Partea Ⅱ Comparația profilurilor chimice și a activităților antioxidante ale diferitelor părți ale cultivatei Cistanche Deserticola utilizând cromatografie lichidă ultra performanță-spectrometrie de masă cu timp de zbor cu cvadrupol și un test pe bază de 1,1-difenil-2-picrhidrazil

Pentru mai multe informatii:emily.li@wecistanche.com

Faceți clic aici pentru a obține mai multe informații despre Cistanche

Datele spectrale de masă detaliate și modelele de fragmentare propuse au fost prezentate în Figura 7. Structurile celor șase PhG identificate mai sus sunt împărțite în trei fragmente: I-acid cafeic (CA), II-aglicon și III-zahăr (Glc și Rha) . În spectrele MS/MS, defectele de masă corespunzătoare clivajelor neutre ale unei grupări cafeoil și reziduurilor Glc și Rha domină căile de fragmentare ale PhG și generează ionii de fragment de diagnostic (Figura 8). Ioni suplimentari de fragmente caracteristice MS/MS la m/z 179, 161 și 135 au sugerat în plus că un substituent cafeoil există în structurile lor. Folosind aceste caracteristici de fragmentare, am putea propune cu încredere căi de fragmentare, după cum urmează.Acteozid(Figura 7c) a produs un fragment la m/z 461 prin pierderea unui fragment CA și apoi a produs un ion la m/z 315 printr-o pierdere suplimentară de Rha. Fragmentul CA a fost găsit la m/z 179, iar ionii săi fragment găsiți la m/z 161 și m/z 135 au fost produși prin pierderea de H2O și, respectiv, CO2. Izoacteozida (Figura 7d) a produs aceiași ioni ca și actozida la m/z 461, 315, 179, 161 și 135. 20 -Acetilacteozida (Figura 7e) a produs un fragment la m/z 623 prin pierderea de acetil și apoi a generat ioni la m/z 461, 315, 179, 161 și 135, care a fost identic cu modelul de fragmentare al actozidei. Între timp, 20 -acetilacteozida a produs, de asemenea, un fragment la m/z 503 prin pierderea fragmentului său CA și ulterior și-a pierdut gruparea Ac pentru a produce ionul la m/z 461. Tubulozida B (Figura 6f) a afișat un model de fragmentare similar cu 20 -acetillacteozidă. Echinacozidul (Figura 7a) a produs un ion fragment la m/z 623 prin pierderea fragmentului său CA, iar apoi pierderile secvențiale ale fragmentelor Rha și Glc au produs ionii fragment la m/z 477 și 315. Ionul fragment la m/z 461 a fost generată prin pierderea fragmentelor CA și Glc din ionul precursor. Au fost găsiți, de asemenea, ionii CA caracteristici la m/z 179, 161 și 135. Cistanozida A (Figura 7b) a produs un ion fragment la m/z 637 prin pierderea fragmentului său CA și apoi a generat ioni la m/z 491 și 475 prin pierderea suplimentară a fragmentelor Rha și, respectiv, Glc. Prin urmare, utilizarea UPLC-PDA-QTOF/MS în combinație ar putea avea o contribuție majoră la elucidarea precisă a structurilor chimice ale compușilor.

2.7. Corelația dintre antioxidanți și proprietățile antioxidante.

Analiza corelației dintre conținutul total de antioxidanți și activitățile antioxidante totale a fost descrisă în multe studii [33–38]. Din câte cunoștințele noastre, există o lipsă de studii privind compararea proprietăților antioxidante și a conținutului de PhG ale cultivatelor.C. deserticolapărți folosind o astfel de metodă de caracterizare concisă. Rezultatele preliminare ale celor șase conținuturi de PhG descrise în secțiunea „Analiză cantitativă” sunt rezumate în Tabelul 4, iar activitatea antioxidantă (IC50) determinată utilizând testul DPPH așa cum este descris în secțiunea „Capacitate antioxidantă” sunt enumerate în Tabelul 5. În primul rând, conținutul total de antioxidanți și activitățile fiecărei părți sunt prezentate în Figura 9. În mod clar, există diferențe vizibile între diferitele părți. De fapt, rezultatele obținute au indicat că activitatea antioxidantă a cultivateC. deserticolatulpinile a fost comparabilă cu cea a tulpinilor disponibile pe piață. Aceste rezultate au sugerat că activitatea antioxidantă a extractului de tulpină poate fi corelată cu conținutul său de PhG. Prin urmare, fitochimicele din extractul de tulpină sunt cultivateC. deserticolase propune să joace un rol important în activitatea sa de captare a radicalilor DPPH. În general, rezultatele noastre au indicat o corelație puternică între conținutul total de PhG și activitatea antioxidantă: r {{0}},92, **p <>

În plus, anumite probe cu conținut total mai mare de antioxidanți nu au prezentat activități antioxidante ridicate, cum ar fi axa și inflorescența. Între timp, corola, care a avut cea mai mare activitate dintre cele șase părți, a avut un conținut total de antioxidanti mai mic decât axa și inflorescența. Figura 4, așa cum este descris în secțiunea „Analiză cantitativă”, arată cantitățile relative de compuși PhG pentru a oferi o înțelegere preliminară a contribuțiilor lor individuale. În acest studiu, a fost efectuată și analiza de regresie Partial Least Squares (PLS) [39–41] pentru a compara corelația dintre abundența fiecărui antioxidant și activitatea antioxidantă in vitro. Modelul PLS a fost construit folosind conținutul fiecărui antioxidant (ca matrice de descriptor X) din cromatogramele de amprentă la 330 nm și activitățile antioxidante (ca matrice de răspuns Y) ale tuturor părților. Graficele coeficienților și valorile de importanță variabilă în proiecție (VIP) obținute folosind software-ul SIMCA-P plus (Versiunea 13.0, Umetrics, Umea, Suedia) sunt prezentate în Figura 10. În special, inversul valorilor IC50 (1/IC50) a fost selectat ca variabilă Y pentru a stabili modelele, deoarece valorile mai mici IC50 reprezintă o activitate antioxidantă mai puternică. Conform graficului coeficientului de regresie obținut din Figura 10A, modelele de regresie liniară arată că toți antioxidanții, cu excepția actozidei, au fost corelați pozitiv cu 1/IC50. Modelul de calibrare obţinut al PLS este exprimat prin ecuaţia de regresie: Y=0.50X1 plus 0.57X2 − 0.11X3 plus 0.32X4 plus 0.58X5 plus 0.24X6. Valorile VIP reflectă importanța variabilelor în model. cu cât este mai mare VIP, cu atât mai relevant pentru clasificarea eșantionului. După cum au arătat rezultatele noastre, 20 -acetillacteozidul a contribuit important la activitatea antioxidantă (Figura 10B). Această constatare a fost în acord cu un studiu realizat de Yang și colab. [20].

3 Materiale și Metode

3.1 Planta Materiale.CultivatC. deserticolaa fost furnizat cu generozitate de baza de plantare Bencao Congrong din județul Yongning, provincia Ningxia și a fost autentificat de prof. Jun Chen de la Institutul de Dezvoltare a Plantelor Medicinale, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing, China. Cele șase părți diferite ale cultivateC. deserticola includ tulpina suculentă (R1), axa de inflorescență (R2), inflorescența (R3), floarea (fără sămânță) (R4), tulpina de inflorescență (R5) și corola (R6). Informațiile detaliate ale eșantionului sunt prezentate în Figura 11. Fiecare parte a fost uscată separat într-un uscător, zdrobită în pulbere, trecută printr-o sită cu plasă 40-și apoi încărcată în recipiente etanșe și depozitată într-un desicator. Exemplare de voucher din aceste probe au fost depuse la Institutul de Dezvoltare a Plantelor Medicinale, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing, China.

3.2. Produse chimice și reactivi. Isoacteozida (Lotul 130809), acteozida (Lotul 130421) și echinacozida (Lotul 121027) au fost achiziționate de la Chengdu Pure-Chem Standard Co. Ltd. (Beijing, China), Cistanoside A, 20 -acetilacteozidul și tubulozidul B au fost izolate și purificat din cultivatC. deserticolaîn laboratorul nostru, cu o puritate mai mare de 98% (HPLC) și structura lor a fost, de asemenea, confirmată pe baza HR-MS, 1H-RMN și 13C-RMN și în comparație cu literatura anterioară. Structurile lor sunt afișate în Tabelul 7. DPPH, acid L-ascorbic și Trolox au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SUA). Solvenții, acetonitrilul și metanolul au fost de calitate HPLC de la Merck (Darmstadt, Germania), iar acidul formic cu o puritate de 96 la sută a fost de calitate HPLC (Tedia, Fairfield, OH, SUA). Apa deionizată (18 MΩ) a fost preparată cu apă distilată printr-un sistem Milli-Q (Millipore, Milford, MA, SUA). Alți reactivi și substanțe chimice au fost de calitate analitică.

3.3. Pregătirea soluțiilor

3.3.1. Soluții standard. O soluție stoc standard mixtă care conțineechinacozid(501 µg/mL), cistanozidă A (64 µg/mL), actozidă (239 µg/mL), izoacteozidă (22,6 µg/mL), 20 -acetilacteozidă (278 µg/mL) și tubulozidă B (46,2 µg) /mL) a fost preparat în metanol. Soluțiile stoc au fost diluate cu metanol pentru a obține o serie de concentrații adecvate care au fost utilizate ca soluții de lucru pentru a dezvolta o curbă de calibrare și au fost depozitate la 4 ◦C înainte de utilizare.

3.3.2. Exemple de soluții. O pulbere cântărită cu precizie (40 mesh, 1 g) din șase părți diferite de cultivatC. deserticolaa fost adăugat cu 50 mL de metanol, respectiv. După ce au fost scufundate timp de 30 de minute la temperatura camerei, amestecurile au fost cântărite și apoi extrase într-o baie de apă cu ultrasunete (40 kHz, 250 W, Kunshan, China) la temperatura camerei timp de 40 de minute. După răcire, s-a adăugat metanol suplimentar pentru a compensa greutatea pierdută. Toate soluțiile au fost filtrate prin filtre cu membrană de 0,22 um înainte de injectare. O parte alicotă (3 uL) din soluția de supernatant a fost injectată în UPLC pentru analiză. Fiecare extract a fost injectat în trei exemplare.

3.3.3. Soluții DPPH. Soluția stoc de radicali DPPH (5 × 10-3 mol/L) a fost preparată prin dizolvarea unei probe de DPPH cântărite cu precizie în metanol imediat înainte de experimente și a fost protejată de lumină. Apoi, soluția stoc a fost proaspăt diluată cu metanol pentru a obține o soluție standard (1 × 10-4 mol/L).

3.4. Condiție de analiză UPLC-PDA. Analiza UPLC a fost efectuată pe un sistem UPLC Waters Acquity (Waters, Milford, MA, SUA) care cuprinde un încălzitor de coloană, un manager de eșantionare, un manager binar de solvenți și un detector cu matrice de fotodiode. Separarea cromatografică a fost efectuată pe o coloană Acquity UPLC BEH C18 (1,7 µm, 2,1 mm × 1{{10}}0 mm; Waters) prin fixarea încălzitorului coloanei la 30 ◦C. Faza mobilă a constat din acetonitril (A) și apă care conține 0,2% acid formic (B) la un debit de 0,4 ml/min. Un program de eluare cu gradient a fost folosit după cum urmează: 5 la sută A la 0-2 min, 5-15 la sută A la 2-4 min, 15 la sută A la 4-6 min, 15-20 la sută A la 6-10 min, 20 –35% A la 10–15 min, 35% A la 15–18 min și 35–5% A la 18–18,1 min. Compoziţia a fost apoi menţinută la 5% A timp de încă 10 minute pentru reechilibrare. Lungimea de undă de detecție a fost setată la 330 nm.

3.5. Analiza UPLC-ESI-Q/TOF-MS. Condiție Condițiile UPLC au fost aceleași cu cele descrise în Secțiunea 3.4. Analiza MS a fost efectuată pe un spectrometru de masă Waters Xevo G2-XS QTOF (Waters MS Technologies, Manchester, Marea Britanie) echipat cu o interfață de electrospray (ESI) în modul de ioni negativi cu un spectru MS de scanare completă pe m/ intervalul z de 50-1200. În sursă, tensiunea capilară a fost de 2000 V, temperatura sursei a fost de 120 ◦ C, temperatura de desolvatare a fost de 450 ◦ C, tensiunea conului a fost de 40 V, gazul conului a fost de 30 L/h și debitul de gaz de desolvatare a fost de 600 L/h. Experimentele MS/MS au fost efectuate folosind MSE, iar energia de coliziune a fost de 20–40 V. Toate datele MS au fost colectate folosind sistemul Lock Spray pentru a asigura acuratețea și reproductibilitatea masei. Ionul [M - H] - al leucinei-encefalinei la m/z 554,2615 a fost utilizat ca masă de blocare în modul ESI negativ. Datele au fost achiziționate, analizate și procesate folosind software-ul Waters Mass Lynx 4.1 (Waters MS Technologies, Manchester, Marea Britanie).

3.6. Testul de eliminare a radicalilor DPPH offline. Activitatea antioxidantă totală a extractelor de plante a fost evaluată folosind un test offline de eliminare a radicalilor DPPH. Soluțiile de probă (2 mL) la diferite concentrații au fost amestecate cu 2 mL de soluție DPPH 1 × 10-4 mol/L (în metanol). Toate probele au fost agitate și lăsate să stea la întuneric la temperatura camerei timp de 60 de minute. Reducerea radicalilor liberi DPPH a fost măsurată prin citirea absorbanței la 517 nm față de un martor (metanol fără probă) pe un cititor ELISA (TECAN, Growing, Austria). Metanolul (2 ml) singur a fost utilizat ca control al acestui experiment. Trolox și acid L-ascorbic au fost utilizate ca martori pozitivi. Activitatea de captare a radicalilor (inhibarea procentuală) a probelor testate, care a fost exprimată ca procent de captare a DPPH, a fost calculată folosind următoarea formulă: procent de inhibare=[(A control - O probă)/Acontrol] × 100. Activitatea antioxidantă totală a fost calculată prin reprezentarea grafică a procentului de inhibiție față de concentrația probei și a fost reprezentată ca concentrația de probă necesară pentru a elimina 50% din radicalii DPPH (IC50). Toate testele au fost efectuate în trei exemplare, iar valorile IC50 au fost raportate ca medii ± SD.

3.7. UPLC-PDA cuplat cu testul DPPH precoloană. În acest studiu, după ce s-au amestecat 2 mL de soluție de DPPH (3 × 10-3 mol/L) și 1 mL de soluții de probă (12 mg/mL) din diferite părți de C. deserticola cultivată, UPLC-PDA a fost folosit pentru a continua ecranați profilele antioxidante și identificați componentele antioxidante prin detectarea modificărilor vârfurilor caracteristice ale soluțiilor de probă înainte și după reacția de captare a radicalilor liberi DPPH. Pentru fiecare parte diferită de plantă, alicote de 10 uL din soluția de probă înainte și după testul DPPH au fost injectate separat în sistemul UPLC în aceleași condiții ca cele descrise în secțiunea 3.4. După ce soluțiile de probă au fost amestecate cu soluție de DPPH, modificările vârfurilor caracteristice ale soluțiilor de probă au fost detectate la 330 nm.

3.8. Analiza datelor. Datele analitice sunt exprimate ca medie ± abaterea standard (SD) a măsurătorilor independente triplicate. Analiza de corelație bivariată a fost efectuată pentru a studia relația dintre conținutul total de PhG și activitatea antioxidantă prin determinarea coeficientului de corelație Pearson (r) folosind IBM SPPS Statistics (Versiunea 19; International Business Machines Corp., New York, NY, SUA). Valorile IC50 au fost, de asemenea, calculate prin analize probit folosind SPPS Statistics 19. Rata de captare a radicalilor liberi DPPH și conținutul total de PhG au fost reprezentate folosind OriginPro 8.5.1 (Origin Lab Corp., Northampton, MA, SUA). Regresiile cu cele mai mici pătrate parțiale (PLS) au fost determinate folosind software-ul SIMCA-P plus (Versiunea 13.0, Umetrics, Umea, Suedia).

4. Concluzii

Diferite părți ale cultivatei C. deserticola, un medicament pe bază de plante utilizate pe scară largă, au fost investigate pentru calitățile lor. În primul rând, amprentele digitale caracteristice a șase părți diferite ale cultivateCistanchedeserticolaprobele au fost generate și evaluate folosind SES și analiza simultană a conținutului a șase compuși markeri. În al doilea rând, cuantificarea celor șase compuși majori folosind UPLC a demonstrat caracteristicile de distribuție ale acestor compuși în diferite părți. Cu toate acestea, rezultatele nu au putut fi direct legate de activitatea medicinei pe bază de plante. Prin urmare, a fost necesară o metodă mai bună pentru determinarea simultană a calității și activității probelor cultivate de C. deserticola. În primul rând, am folosit un test offline de eliminare a radicalilor DPPH pentru a evalua activitățile antioxidante ale cultivatelorCistanchedeserticolaextracte și a găsit cea mai mare activitate în extractul de tulpină. Mai mult, UPLC-PDA cuplat cu testul DPPH pre-coloană a fost aplicat pentru screening-ul și evaluarea antioxidanților din plantele cultivate.Cistanchedeserticolaextracte de tulpini. Această metodă nu numai că a oferit mai multe informații chimice, dar a oferit și unele informații antioxidante care ar putea fi utilizate pentru a identifica și evalua medicamentele pe bază de plante. În al doilea rând, componentele active din extractele de tulpină au fost separate și identificate folosind UPLC-PAD-QTOF/MS pentru a confirma numărul și poziția grupurilor de substituenți și pentru a îmbunătăți acuratețea analizei structurale. În cele din urmă, a fost stabilită și validată o relație între componentele chimice și activitatea antioxidantă in vitro folosind modelul PLS.

În concluzie, pentru prima dată, am comparat profilurile compoziției chimice și activitățile antioxidante ale diferitelor părți ale probelor cultivate de C. deserticola. Aceste descoperiri au fost de un interes deosebit, deoarece distribuția compușilor PhG, conținutul de PhG și contribuția lor la antioxidantul diferitelor părți ale probelor cultivate de C. deserticola nu au fost raportate până în prezentul studiu. Mai mult, analiza PLS a fost stabilită pentru a oferi o înțelegere preliminară a șase contribuții individuale ale PhG la activitatea antioxidantă. Această abordare ne poate oferi câteva noi perspective în evaluarea cuprinzătoare a calității C. deserticola cultivată. În cele din urmă, această lucrare reprezintă primul raport al unei corelații puternice între activitatea de captare a radicalilor DPPH și conținutul total de PhG al diferitelor părți din C. deserticola cultivată (r=0.92). Printre aceste părți diferite, tulpinile s-au dovedit a fi bogate în PhG și au o activitate antioxidantă puternică. În special, părțile aruncate de la C. deserticola cultivate au conținut și unii compuși bioactivi și ar putea fi utilizate ca supliment alimentar alternativ. Sperăm că rezultatele vor oferi informații utile pentru utilizarea ulterioară a C. deserticola cultivată. Din câte știm, acesta este primul raport privind identificarea și cuantificarea rapidă a antioxidanților naturali în diferite părți ale zonelor cultivate.Cistanchedeserticolafolosind UPLC-PAD-QTOF/MS, metoda offline DPPH și metoda UPLC-PAD-pre-columnDPPH. Conform rezultatelor noastre, metoda dezvoltată aici ar putea oferi un instrument puternic și semnificativ pentru controlul cuprinzător al calității medicamentelor complexe pe bază de plante. În țara noastră, sub îndrumarea inițiativei „One Belt, One Road”, această cultură tradițională cu beneficii pentru sănătate ar putea fi folosită pentru a proiecta noi produse cu aplicații la nivel mondial.

Mulțumiri

Autorii recunosc cu recunoștință sprijinul financiar al Academiei Chineze de Științe Medicale (CAMS) Fondul de inovare pentru științe medicale (CIFMS) (nr. 2016-I2M-1-012) și al Fundației Naționale pentru Științe Naturale din China (nr. 31570344).

Contribuții ale autorului

Yue Shi și Xiaoming Wang au participat la proiectarea cercetării. Xiaoming Wang, Jinfang Wang, Huanyu Guan, Rong Xu, Xiaomei Luo, Meifeng Su, Xiaoyan Chang, Wenting Tan și Jun Chen au fost responsabili pentru efectuarea experimentelor. Yue Shi, Xiaoming Wang și Jinfang Wang au efectuat analiza datelor. Yue Shi și Xiaoming Wang au contribuit la scrierea și editarea manuscrisului. Conflicte de interese: Autorii nu declară conflicte de interese.

Referințe

Wang, T.; Zhang, X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, „Desert Ginseng”: A Review. A.m. J. Chin. Med. 2012, 40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, Z.; Lin, H.; Gu, L.; Gao, J.; Tzeng, C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Unul dintre cele mai bune daruri farmaceutice ale medicinei tradiționale chineze. Față. Pharmacol. 2016, 7, 41. [CrossRef] [PubMed]

3. Gu, C.; Yang, X.; Huang, L. Cistanches Herba: O revizuire de neurofarmacologie. Față. Pharmacol. 2016, 7, 289. [CrossRef] [PubMed]

4. Xu, X.; Zhang, Z.; Wang, W.; Yao, H.; Ma, X. Efectul terapeutic al cistanozidei A asupra metabolismului osos al șoarecilor ovariectomizați. Molecule 2017, 22, 197. [CrossRef] [PubMed]

5. Wang, D.; Wang, H.; Gu, L. Activitățile antidepresive și de îmbunătățire cognitivă ale plantelor tradiționale chinezești Cistanche. Evid.-Complement bazat. Altern. Med. 2017, 2017, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

6. Xue, Z.; Yang, B. Phenylethanoid Glycosides: Research Advances in Their Phytochemistry, Pharmacological Activity and Pharmacokinetics. Molecules 2016, 21, 991. [CrossRef] [PubMed]

7. Jiang, Y.; Tu, P. Analiza constituenților chimici la speciile Cistanche. J. Chromatogr. A 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

8. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T. Efectele antioxidante ale feniletanoizilor din Cistanche deserticola. Biol. Farmacia. Taur. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

9. Ma, Z.; Yang, Z.; Li, P.; Li, C. Determinarea simultană a opt glicozide feniletanoide în diferite specii ale genului Cistanche prin cromatografie lichidă de înaltă performanță. J. Liq. Cromatogr. Relat. Tehnol. 2008, 31, 2838–2850. [CrossRef]

10. Jiang, Y.; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Diferențierea Herba Cistanches prin amprentă cu cromatografie lichidă de înaltă performanță-detecție matrice de diode-spectrometrie de masă. J. Chromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

11. Lu, D.; Zhang, J.; Yang, Z.; Liu, H.; Li, S.; Wu, B.; Ma, Z. Analiza cantitativă a Cistanches Herba folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță cuplată cu detecția matricei de diode și spectrometrie de masă de înaltă rezoluție combinată cu metode chimiometrice. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]

12. Cântec, Q.; Li, J.; Liu, X.; Zhang, Y.; Guo, L.; Jiang, Y.; Song, Y.; Tu, P. Silabarea online de casă a extracției lichide sub presiune, cromatografia în flux turbulent și cromatografia lichidă de înaltă performanță, Cistanche deserticola ca studiu de caz. J. Chromatogr. 2016, 1438, 189–197. [CrossRef] [PubMed]

13. Han, L.; Boakye-yiadom, M.; Liu, E.; Zhang, Y.; Li, W. Structural Characterization and Identification of Phenylethanoid Glycosides from Cistanches deserticola YC Ma by UHPLC/ESI–QTOF–MS/MS. Phytochem. Anal. 2012, 23, 668–676. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, S.; Jiang, X.; Wu, L.; Wang, Z.; Huang, L. Discriminarea chimică și genetică a Cistanches Herba pe baza codurilor de bare UPLC-QTOF/MS și ADN. PLoS ONE 2014, 9, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Song, Y.; Cântec, Q.; Li, J.; Zhang, N.; Zhao, Y.; Liu, X.; Jiang, Y.; Tu, P. O strategie integrată de diferențiere cantitativă a mușețelului între Cistanche deserticola și C. tubulosa folosind spectrometrie de masă cromatografie lichidă de înaltă performanță-hibrid triplu cvadrupol-capcană de ioni liniară. J. Chromatogr. 2016, 1429, 238–247. [CrossRef] [PubMed]

16. Niu, Y.; Yin, L.; Luo, S.; Dong, J.; Wang, H.; Hashi, Y.; Chen, S. Identificarea antioxidanților din Flos Chrysanthemi prin HPLC-DAD-ESI/MSN și HPLC cuplat cu un sistem de derivatizare post-coloană. Phytochem. Anal. 2013, 24, 59–68. [CrossRef] [PubMed]

17. Chen, LX; Hu, DJ; Lam, SC; Ge, L.; Wu, D.; Zhao, J.; Lung, ZR; Yang, WJ; Fan, B.; Li, SP Compararea activităților antioxidante ale diferitelor părți din crizantema de zăpadă (Coreopsis tinctoria Nutt.) și identificarea antioxidanților naturali ai acestora folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță cuplată cu detectarea matricei de diode și spectrometrie de masă și 2,20 -azinobis({ {4}}etilbenztiazolină-acid sulfonic) analiză pe bază de sare de diamoniu. J. Chromatogr. 2016, 1428, 134–142. [PubMed]

18. Fu, M.; Xu, Y.; Chen, Y.; Wu, J.; Yu, Y.; Zou, B.; An, K.; Xiao, G. Evaluarea flavonoidelor bioactive și a activității antioxidante în Pericarpium Citri Reticulate (Citrus reticulata "Chachi") în timpul depozitării. Food Chim. 2017, 230, 649–656. [CrossRef] [PubMed]

19. Zhang, X.; Xu, M.; Zhang, J.; Wu, L.; Liu, J.; Si, J. Identificarea și evaluarea componentelor antioxidante în florile a cinci specii de Chimonanthus. Cultură ind. Prod. 2017, 102, 164–172. [CrossRef]

20. Yang, J.; Hu, J.; Rena, K.; Ka, S.; Du, N. Relații structură-activitate ale glicozidelor feniletanoide în plantele de salsa Cistanche asupra activității antioxidante. J. Chin. Med. Mater. 2009, 32, 1067–1069.

21. El, W.; Fang, T.; Tu, P. Progresul cercetării privind activitățile farmacologice ale echinacozidei. China J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

22. Li, Y.; Chen, J.; Li, Y.; Li, P. Identificarea și cuantificarea captatorilor de radicali liberi în mugurii florali ai speciilor Lonicera prin test online HPLC-DPPH cuplat cu spectrometrie de masă în tandem cu patrupol cu ​​ionizare cu electrospray în timp de zbor. Biomed. Cromatogr. 2012, 26, 449–457. [CrossRef] [PubMed]

23. Yao, H.; Chen, Y.; Shi, P.; Hu, J.; Li, S.; Huang, L.; Lin, J.; Lin, X. Screening-ul și analiza cantitativă a antioxidanților din fructele de Livistona Chinensis R. Br utilizând HPLC-DAD-ESI MS cuplat cu testul DPPH pre-coloană. Food Chim. 2012, 135, 2802–2807. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, Y.; Hao, H.; Wang, G.; Tu, P.; Jiang, Y.; Liang, Y.; Dai, L.; Yang, H.; Lai, L.; Zheng, C.; et al. O abordare pentru identificarea metaboliților secvențiali ai unei glicozide feniletanoid tipice, echinacozidul, bazată pe analiza spectrometriei de masă prin cromatografie lichidă-capcana ionică-timp de zbor. Talanta 2009, 80, 572–580. [CrossRef] [PubMed]

25. Qi, M.; Xiong, A.; Li, P.; Yang, Q.; Yang, L.; Wang, Z. Identificarea actozidei și a metaboliților săi majori în urina de șobolan prin cromatografie lichidă ultra-performanță combinată cu spectrometrie de masă în tandem cu patrupol cu ​​ionizare cu electrospray în timp de zbor. J. Chromatogr. B 2013, 940, 77–85. [CrossRef] [PubMed]

26. Li, W.; Soare, X.; Song, H.; Ding, J.; Bai, J.; Chen, Q. Identificarea bazată pe HPLC/Q-TOF-MS a constituenților absorbiți și a metaboliților lor în serul și urină de șobolan după administrarea orală a extractului de Cistanche deserticola. J. Food Sci. 2015, 80, H2079–H2087. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, Y.; Zhou, G.; Xing, S.; Xing, S.; Tu, P.; Li, X. Identificarea metaboliților de echinacozid produși de bacteriile intestinale umane utilizând cromatografie lichidă ultraperformanță-spectrometrie de masă în timp de zbor cu cvadrupol. J. Agric. Alimente. Chim. 2015, 63, 6764–6771. [CrossRef] [PubMed]