Partea Ⅱ: Glicozidele feniletanoide Cistanche Tubulosa induc apoptoza celulelor de carcinom hepatocelular prin căile dependente de mitocondrii și MAPK și îmbunătățesc efectul antitumoral prin combinație cu cisplatină

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Am evaluat în continuare efectul imunostimulator al CTPG (Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) pe șoareci. După injectarea ip, injectarea sc și administrarea ig de CTPG (200 și 400 mg/kg), nu a existat nicio schimbare semnificativă în starea șoarecilor în comparație cu grupul netratat. Greutatea corporală a șoarecilor nu a avut nicio diferență semnificativă între grupurile tratate cu CTPG și grupurile netratate (Figura 7A). Indicii inimii, ficatului, splinei, plămânilor, rinichilor și timusului șoarecilor au fost similari între toate grupurile, cu excepția indicilor splinei ai șoarecilor din grupul de injecție ip CTPG de 400 mg/kg (Tabelul 1). Rezultatele au sugerat că dozele selectate de CTPG nu au avut efecte secundare la șoareci. Splina este un organ important de apărare imună la mamifere, iar dezvoltarea sa afectează direct funcția imunitară a individului și capacitatea de a rezista bolilor. Indicele organelor imune reflectă dezvoltarea și funcția imună a organelor imune. Splina conține o varietate de celule imunitare, inclusiv celule T, celule B, celule ucigașe naturale (celule NK), macrofage, celule dendritice (DC) și altele, care joacă un rol important în sistemul imunitar.30 A fost raportat. că polizaharidele pot crește numărul de celule imunitare pentru a spori cel al organismuluiimunitate.31 Deoarece injectarea ip de CTPG a crescut semnificativ indicele splinei (a crescut de 0,55 ori), am analizat în continuare numărul diferitelor celule imunitare din splină. Rezultatele au arătat că injecția ip de CTPG a crescut semnificativ numărul de celule T (CD3 plus celule CD19-) (crește de 0,49 ori), celule B (CD3-CD19 plus celule) (crește 0 .49 ori) și celule NK (CD3-CD19-CD49b plus celule) (a crescut de 1,63 ori) în comparație cu grupul netratat. Celulele T CD4 plus și CD8 plus, ca principale subtipuri de celule T, joacă un rol important în răspunsul imun celular specific antigenului.32 Prin urmare, am analizat în continuare numărul și starea de activare a celulelor T CD4 plus și CD8 plus în splină. Rezultatele au indicat că injecția ip de CTPG nu numai că a crescut semnificativ numărul de celule T CD4 plus și CD8 plus (a crescut de 0,55 și respectiv 0,34 ori), dar a îmbunătățit și starea de activare a CD4 plus celule T (CD4 plus CD44 plus celule) (creștet de 0,84 ori) (Figura 7B), aceste rezultate sugerând că CTPG a avut funcție de îmbunătățire a sistemului imunitar.

Combinația de CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) și Cisplatin a prezentat un efect antitumoral puternic asupra modelului de șoarece cu tumoare H22

Este în general acceptat că chimioterapia sau radioterapia pot duce la un prognostic prost și pot induce numeroase evenimente adverse, care se pot datora suprimării sistemului imunitar și lezării țesuturilor și organelor normale. Polizaharidele din TCM au efecte de îmbunătățire a sistemului imunitar și atenuează daunele organelor și celulelor imune cauzate de chimioterapie, de exemplu, chitosan33 și polizaharidele Lycium barbarum.34 Rezultatul de mai sus a arătat că CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) ar putea ameliora efectele secundare ale cisplatinei asupra sistemului imunitar. Prin urmare, efectul antitumoral al CTPG combinat cu cisplatină a fost evaluat în modelul de șoarece tumoral H22. După cum se arată în Figura 8A, CTPG singur, cisplatin singur și combinația de CTPG și cisplatină (CTPG plus cisplatină) au suprimat semnificativ creșterea tumorii H22 în comparație cu grupul de control. CTPG plus cisplatină au arătat un efect inhibitor mai puternic decât cel al CTPG și cisplatină în monoterapie. În a 20-a zi, volumele tumorii în grupele martor, cisplatină în monoterapie, CTPG singur și CTPG plus cis platină au fost de aproximativ 1707,8, 722,5, 1033,8 și, respectiv, 367,5 mm3. În aceeași zi, tumorile au fost colectate pentru observarea vizuală (Figura 8B) și compararea greutății (Figura 8C). CTPG plus cisplatin au arătat efecte terapeutice mai bune asupra modelului de șoarece tumoral H22 decât CTPG sau cisplatin singur. Greutatea tumorii în grupul CTPG plus cisplatină a fost mai mică decât cea din alte grupuri. Aceste rezultate sugerează că activitatea antitumorală a CTPG și a cisplatinei are efecte sinergice.

Greutățile corporale ale șoarecilor au fost măsurate pentru a reflecta starea de sănătate a șoarecilor. Greutatea corporală a scăzut remarcabil după tratamentul cu cisplatină, sugerând o toxicitate sistemică severă indusă de cisplatină.35 În comparație, CTPG combinat cu cisplatină a ameliorat semnificativ pierderea în greutate corporală indusă de cisplatină, în timp ce CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) singur nu a avut un efect semnificativ asupra greutății corporale a șoarecilor (Figura 8D). Organele, inclusiv splina, inima, ficatul, plămânul, rinichiul și timusul au fost, de asemenea, izolate pentru a calcula indici de organe. În comparație cu grupul netratat, indicii splinei au fost semnificativ scăzuti și crescuti de cisplatină și, respectiv, CTPG. CTPG plus cisplatină au recuperat indici de splină în comparație cu cisplatină în monoterapie. Alți indici de organe nu au arătat nicio diferență semnificativă între toate grupurile (Tabelul 2).CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) Combinat cu Cisplatin îmbunătățitImunitateal șoarecilor tumorali.

Rezultatele de mai sus au arătat că CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) a crescut imunitateade șoareci și a inhibat apoptoza splenocitelor indusă de cisplatină. Am investigat în continuare dacă efectul antitumoral al CTPG plus cisplatină a fost corelat cu imunitatea sporită. În procesul de apariție și dezvoltare a tumorii, sistemul imunitar al organismului joacă o funcție importantă de supraveghere imunitară, iar imunitatea celulară mediată de celulele T joacă un rol cheie. Celulele T CD4 plus au funcția de a ajuta imunitatea celulară și răspunsul imun umoral, iar celulele T CD8 plus sunt principalele celule efectoare ale unui răspuns imun, care pot ucide în mod specific celulele țintă și pot juca un rol important în imunitatea tumorală și imunitatea antivirale.32 Splinele șoarecilor purtători de tumori au fost colectate pentru a detecta numărul de celule T și celule B prin citometrie în flux. Frecvențele și numărul de celule T, inclusiv celulele T CD4 plus și CD8 plus din grupul CTPG plus cisplatină, au fost semnificativ mai mari decât cele din grupul de control (a crescut de 0,55 și respectiv 0,7 ori) și grupurile de cisplatină (a crescut de 0.92 și, respectiv, de 1,16 ori) (Figura 9A și B). Comparativ cu grupul de control, CTPG singur a crescut, de asemenea, parțial numărul de celule T CD4 plus și CD8 plus, deși nu a existat o diferență semnificativă. Frecvențele și numărul de celule B nu au avut nicio diferență semnificativă între toate grupurile.

Celulele supresoare derivate din mieloid (MDSC) și celulele T reglatoare (Tregs) se extind în tumori și inhibă răspunsurile imune antitumorale; ele suprimă activarea și expansiunea celulelor T CD4 plus, funcția celulelor T efectoare, activarea și/sau proliferarea și formarea de citokine a celulelor T CD4 plus și CD8 plus, proliferarea celulelor B și producția de imunoglobuline și schimbarea clasei, funcțiile citotoxice ale celulelor NK și ale celulelor T ucigașe naturale (NKT), precum și funcția și maturarea DC.36-38 Frecvențele și numărul de MDSC (CD11b plus Gr-1 plus ), macrofage (CD11b plus Gr). -1-), și Tregs (Tregs naturale: CD4 plus CD25 plus Foxp3 plus; Treg induse: CD4 plus CD25-Foxp3 plus) în splinele șoarecilor tumorali au fost analizate prin citometrie în flux. Comparativ cu grupul de control, frecvențele și numărul de MDSC au scăzut semnificativ după injectarea cu cisplatină în monoterapie (a scăzut de 1,56 ori) sau în combinație cu CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) (a scăzut de 0,62 ori). Numărul de macrofage CD11b plus Gr-1-a scăzut, de asemenea, semnificativ, deși nu a existat o schimbare semnificativă a frecvenței lor (Figura 9C). În plus, CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glicozide) singure și tratamentul cu CTPG plus cisplatină au scăzut semnificativ frecvențele Treg-urilor induse (a scăzut de {{0}},33 și, respectiv, de 0,37 ori) (Figura 9D). Aceste rezultate au sugerat că efectul antitumoral al CTPG plus cisplatină ar putea fi corelat cu imunitatea sporită caracterizată prin numărul crescut de celule T și numărul scăzut de MDSC și Treg.