Analize morfologice ale expresiei nefrinei în glomerulonefropatia progresivă

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstract:

În acest studiu, ne-am concentrat asupra nefrinei, una dintre moleculele cheie din diafragma fantei podocitelor, deoarece, deși au existat rapoarte privind exprimarea acesteia la oameni și șobolani, prezența lor în marmosetele obișnuite nu a fost raportată. Am investigat expresia nefrinei și modificările glomerulilor, în funcție de dezvoltarea glomerulonefropatiei spontane progresive la marmoseți obișnuiți. Au fost evaluate 19 marmosets comune la vârsta de doi până la zece ani. Rinichiul a fost examinat prin microscopie cu hematoxilină și eozină și colorare imunohistochimică pentru nefrină. Leziunile au fost clasificate în trei grade conform unui sistem de clasificare a leziunilor renale raportat anterior. Aria nefrină-pozitivă a fost măsurată prin analiză morfometrică și a fost calculat raportul nefrină-pozitiv. Expresia nefrinei a fost observată de-a lungul ansei capilare glomerulare într-un model liniar continuu la gradele de leziuni renale 0 până la 2 și fie un model liniar discontinuu, fie un model granular grosier în gradul 3. Expresia nefrinei a avut tendința de a scădea semnificativ în funcție de gradul leziunilor renale. . S-a sugerat că modificarea exprimării nefrinei joacă un rol important în progresia leziunilor renale.

Cuvinte cheie:nefrină, marmoset,glomerulonefropatie, rinichi, patologie

beneficii cistanche de deșertșiUzina Cistancheeste bun pentrurinichi

Introducere

Se știe că glomerulonefropatia progresivă spontană la marmosetele comune (Callithrix jacchus) apare frecvent începând cu vârsta de doi ani, severitatea leziunii progresând odată cu vârsta. Am raportat anterior leziuni primare și progresive de nefropatie la marmosets comune1. Modificările glomerulare primare ale nefropatiei în stadiu incipient sunt caracterizate prin ștergerea proceselor podocitelor piciorului și îngroșarea parțială a membranei bazale glomerulare, care se presupune că provoacă scurgeri de proteine ​​din glomeruli și pot fi observate prin ultramicroscopie, dar nu prin microscopie cu lumină1-3. Mai mult, imunoglobulina joacă un rol important în progresia nefropatiei1, 2. IgM se depune pe mezangiu în stadiul incipient al glomerulonefropatiei, iar după prima depunere de IgM, zona de depozit se extinde la întreg glomerulul, iar IgA și IgG sunt depus cu progresie2. Gipsurile hialine sugerând scurgeri de proteine ​​din glomeruli pot fi observate prin microscopie cu lumină cu progresia glomerulonefropatiei4. Proteinuria exacerbează progresia leziunilor tubulointerstițiale la marmoseți obișnuiți4, ca la om5, 6 și, într-un studiu recent al glomerulilor, proteinuria ar putea fi indusă de tulburări ale diafragmei fantei, legând astfel procesele adiacente ale piciorului (pedicelele) podocitei. Diafragma cu fantă este un complex de joncțiune intercelulară prezent între procesele piciorului adiacente și au fost identificate unele molecule legate de formarea acestuia3. S-a considerat că o scădere a expresiei acestor molecule sau disfuncția diafragmei fantei este legată de progresia proteinuriei3. Nefrina, una dintre moleculele cheie exprimate în diafragma cu fantă a podocitelor, este o glicoproteină constând din 1241 de aminoacizi și este un biomarker binecunoscut utilizat pentru monitorizarea tulburării diafragmelor cu fantă7–10. Moleculele legate de diafragmele cu fante nu au fost studiate în nefropatia marmosetelor comune, deși se știe că la acestea apar alterarea proceselor podocitelor și progresia proteinuriei. Mai mult, au existat rapoarte privind expresia nefrinei la oameni și șobolani7–12, dar nu și la marmosets. Prin urmare, am investigat expresia nefrinei în glomeruli și modificările expresiei nefrinei, în funcție de progresia leziunii, prin analize imunohistochimice.

cistanche tcm

Materiale și metode

animale

Acest studiu a fost aprobat de Comitetul Instituțional de Îngrijire și Utilizare a Animalelor al Instituției Centrale pentru Animale Experimentale (CIEA; Kawasaki, Japonia) și a fost realizat în strictă conformitate cu Regulamentele pentru Experimentarea pe Animale ale CIEA, pe baza Ghidurilor pentru conduita corectă a Experimente cu animale (Consiliul științific al Japoniei, 2006). Au fost evaluate 19 marmosets comune (11 masculi si 8 femele) de la CLEA Japan Inc. (Tokyo, Japonia). Vârstele lor variau între 2 și 10 ani la momentul necropsiei. Animalele au fost găzduite în cuști într-o cameră pentru animale menținută la o temperatură de 26 ± 3 grade și o umiditate de 55 ± 20 la sută. Au fost hrăniți cu LCMS-1M (CLEA Japan Inc., Tokyo, Japonia) și apă de la robinet. Animalele au fost sacrificate uman sub anestezie cu pentobarbital sodic din cauza diverselor cauze de moribunde (cum ar fi sintexis, curbura vertebrelor lombare, luxația articulației mandibulare etc.). Nu a fost efectuată analiza de urină deoarece nu a putut fi prelevată probe de urină.

Histopatologie

Therinichiau fost perfuzați cu ser fiziologic, urmat de paraformaldehidă 4% și apoi fixați în formol tamponat neutru 10% pentru examinare microscopică. Specimenele au fost încorporate în parafină, secţionate la 5 μm grosime şi colorate cu hematoxilină şi eozină (HE). Leziunile au fost clasificate ca leziuni glomerulare, tubulare și interstițiale pe baza criteriilor publicate1. Gradele nefropatiei au fost împărțite în patru grupe: gradul 1 (3 bărbați și 1 femeie), gradul 2 (3 bărbați și 5 femei), gradul 3 (1 bărbat și 3 femei) și gradul 4 (3 bărbați) (Tabelul 1).

Pentru imunohistochimie, un anticorp monoclonal împotriva domeniului extracelular de origine umanănefrină(1:1,000, Nefrinăg{{0}}, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, SUA) a fost utilizat ca anticorp primar. Secțiunile de 5-μm au fost deparafinate, rehidratate, tratate cu peroxid de hidrogen 3% la temperatura camerei timp de 5 minute și apoi încălzite într-o autoclavă la 121 de grade timp de 20 de minute în soluție de recuperare țintă (pH 6,0, Dako, Glostrup, Danemarca). După răcire, secțiunile au fost incubate cu anticorpul primar la 4 grade peste noapte. Polimerul IgG anti-șoarece și anti-iepure conjugat cu peroxidază (Histofine Simple Stain Rat MAX-PO(MULTI), Nichirei Bioscience Inc., Tokyo, Japonia) a fost utilizat ca anticorp secundar pentru metoda pe bază de polimer13. Secțiunile au fost incubate cu anticorpul polimer secundar la temperatura camerei timp de 30 de minute și produsele de reacție au fost vizualizate folosind 3,3'-diaminobenzidină ca cromogen. Contracolorarea a fost efectuată cu hematoxilină. Pentru controlul negativ, anticorpul primar a fost omis.

Analiza morfologică

Pentru analiza morfologică, glomerulii cu hilul glomerular au fost supuși examinării și 16 până la 28 de glomeruli au fost capturați pe fiecare lamă (Tabelul 1) utilizând un scanner de diapozitive întregi (Aperio AT2, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL, SUA) și un software corespunzător de vizualizare a diapozitivelor patologice (Aperio ImageScope, Leica Microsystems Inc.) la aceeași rezoluție și dimensiune a imaginii.Nefrină-ariile glomerulare pozitive și întregi au fost calculate cu un software de analiză a imaginii (Image-Pro V10, Mediacybenetics Inc., Rockville MD, SUA) prin trasarea unei regiuni de interes în jurul glomerulului, conform unui raport anterior14. Întreaga zonă glomerulară a fost definită ca zona care poate fi distinsă de fundalul alb. Pragurile de culoare pentru calculnefrină-s-au determinat zonele pozitive in functie de fiecare conditie de colorare. Pragurile pentru roșu, verde și albastru au fost 37–67, 31–77 și, respectiv, 32–88. Raportul nefrină-pozitiv a fost calculat prin împărțirea măsurătorilornefrină-zona pozitiva peste zona glomerulara. Analiza statistică a fost efectuată folosind testul Jonckheere (nivel de semnificație: 5 la sută, test unilateral) pentru a evalua tendința dintre gradul nefropatiei și expresianefrină.

costache

Rezultate

Scorurile patologice și gradele leziunilor renale individuale sunt prezentate în Tabelul 1. La fel ca și în primul nostru raport1, gradul leziunii a avut tendința de a crește odată cu vârsta și nu a existat nicio diferență evidentă de sex. Rezultatele colorării imunohistochimice alenefrinăsunt prezentate în Fig. 1, iarnefrină- raportul pozitiv este prezentat în Fig. 2 și Tabelul 1. Dintre scorurile și notele din Tabelul 1, gradul leziunii renale, derivat din scorul total al fiecărei leziuni renale, și scorul gipsului hialin au fost utilizate pentru comparație cunefrină-raport pozitiv (Fig. 2 si 3). Cazurile individuale din Tabelul 1 sunt prezentate în ordinea crescătoare a gradului leziunii renale. Expresia nefrinei a fost observată împreună cu bucla capilară glomerulară într-un model liniar continuu în gradele 0 până la 2 (Fig. 1A-C) și un model discontinuu liniar sau granular grosier în gradele 3 (Fig. 1D). În proba martor negativ, nicio reacție pozitivă pentrunefrinăa fost observată în orice loc.

Comparația dintrenefrină- raportul pozitiv la gradul leziunii renale este prezentat în Fig. 2. În cazurile cu gradul de leziune renală 0, media ± abaterea standard (SD) anefrină- raportul pozitiv a fost de 5,66 ± 1,18 la sută, iar valorile maxime, minime și mediane au fost de 6,84 la sută, 4,27 la sută și, respectiv, 5,76 la sută. În cazurile de gradul 1, media ± SD a fost de 3,99 ± 1,61 la sută, iar valorile maxime, minime și mediane au fost de 5,69 la sută, 1,19 la sută și, respectiv, 4,35 la sută. În cazurile de gradul 2, media ± SD a fost de 3,82 ± 2,25 la sută, iar valorile maxime, minime și mediane au fost de 6,71 la sută, 1,58 la sută și, respectiv, 3,49 la sută. În cazurile de gradul 3, media ± SD a fost de 2,52 ± 1,02 la sută, iar valorile maxime, minime și mediane au fost de 3,67 la sută, 2,17 la sută și, respectiv, 2,17 la sută. În mod colectiv, diferențele individuale în exprimarea nefrinei au fost mici în cazurile de gradul 0, dar mari în cazurile de gradul 1 sau mai mare, iar expresia pozitivă scăzută a fost detectată sporadic.Nefrinăexpresia a avut tendința de a scădea în funcție de gradul leziunilor renale (fig. 2). A existat o tendință semnificativ mai scăzută între gradul leziunii renale șinefrină-raport pozitiv conform testului Jonckheere (p=0.0166). Scorul de ghips hialin în comparație cu gradul leziunii renale este prezentat în Fig. 3. În cazurile cu un scor de ghips hialin de 0, media ± SD a raportului pozitiv pentru nefrină a fost de 5,40 ± 1,32 la sută, în scorul 1 cazuri, a fost de 4,10. ± 1,70 la sută, iar în scorul 2 cazuri, a fost 3,37 ± 1,98 la sută. A existat o tendință semnificativ mai scăzută între scorul de gips hialin și raportul pozitiv pentru nefrină conform testului Jonckheere (p=0.0654).

Discuţie

O scădere a nefrinei a fost corelată cu progresia leziunilor renale în timpul dezvoltării glomerulonefropatiei marmoset. Anticorpul anti-nefrină utilizat în acest studiu a recunoscut domeniul extracelular din partea N-terminală. Acest domeniu extracelular interacționează cu moleculele NEPH1 și formează o structură asemănătoare fermoarului în interiorul diafragmei cu fante15. Localizarea nefrinei în glomeruli normali este de-a lungul ansei capilare glomerulare, iar modelul de colorare este un model liniar de granule continue continue atât la șobolani, cât și la oameni11, 12, 16–18. Colorația efectuată în acest studiu este adecvată; ceea ce este confirmat de observatia ca peretii capilari in contact cu regiunea mezangiala nu au fost colorati, in timp ce cei in contact cu podocitele au fost. În condiții anormale, cum ar fi sindromul nefrotic la om sau nefroza puromicină aminonucleozidă la șobolani, modelul de colorare cu nefrină în glomeruli este discontinuu și granular grosier, iar intensitatea colorării imunohistochimice este mai slabă decât în ​​glomeruli normali11, 16, 17. În studiul de față. , modelul de expresie a nefrinei în clasele 0 până la 2 a fost normal; cu toate acestea, modelul de colorare în clasele 3 a fost comparabil cu cel al condițiilor anormale. Într-o investigație anterioară a expresiei nefrinei glomerulare la șobolani Crl: CD(SD) cu boală de modificare minimă, expresia nefrinei a fost intactă, deși procesele podocitelor au arătat ștergere sub microscopie electronică, fără modificări morfologice aparente observate la microscopie cu lumină18. În boala renală comună a șobolanului, nefropatia cronică progresivă (CPN), s-a demonstrat că albuminuria însoțită de CPN în stadiu incipient poate duce la mai puține modificări ale permeabilității glomerulare din eșecul reabsorbției albuminei din tubii proximali19. La om, au existat unele investigații privind reducerea expresiei nefrinei sub modificări minore10 sau în cazul altor boli de rinichi14, 16. Pe de altă parte, a existat un raport privind expresia nefrinei intacte în nefroza cu modificări minime20. Prezența sau absența unei modificări în expresia nefrinei în boala nefrotică cu modificări minime este încă în discuție. În realitate, a fost dificil de confirmat creșterea sau scăderea reacției cu anticorpi a nefrinei prin observarea vizuală în nefropatia marmoset, dar a fost posibil să se detecteze modificarea în întregul rinichi prin analiza imaginii. Investigația noastră sugerează că anomalia diafragmelor fante ale glomerulului poate fi implicată în progresia nefropatiei la marmoseții obișnuiți din cauza scăderii nefrinei. Transformarea modelului de colorare pozitiv al nefrinei, de la modelul liniar la cel granular, a fost raportată la un model animal de șobolani de boală nefrotică în timpul dezvoltării leziunii11, 16, 21. O asociere între anomaliile membranei fantei și proteinurie a avut au fost raportate frecvent22, 23; prin urmare, s-a speculat că proteinuria poate fi cauzată de disfuncția diafragmei cu fante. În studiul nostru asupra nefropatiei marmoset, progresia permeabilității proteinelor glomerulare din cauza disfuncției diafragmei fante s-ar fi putut produce deoarece caracteristicile morfologice ale gipsurilor hialine au fost observate numai în cazurile fără modificări tubulointerstițiale. În acest studiu, nu a fost observată nicio diferență semnificativă statistic între scorul modificărilor morfologice ale gipsurilor hialine și scăderea expresiei nefrinei. Cu toate acestea, expresia nefrinei tinde să scadă în funcție de scorul de turnat hialin, care este un indicator al scurgerii de proteine ​​din glomerul.

În investigația noastră anterioară, s-a observat ștergerea proceselor piciorului în stadiul incipient al nefropatiei marmoset, iar aria procesului piciorului afectat a fost extinsă în funcție de gradul leziunii renale1. Tabelul 2 arată relația dintre rata de reducere a nefrinei în acest studiu și constatările microscopiei electronice pentru fiecare grad de leziune renală dintr-un studiu anterior. Se crede că ștergerea se datorează unei defalcări a citoscheletului de actină al proceselor piciorului24. Nefrina este defosforilată atunci când membrana fantei este construită și se leagă de actină prin CD2AP și podocină25, 26. Când o diafragmă fanteză este rănită, moleculele de nefrină devin grupate, inducând fosforilarea nefrinei, polimerizarea actinei și ștergerea proceselor piciorului26. Fosforilarea nefrinei are loc, de asemenea, rapid după inducerea ștergerii procesului piciorului în modelul cu sulfat de protamină la șoareci27. Nefrina este o proteină de adeziune glomerulară asociată cu maturarea, diferențierea, formarea procesului și semnalizarea podocitelor24. Investigația noastră a arătat că a existat o corelație între reducerea expresiei nefrinei, determinată de imunohistochimie, și progresia gradului leziunii renale, sugerând o extindere a ștergerii proceselor podocitelor piciorului. Cu toate acestea, nu este clar dacă anomaliile din complexul proteic al diafragmei cu fante provoacă leziuni ale proceselor piciorului podocitelor sau dacă leziunile podocitelor cauzează modificări ale diafragmelor cu fante și reducerea nefrinei. Deoarece nefrina este, de asemenea, implicată în diferențierea podocitelor, se crede că această relație va fi clarificată în continuare prin datele privind regenerarea și diferențierea podocitelor.

În concluzie, rezultatele noastre oferă informații desprenefrinăexpresie în glomerulonefropatia progresivă la marmosetele comune. Analiza morfologică a relevat o tendință mai scăzută denefrinăexpresia în podocite în glomerulonefropatia progresivă a marmosetelor comune și alterareanefrinăs-a sugerat că expresia joacă un rol important în progresia leziunilor renale.

Dezvăluirea potențialelor conflicte de interese:

Autorii declară că nu au conflicte de interese.

Confirmare:

Autorii ar dori să-i mulțumească domnului Takayoshi Ito pentru asistența tehnică excelentă oferită. Autorii le mulțumesc, de asemenea, doamnei Kanae Tamatsukuri și domnului James Harada pentru editarea lingvistică a manuscrisului.

stanch

Referințe
1. Yamada N, Sato J, Kanno T, Wako Y și Tsuchitani M. Studiu morfologic al glomerulonefropatiei progresive la marmosets comune (Callithrix jacchus). Toxicol Pathol. 41: 1106–1115. 2013.
2. Yamada N, Hashimoto N, Kamiie J, Doi T, Sato J, Inoue T, Shirota K și Tsuchitani M. Relația dintre depunerea de imunoglobulină și leziunile precoce ale glomerulonefropatiei progresive la marmosets obișnuiți tineri. Veterinarul Pathol. 55: 173–176. 2018.
3. Cara-Fuentes G, Clapp WL, Johnson RJ și Garin EH. Patogenia proteinuriei în boala idiopatică cu modificări minime: mecanisme moleculare. Pediatr Nephrol. 31: 2179–2189. 2016.
4. Isobe K, Adachi K, Hayashi S, Ito T, Miyoshi A, Kato A și Suzuki M. Leziuni spontane glomerulare și tubulointerstițiale la marmosets comune (Callithrix jacchus). Veterinarul Pathol. 49: 839–845. 2012.
5. Eddy AA. Proteinurie și leziuni interstițiale. Transplant Nephrol Dial. 19: 277–281. 2004.
6. Hingorani S, Gooley T, Pao E, Sandmaier B și McDonald G. Citokine urinare după HCT: dovezi pentru inflamația renală în patogeneza proteinuriei șirinichiboala. Transplant de măduvă osoasă. 49: 403–409. 2014.
7. Kestilä M, Lenkkeri U, Männikkö M, Lamerdin J, McCready P, Putaala H, Ruotsalainen V, Morita T, Nissinen M, Herva R, Kashtan CE, Peltonen L, Holmberg C, Olsen
A și Tryggvason K. Gena donată pozițional pentru o nouă proteină glomerulară--nefrina-- este mutată în sindromul nefrotic congenital. Celula Mol. 1: 575–582. 1998.
8. Langham RG, Kelly DJ, Cox AJ, Thomson NM, Holthöfer H, Zaoui P, Pinel N, Cordonnier DJ și Gilbert RE. Proteinuria și expresia proteinei diafragmei podocitelor, nefrina, în nefropatia diabetică: efectele inhibării enzimei de conversie a angiotensinei. Diabetologia. 45: 572–1576. 2002.
9. Welsh GI și Saleem MA. Moleculă cu semnătură de nefrină a podocitului glomerular? J Pathol. 220: 328–337. 2010.
10. van de Lest NA, Zandbergen M, IJpelaar DHT, Wolterbeek R, Bruijn JA, Bajema IM și Scharpfenecker M. Pierderea nefrinei poate fi utilizată pentru a prezice remisiunea și rezultatul renal pe termen lung la pacienții cu boală de modificare minimă.RinichiInt Rep. 3: 168–177. 2017.
11. Kawachi H, Koike H, Kurihara H, Yaoita E, Orikasa M, Shia MA, Sakai T, Yamamoto T, Salant DJ și Shimizu F. Clonarea nefrinei de șobolan: expresie în dezvoltarea glomeruli și în stări proteinurice.RinichiInt. 57: 1949–1961. 2000.
12. Luimula P, Ahola H, Wang SX, Solin ML, Aaltonen P, Tikkanen I, Kerjaschki D și Holthöfer H. Nephrin în boala glomerulară experimentală.RinichiInt. 58: 1461–1468. 2000.
13. Janardhan KS, Jensen H, Clayton NP și Herbert RA. Imunohistochimia în patologia investigativă și toxicologică. Toxicol Pathol. 46: 488–510. 2018.
14. Koop K, Eikmans M, Baelde HJ, Kawachi H, De Heer E, Paul LC și Bruijn JA. Exprimarea moleculelor asociate podocitelor la om dobânditrinichiboli. J Am Soc Nephrol. 14: 2063–2071. 2003.
15. Gerke P, Huber TB, Sellin L, Benzing T și Walz G. Homodimerization and heterodimerization of the glomerular podocyte proteins nephrin and NEPH1. J Am Soc Nephrol. 14: 918–926. 2003.
16. Doublier S, Ruotsalainen V, Salvidio G, Lupia E, Biancone L, Conaldi PG, Reponen P, Tryggvason K și Camussi G. Redistribuirea nefrinei pe podocite este un mecanism potențial pentru proteinurie la pacienții cu sindrom nefrotic primar dobândit. Sunt J Pathol. 158: 1723–1731. 2001.
17. Kawakami H, Kamiie J, Yasuno K, Kobayashi R, Aihara N și Shirota K. Dinamica cantității absolute de nefrină într-un singur podocit la șobolani cu nefroză puromicină aminonucleozidă calculată prin abordarea proteomică glomerulară cantitativă cu modul de monitorizare a reacției selectat. Transplant Nephrol Dial. 27: 1324–1330. 2012.
18. Yasuno K, Honda K, Hakamata S, Kai K și Mori K. Minimal change disease of therinichiîntr-un tânăr șobolan Sprague Dawley. J Toxicol Pathol. 31: 55–59. 2018.
19. Obert LA și Frazier KS. Implicarea sistemului renină-angiotensină intrarenală în patogeneza nefropatiei cronice progresive-reducerea decalajului informațional dintre discipline. Toxicol Pathol. 47: 799–816. 2019.
20. Patrakka J, Ruotsalainen V, Ketola I, Holmberg C, Heikinheimo M, Tryggvason K și Jalanko H. Expression of nephrin in pediatricrinichiboli. J Am Soc Nephrol. 12: 289–296. 2001.
21. Saran AM, Yuan H, Takeuchi E, McLaughlin M și Salant DJ. Complementul mediază redistribuirea nefrinei și disocierea actinei în nefropatia membranoasă experimentală.RinichiInt. 64: 2072–2078. 2003.
22. Gagliardini E, Benigni A, Tomasoni S, Abbate M, Kalluri R și Remuzzi G. Reglarea în jos direcționată a nefrinei extracelulare în nefropatia IgA umană. Sunt J Nephrol. 23: 277–286. 2003.
23. Wakamatsu A, Fukusumi Y, Hasegawa E, Tomita M, Watanabe T, Narita I și Kawachi H. Rolul calcineurinului (CN) înrinichipodocitul glomerular: inhibitorul CN a ameliorat proteinuria prin inhibarea redistribuirii CN la nivelul diafragmei fantei. Physiol Rep. 4: e12679. 2016.
24. Garg P. O revizuire a biologiei podocitelor. Sunt J Nephrol. 47(Suppl 1): 3–13. 2018.
25. Ichimura K, Kurihara H și Sakai T. Organizarea filamentului de actină a proceselor piciorului în podocite de șobolan. J Histochem Cytochem. 51: 1589–1600. 2003.
26. Ronco P. Proteinurie: este totul la picior? J Clin Invest. 117: 2079–2082. 2007.
27. Verma R, Kovari I, Soofi A, Nihalani D, Patrie K și Holzman LB. Angajamentul ectodomeniului nefrinei are ca rezultat activarea Src kinazei, fosforilarea nefrinei, recrutarea Nck și polimerizarea actinei. J Clin Invest. 116: 1346–1359. 2006.