Studiu farmacodinamica cistanche fenil etanol glicozide pe induse de Gentamicină leziuni renale acute la șobolani

Contact: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Abstract

Obiectiv Studierea efectului protector alglicozide feniletanoide(PHG)pe induse de gentamicinăleziuni renale acutela șobolani. Metode Un total de 54 de șobolani SD masculi au fost împărțiți aleatoriu în grupul de control (10 d,15 d, soluție salină normală 10 mL/kg), grup model (10 d,15 d, soluție salină normală 10 mL/kg), phGs500 mg/kg grup(10 d,15 d), PHG 250 mg/kg grup(10 d,15 d) și grup clinic simulat (21 d, soluție salină normală 10 ml/kg,fiecare grup a avut șase șobolani. Modelul de șobolan de leziuni renale acute a fost stabilit prin injectarea intraperitoneală de gentamicină la 75 mg/kg timp de 10 zile. La sfârșitul experimentului, a fost colectată urina de 24 de ore de șobolani, sângele șobolanilor a fost luat din aorta abdominală, rinichii bilaterali ai șobolanilor au fost luați și s-a calculat indicele renal. Creatinina serică (Scr), azotul ureic din sânge (BUN) au fost măsurate prin auto-analizor. Superoxid dismutaza (SOD), glutation peroxidaza (GSH-Px), catalazei (CAT) și malonaldehidă (MDA) nivelurile în țesutul renal au fost detectate. Rezultate Comparativ cu grupul martor de control, Scr, BUN,24 h volumul de urină și mda expresia nivelul în țesutul renal au fost crescute în grupul de model 10 d și 15 d, și activitățile de SOD, CAT, și GSH-PX în țesutul renal au fost de-creased semnificativ(P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">leziuni renale acutela șobolani.

Cuvinte cheie:Cistanche Herba;glicozidă feniletanoidăs; gentamicină;leziuni renale acute

Cistanche Herba

Leziuni renale acute (AKI)este un sindrom clinic de declin brusc și rapid sau de pierdere a funcției de filtrare renală cauzată de diferite motive [1]. În prezent, incidența AKI crește de la an la an. Cauzele sale sunt diverse și pot duce la o varietate de complicații, iar metodele de intervenție pentru tratamentul clinic sunt foarte limitate [2·3]. Studiile au descoperit că tratamentul continuu cu antibiotice aminoglicozide este un factor de risc independent pentru AKI [4], iar mecanismul său de inducere este legat de producția de radicali liberi mediați de medicamente, depunerea fosfolipidelor, scăderea fluxului sanguin renal și inflamația locală [5]. Din punct de vedere clinic, tehnicile terapeutice de monitorizare a medicamentelor sunt adesea utilizate pentru a trata leziunile acute ale funcției renale induse de antibioticele aminoglicozide, dar nu pot îmbunătăți sau inversa riscul de leziuni renale cauzate de astfel de antibiotice din cauza principală [6]. Intervenția timpurie a nefrotoxicității antibioticelor aminoglicozide este un punct fierbinte în cercetarea privind aplicarea rațională a antibioticelor aminoglicozide. Medicina tradițională chinezăCistanchesHerba este o tulpină cărnoasă uscată cu frunze solzoase aleCistanchesplantă aparținând familiei OrobanchaceaeCistanches. Are functiile de a hrani rinichi yang si esenta hranitoare si sange [7]. Este cald în natură, dulce în gust și se întoarce la meridianul rinichilor.glicozide feniletanoidesunt principalele componente chimice înCistanche, care poate crește activitatea superoxidului seric dismutază, inhibă expresia malondialdehidei, sporește capacitatea organismului de a curăța radicalii liberi de oxigen, de a reduce acumularea de radicali liberi în organism și de a proteja organismul de stresul excesiv. Efect de deteriorare oxidativă [8]. În acest studiu, gentamicina a fost utilizată pentru a construi un model de șobolan de leziuni renale acute pentru a explora efectele preventive și terapeutice ale citroneleiglicozide feniletanoideprivind leziunile renale acute induse de gentamicină. Raportul este următorul.

1 Materiale și metode

1.1 Animale experimentale

54 șobolani SD, bărbați, greutate corporală (200 ± 20) g, achiziționați de la Centrul Experimental Animal al Universității de Medicină din Xinjiang, număr de licență pentru producția animală: SCXK (nou) 2016-0003, toate animalele sunt crescute în mediul de barieră Xinjiang Medical University SPF al Centrului de experimente animale, numărul de licență: SYXK (nou) 2016-0002, temperatura ambiantă 24 ~ 26 ° C, temperatura și umiditatea constantă, umiditatea relativă 40% ~ 70%, șobolanii mănâncă și beau liber.

1.2 Medicamentul de testare

Glicozide totale de fenetil cistanche (acest grup de cercetare este îmbogățit și purificat din Cistanche tubulosa, conținutul total de glicozide de alcool fenetil este de 89,5%, conținutul de echinacozide este mai mare de 40%, iar conținutul de verbascoside este mai mare de 16,0%); Injecție cu gentamicină (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., număr de lot 16122411), kit de detectare malondialdehidă (MDA) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., număr de lot VAAAK6S286), kit de detectare a enzimei de disproporție a superoxidului (SOD) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., numărul lotului WSH27SS9GB), Kit de detectare catalază (CAT) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., numărul lotului FGS3J66D2K), Kit de detectare a peroxidazei de glutation din valea glutationului (GSH-PX) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., numărul lotului DK8A622XZP), kitul de cuantificare a proteinelor BCA (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., numărul lotului 20190622).

1.3 Instrument experimental

TD50002A echilibru electronic (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co, Ltd.), Multiskan full-lungime de undă cititor de microplate (US Thermo Fisher Company), BS-320 analizor biochimic automat (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co, Ltd.), Biofugeprimo desktop centrifugă frigorifică (Thermo Fisher Company, SUA).

1.4 Metode de modelare, grupare și administrare

După 1 săptămână de hrănire adaptivă, 54 de șobolani SD masculi au fost împărțiți aleatoriu în 10d, 15d grup martor de control, 10d, grup model 15d, 10d, 15d Cistanche cistanche alcool fenetil grup de doze mari, 10d, 15d Cistanche fenil etanol grup de doze mici Grupul de doze și 21d grup de tratament clinic simulat, fiecare grup are 6 animale. Cu excepția grupelor martor 10d și 15d, șobolanii din fiecare grup au fost injectați intraperitoneal cu gentamicină (75 mg/kg greutate corporală) timp de 10 zile consecutive pentru a stabili un model de leziune renală acută. Metoda de administrare: (1) șobolanilor martor 10d și 15d li s-a administrat o injecție intraperitoneală de soluție salină normală (10 ml/kg greutate corporală) și gavaj pentru 10d și respectiv 15d; (2) Șobolanii model 10d și 15d au modelat simultan Șobolanii din grupele cu doze mari de 10d și 15d au primit soluție salină normală (10 ml/kg masă corporală) prin gavaj la 10d și respectiv 15d; Stomac la 10d și 15d; (4) 10d și 15d doze mici de șobolani grup au fost modelate zilnic și dat Cistanche fenetithanol glicozide totale (250mg/kg greutate corporală) de gavaj pentru 10d și 15d; (5) 21d grup clinic simulat În același timp, șobolanilor li s-a administrat soluție salină normală (10 ml/kg greutate corporală) prin gavaj timp de 21 de zile. Șobolanii sunt cântăriți săptămânal, iar doza de medicament este ajustată în funcție de greutatea corporală.

1.5 Colectarea specimenelor

Șobolani în fiecare grup au fost colectate 24h urină pe 10, 15, și 21 zile (animalul a fost plasat în cușcă metabolice cu o zi înainte, și un animal în fiecare cușcă metabolice, scos după 24h), centrifugat la 3000r/min pentru 20min la 4 ° C, Colecta supernatant și congela la -20 ° C pentru utilizare ulterioară. După experiment, șobolanii din fiecare grup au fost postiți fără hrană și anesteziați cu 10% hidrat de cloral în cavitatea abdominală. Sângele a fost prelevat din aorta abdominală și lăsat să stea la temperatura camerei timp de 1h la 4 °C, centrifugat la 3500r / min timp de 15min, iar stratul superior de lichid limpede galben deschis a fost alicotat. A se păstra înghețată la 20 °C pentru o utilizare ulterioară. Șobolanii din fiecare grup au fost anesteziați, cavitatea abdominală a fost complet expusă, arterele și venele capetelor distale și proximale ale țesuturilor renale au fost fixate cu forceps hemostatic, venele renale au fost tăiate și salina normală izotonică de 4 °C a fost injectată prin aorta abdominală, iar culoarea rinichilor a fost perfuzată. După ce ați devenit palizi, îndepărtați rapid ambii rinichi și puneți-i pe hârtie de filtru pentru a absorbi apa și a le cântări pentru a calcula indicele organelor. Luați 0,4g de cortex renal drept proaspăt de șobolan, adăugați soluție salină normală pre-răcită la 1:9, faceți 10% omogenizare a țesutului renal într-un mediu cu temperatură scăzută, înghețați-l și rezervați-l pentru utilizare ulterioară. Formula de calcul a indicelui organului este următoarea: Indice renal = masă renală bilaterală × 103/masă corporală șobolan.

1.6 Detectarea nivelurilor serice de creatinină și azot ureic la șobolani

Se prelevează probele de ser pentru a fi testate și se pun într-un analizor biochimic automat pentru determinare. Conform instrucțiunilor kitului, determinați conținutul creatininei și azotului de uree în serul de șobolan.

1.7 Detectarea SOD, CAT, GSH-PX și MDA în țesuturile renale de șobolan

Luați omogenatul renal de șobolan pentru a dezgheța la temperatura camerei, centrifugați la 3000r / min timp de 20 de minute la 4 ° C, colectați supernatantul și utilizați kitul BCA pentru a testa rinichii de șobolan în fiecare grup Concentrația de proteine tisulare. Urmați instrucțiunile kitului pentru a determina activitatea conținutului de superoxid dismutază (SOD), catalază (CAT), glutation peroxidază (GSH-Px) și malondialdehidă (MDA) în țesutul renal. 1.8 Analiza statistică Software-ul statistic SPSS21.0 a fost utilizat pentru analiza statistică. Datele de măsurare au fost exprimate ca medie ± deviația standard (-x ± s). Comparația dintre cele două grupuri a fost efectuată prin testul t, nivelul de testare α =0,05.

extract de cistanche

2 Rezultate

2.1 Efectele glicozidelor totale ale alcoolului fenetil cistanche asupra masei corporale, indicelui renal și producției de urină de 24 de ore de șobolani din fiecare grup

Nu a existat nici o diferență semnificativă în masa corporală a șobolanilor în fiecare grup înainte de modelare (P>0.05). După modelare, în comparație cu grupul martor de control, masa corporală a fiecărui grup model a scăzut, iar indicele renal și producția de urină de 24 de ore a crescut, diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 Efectul glicozidelor feniletanoide Cistanche asupra conținutului de creatinină serică al șobolanilor din fiecare grupă

În comparație cu grupul martor martor, conținutul creatininei serice al șobolanilor din fiecare grup model a crescut, iar diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 Efectul glicozidelor feniletanoide Cistanche asupra conținutului seric de azot ureic al șobolanilor din fiecare grup

În comparație cu grupul martor de control, conținutul de azot seric de uree al șobolanilor din fiecare grup model a crescut, iar diferența a fost semnificativă din punct de vedere statistic (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">aproape de 0 pat. 0 grupa 5)

2.4 Efectul glicozidelor feniletanoide Cistanche asupra activității SOD în țesutul renal al fiecărui grup de șobolani

În comparație cu grupul martor de control, activitatea SOD în țesutul renal al fiecărui grup model a fost redusă, iar diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5 Efectul glicozidelor feniletanoide cistanche asupra activității CAT în țesutul renal al fiecărui grup de șobolani

În comparație cu grupul martor de control, activitatea CAT în țesutul renal al fiecărui grup model a scăzut, iar diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05)

2.6 Efectele glicozidelor feniletanoide cistanche asupra activității GSH-PX în țesuturile renale ale șobolanilor din fiecare grup

În comparație cu grupul martor de control, activitatea GSH-PX în țesutul renal al fiecărui grup model a fost redusă, iar diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.7 Efectele glicozidelor feniletanoide cistanche asupra conținutului de MDA în țesuturile renale ale șobolanilor din fiecare grup

În comparație cu grupul martor de control, conținutul de MDA în țesutul renal al fiecărui grup model a crescut, iar diferența a fost semnificativă statistic (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cistanche proteja functia renala

3 Discuții

O reacție adversă gravă comună a antibioticelor aminoglicozide este nefrotoxicitatea [9]. Acest tip de medicament este ușor de filtrat prin glomerulus ca medicament prototip, iar unele medicamente sunt secretate în urină, iar majoritatea medicamentelor sunt acumulate selectiv în cortexul renal, ceea ce face ca concentrația la acest loc să fie de câteva ori mai mare decât concentrația medicamentului în ser (10) ], acumularea acestui tip de medicament provoacă în mod inevitabil leziuni celulare și scăderea funcției renale. Pentru o lungă perioadă de timp, tratamentul clinic al AKI cauzat de medicamente aminoglicozide a urmat întotdeauna principiul tratamentului simptomatic și de susținere a retragerii medicamentului și a rehidratării de rutină. daune. Prin urmare, acest studiu a stabilit un grup de tratament clinic simulat de 21 de zile pentru a simula tratamentul clinic de rutină și reabilitarea corpului cât mai mult posibil, astfel încât să se investigheze în continuare în mod obiectiv efectul terapeutic al glicozidelor feniletanoide Cistanche. În tratamentul clinic, Scr și BUN sunt adesea folosite ca indicatori pentru a evalua funcția renală. Cu cât este mai mare nivelul de Scr și BUN, cu atât mai gravă este reflectată afectarea funcției renale [11]. În acest studiu, un model AKI a fost stabilit prin injectarea intraperitoneală de gentamicină 75 mg/kg la șobolani timp de 10 zile consecutive. În comparație cu grupul de control necompletat, nivelurile de Scr și BUN din grupul de modele au crescut, indicând faptul că modelul a avut succes. După intervenția glicozidelor feniletanoide Cistanche timp de 10 și 15 zile, Scr și BUN de șobolani din fiecare grup de tratament au scăzut, indicând faptul că glicozidele fenilentanoide cistanche au avut un efect bun asupra îmbunătățirii AKI cauzate de gentamicină.

Studiile au descoperit că creșterea speciilor reactive de oxigen (ROS) joacă un rol important în procesul patologic de afectare tubulară renală cauzată de gentamicină [12]. MDA este una dintre principalele substanțe care reflectă nivelul de SRO din organism [13-14]. Anti-oxidant (antioxidanti) sistem de apărare în organism împotriva ROS include SOD, CAT, GSH-PX, și așa mai departe. Ca principală componentă eficientă a Cistanche deserticola, glicozidele feniletanoide totale pot exercita o activitate antioxidantă semnificativă la animale [15]. După intervenția glicozidelor totale ale alcoolului fenetil Cistanche, conținutul de MDA în țesutul renal al șobolanilor din grupul de administrare a fost redus semnificativ, iar activitățile SOD, CAT și GSH-PX au fost crescute semnificativ, sugerând că glicozidele totale ale alcoolului fenetil Cistanche pot îmbunătăți deteriorarea stresului oxidativ renal și pot ameliora leziunile renale.

În concluzie, glicozidele totale ale alcoolului fenetil cistanche au un efect protector asupra leziunilor renale acute induse de gentamicină. Acesta exercită efecte antioxidante prin inhibarea producției de radicali liberi și activarea radicalilor liberi coridoarele enzimelor, îmbunătățirea stării de stres oxidativ organismului, și consolidarea efectului antioxidant al organismului. Capacitatea de oxidare, reduce leziunile renale.

cistanche proteja functia renala