Proprietățile neuroprotectoare ale 4-aminopiridinei

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Michael Dietrich, PhD, Hans-Peter Hartung, MD, PhD, FRCP și Philipp Albrecht, MD

Abstract

Ca antagonist al canalelor de potasiu (Kv) dependente de tensiune, 4-aminopiridina (4-AP) este utilizată ca terapie simptomatică în mai multe tulburări neurologice. Îmbunătățirea funcției vizuale și a abilităților motorii și ameliorarea oboselii la pacienții cu SM au fost atribuite 4-AP. Formula sa cu eliberare prelungită (fampridină) a fost aprobată pentru tratamentul simptomatic al dizabilității de mers în SM. Efectele benefice au fost explicate prin blocarea canalelor Kv axonale, îmbunătățind astfel conducerea de-a lungul axonilor demielinizați. Cu toate acestea, un număr tot mai mare de dovezi sugerează că 4-AP poate avea proprietăți suplimentare dincolo de modul de acțiune simptomatic. În această revizuire, rezumăm datele preclinice și clinice despre posibilele caracteristici neuroprotectoare ale 4-AP.

4-Aminopiridina în bolile neurologice

Aminopiridinele sunt un grup de derivați monoamine și diamino ai piridinei, care inhibă canalele de potasiu (Kv) dependente de tensiune. În special, cei doi blocanți ai canalelor de potasiu cu spectru larg 4-aminopiridină (4-AP) și 3,4-aminopiridină (3,4- DAP) au fost utilizați ca substanțe noi experimentale în diferite boli neurologice. Chiar dacă 3,4-DAP este un antagonist mai puternic al canalelor de potasiu, 4-AP traversează mai ușor bariera hematoencefalică1 și a fost superior din punct de vedere clinic la pacienții cu SM, în special pentru îmbunătățirea funcției vizuale,2 oboseală ,3 cogniție,4 și viteza de mers.1 În plus, s-a raportat că 4-AP facilitează conducerea neuronală în alte boli neurologice decât MS.5,6

Efectele cistanche: Protejează neuronii

În axonii sănătoși, canalele Kv1.1 și Kv1.2 sunt grupate în apropierea nodurilor lui Ranvier.7 Aceste canale devin expuse după demielinizare și migrează prin segmentul demielinizat. În același timp, expresia acestor canale este mărită de mai multe ori.8 Această redistribuire greșită a canalelor Kv afectează transmiterea potențialelor de acțiune, ducând la invaliditate permanentă. 4-AP blochează aceste canale de potasiu expuse și, prin urmare, îmbunătățește transducția semnalului.9,10 Canalul Kv1.3 a fost descoperit în celulele T umane,11 s-a dovedit a fi foarte exprimat în infiltratele inflamatorii din creierul SM,12 și este exprimate pe macrofage, microglia și celulele T cu memorie efectoare.13 Blocanții selectivi și neselectivi ai canalelor Kv1.3 ar putea oferi astfel proprietăți imunomodulatoare prin inhibarea proliferării celulare și a secreției de citokine proinflamatorii.14 Studiile înainte de 2009 nu au reușit să stabilească 4-AP ca un tratament simptomatic pentru SM, deoarece concentrațiile sanguine ale medicamentului la pacienți erau imprevizibile, dozele excesive fiind asociate cu riscul de crize epileptice și tulburări de conștiență.15–18 Prin urmare, a fost dezvoltată fampridina, formula cu eliberare prelungită a 4-AP și a fost aprobat ulterior pentru tratamentul simptomatic al dizabilității de mers în SM. toate efectele simptomatice recunoscute, 4-AP poate avea proprietăți de protecție suplimentare.

Evaluarea 4-AP folosind modele in vitro

In vitro, efectele neuroprotectoare ale 4-AP au fost observate în numeroase modele. Când neuronii motori (MN) s-au diferențiat de celulele stem pluripotente induse ale pacienților cu scleroză laterală amiotrofică purtătoare de mutații ale genei FUS și SOD1 au fost expuși la 4-AP, dezechilibrele canalelor ionice au fost remediate, nivelurile activității neuronale au crescut, reticulul endoplasmatic stresul a scăzut, iar activarea caspazei atenuată. MN-urile mutante au prezentat curenți de sodiu mai mici și rapoarte Na plus/K plus, ceea ce poate fi cel puțin parțial motivul hiperexcitabilității lor. Acest lucru a fost inversat după 4-tratamentul AP, care a condus la scăderea curenților de potasiu și a restabilit tiparele de activitate spontană și intrarea sinaptică în MN.24 4-Tratamentul AP a redus eliberarea de mediatori proinflamatori din microglia umană provocată cu amiloid- beta și neuronii hipocampali de șobolan de cultură protejați scăldat în supernatanți din microglia tratată cu amiloid beta.25 Se pare că un derivat de AP 4-a redus acumularea de sinucleină, oxidarea, inflamația și activarea Rho kinazei într-un model in vitro al bolii Parkinson.26 Alte studii in vitro au raportat că 4-AP a crescut fosforilarea proteinei care leagă elementul de răspuns la cAMP protejată de stresul celular de glutamat, NMDA și acidul 3-nitropropionic exercitat asupra neuronilor granulelor cerebeloase neonatale de șobolan. Glutamatul duce la o viabilitate scăzută și în celulele precondiționate cu 4-AP, dar fără activare semnificativă a caspazei-3. Aceste observații au sugerat că 4-AP este eficient în primul rând împotriva excitotoxicității necrotice.27 De asemenea, sa demonstrat că protejează culturile neuronale primare de privarea de oxigen-glucoză sau de toxicitatea acidului benziloxiaspartic ouabain/DL-trei- -.28.

efectul neuroprotector al Cistanche

Studii preclinice in vivo pe 4-AP

Mai multe studii au investigat efectele protectoare ale 4-AP în diferite modele de boală (tabelul 1). În modelele de afectare a nervilor periferici, tratamentul profilactic și precoce 4-AP a determinat recuperarea vitezei de conducere nervoasă, a promovat remielinizarea și a mărit zona axonală. Ultimele observații au fost explicate prin efecte similare cu cele care apar după stimularea electrică, de exemplu, creșteri ale nivelurilor de factor neurotrofic neurotrofic derivat din creier (BDNF).29 Într-un model de boală Alzheimer, injectarea de beta-amiloid în hipocampul lui Sprague Dawley. șobolanii au indus leziuni neuronale și activarea microglială crescută. Sa constatat că administrarea zilnică de 1 mg/kg 4-AP suprimă activarea microglială și oferă neuroprotecție. Acest lucru a fost atribuit capacității 4-AP de a bloca curentul K plus care redresează în exterior neinactivator în microglia activată și de a reduce producția celulară de citokine proinflamatorii.25 Investigațiile care au folosit un model in vivo de neurotoxicitate hipocampală indusă de kainat au dezvăluit efecte neuroprotective robuste ale 4- {11}}AP care ar putea fi abrogată de antagonistul necompetitiv al receptorului NMDA MK-801 și antagonistul de adenozină A1 8-ciclopentil teofilină. Aceste observații sugerează că receptorii NMDA sunt relevanți pentru 4-protecția mediată de AP în acest model.30Într-un model animal de neuropatie autoimună la șobolani Lewis, 4-AP a ameliorat severitatea clinică și constatările electrofiziologice patologice. Autorii au sugerat că protecția axonală a fost asigurată prin blocarea curenților interiori mediați de sodiu în faza incipientă, deoarece potențialele membranare ridicate în faza acută a inflamației pot fi neurotoxice. În faza cronică, conducerea nervoasă a fost potențial îmbunătățită prin blocarea curentului de ieșire mediat de potasiu.1

În encefalomielita autoimună experimentală (EAE), un model de inflamație a SNC mediată imun care replică caracteristicile cardinale ale SM, sa raportat că blocarea canalului Kv inhibă activarea celulelor T, potențial prin blocarea canalelor subfamiliei Kv1.3 și demielinizarea axonală atenuată. și degenerare prin acțiunea asupra canalului K.3.1 pe astroglia, potențial inducând semnalul BDNF. ling. În EAE indusă de proteine ​​​​proteolipide la șoarecii SJL, tratamentul cu AP a îmbunătățit semnificativ scorurile digitale, care au fost confirmate patologic. Sa observat că expresia proteinei acide fibrilare gliale este reglată în jos la șoarecii tratați cu 4-AP, iar activarea celulelor T și polarizarea Th1/17 au fost atenuate. Cu toate acestea, în modelul EAE cronic indus de peptida glicoproteinei oligodendrocitelor de mielină (MOG) la șoarecii C57BL/6,4-AP nu a schimbat cursul EAE.5 Un alt studiu a investigat, de asemenea, efectele {{19} }AP într-un model MOG-EAE la șoareci C57BL/6 și a raportat efecte simptomatice, dar fără efecte de modificare a bolii. Nici un tratament profilactic, nici unul terapeutic 4-AP nu a atenuat severitatea cursului EAE digital, în timp ce animalele tratate cu 4-AP au prezentat o mobilitate îmbunătățită, evaluată prin analiza amprentei și a tijei rotative. Demielinizarea măduvei spinării, leziunile neuronale și imagistica RMN a modificărilor volumului creierului au fost nemodificate. Proliferarea, producția de IL17 sau IFN-y a celulelor T CD4* au fost, de asemenea, neafectate.3

Mai recent, am demonstrat că, în afară de efectele sale simptomatice asupra îmbunătățirii conducerii neuronale, 4-AP poate preveni neurodegenerarea retinei în timpul nevritei optice experimentale induse de peptide MOG (EAEON) la șoarecii C5BL6. „Folosind tomografia cu coerență optică in vivo( Imagistica OCT, testarea funcției vizuale și evaluarea histologică, am observat o reducere a gradului de degenerare a straturilor retiniene interioare în modelele de EAEON, atât pentru administrarea AP 4- profilactică, cât și terapeutică. În acest model, 4-AP a potențat efectele tratamentului imunomodulator cu fingolimod, modulator al receptorului de sfingozină-1-fosfat, sugerând moduri independente de acțiune. Este rezonabil să presupunem că acest efect nu se limitează la fingolimod în monoterapie și este aplicabil 4-AP combinat cu alte medicamente imunomodulatoare pentru SM. În studiul nostru, histologia nervului optic a arătat că, spre deosebire de fingolimod,4-AP nu a avut nicio influență semnificativă asupra activării microgliale și/sau infiltrației limfocitelor sau macrofagelor, sugerând că efectele protectoare nu au fost legate de un mod antiinflamator. de acțiune. În conformitate cu aceasta, 4-tratamentul AP nu a interferat cu inducerea EAE, validată printr-un test de restimulare a celulelor T. În plus, am observat o protecție semnificativă împotriva neurodegenerării retinei sub tratamentul 4-AP și în modelul de zdrobire a nervului optic neinflamator, în timp ce, aici, fingolimodul nu a avut niciun efect. Interesant este că in vitro, 4-tratamentul AP nu a reușit să protejeze direct celulele ganglionare retiniene. În schimb, histologie și experimentele in vitro au indicat 4-stabilizarea mediată de AP a celulelor precursoare de mielină și oligodendrocite. Acest efect a fost asociat cu un aflux crescut de calciu și cu translocarea nucleară a factorului nuclear al celulelor T activate (NFAT). S-a demonstrat anterior că 4-AP reglează homeostazia calciului prin creșterea nivelurilor de inozitol trifosfat și, prin urmare, provoacă eliberarea de calciu din depozitele intracelulare de calciu. Cu toate acestea, studii suplimentare despre 4-AP în modelele demielinizante, de exemplu, modelele de tratament cu cuprizonă sau modelele de șoareci transgenici cu ablație inductibilă a oligodendrocitelor ar putea fi utile pentru a confirma aceste condiții. Studiile existente pe modele animale de demielinizare se concentrează în principal pe capacitatea 4-AP de a restabili potențialul de acțiune, dar lipsesc investigații suplimentare ale celulelor oligodendrogliale (figura).

Este important de menționat că dozele necesare pentru a obține aceste efecte in vitro sunt cu aproximativ 100-1,000x mai mari decât concentrația atinsă la pacienți. Prin urmare, mecanisme suplimentare sau alte ar putea fi relevante pentru observațiile făcute in vivo și in vitro. Acestea includ, dar nu se limitează la, o diminuare a disipării de energie a axonilor demielinizați din cauza blocării scurgerii de potasiu și a capacităților de protecție și reparații mai puternice din creier, care rezultă indirect din creșterea mobilității și exerciții fizice mai mari.

Mai mult, mecanismele imunomodulatoare ale 4-AP nu pot fi excluse, mai ales pentru că activarea redusă a celulelor T și polarizarea Th1/17 au fost demonstrate în EAE indusă de PLP la șoarecii SJL.3 În plus, studiile preclinice ale altor modele de boală au descoperit o activare atenuată și o eliberare redusă de mediatori proinflamatori de către microglia. Aceste rezultate controversate evidențiază diversele mecanisme patologice ale diferitelor modele animale, în care celulele imune sunt mai mult sau mai puțin susceptibile la strategiile de tratament. Discrepanțele dintre rezultatele noastre și rapoartele anterioare privind doar efectele simptomatice la EAE indus de peptida MOG la șoarecii C57BL6" pot fi explicate cel puțin parțial prin (1) diferențe de dozare, deoarece alții au folosit doze de 100 ug și 600 ug/șoarece/zi, întrucât am administrat 250 ug/șoarece/zi; (2) durata tratamentului (40, 60 și 90 de zile de către Göbel și colab.,* Moriguchi și colab.,3 și Dietrich și colab., „respectiv); și (3) cantitatea de MOG utilizată pentru imunizare deoarece am folosit 200 ug MOG per șoarece, în timp ce alții au folosit doar 100 ug MOG per șoarece. Cercetările recente se concentrează pe rolul microbiotei intestinale în influențarea inducerii și severității EAE prin modificarea echilibrului celulelor T și B efectoare și reglatoare. Microbiomul rozătoarelor poate diferi între instalațiile animale, ceea ce duce la diferențe în severitatea EAE, curs și, eventual, chiar răspunsul la terapii. Luați împreună, acești factori ar putea explica eterogenitatea rezultatelor studiului.

efectul neuroprotector al Cistanche

Abordare clinică privind 4-PA la pacienții cu SM

Mai multe studii clinice din anii 1980 au sugerat deja efectele benefice ale 4-AP la persoanele cu SM. Printre altele, au identificat îmbunătățiri ale funcțiilor motorii40-2 și vizuale-44 și oboseală.5-7 Cu toate acestea, limitările studiului, absența unui design omogen al studiului și un număr mic de pacienți au interzis aprobarea {{ 5}}AP de către autoritățile obișnuite și duc la o utilizare off-label pentru mai mult de 3 decenii.4 Pe de altă parte, unele dintre aceste studii au facilitat dezvoltarea formulării cu eliberare susținută (SR-4-AP sau fampridină), deoarece au descoperit că nivelurile plasmatice ale compusului original cu eliberare imediată sunt inconsistente și imprevizibile. Primul studiu clinic cu SR-4-AP a fost efectuat în 1997 de către Schwid și colab.49, demonstrând o îmbunătățire semnificativă a vitezei de mers și o tendință de îmbunătățire a forței musculare.

Sistemul de tehnologie cu eliberare extinsă a fost dezvoltat de Elan Pharmaceuticals. A folosit un așa-numit sistem matrice de absorbție a medicamentelor, constând dintr-o matrice polimerică proprie care controlează eliberarea prin difuzie și eroziune de către enzimele gastrointestinale. Acest lucru a dus la niveluri plasmatice de vârf mai scăzute și o durată mai lungă de acțiune.1 Inițial, SR-4-AP a fost testat în 4 studii. În 2007, Goodman și colab.1 au efectuat un interval de doză în trepte de 5 mg de la 10 până la 40 mg de două ori pe zi la 36 de pacienți cu SM. În testul de mers cronometrat de 25 de picioare (T25FW), nu a fost observată nicio schimbare semnificativă, în timp ce o analiză post-hoc care a convertit datele în viteză de mers (ft/s) a atins semnificație. În plus, a fost observată o îmbunătățire a oboselii auto-raportate. Într-un studiu de comparare a dozelor din 2008 (randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo), Goodman și colab.2 au recrutat 206 pacienți, care au primit un placebo sau doze de 10, 15 sau 20 mg de două ori pe zi. Din nou, analiza post-hoc care compară îmbunătățirea vitezei de mers pe jos a găsit rezultate semnificativ mai bune pentru toate grupurile de tratament în mod individual și pentru toți pacienții tratați cu SR-4-AP în comparație cu placebo. Puterea muzei a fost îmbunătățită pentru grupurile tratate cu 10-mg și 15-mg, dar nu pentru grupurile tratate cu 20 mg în comparație cu subiecții placebo. În cele 2 studii clinice ulterioare de fază Ⅲ (21-studiu randomizat dublu-orb, controlat cu placebo, 301 de pacienți și 14-studiu dublu-orb controlat cu placebo, 239 de săptămâni) cu 10 mg de două ori pe zi, Pacienții au fost împărțiți într-un grup de răspuns și un grup de nonresponder, definite prin îmbunătățirea constantă a T25FW. În ambele studii, creșterea vitezei de mers pe jos a fost semnificativă în comparație cu grupul nonresponder sau placebo. În plus, a existat o îmbunătățire a scorului 12-Item MS Walking Scale (MSWS-12) pentru cei care au răspuns.2122

Într-un studiu deschis de extensie a acestor studii, s-a demonstrat că ameliorarea clinică a fost pierdută după retragerea medicamentului, dar a revenit la 2 săptămâni după reluarea terapiei cu SR-4-AP.Ampyra/Fampyra, formularea comprimatelor de SR{ {3}}AP a primit aprobarea deplină de la Food and Drug Administration în ianuarie 2010 pentru a îmbunătăți mersul pe jos la pacienții cu SM, dar numai o autorizație de introducere pe piață condiționată în 2011 de la Agenția Europeană pentru Medicamente (EMA). Pe baza studiilor menționate, aprobarea a fost supusă prevederii de a furniza mai multe date de eficacitate și siguranță pe termen lung. Prin urmare, au fost inițiate un studiu explorator de fază II (MOBIL) și un studiu de confirmare de fază I (ENHANCE).

În studiul explorator MOBLE cu 132 de participanți, a fost găsită o îmbunătățire a impresiei globale a schimbării pacientului (PGIC), MSWS-12 și a vitezei Timed Up and Go (TUG)23 Pentru a evalua eficacitatea și siguranța pe termen lung a A fost efectuat SR-4-AP, studiul confirmator ENHANCE (10 mg de două ori pe zi la 646 de pacienți cu SM). Pe lângă îmbunătățirile raportate în studiul MOBILE, autorii au descoperit o îmbunătățire semnificativă a pacienților tratați cu SR-4-AP pe 29-Scala de impact MS articol.5 EMA a acordat ulterior aprobarea necondiționată a SR{ {11}}AP pentru tratamentul pacienților cu SM cu dizabilități de mers. Studiul observațional de fază ENABLE cu 901 de pacienți a demonstrat că tratamentul cu SR-4-AP este benefic pentru pacienții cu SM prin intermediul funcționării fizice auto-percepute și sănătății psihologice într-un cadru real2 (tabelul 2).

Pe baza datelor preclinice promițătoare privind protecția împotriva neurodegenerării retinei descrise mai sus, grupul nostru a efectuat un studiu OCT retrospectiv, multicentric pentru a compara longitudinal neurodegenerarea retiniană între 52 de pacienți cu terapie continuă 4-AP și 51 de controale care au fost potrivite pentru toate covariatele relevante. folosind un algoritm de potrivire predefinit. În conformitate cu datele experimentale, în timpul terapiei concomitente 4-AP, degenerarea stratului de fibre ale nervului retinian macular a fost redusă pe parcursul a 2 ani. Cu toate acestea, aceste constatări trebuie să fie coroborate în studii de cohortă independente și în mod ideal prospective, în special pentru că dimensiunea efectului a fost scăzută și ratele de subțiere a stratului de fibre nervoase retiniene peripapilare și a celulelor ganglionare maculare/stratul plexiform interior nu au diferit semnificativ între grupuri. . Aceste discrepanțe ale efectului protector al 4AP numai asupra mRNFL, dar nici în pRNFL și nici în McGill, nu pot fi explicate ușor. Este important de menționat că, deoarece 4AP este autorizat doar pentru îmbunătățirea dizabilității de mers la pacienții cu EDSS 3.5-5, ratele de modificare analizate au fost investigate în stadiile ulterioare ale bolii și fără nevrită optică acută. Într-o astfel de situație, apar doar modificări foarte subtile ale retinei și ar fi necesare cohorte mari pentru a detecta efectele tratamentului. Prin urmare, studiul retrospectiv la pacienți nu a fost cu siguranță suficient de puternic pentru a detecta în mod fiabil efectele tratamentului de protecție și nu este o surpriză că doar unul dintre rezultate s-a dovedit pozitiv. Posibil, mRNFL a fost cel mai sensibil strat pentru detectarea efectelor tratamentului.5"

În rezumat, un număr tot mai mare de dovezi in vivo sugerează că 4-AP, pe lângă efectele sale simptomatice binecunoscute, prin prevenirea neurodegenerării, poate modifica evoluția bolii EAEON și, posibil, chiar și a pacienților cu SM. Dovezile preliminare in vitro implică implicarea nivelurilor de calciu celular și a căii NFAT, dar investigații suplimentare sunt justificate pentru a elucida mecanismele moleculare exacte care stau la baza efectului neuroprotector al 4-AP în demielinizarea inflamatorie mediată imun. Aceste constatări pot avea un impact marcat asupra strategiilor de tratament a SM dacă sunt confirmate într-un studiu clinic controlat randomizat prospectiv.

efectul Cistanche

Referințe

1. Leussink VI, Montalban X, Hartung HP. Restaurarea funcției axonale cu 4-aminopiridină: eficacitate clinică în scleroza multiplă și nu numai. Medicamente SNC 2018;32:637–651.

2. Horton L, Conger A, Conger D și colab. Efectul 4-aminopiridinei asupra vederii la pacienții cu scleroză multiplă cu neuropatie optică. Neurologie 2013;80:1862–1866.

3. Morrow SA, Rosehart H, Johnson AM. Efectul Fampridinei-SR asupra oboselii cognitive într-un studiu randomizat dublu-orb încrucișat la pacienții cu SM. Mult Scler Relat Disord 2017;11:4–9.

4. Brother SD, Filli L, Geissler O, et al. Efectele pozitive ale fampridinei asupra cogniției, oboselii și depresiei la pacienții cu scleroză multiplă de peste 2 ani. J Neurol 2018; 265:1016–1025.

5. Hayes KC, Blight AR, Potter PJ și colab. Studiu preclinic al 4-aminopiridinei la pacienții cu leziuni cronice ale măduvei spinării. Paraplegia 1993;31:216–224.

6. Iaci JF, Parry TJ, Huang Z, et al. Dalfampridina îmbunătățește funcția senzorio-motorie la șobolanii cu deficite cronice după ocluzia arterei cerebrale medii. Stroke 2013;44: 1942–1950.

7. Trimmer JS, Rhodos KJ. Localizarea canalelor ionice dependente de tensiune în creierul mamiferelor. Annu Rev Physiol 2004;66:477–519.

8. Rodr´ ıguez-Rangel S, Bravin AD, Ramos-Torres KM, Brugarolas P, S´anchez Rodr´ ıguez JE. Studii de relație structură-activitate a patru noi blocanți ai canalelor 4-aminopiridinei K( plus ). Sci Rep 2020;10:52.

9. Bostock H, Sears TA, Sherratt RM. Efectele ionilor de 4-aminopiridină și tetraetilamoniu asupra fibrelor nervoase normale și demielinizate ale mamiferelor. J Physiol 1981;313:301–315.

10. Huynh W, Pickering H, Howells J, et al. Efectul fampridinei asupra excitabilității axonale în scleroza multiplă. Clin Neurophysiol 2016;127:2636–2642.

11. DeCoursey TE, Chandy KG, Gupta S, Cahalan MD. Canale K plus dependente de tensiune în limfocitele T umane: un rol în mitogeneză? Nature 1984;307:465–468.

12. Rus H, Pardo CA, Hu L, et al. Canalul de potasiu tensionat Kv1.3 este foarte exprimat pe infiltratele inflamatorii din creierul de scleroză multiplă. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:11094–11099.

13. Wang X, Li G, Guo J, și colab. Canalul Kv1.3 ca țintă terapeutică cheie pentru bolile neuroinflamatorii: stadiul tehnicii și nu numai. Front Neurosci 2019;13:1393.

14. Wulffff H, Calabresi PA, Allie R, et al. Canalul Kv1.3 K( plus) dependent de tensiune din celulele T de memorie efectoare ca o nouă țintă pentru MS. J Clin Invest 2003;111:1703–1713.

15. Burton JM, Bell CM, Walker SE, O'Connor PW. 4-toxicitatea aminopiridinei cu supradozaj neintenționat la patru pacienți cu scleroză multiplă. Neurologie 2008;71: 1833–1834.

16. Johnson NC, Morgan MW. Un caz neobișnuit de 4-toxicitate pentru aminopiridină. J Emerg Med 2006;30:175–177.

17. Schwam E. Supradozaj accidental sever de 4-aminopiridină din cauza unei erori de combinare a farmaciei. J Emerg Med 2011;41:51–54.

18. Etemadifar M, Saboori M, Chitsaz A, et al. Efectul fampridinei asupra riscului de convulsii la pacienții cu scleroză multiplă. Mult Scler Relat Disord 2020;43:102188.

19. Goodman AD, Cohen JA, Cross A, et al. Fampridine-SR în scleroza multiplă: un studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, cu doze. Mult Scler 2007; 13:357–368.

20. Goodman AD, Brown TR, Cohen JA, et al. Studiu de comparare a dozelor de fampridină cu eliberare susținută în scleroza multiplă. Neurologie 2008;71:1134–1141.

21. Goodman AD, Brown TR, Krupp LB, et al. Fapridina orală cu eliberare susținută în scleroza multiplă: un studiu randomizat, dublu-orb, controlat. Lancet 2009;373: 732–738.

22. Goodman AD, Brown TR, Edwards KR, et al. Un studiu de fază 3 al dalfampridinei orale cu eliberare prelungită în scleroza multiplă. Ann Neurol 2010;68:494–502.

23. Hupperts R, Lycke J, Short C, et al. Fapridina cu eliberare prelungită și mersul pe jos și echilibrul în SM: studiu randomizat controlat MOBILE. Mult Scler 2016;22:212–221.

24. Naujock M, Stanslowsky N, Bufler S, et al. 4-Activitatea indusă de aminopiridină salvează neuronii motori hipoexcitabili din celulele stem pluripotente induse de pacient cu scleroză laterală amiotrofică. Stem Cells 2016;34:1563–1575.

25. Franciosi S, Ryu JK, Choi HB, Radov L, Kim SU, McLarnon JG. Efectele cu spectru larg ale 4-aminopiridinei pentru a modula semnalizarea celulară indusă de beta amiloid1-42- și răspunsurile funcționale în microglia umană. J Neurosci 2006;26:11652–11664.

26. Li S, Wei D, Mao Z, et al. Proiectarea, sinteza, evaluarea imunocitochimiei și investigarea de andocare moleculară a mai multor derivați de 4-aminopiridină ca potențiali agenți neuroprotectori pentru tratarea bolii Parkinson. Bioorg Chem 2017;73:63–75.

27. Smith AJ, Tauskela JS, Stone TW, Smith RA. Precondiționarea cu 4-aminopiridină protejează neuronii granulelor cerebeloase împotriva excitotoxicității. Brain Res 2009;1294: 165–175.

28. Tauskela JS, Aylsworth A, Hewitt M, Brunette E, Blondeau N. Eșecul și salvarea neuroprotecției induse de precondiționare în insulte severe asemănătoare unui accident vascular cerebral. Neurophar mycology 2016;105:533–542.

29. Tseng KC, Li H, Clark A, et al. 4-Aminopiridina promovează recuperarea funcțională și remielinizarea în leziunile acute ale nervilor periferici. EMBO Mol Med 2016;8:1409–1420.

30. Ogita K, Okuda H, Watanabe M, Nagashima R, Sugiyama C, Yoneda Y. Tratamentul in vivo cu blocantul canalului K plus 4-aminopiridina protejează împotriva morții celulelor neuronale induse de kainat prin activarea receptorilor NMDA la murin hipocampus. Neuropharmacology 2005;48:810–821.

31. Moriguchi K, Miyamoto K, Kusunoki S. 4-Aminopiridina ameliorează nevrita autoimună experimentală la șobolani Lewis. J Neuroimmunol 2017;305:72–74.

32. Schmalhofer WA, Bao J, McManus OB, et al. Identificarea unei noi clase de inhibitori ai canalului de potasiu voltaj, Kv1.3, cu proprietăți imunosupresoare. Biochimie 2002;41:7781–7794.

33. Varga Z, Company T, Papp F, et al. Expresia canalului de potasiu în CD4 uman plus celulele T regulatoare și na¨ ıve de la subiecți sănătoși și pacienți cu scleroză multiplă. Immunol Let 2009;124:95–101.

34. Jukkola P, Gu Y, Lovett-Racke AE, Gu C. Suprimarea demielinizării inflamatorii și a degenerării axonilor prin inhibarea canalelor Kv3. Front Mol Neurosci 2017;10:344.

35. Moriguchi K, Miyamoto K, Fukumoto Y, Kusunoki S. 4-Aminopiridina ameliorează encefalomielita autoimună experimentală cu recidivă-remisie la șoarecii SJL/J. J Neuroimmunol 2018;323:131–135.

36. Gobel K, Wedell JH, Herrmann AM, et al. 4-Aminopiridina îmbunătățește mobilitatea, dar nu evoluția bolii într-un model animal de scleroză multiplă. Exp Neurol 2013;248: 62–71.

37. Dietrich M, Koska V, Hecker C, et al. Efectele protectoare ale 4-aminopiridinei în nevrita optică experimentală și scleroza multiplă. Brain 2020;143:1127–1142.

38. Grimaldi M, Atzori M, Ray P, Alkon DL. Mobilizarea calciului din rezervele intracelulare, potențarea tranzitorilor de calciu induși de neurotransmițători și intrarea capacitivă a calciului de către 4-aminopiridină. J Neurosci 2001;21:3135–3143.

39. van Diemen HA, Polman CH, Koetsier JC, van Loenen AC, Nauta JJ, Bertelsmann FW. 4-Aminopiridină la pacienții cu scleroză multiplă: doza și nivelul seric legate de eficacitate și siguranță. Clin Neuropharmacol 1993;16:195–204.

40. Davis FA, Stefoski D, Rush J. 4-aminopiridina administrată oral îmbunătățește semnele clinice în scleroza multiplă. Ann Neurol 1990;27:186–192.

41. Stefoski D, Davis FA, Faut M, Schauf CL. 4-Aminopiridina îmbunătățește semnele clinice în scleroza multiplă. Ann Neurol 1987;21:71–77.

42. Stefoski D, Davis FA, Fitzsimmons WE, Luskin SS, Rush J, Parkhurst GW. 4- Aminopiridină în scleroza multiplă: administrare prelungită. Neurologie 1991;41: 1344–1348.

43. Jones RE, Heron JR, Foster DH, Snelgar RS, Mason RJ. Efectele 4-aminopiridinei la pacienții cu scleroză multiplă. J Neurol Sci 1983;60:353–362.

44. van Diemen HA, Polman CH, van Dongen TM, et al. Efectele 4-aminopiridinei asupra semnelor clinice în scleroza multiplă: un studiu randomizat, controlat cu placebo, dublu-orb, încrucișat. Ann Neurol 1992;32:123–130.

45. Polman CH, Bertelsmann FW, van Loenen AC, Koetsier JC. 4-aminopiridină în tratamentul pacienților cu scleroză multiplă. Eficacitate și siguranță pe termen lung. Arch Neurol 1994;51:292–296.

46. ​​Romani A, Bergamaschi R, Candeloro E, Alfonsi E, Callieco R, Cosi V. Fatigue in multiple sclerosis: multidimensional assessment and response to symptomatic treatment. Mult Scler 2004;10:462–468.

47. Rossini PM, Pasqualetti P, Pozzilli C, et al. Oboseală în scleroza multiplă progresivă: rezultatele unui studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, încrucișat cu aminopiridină orală. Mult Scler 2001;7:354–358.

48. Hauser SL, Johnston SC. 4-aminopiridină: viață nouă pentru un medicament vechi. Ann Neurol 2010; 68:A8–A9.

49. Schwid SR, Petrie MD, McDermott MP, Tierney DS, Mason DH, Goodman AD. Evaluarea cantitativă a 4-aminopiridinei cu eliberare susținută pentru tratamentul simptomatic al sclerozei multiple. Neurologie 1997;48:817–821.

50. Goodman AD, Bethoux F, Brown TR, et al. Siguranța și eficacitatea pe termen lung a dalfampridinei pentru afectarea mersului la pacienții cu scleroză multiplă: rezultate ale extensiilor deschise a două studii clinice de fază 3. Mult Scler 2015;21:1322–1331.

51. Hobart J, Ziemssen T, Feys P, et al. Evaluarea îmbunătățirilor semnificative clinic ale capacității de mers auto-raportate la participanții cu scleroză multiplă: rezultate din studiul randomizat, dublu-orb, de fază III, ENHANCE, al fampridinei cu eliberare prelungită. Medicamente SNC 2019;33:61–79.

52. Macdonell R, Nagels G, Lapland DA, et al. Impactul îmbunătățit asupra sănătății raportat de pacient al sclerozei multiple: studiul ENABLE al PR-fampridinei. Mult Scler 2016;22: 944–954.

53. Noble M, Tseng K-CC, Li H, Elfar JC. 4-Aminopiridina ca agent unic de diagnostic și tratament pentru leziuni severe de strivire a nervilor. Mil Med 2019;184(suppl 1):379–385.