifenului (Figura suplimentară S18). În comparație cu controlul littermate, Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F șoarecii au avut o modificare similară a greutății corporale și a nivelului de Hct la 7 zile după UUO (Figura 7b și c). În ceea ce priveștefibroza renala, nu a putut fi detectată nicio diferență în zona colorată cu roșu picrosirius, nivelurile de ARNm ale Col1a1 și Acta2 înrinichi(Figura 7d–f). Nivelurile de ARNm ale Havcr1 și Adgre1 nu au fost, de asemenea, diferite (Figura 7g și h). Am modificat doza și perioada de eliminare a tamoxifenului (Figurile suplimentare S19A și S20A), iar rezultatele pentru depunerea de colagen și expresia genelor au fost similare (Figurile suplimentare S19B-E, S20B-E). Am repetat experimentele în Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F(Figura 8a–c) și Gli1- CreERT2/ plus ; Hif2aF/F(Figura 8d–f) șoareci și nu au demonstrat diferența indusă de UUOfibroza renalaîn comparație cu controlul colegului.
DISCUŢIE
Principalele constatări ale acestui studiu au inclus următoarele: (i) gli1 renal plus stabilizarea HIF specifică pericitului a condus la producerea de EPO și eritropoieza, dar niciun efect asupra patologiei rinichilor cu sau fără leziune UUO; și (ii) Gli1 renal plus HIF-1a și HIF-2knock-out specific pericitului nu au afectatfibroza renalafie.
Am raportat anterior că Foxd1 renal plus pericitele derivate din progenitor sunt REPC și reglementate de HIF-2a. 14 În acest studiu, am arătat că celulele renale Gli1 plus sunt, de asemenea, REPC. Deși nicio dovadă directă nu explică relația dintre FOXD1 și GLI1 în pericite, studiile anterioare au arătat că atât celulele renale Foxd1 plus celulele progenitoare, cât și celulele Gli1 plus sunt pericite și sunt capabile să se diferențieze de miofibroblaste în cazul leziunii.10,11,36. datele au arătat că eliminarea PHD2 sau pVHL în mod specific în Gli1 plus pericite a dus la creșterea producției renale de EPO, eritropoieza și policitemie, ceea ce este în conformitate cu un raport recent al lui Greenwald și colab.40 În plus, în comparație cu o scădere marcată a Epo. expresia în rinichiul UUO al tovarășilor de tip sălbatic, expresia Epo în rinichiul UUO la șoareci cu knockout pVHL specific Gli1-a fost comparabilă cu nivelul afișat în controlateralul de controlrinichi, susținând stabilizarea HIF ar putea depăși mecanismul de reprimare a EPO în miofibroblastele fibrotice de rinichi.14,17 În conformitate cu descoperirea noastră, Souma și colab.17 au raportat că sinteza EPO este restabilită în UUO-rinichimiofibroblaste la șoareci cu knockout PHD2. În corespondență cu constatările noastre, un studiu foarte recent41 a raportat că celulele renale Gli1 plus sunt o subpopulație de receptor-b a factorului de creștere derivat din trombocite plus REPC și păstrează capacitatea de producere a EPO în UUO.rinichi.
Studiile clinice au dovedit eficacitatea inhibitorilor PHD în tratamentul anemiei asociate cu CKD.3–5,42–45 Este important că analizele grupate ale studiilor de fază III cu roxadustat au demonstrat un rezultat cardiovascular neinferior sau chiar mai bun.46 Cu toate acestea, nici un rezultat formal raportul privind efectul inhibitorilor PHD asupra progresiei CKD a fost lansat până acum. Experimental, rolul hipoxiei și HIF înfibroza renalaeste controversată.47,48 La șoarecii supuși unei leziuni renale acute (AKI) induse de leziuni de ischemie-reperfuzie, Kapitsinou și colab.24 au demonstrat că inhibarea PHD înainte de AKI se amelioreazăfibroză, în timp ce inhibarea în faza de recuperare timpurie a AKI nu. Mai mult, Uchida et al.26 au demonstrat că inhibitorul PHD se poate ameliorafibroza renalaîn asociere cu reducerea citokinelor proinflamatorii și restabilirea densității capilare în rinichiul unui model de CKD de șobolan indusă de nefrectomie subtotală 5/6, deși nu este demonstrat niciun efect asupra proteinuriei și a nivelului creatininei serice. În schimb, un raport recent a arătat că inhibitorul PHD contribuie la policitemie și atenuarea nefritei tubulointerstițiale, dar nu are niciun efect asupra fibrozei renale într-un model de nefrită tubulointerstițială cronică indusă de adenină.25 A fost, de asemenea, demonstrat efectul antiinflamator al inhibitorilor PHD. în rinichiul unui model murin de diabet zaharat de tip 2 obez.27 Dacă inhibitorii PHD ameliorează fibroza renală prin atenuarea inflamației interstițiale justifică studii suplimentare. Deși aceste studii nu au raportat efectele inhibitorilor PHD asupra activării miofibroblastelor renale, absența unui efect negativ asupra fibrozei renale ar putea susține efectul ignorabil al expresiei HIF asupra producției de colagen în pericitele renale. Evaluarea efectului HIF asupra rinichilor este sofisticată.49 În primul rând, diferite tipuri de celule pot exprima diferite izoforme HIF.50 În al doilea rând, chiar și aceeași izoformă HIF poate regla gene țintă diferite în diferite tipuri de celule.51 În al treilea rând, expresia și reglarea HIF în starea fiziologică poate fi diferită de rinichiul bolnav.50 În plus, degradarea rapidă a HIF în condiții normoxice crește dificultatea analizelor inexacte ale nivelurilor de proteine HIF în țesut.52 Prin urmare, rezultatele inconsecvente anterioare privind efectul asupra fibrozei renale sunt probabil deoarece efectele HIF sunt dependente de tipul celular și de context. De exemplu, dovezile au arătat că inhibitorul PHD înainte de AKI indusă de leziuni de ischemie-reperfuzie ameliorează fibroza post-AKI printr-un mecanism endotelial dependent de HIF-2a24,30, în timp ce inflamația dependentă de HIF-1a , fibroză și displazie a celulelor renale au fost găsite în Tg(Hoxb7-Cre); VhlF/Fșoareci care au pVHL knockout în canalele colectoare și un subset de tubuli distali.fibroza renala,am demonstrat că producția de EPO a crescut substanțial în pericitele renale la șoareci cu stabilizare HIF specifică Gli1 plus pericit prin knockout-ul pVHL sau PHD2 specific celulei și, în special, expresia Epo a fost menținută în miofibroblastele UUO-renichi. Cu toate acestea, nu am descoperit că stabilizarea HIF specifică pericitului a afectat tranziția pericit-miofibroblast, producția de colagen în miofibroblaste sau indusă de UUO.rinichifibroză. Mai mult, expresiile Havcr1 și Adgre1 nu au fost afectate în rinichiul UUO, ceea ce implică faptul că severitatea leziunii tubulare renale și inflamația renală nu au fost afectate la șoarecii cu stabilizare HIF specifică pericitului. Deoarece miofibroblastul este tipul de celule producătoare de cicatrici în timpulfibroza renala, rezultatele noastre pot furniza dovezi experimentale pentru absența efectului negativ al stabilizării HIF de către inhibitorii PHD asupra fibrozei renale. În conformitate cu studiul nostru, Souma și colab.17 au raportat de asemenea căfibroza renalanu este afectat de knockout concomitent al PHD1, PHD2 și PHD3 în REPC-urile șoarecilor Tg(Epo-Cre).
cistanche este bun pentrurenal
În studiul nostru, Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/F șoarecii au fost caracterizați atât prin creșterea producției de EPO endogen, cât și prin policitemie. Dacă nivelul crescut de EPO seric al policitemiei afecteazăfibroza renalaeste controversat. Există studii extinse privind efectele EPO recombinată exogenă asupra AKI sau CKD.53–57 În studiile anterioare, se raportează că EPO recombinată în doze mari provoacă policitemie, hipertensiune arterială și deteriorarea funcției renale.56,58 Interesant, unele studii au relevat. acel analog EPO exogen în doză mică, cât să nu inducă eritropoieza, are ca rezultat efecte renoprotectoare în restulrinichiși modele de șoareci db/db.59,60 În plus, s-a demonstrat că flebotomia pentru normalizarea policitemiei ameliorează albuminuria crescută la șoarecii db/db supuși la doze mari de analog EPO exogen.60 Într-o cohortă clinică de pacienți cu policitemie vera, un boală caracterizată prin policitemie fără EPO endogen crescut61, frecvența CKD (definită ca rata de filtrare glomerulară estimată<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2/ plus; VhlF/F șoarecii supuși leziunii UUO, datele noastre au arătat o expresie crescută a Epo renală și policitemie, dar nicio modificare afibroza renala, inflamație și leziuni tubulare. Prin urmare, efectele generale ale stabilizării HIF specifice pericitului asupra leziunii renale, inflamației și fibrozei au fost neutre, susținând siguranța inhibitorilor PHD în progresia CKD. Pericitele renale pot fi definite ca o populație eterogenă de fibroblaste în contact strâns cu celulele endoteliale dinrinichi.8–13 Din cauza complexității dezvoltării64,65, a funcției biologice eterogene8,11–13,23 și a reglării diferențiale PHD și HIF,17,41,66 markerul genetic optim pentru pericitele renale nu a fost încă definit. Celulele Gli1 plus îndeplinesc criteriile morfologice și anatomice pentru pericite. După leziunea UUO, celulele renale Gli1 plus proliferează și se diferențiază în miofibroblaste. Celulele renale Gli1 plus au reprezentat aproximativ 45% din totalul de miofibroblasti renali, iar ablația celulelor renale Gli1 plus a redusfibroza renala.11,36 Am fost conștienți de faptul că celulele Gli1 plus renale sunt o subpopulație de receptori ai factorului de creștere derivat din trombocite – b plus celule11,36,41 și că efectele manipulării genetice restricționate de Gli1 plus periciți pot fi mascate de alte fibroblaste. Cu toate acestea, experimentele noastre pe celule Gli1 plus renale sortate au demonstrat că stabilizarea HIF a putut crește Epo, dar nu și expresia colagenului sau Acta2 la nivel celular. Nu putem exclude posibilitatea ca stabilizarea HIF condusă de alți markeri periciți să aibă rezultate diferite. Șoarecii cu recombinaza Cre este condusă de promotorul Col1a1, Foxd1 sau Pdgfrb nu au fost folosiți pentru a defini pericitele în acest studiu, deoarece recombinaza lor Cre este activă și în podocitele glomerulare,8 celulele mezangiale glomerulare,67 celulele musculare netede vasculare68 și, probabil, unele tubulare. celulele epiteliale.69 S-a raportat că knockout-ul pVHL în podocite și celulele tubulare induc patologii renale, cum ar fi glomerulonefrita semilună31 și chisturile renale.70 În plus, am folosit Cre inductibil pentru a elimina PHD2 sau pVHL după vârsta de 5 săptămâni, deoarece Foxd1 este exprimat în embrion. S-a demonstrat că stadiul și knockout-ul fie pVHL, fie PHD2 în pericitele care exprimă Foxd1-deteriorează nefrogeneza.71,72.
În celule renale Gli1 plus sortate cu knockout PHD2 folosind Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoșoareci, am observat o creștere semnificativă a expresiei ARNm Epo celular, dar nu Col1a1 sau Acta2. Creșterea de 50-ori a ARNm Epo a confirmat supraexprimarea HIF în Gli1 renal sortat plus pericite cu knockout PHD2. În plus, knockout-ul pVHL sau PHD2 in vivo în Gli1 plus pericite a condus la creșterea expresiei renale a Epo și policitemie, dar nufibroza renala. Credem că dacă moleculele HIF din aval din pericite sunt afectatefibroza renala, s-ar observa în studiul nostru. Efectele inactivării PHD2 asupra stabilizării HIF pot fi mascate de redundanța biologică a PHD1 și PHD3. Cu toate acestea, am observat efecte consistente asupra producției de EPO și colagen în Gli1 plus pericite, fie cu pVHL, fie cu knockout PHD2, susținând în continuare stabilizarea HIF în pericite promovează eritropoieza, dar nu.fibroză. Nu am putut genera Gli1CreERT2/ plus;VhlF/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatosoareci prin crucea lui Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fsi ROSA26fstdTomato/fstdTomatoșoareci, deoarece atât Vhl, cât și ROSA26 sunt localizate pe cromozomul 6.
Am folosit UUO ca arinichimodel de leziune pentru a investiga efectele manipulării specifice pericitului a HIF asuprafibroza renaladeoarece în modelul UUO majoritatea pericitelor Gli1 plus s-au diferențiat la miofibroblaste și ablația celulelor Gli1 plus a ameliorat fibroza renală.11,36 Modelul UUO a fost, de asemenea, utilizat cu succes pentru a demonstra modificările producției de colagen și EPO în timpul tranziției pericit-miofibroblast de către grupul nostru și altele.14,17,41 Cu toate acestea, UUO are propriile sale limitări ca model CKD și constatările noastre din acest studiu pot să nu fie generalizate la alte modele CKD. Studiile viitoare sunt justificate pentru a testa efectele manipulării HIF specifice pericitului în diferite modele CKD.
În concluzie, am demonstrat că stabilizarea Gli1 plus HIF specifică pericitului crește EPO, eritropoieza, dar nu a afectatfibrozăla modelele cu sau fără leziuni UUO. La nivel celular, stabilizarea Gli1 plus HIF specifică pericitului crește expresia Epo, dar nu o expresie a Col1a1, Col3a1 și Acta2. Knockout-ul HIF specific pericitului nu a afectatfibroza renala, fie. Aceste rezultate oferă dovezi experimentale pentru absența efectelor negative ale inhibitorilor PHD asupra fibrozei renale și progresiei CKD.
Cistanche pentru imbunatatirerinichifuncţie
DEZVĂLUIRE
Toți autorii au declarat că nu există interese concurente.
MULȚUMIRI
SYP este susținut de Ministerul Științei și Tehnologiei (granturi 106-2314-B{-418-006, 107-2314-B-418-001 și 108-2314-B{-418-004) și Spitalul Memorial din Orientul Îndepărtat (acordă 2017-C-037 și 2020-C{- 037). SLL este sprijinit de Ministerul Științei și Tehnologiei (granturi 108-2314-B-002-078-MY3 și 109-2314-B{-002-260), Institutul Național de Cercetare în Sănătate (grant EX{108-10633 SI), Spitalul Universitar Național din Taiwan (NTUH; granturi 108-T16 și 109-T16), NTUH și NTU College of Medicine (grant NSCCMOH-131-43), doamna Hsiu-Chin LeeRinichiFundația de cercetare și Fundația pentru sănătate din Taiwan.
Mulțumim profesorului Guo-Hua Fong (Centrul de sănătate al Universității din Connecticut) pentru Egln1F/Fsoareci; Dr. Yi-Ting Tsai (Colegiul de Medicină NTU) pentru examinarea patologică a Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fși VhlF/Fsoareci; și Departamentul de Cercetare Medicală al NTUH, Centrul de sortare și imagistică a celulelor din primul laborator principal, Centrul de bază pentru modelul de șoarece transgenic și Laboratorul de bază al șoarecelui Gene Knockout al Colegiului de Medicină NTU pentru suport pentru echipamente și asistență tehnică.
CONTRIBUȚIILE AUTORILOR
SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC și WCC au efectuat experimente și au analizat datele. SYP, YLC, TH, YMC și TSC au participat la proiectarea experimentului și la analiza datelor. SLL a proiectat și a condus proiectul. SYP și SLL au scris manuscrisul.
MATERIAL SUPLIMENTAR
Fișier suplimentar (PDF)
Metode suplimentare.
Figura S1. Greutatea corporală, numărul de globule albe periferice și numărul de trombocite nu s-au modificat la șoarecii cu knockout PHD2 specific pericitului.
Figura S2. Imagini reprezentative ale ARNm Epo detectate prin hibridizarea ARN in situ înrinichide Egln1F/F și Gli1CreERT2/þ; Egln1F/F soareci. Figura S3. Knockout global PHD2 promovează producția de EPO și
eritropoieza.
Figura S4. Analiza PCR a ADN-ului genomic extras dinrinichi, ficat, splină, inimă și plămân în Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F și șoareci de control al littermate.
Figura S5. Imagini reprezentative ale ARNm Epo detectate prin hibridizarea ARN in situ înrinichide șoareci Egln1F/F.
Figura S6. Imagini reprezentative ale pericitelor Gli1 în CLK și UUOrinichidupă rănirea UUO.
Figura S7. Efectele pe termen lung ale stabilizării HIF specifice pericitului în
Șoareci Gli1CreERT2/þ;VhlF/F.
Figura S8. Raport de patologie a Gli1CreERT2/ plus ; Șoareci VhlF/F.
Figura S9. Creșterea hematocritului și a nivelurilor serice de EPO în Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fsoareci.
Figura S10. Analiza PCR arinichiADN genomic după inducerea tamoxifenului.
Figura S11. Imagini complete cu gel pentru imunobtajarea a-SMA și a[1]tubulinei.
Figura S12. Expresia renală Epo și Acta2 în VhlF/F și Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/Fșoareci la 7 zile după leziunea UUO.
Figura S13. Expresia renală Epo și Acta2 în VhlF/F și Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/Fșoareci la 14 zile după leziunea UUO.
Figura S14.Fibroza renalaîn modelul de eliminare extinsă a tamoxifenului.
Figura S15. Schema experimentală pentru etichetarea celulelor Gli1þ renale cu tdTomato.
Figura S16. Strategia de trecere pentru sortarea celulelor renale tdTomatoþ.
Figura S17. Validarea expresiei tdTomato și ștergerea Egln1 în celulele renale sortate tdTomato.
Figura S18. Analiza PCR arinichiADN genomic din Gli1CreERT2/ plus ; Hif1aF/F; Hif2aF/Fiar partenerul Hif1aF/F; Hif2aF/Fcontrolul șoarecilor după administrarea tamoxifenului.
Figura S19. UUO indusfibroza renalaîn Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/Fșoareci după o doză mare și o perioadă scurtă de eliminare de tamoxifen.
Figura S20. UUO indusfibroza renalaîn Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F șoareci după jumătate de doză și o perioadă prelungită de eliminare a tamoxifenului.
Tabelul S1. Primeri utilizați pentru genotipare.
Tabelul S2. Primeri utilizați pentru PCR cantitativ.
Macro suplimentară. Macro pentru cuantificarea automată a picrosirius colorat cu roșurinichizona de ImageJ.
Produsele Cistanche sunt bune pentrurenal
REFERINȚE
1. Boală de rinichi: Îmbunătățirea rezultatelor globale (KDIGO) Grupul de lucru pentru anemie. Ghidul de practică clinică KDIGO pentru anemie înboală cronică de rinichi.Kidney Int Suppl. 2012;2:279–335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A, et al. Asociația derinichifuncția cu anemie: al treilea sondaj național de examinare a sănătății și nutriției (1988-1994). Arch Intern Med. 2002;162:1401–1408.
3. Maxwell PH, Eckardt KU. Inhibitori de prolil hidroxilază HIF pentru tratamentul anemiei renale și nu numai. Nat Rev Nephrol. 2016;12:157–168.
4. Chen N, Hao C, Peng X și colab. Roxadustat pentru anemie la pacienții curinichiboală care nu primește dializă. N Engl J Med. 2019;381:1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC și colab. Tratamentul cu Roxadustat pentru anemie la pacienții care fac dializă pe termen lung. N Engl J Med. 2019;381:1011–1022.
6. Schodel J, Ratcliffe PJ. Mecanisme de semnalizare a hipoxiei: noi implicații pentru nefrologie. Nat Rev Nephrol. 2019;15:641–659.
7. Pan SY, Chiang WC, Chen YM. Călătoria de la eritropoietină la Premiul Nobel 2019: concentrare pe factorii inducibili de hipoxie înrinichi. J Formos Med Conf. univ. 2021;120:60–67.
8. Lin SL, Kisseleva T, Brenner DA, et al. Pericitele și fibroblastele perivasculare sunt sursa principală de celule producătoare de colagen în obstructive.fibrozăa rinichiului. Sunt J Pathol. 2008;173:1617–1627.
9. Pan SY, Chang YT, Lin SL. Pericitele microvasculare în rinichii sănătoși și bolnavi. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014;7:39–48.
10. Humphreys BD, Lin SL, Kobayashi A, et al. Urmărirea destinului dezvăluie originea pericită și nu epitelială a miofibroblastelor înfibroza renala. Sunt J Pathol. 2010;176:85–97.
11. Kramann R, Schneider RK, DiRocco DP, et al. Progenitorii Gli1+ perivasculari contribuie cheie la organul indus de leziunifibroză. Celula stem celulară. 2015;16:51–66.
12. Schrimpf C, Xin C, Campanholle G, et al. Pericyte TIMP3 și ADAMTS1 modulează stabilitatea vasculară dupărinichirănire. J Am Soc Nephrol. 2012;23: 868–883.
13. Lemos DR, Marsh G, Huang A, et al. Menținerea integrității vasculare de către pericite este esențială pentru normalrinichifuncţie. Am J Physiol Renal Physiol. 2016;311:F1230–F1242.
14. Chang YT, Yang CC, Pan SY și colab. Inhibarea ADN-metiltransferazei restabilește producția de eritropoietină în rinichii fibrotici murini. J Clin Invest. 2016;126:721–731.
15. Chou YH, Pan SY, Shao YH și colab. Metilarea în pericite după o leziune acută favorizează cronicizarearinichiboala. J Clin Invest. 2020;130:4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT, et al. Perspective noi asupra tranziției pericitemiofibroblastelor și a țintelor terapeutice înfibroza renala. J Formos Med Conf. univ. 2012;111:589–598.
17. Souma T, Nezu M, Nakano D, et al. Sinteza eritropoietinei în miofibroblastele renale este restabilită prin activarea semnalizării hipoxiei. J Am Soc Nephrol. 2016;27:428–438.
18. Asada N, Takase M, Nakamura J, et al. Disfuncția fibroblastelor de origine extrarenală stă la bazafibroza renalași anemie renală la șoareci. J Clin Invest. 2011;121:3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF și colab. Transformarea factorului de creștere beta-1 stimulează semnalizarea epitelială profibrotică pentru a activa tranziția pericit-miofibroblast în cazul obstructiv.fibroza renala.Sunt J Pathol. 2013;182:118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF și colab. Semnalizarea receptorului factorului de creștere derivat din trombocite activează tranziția pericit-miofibroblast în condiții obstructive și post-ischemicerinichifibroză. Rinichi Int. 2011;80:1170–1181.
21. Lin SL, Chang FC, Schrimpf C, et al. Dirijarea diafoniei endoteliu-pericite prin inhibarea atenuărilor de semnalizare a receptorului VEGFrinichirarefacția microvasculară șifibroză. Sunt J Pathol. 2011;178:911–923.
22. Ren S, Johnson BG, Kida Y, et al. LRP-6 este un coreceptor pentru căi multiple de semnalizare fibrogenică în pericite și miofibroblaste care sunt inhibate de DKK-1. Proc Natl Acad Sci US A. 2013;110:1440–1445.
23. Kawakami T, Mimura I, Shoji K, et al. Hipoxie șifibrozăînboli renale cronicee: încrucișare la pericite. Kidney Int Suppl. 2014;4:107–112.
24. Kapitsinou PP, Jaffe J, Michael M, et al. Țintirea preischemică a hidroxilării prolil HIF inhibăfibrozăasociat cu acutărinichirănire. Am J Physiol Renal Physiol. 2012;302:F1172–F1179.
25. Schley G, Klanke B, Kalucka J, et al. Fagocitele mononucleare orchestrează renoprotecția mediată de inhibarea prolil hidroxilazei în nefrita tubulointerstițială cronică. Rinichi Int. 2019;96:378–396.
26. Uchida L, Tanaka T, Saito H, et al. Efectele unui inhibitor de prolil hidroxilază asuprarinichiși complicații cardiovasculare într-un model de șobolan de boală cronică de rinichi. Am J Physiol Renal Physiol. 2020;318:F388–F401.
27. Sugahara M, Tanaka S, Tanaka T, et al. Inhibitorul domeniului prolil hidroxilază protejează împotriva tulburărilor metabolice și asociaterinichiboală la șoareci obezi cu diabet de tip 2. J Am Soc Nephrol. 2020;31:560–577.
28. Higgins DF, Kimura K, Bernhardt WM, et al. Hipoxia promovează fibrogeneza in vivo prin stimularea HIF-1 a tranziției de la epiteliu la mezenchimal. J Clin Invest. 2007;117:3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J, et al. Inactivarea condiționată a genei supresoare tumorale von Hippel-Lindau de șoarece are ca rezultat leziuni hiperplazice, inflamatorii și fibrotice larg răspândite în rinichi. Oncogene. 2014;34:2631.
30. Kapitsinou PP, Sano H, Michael M, et al. HIF endotelial-2 mediază protecția și recuperarea din ischemierinichirănire. J Clin Invest. 2014;124:2396–2409.
31. Ding M, Cui S, Li C, et al. Pierderea supresorului tumoral Vhlh duce la reglarea în sus a Cxcr4 și glomerulonefrită rapid progresivă la șoareci. Nat Med. 2006;12:1081–1087.
32. Ding M, Coward RJ, Jeansson M, et al. Reglarea factorului inductibil de hipoxie 2-a este esențială pentru integritatea barierei glomerulare. Am J Physiol Renal Physiol. 2013;304:F120–F126.
33. Norman JT, Clark IM, Garcia PL. Hipoxia promovează fibrogeneza în fibroblastele renale umane. Rinichi Int. 2000;58:2351–2366.
34. Wang Z, Tang L, Zhu Q și colab. Factorul-1alfa inductibil de hipoxie contribuie la acțiunea profibrotică a angiotensinei II în celulele interstițiale medulare renale.RinichiInt. 2011;79:300–310.
35. Koury MJ, Haase VH. Anemia inrinichiboală: valorificarea răspunsurilor la hipoxie pentru terapie. Nat Rev Nephrol. 2015;11:394–410.
36. Fabian SL, Penchev RR, St-Jacques B, et al. Activarea căii Hedgehog-Gli în timpulfibroza renala.Sunt J Pathol. 2012;180:1441–1453.
37. Lin SL, Castano AP, Nowlin BT, et al. Monocitele Ly6Chigh din măduva osoasă sunt recrutate selectiv la rănițirinichiși se diferențiază în populații distincte funcțional. J Immunol. 2009;183:6733–6743.
38. Delle H, Rocha JR, Cavaglieri RC, et al. Efectul antifibrotic al tamoxifenului într-un model de boală renală progresivă. J Am Soc Nephrol. 2012;23:37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema A, et al. Tamoxifenul pentru inducerea Crecombinației poate produce confuziefibrozăstudii la femele de șoareci. Semnal comun al celulei J. 2017;11:205–211.
40. Greenwald AC, Licht T, Kumar S, et al. VEGF extinde eritropoieza prin inducerea independentă de hipoxie a eritropoietinei în celulele stromale perivasculare necanonice. J Exp Med. 2019;216:215–230.
41. Broeker KAE, Fuchs MAA, Schrankl J, et al. Diferite subpopulații derinichicelulele interstițiale produc eritropoietină și factori care susțin oxigenarea țesuturilor ca răspuns la hipoxie in vivo.RinichiInt. 2020;98:918–931.
