A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Vă rugăm să faceți clic aici pentru partea 2

Cistanche are un efect neuroprotector foarte bun

Gabriel Gonzalez 1,2 , Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D'Acunto 1, Petr Kaˇnovsk2 și Miroslav Strnad1,2,*

1. Laboratorul de Reglementare a Creșterii, Institutul de Botanică Experimentală al Academiei Cehe de Științe,

și Facultatea de Științe, Universitatea Palacký, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Republica Cehă;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. Departamentul de Neurologie, Spitalul Universitar Olomouc și Facultatea de Medicină și Medicină Dentară,

Universitatea Palacký Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, Republica Cehă; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Corespondență: miroslav.strnad@upol.cz; Tel.: plus 420-585-634-850

Abstract: Citokininesunt fitohormoni pe bază de adenină care reglează procesele cheie în plante, cum ar fi diviziunea și diferențierea celulară, creșterea rădăcinilor și lăstarilor, dominanța apicală, ramificarea și germinarea semințelor. În studiile preliminare, aceștia au demonstrat și activități de protecție împotriva bolilor neurodegenerative umane. Pentru a extinde cunoștințele despre protecția (activitatea de protecție) pe care o oferă, am investigat activitățile naturalecitochinineîmpotriva toxicității induse de salsolinol (SAL) (aboala Parkinsonmodel) și moartea indusă de glutamat (Glu).neuron-ca celulele dopaminergice SH-SY5Y. Am descoperit că kinetin-3-glucozida, cis-zeatina ribozida și N{6-izopentenil adenozina au fost active în modelul PD indus de SAL. În plus, trans-, cis-zeatina și kinetina împreună cu chelatorul de fier deferoxamină (DFO) și inhibitorul de necroptoză necrostatina 1 (NEC-1) au redus semnificativ ratele de moarte celulară în modelul indus de Glu. Testele lactat dehidrogenazei au arătat căcitochinineprevazut mai josneuroprotectoractivitate decât DFO și NEC-1. Mai mult, au redus activitățile apoptotice a caspazei-3/7 mai puțin decât DFO. Însăcitochininea avut efecte foarte asemănătoare cu DFO și NEC-1 asupra producției de radicali superoxid. În general, ei au arătat activitate de protecție în modelul indus de SALparkinsonianneuronalemoartea celulară și modelul de deteriorare oxidativă indus de Glu, în principal prin reducerea stresului oxidativ.

Cuvinte cheie: citochinină; fitohormon; neuroprotecție; celule SH-SY5Y asemănătoare neuronilor; citotoxicitate; salsolinol; glutamat; stresul oxidativ; boala Parkinson

planta cistancheasupra efectelor asupraNeuroprotecție

1. Introducere

boala Parkinson(PD) este a doua cea mai frecventă boală neurodegenerativă legată de motor și este de așteptat ca numărul cazurilor diagnosticate la nivel global să crească de la 6 milioane în 2015 la peste 12 milioane până în 2040 [1]. Se caracterizează prin simptome motorii legate de degenerarea specifică și pierderea a aproximativ 30-70% din dopaminergice (DA)neuroniiîn substanța nigra pars compacta și proiecțiile lor spre striat [2,3]. Unele dintre multele semne moleculare cunoscute ale PD includ stresul oxidativ și nitrozativ sporit, disfuncția mitocondrială [4–7], excitotoxicitatea [8], disfuncția sistemului ubiquitin/proteazomal [9] și neuroinflamația [10]. Tratamentele actuale au diverse efecte secundare adverse și oferă doar o ameliorare simptomatică [11], așa că există eforturi intense pentru a dezvolta medicamente cu efecte curative eficiente asupra DA degeneratoare.neuronii. Resursele care pot ajuta astfel de eforturi includ compuși naturali care tind să aibă mai puține efecte secundare. Printre altele, substanțele din Ginkgo biloba (ginkgetin, ginkgolid, bilobalid), ginseng (ginsenozide) și flavonoide (baicaleină, kaempferol, rutina și luteolină) au demonstrat o activitate de protecție largă în mai multe modele in vitro (inclusiv linia celulară de neuroblastom uman SH). -SY5Y) și modele in vivo de PD indusă de diclorură de 1,1'-dimetil-4,4'-bipiridiniu (paraquat), 1-metil- 4-fenil-1, 2,3,6-tetrahidropiridină (MPTP), 1-metil-4-fenilpiridiniu (MPP plus ) și 6-hidroxidopamină ({6-OHDA) [12].

Studiul prezentat aici s-a concentrat pe efectele unei clase de fitohormoni naturali numitecitochinine(CK) și metaboliții lor, care sunt regulatori bine cunoscuți ai diviziunii celulare, creșterii, diferențierii și senescenței frunzelor la plante [13]. Din punct de vedere structural, CK sunt derivați de adenină substituiți în poziția N6-fie cu o catenă laterală prenil (izopentenil) fie aromatică. Formele naturale includ 6-(E)-4-hidroxi-3-metil dar-2-enilaminopurina (transzeatina, tZ), izomerul său 6-(Z) ( cis-zeatină, cZ), N6-izopentenil adenină (iP), 6-benzil amino purină (BAP), 6-furfurilaminopurină (kinetina, K) și orto-, meta-, și derivați para-hidroxilați sau metoxilați ai BAP, numiți topoline (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). Diferite 9-ribozide, 9-nucleotide, precum și 7-, 9 și O-glucozide ale acestor forme apar, de asemenea, în mod obișnuit, așa cum se arată în tabelul 1. Pe lângă rolurile lor native în plante, CK-urile au arătat o activitate puternică anti-oxidantă față de speciile reactive de oxigen (ROS) care oferă protecție în mai multe modele de stres in vitro ale tulburărilor asociate îmbătrânirii [14].

Tabelul 1. Structuri alecitochinineși agenții de control pozitiv.

În special, CK-urile au activitate citoprotectoare în modele precum moartea celulară indusă de H2O2- a fibroblastelor umane [15] și stresul glioxidativ indus de D-galactoză în astrocitele de șobolan [16]. Mai important, în acest context, au arătatneuroprotectorefecte în modele legate de boli neurodegenerative, cum ar fi PD familială, toxicitatea indusă de inhibitor de proteazom MG 132-sau H2O2-indusă în celulele SH-SY5Y [17], lezarea oxidativă indusă de Glu a hipocampului de șoarece HT22neuronalecelule [18] și modelul celular PC12 al bolii Huntington [19]. Alte studii indică faptul că activitățile de protecție ale CK implică atât modularea directă [20,21], cât și indirectă [15,16,22] a sistemelor redox celulare. În plus față de activitățile antioxidante caracteristice ale CK, acestea au efecte de reglare în mitocondrii care sporescneuronaleviabilitate [17]. Mai mult, K poate stabiliza potențialul membranei mitocondriale și poate crește producția de ATP, atenuând astfel moartea indusă de Glu a celulelor HT22 [18]. Cu toate acestea, în ciuda constatărilor privind efectele lor în mai multe modele, există cunoștințe limitate despre activitatea protectoare a CK în cea mai comună formă (sporadică) de PD.

Pentru a aborda decalajul de cunoștințe descris mai sus, am evaluat sistematic efectele CK-urilor naturale și ale metaboliților acestora în două modele in vitro: Un model de PD indus de salsolinol (SAL) și model de daune oxidative indus de glutamat (Glu) înneuron-ca celulele SH-SY5Y. Această linie a fost utilizată datorită fenotipului său dopaminergic, sensibilității la toxinele dopaminergice precum SAL și formării convenabile de populații relativ stabile deneuronalecelule cu rate reduse de proliferare după 48 de ore de expunere la 10 uM acid all-trans retinoic (ATRA) [23–25].

NeuronCelulele asemănătoare au fost expuse la endo/exotoxină SAL pentru a imita patologia PD prin disfuncția sistemului redox celular: epuizarea glutationului (GSH) și inhibarea atât a activităților enzimei antioxidante (Cu/Zn superoxid dismutază și catalază), cât și a activităților mitocondriale. complexe (I și II), conducând la apoptoză și necroză [26]. În celălalt model, Glu induce daune oxidative potențial letale prin perturbarea sistemului redox. Ambele modele din linia celulară SH-SY5Y au fost utilizate anterior în studiile de neuroprotecție [26,27].

Activitățile citoprotectoare și/sau antioxidante legate de tulburările degenerative ale K, iP, BAP, iPR, tZR și bazele lor libere au fost testate și (după cum sa subliniat mai sus) s-a descoperit că unele CK au activități de protecție înneuronalecelule. Cu toate acestea, niciun studiu publicat anterior nu a examinat structura-neuroprotectorrelația de activitate (SAR) a CK-urilor naturale (Tabelul 1). Prin urmare, acest studiu a fost întreprins pentru a examinaneuroprotector(anti-parkinsonian) activități ale aproape tuturor CK-urile naturale cunoscute în modelele de neurodegenerare induse de SAL și Glu selectate. În primul rând, am evaluat fiecare dintre capacitatea de absorbție a radicalilor de oxigen (ORAC) și (în testele de siguranță) citotoxicitatea față de fiecare CK.neuron-ca celulele SH-SY5Y. Apoi, am evaluat efectele neuroprotectoare ale compușilor și influența asupra nivelurilor de stres oxidativ prin măsurarea producției de superoxid (O2) (dihidroetidiu, test DHE) și a activităților caspazei apoptotice-3,7. Rezultatele oferă primele indicații sistematice raportate ale relațiilor dintre structurile CK naturale șineuroprotectorActivități.

Cistanche herbaare un foarte bunneuroprotectorefect

2. Rezultate și discuții

2.1. Capacitatea de absorbție a radicalilor de oxigen a citokininelor (ORAC)

Deoarece bolile neurodegenerative sunt asociate cu stres oxidativ crescut, activitatea antioxidantă joacă un rol cheie în apărareaneuronalecelule. Pentru a evalua potențialul biologic al CK în acest sens, capacitatea antioxidantă a fost determinată de ORAC, care este utilizat în mod obișnuit pentru a determina capacitatea antioxidantă a substanțelor [28]. Capacitatea antioxidantă a fost exprimată ca echivalenți Trolox (TE), care determină eficacitatea (de mai mică la mai mare) a compușilor decât Trolox pe o bază echimolară. Rezultatele, prezentate în tabelul 1, arată că topolinele (oT, mT și pT) și ribozidele lor (oTR, mTR, pTR) au activități antioxidante ridicate, care sunt probabil strâns legate de sistemul bogat în electroni al lor C{{ 3}}substituent hidroxi benzil amino. În ciuda valorilor ORAC ridicate, topolinele nu au avut marineuroprotectoractivitate. Cu toate acestea, mai multe CK heteroaromatice, inclusiv K (N6-furfurilaminopurina) și cis-zeatin-O-glucozidă nearomatică (cZOG), care are un 4-hidroxi-3-metilbut{{7} substituentul }en-1-il)amino, a prezentat, de asemenea, capacitate antioxidantă mare (Tabelul 2). Alți metaboliți ai CK, inclusiv kinetina-3-glucozidă (K3G), kinetina ribozida 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

beneficii cistanche stempeanti-boala Alzheimer

2.2. Diferențierea celulelor SH-SY5Y

Pentru a studia CK-urileneuroprotectorefecte, celulele de neuroblastom SH-SY5Y (alese din motive deja descrise [23]) au fost diferențiate prin expunerea la 10 uM ATRA timp de 48 de ore așa cum s-a descris anterior [23,24]. Au fost apoi colorați folosind un kit de colorare cu membrană pentru a examina diferențele morfologice dintre celulele nediferențiate și cele diferențiate. După cum se arată în Figura 1A,neuronCelulele diferențiate asemănătoare au crescut mai puțin dens, au fost mai prelungite și au produs mai multe neurite (indicate prin săgeți galbene în figură) decât celulele nediferențiate. Aceste modificări morfologice asociate cu diferențierea au fost observate anterior, chiar și după o expunere mai scurtă (24 de ore) la ATRA [24,30]. Mai important, numărul de neuriți crește dramatic până la un nivel în care pot crea o rețea de neuriți. Din acest motiv, viabilitatea celulară a fost măsurată pentru a compara rata de proliferare a celulelor SH-SY5Y nediferențiate și diferențiate. Viabilitatea SH-SY5Y nediferențiată a fost considerată ca rată maximă de proliferare. Rezultatele prezente în

Figura 1B arată că rata de proliferare (evaluată prin testul de viabilitate Calcein AM) a SH-SY5Y a fost redusă cu 23% după 48 de ore de tratament ATRA.

Figura 1. (A) Micrografii fluorescente ale celulelor SH-SY5Y cu membrane colorate folosind un kit de excrescență Neurite (Invitrogen™): celule de control, nediferențiate (expuse la soluție de tratament simulată:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

Tabelul 2. Capacitatea de absorbție a radicalilor de oxigen (ORAC) a substanței testatecitochinine(CKs) exprimate ca echivalenți Trolox (TE) pe o bază echimolară. Numele, abrevierile și structurile CK-urilor sunt prezentate în Figura 1.

2.3. Citotoxicitatea citokininelor față de celulele SH-SY5Y asemănătoare neuronului

În testele de citotoxicitate potențială a CK cu testul de viabilitate Calcein AM [31], majoritatea au arătat o toxicitate scăzută față deneuron-ca celulele SH-SY5Y. Scăderea viabilității sub 90 la sută a fost considerată ca un prag pentru efectul neurotoxic. Singurele două excepții au fost KR (11,9 la sută) și pTR (10,5 la sută), în conformitate cu constatările anterioare conform cărora unelecitochininămetaboliții, în special ribozide, pot avea efecte citotoxice [32]. Alte ribozide, cum ar fi cZR, iPR, oTR, mTR, nu au cauzat nicio reducere aparentă aneuron-ca și viabilitatea celulelor SH-SY5Y (Tabelul 3). DFO [33,34] și NEC-1 [35,36] utilizate ca martori pozitivi în modelul nostru in vitro au fost, de asemenea, dovedite prin alte studii asupra celulelor SH-SY5Y a fi netoxice. În concluzie, în principal derivații KR și pTR au prezentat o viabilitate mai mică decât 90 la sută și, prin urmare, au fost considerați mai puțin interesanți pentru evaluare ulterioară în ambele modele in vitro de neurodegenerare.

Tabelul 3. Viabilitatea celulară aneuron-ca celulele SH-SY5Y după expunerea lacitochininetimp de 24 h. Viabilitatea este exprimată ca procent din controlul DMSO.

2.4. Identificarea citochininelor neuroprotective în modelul de PD indus de SAL

Pentru aceste teste,neuronaleCelulele SH-SY5Y au fost diferențiate timp de 48 de ore, apoi au fost co-tratate cu 500 uM SAL și fiecare CK la trei concentrații (0,1, 1, 10 uM). După cum se arată prin linia punctată din Figura 2A, aplicarea neurotoxinei SAL la 500 uM a redus viabilitatea celulelor SH-SY5Y diferențiate, conform testului Calcein AM, cu 30%. N-acetilcisteina (NAC) a fost utilizată ca martor pozitiv în aceste teste datorită efectului său neuroprotector raportat anterior în același model in vitro bazat pe celule SH-SY5Y [37]. Au fost utilizate concentrații de 10, 100 și 1000 uM NAC pentru a induce recuperarea parțială sau aproape completă în modelul SAL. NAC a reușit să crească viabilitatea celulară la o concentrație de 100 uM și 1 mM, corespunzând la 83,39 ± 1,74 la sută și, respectiv, la 89,21 ± 2,89 la sută. Activitatea de protecție a NAC la 100 uM (indicată prin linia întreruptă în Figura 2A) a fost utilizată ca prag de potență pentru selectarea CK-urilor pentru teste ulterioare. Conform acestei configurații, activitățile neuro-protectoare semnificative biologic au fost observate cu K3G la 10 uM (81,84 ± 2,36 la sută), cZR la 0,1 uM (81,14 ± 2,30 la sută) și 1 uM (81,53 ± 2,24 la sută ) și iPR la 1 uM (82,43 ± 2,51 procente). Astfel, iPR și cZR au fost neuroprotectori eficienți la concentrații micro sau submicromolare mai mici decât NAC. Thecitochininăscreening-ul a mai arătat că mulți alți metaboliți pot crește moderat viabilitatea celulelor SH-SY5Y diferențiate expuse la SAL. Cu toate acestea, unele CK testate (inclusiv tZR, tZMP, mT, mTR, pT și pTR) au avut un efect protector foarte mic.

Figura 2. (A)Neuroprotectoractivitatea decitochinineși N-acetilcisteină (NAC) în modelul de PD indus de SALneuron-ca celulele SH-SY5Y. Linia întreruptă arată pragul efectului NAC la carecitochinineau fost selectați pentru testare ulterioară; linia punctată numără apoi numărul de celule vii din testul Calcein AM după tratarea celulelor cu 500 uM SAL; celule de control sănătoase (CTR, DMSO < 0,1="" la="" sută).="" triplicat="" în="" cel="" puțin="" trei="" zile="" separate.="" (b)="" moartea="" celulelor="" sh-sy5y="" normalizată="" după="" colorarea="" cu="" iodură="" de="" propidiu.="" se="" triplica="" în="" cel="" puțin="" cinci="" zile="" independente.="" *="" p="" în="" comparație="" cu="" vehiculul="" cu="" 500="" um="" sal,="" #="" p="" în="" comparație="" cu="" vehiculul="" fără="" 500="" um="">

Pentru a confirma, cele mai active activități anti-PD ale CK-urilor naturale, ratele globale de moarte celulară au fost cuantificate prin colorare cu iodură de propidiu (PI), care (spre deosebire de testele de viabilitate bazate pe metabolismul celular) etichetează doar celulele cu integritatea membranei afectate, celulele moarte. , și celule deja moarte [38]. Rezultatele au fost normalizate în ceea ce privește rata de moarte celulară în urma tratamentului cu SAL singur (setat la 100 la sută). După cum se arată în Figura 2B, substanța de control pozitiv NAC a redus în mod semnificativ ratele de moarte celulară atât la 100, cât și la 1000 uM (la 77,3 ± 2,21 la sută și, respectiv, la 77,5 ± 4,44 la sută). În general, NAC sa dovedit a fi unneuroprotectoragent cu activități comparabile cu cele înregistrate în alte studii într-o manieră dependentă de doză (în intervalul 50–500 uM) pentru celulele SH-SY5Y [37]. Testul PI a arătat, de asemenea, că CK-urile cZR, K3G și iPR au activități de protecție, în special cZR, care a redus rata de moarte celulară la 71,6 ± 5,08 la sută la 0,1 uM. Spre deosebire de cZR, K3G a avut efecte inversate dependente de doză, cu activitate maximă la 10 uM (reducerea ratei de moarte celulară la 75,0 ± 3,69 la sută) și activitatea NPR a atins vârful la 1 uM (reducerea ratei la 73,9 ± 4,99 la sută). Luate împreună, așa cum se arată în Figura 2, CK-urile au oferit un comparabilneuroprotectoractivitate la 100 uM NAC conform ambelor analize de viabilitate și citotoxicitate. Mai mult, concentrațiile eficiente de CK, cum ar fi cZR și iPR, au fost mult mai mici decât cele ale NAC, în intervalele sub-micromolare și micromolare. Observațiile anterioare obținute în urma colorării duble cu PI și anexină V/PI indică faptul că K poate reduce apoptoza [39], astfel că am investigat și efectele CK și NAC asupra stresului oxidativ și activării caspazei-3,7 (un bine- marker de apoptoză cunoscut).

2.5. Citokininele scad formarea de radicali de superoxid indusă de SAL

Stresul oxidativ (OS) este un contributor patologic cheie la mai multe boli neurodegenerative și atât SAL (la > 100 uM) cât și tetrahidroizochinolinele sunt inductori puternici de OS [26,40]. Astfel, am măsurat, de asemenea, formarea de superoxid (un marker ROS și OS important) în prezența SAL cu și fără CK sau NAC selectate. Pentru a se asigura că SAL a cauzat suficiente daune OS în celulele SH-SY5Y pentru a detecta răspunsurile, celulele au fost expuse la 500 uM SAL timp de 24 de ore, ca în munca anterioară [37] și în conformitate cu constatările prezentate mai sus. Celulele au fost apoi colorate cu dihidroetidiu (DHE) pentru a detecta formarea de radicali superoxid [41,42]. După cum se poate observa în Figura 3A, celulele au fost observate vizual după etichetarea cu DHE (care furnizează semnale de fluorescență roșie în urma reacției cu superoxid). SAL a indus o creștere clară a fluorescenței DHE, în raport cu nivelurile din celulele martor și tratate cu NAC. Mai mult, trei CK (cZR, K3G și iPR) au avut efecte vizuale similare cu NAC (100 uM) asupra fluorescenței DHE. În plus, cuantificarea spectrofotometrică în ceea ce privește nivelurile detectate în celulele tratate numai cu SAL (stabilită la 100 la sută), a fost în conformitate cu observația microscopică. După cum se arată în Figura 3B, nivelul normalizat de superoxid în celulele de control sănătoase (CTR) a fost mai mic de 39%, iar substanța de control pozitiv NAC a oferit o reducere moderată până la completă a producției de ROS indusă de SAL la 100 și 1000 uM (la 76,3). ± 4,33 și 44,3 ± 5,12 la sută), sugerând că epuizarea glutationului (GSH) joacă un rol cheie în model [26]. Interesant, SAL a indus reduceri dramatice ale conținutului de GSH al celulelor SH-SY5Y însoțite de creșterea OS, la niveluri similare cu cele observate anterior într-un studiu care a înregistrat, de asemenea, efecte mediate de NAC asupra viabilității celulare, morții celulare și conținutului de glutation [43] . Rezultatele prezentate aici arată că NAC a redus, de asemenea, formarea de radicali de superoxid la niveluri bazale (adică, nivelurile în controalele tratate cu DMSO). Ribozidele CK au fost testate la concentrații active (0,1–1 uM) împreună cu K3G și au redus semnificativ conținutul de radicali superoxid al celulelor la următoarele niveluri (față de cele ale celulelor tratate numai cu SAL): cZR 80,34 ± 5,99 procente la 0,1 uM ; K3G 77,1 ± 4,89 procente la 10 uM; iPR 79,2 ± 5,91 procente la 1 uM, comparabil cu efectele 100 uM NAC. În mod colectiv, demonstrațiile ortogonale indică puternic că activitatea anti-OS puternică joacă un rol cheie în efectele protectoare ale NAC și CK în modelul PD indus de SAL. O corelație între ameliorarea OS și neuroprotecția a fost observată și de către alți autori [29], iar mai multe studii au descoperit că K și BAP pot ameliora direct activitățile OS [44] prin formarea de complexe cu ioni de Cu2 plus, rezultând superoxid dismutază- ca activitate [45,46]. Cu toate acestea, CK au fost descrise, de asemenea, ca antioxidanți indirecți, cu efecte mediate de inducerea factorului nuclear eritroid 2-factorul 2 (NRF2) legat de calea de răspuns antioxidant (iPR) [22] sau de restabilirea parțială a activităților glutation peroxidazei și SOD ( K) [16]. În plus, se pare că K areneuroprotectoractivități împotriva leziunii OS induse de H2O2 în celulele SH-SY5Y [17]. Ambele tipuri de activitate anti-ROS raportată a CK-urilor ar putea explica efectele cZR, K3G și iPR în reducerea radicalilor superoxid în modelul PD al celulei SH-SY5Y indus de SAL [47-50].

Figura 3. (A) Microfotografii care arată stresul oxidativ indus de SAL și activitățile de reducere a stresului oxidativ alecitochinineîn uman diferenţiatneuron-ca celulele SH-SY5Y vizualizate prin microscopie cu fluorescență după marcarea cu dihidroetidiu (DHE). Baruri=50 um. Imaginile arată celule tratate cu soluție de DMSO (martori), 500 uM salsolinol (SAL) singur și combinații de 500 uM SAL și 1000 uM NAC (plus NAC), 0,1 uM cZR (plus cZR); 10 uM K3G (plus K3G), 1uM iPR (plus iPR) timp de 24 de ore înainte de colorarea cu DHE. (B) formarea radicalilor superoxid indus de SAL șicitochininăsau activitate protectoare a N-acetilcisteinei (NAC). Graficul arată cuantificarea celulelor colorate cu DHE folosind cititorul de microplăci Infinite M200 Pro (Tecan, Austria). Se triplica în cel puțin cinci zile independente. * P în comparație cu vehiculul cu 500 uM SAL, # P în comparație cu vehiculul fără 500 uM SAL.