Glicozide feniletanoide: metodă de separare a glicozidelor totale ale alcoolului fenetil și efectul său inhibitor asupra monoaminooxidazei-A

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com

Izolarea și identificarea glicozidelor feniletanoide din Aloysia Polystachya și activitatea sa ca inhibitori ai monoaminooxidazei-A

Autorii

Ana Maria S. Pereira1, Camila C. Guimarães1, Sarazete IV Pereira1, Eduardo J. Crevelin2, Gustavo HT Pinto1, Lucas JF Morel1, Bianca W. Bertoni1, Suzelei C. França1, Silvia H. Taleb-Contini1

Afilieri

1 Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais, Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Ribeirão Preto, SP, Brazilia

2 Departamento de Química, Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de

São Paulo (USP), Monte Alegre, Ribeirão Preto, SP, Brazilia

Cuvinte cheie:aloysia polystachya, verbenaceae, activitate antidepresivă, feniletanoizi, inhibitori de monoaminooxidază, acteozidă

Abstract

Aloysia polystachya este folosită ca sedativ și antidepresiv de către populațiile indigene din Argentina și Paraguay, dar compușii asociați cu aceste activități nu au fost determinați. Am separat și identificat constituenții principali ai extractului hidroetanolic de A. polystachya prin cromatografie lichidă ultra-performanță-spectrometrie de masă și am confirmat prezența actozidei, izoacteozidei, 6'-acetilacteozidei și 4',4''',5, 5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O–C7'']-biflavonă prin spectroscopie RMN. Activitatea inhibitoare a extractului hidroetanolic si purificatglicozide feniletanoideîmpotriva monoaminoxidazei-A au fost evaluate utilizând un test fluorometric standard. Extractul hidroetanolic a inhibat activitatea monoaminoxidazei-A într-o manieră dependentă de doză cu un IC50 de 9,2 µg/mL, în timp ce inhibitorul selectiv de monoaminooxidază clorgilina a prezentat un IC50 de 0,06 µg/mL ( 0,22 pM).Acteozida fost cel mai puternic inhibitor al monoaminoxidazei-A (valoarea IC50 de 5 uM), în timp ce izoacteozida și 6’-acetilacteozida au prezentat valori IC50 de aproximativ 10 uM. Rezultatele au arătat că feniletanoizii dintr-un extract hidroetanolic de A. polystachya s-au dovedit a avea activitate inhibitoare împotriva monoaminoxidazei-A. Este probabil ca modul de acțiune al actozidelor să fie multidirecționat, implicând reglarea în jos a moleculelor inflamatorii și neutralizarea reacțiilor de oxidare, precum și inhibarea monoaminooxidazei-A.

Introducere

Potrivit unui raport recent al Organizației Mondiale a Sănătății [1], peste 320 de milioane de oameni (4,4 la sută din populația lumii) suferă de depresie și tulburări de anxietate, aproximativ 800 de mii de sinucideri pe an fiind comise ca urmare a acestor probleme mentale. . Deși tratament cu antidepresive sintetice

este disponibil, mulți pacienți suferă de reacții adverse precum uscăciunea gurii, constipație, amețeli, vedere încețoșată, creșterea apetitului, creștere în greutate, insomnie și probleme cu rinichii [2]. Din acest motiv, abordări care utilizează medicina complementară și alternativă, inclusiv fitoterapie, au fost utilizate în tratamentul mai multor tipuri de tulburări mintale [3].

Cistanche deserticola are multe efecte, click aici pentru a afla mai multe

Diverse studii preclinice și clinice au furnizat dovezi în sprijinul beneficiilor medicamentelor pe bază de plante în tratamentul tulburărilor de anxietate generale și specifice [4, 5]. Un interes deosebit sunt investigațiile asupra proprietăților anxiolitice ale Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae), o specie aromatică găsită în principal în Argentina și Paraguay. Conform studiilor etnofarmacologice, populațiile locale folosesc planta, cunoscută în mod obișnuit ca burrito, ca tonic digestiv, sedativ și antidepresiv [6, 7]. Deși părțile anxiolitice și antidepresive ale extractelor hidroetanolice din A. polystachya au fost confirmate prin studii preclinice [8–10], nu au fost efectuate investigații fitochimice cu scopul de a identifica compușii asociați cu aceste activități.

S-a demonstrat anterior că activitățile antidepresive ale unor plante medicinale, de exemplu, Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) și Peganum harmala L. (Nitrariaceae), sunt asociate cu inhibarea monoaminooxidazei-A (MAO-A) [11]. –13]. Familia MAO este distribuită în sistemul nervos central și periferic, iar supraexprimarea acestor enzime favorizează dezaminarea oxidativă a monoaminelor cu reduceri ale nivelurilor neurotransmițătorilor serotonină, norepinefrină și dopamină, ceea ce duce la apariția tulburărilor psihiatrice. Astfel de procese de dezaminare generează, de asemenea, substanțe precum peroxidul de hidrogen, radicalii liberi de oxigen și aldehidele care sunt responsabile de stresul oxidativ al celulelor. MAO există în două izoforme majore care diferă în ceea ce privește distribuția, specificitatea substratului și sensibilitatea la inhibitori. Izoforma MAO-A joacă un rol important în tulburările depresive și anxioase, în timp ce MAO-B este implicată în bolile neurodegenerative [13-17].

În lumina celor de mai sus, am emis ipoteza că proprietățile anxiolitice și antidepresive ale A. polystachya derivă, cel puțin parțial, din prezența inhibitorilor MAO-A. Pentru a testa această ipoteză, am identificat principiile active prezente în extractul hidroetanolic din frunze de A. polystachya și am evaluat efectele extractului brut și ale constituenților principali izolați din acesta asupra activității MAO-A.

Rezultate si discutii

Extractul hidroetanolic din frunze de A. polystachya a fost supus cromatografiei lichide ultra-performante-spectrometrie de masă (UPLC-MS), iar cromatograma astfel obținută este pre- parfumată în ▶Fig. 1a. Componentele principale ale extractului au fost purificate prin cromatografie pe coloană și cromatografie lichidă de înaltă performanță în fază inversă (RP-HPLC) și identificate caacteozid(sin verbascozidă), izoacteozidă, 6'-acetilacteozidă și 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O– C7'']-biflavona prin compararea lor 1H- și 13C-RMN, HSQC, HMBC (▶Tabelul 1S, 2S, Informații justificative) și datele MS (▶Fig. 1b-e) cu valorile raportate în literatură [18 –20]. Concentrarea deacteozidîn extractul hidroetanolic, determinat prin HPLC, a fost 108,65 ± 1,3 pg/mg de extract uscat. Aceasta reprezintă prima înregistrare a constituenților extractelor de frunze din A. polystachya, deși uleiul esențial al plantei a fost analizat anterior și s-a constatat că conține monoterpenele carvonă și limonen ca componente majore [21].

Extractul hidroetanolic brut din frunzele de A. polystachya a inhibat activitatea MAO-A într-o manieră dependentă de doză (▶Fig. 2a) cu un IC50 de 9,2 µg/mL, în timp ce inhibitorul selectiv de MAO clorgilina a prezentat un IC5 0 din 0,06 µg/mL (0,22 µM). Cel purificatactozidea prezentat, de asemenea, activități inhibitoare împotriva MAO-A (▶Fig. 2b), actozidă prezentând cea mai scăzută valoare IC50 de 5 µM (3,1 µg/mL), urmată de izoacteozidă cu un IC50 de 10,1 µM (6,3 µg/mL) și 6’- acetilacteozidă cu un IC50 de 9,5 pM (6,3 pg/mL). Inhibarea MAO-A duce la restabilirea nivelurilor de serotonină, norepinefrină, dopamină și tiramină, care sunt neurotransmițători cheie în controlul anxietății și depresiei [16]. Astfel, prezența diverșilor inhibitori MAO-A în frunzele de A. polystachya explică, cel puțin parțial, activitatea antidepresivă și anxiolitică raportată anterior a speciei [8–10].

Utilizarea amestecurilor de plante multicomponente poate fi avantajoasă în tratamentul bolilor cu etiologie complexă, cum ar fi anxietatea, depresia și alte afecțiuni neurologice. În prezent, utilizarea fitomedicamentelor în tratamentul bolilor care afectează sistemul nervos se bazează pe paradigma liganzilor direcționați către mai multe ținte,

adică, produse farmaceutice care au activități multi-țintă rezultate din prezența unor substanțe precum polifenolici cu proprietăți antiinflamatorii, antioxidante și inhibitorii MAO care sunt capabile să confere neuroprotecție [20, 22-25].

Totuși, este de remarcat faptul că caracterul polar al substanțelor polifenolice ar putea împiedica interacțiunile cu țintele lor moleculare. Cu toate acestea, studiile clinice au demonstrat că contactul dintre polifenolici și metaboliții secundari nepolari prezenți în extracte poate modifica permeabilitatea membranelor celulare și poate facilita absorbția compușilor polari [23]. Astfel, extractele complexe de plante care conțin agenți multi-țintă care interacționează cu receptorii lor într-un mod pleiotrop generează un sinergism farmacologic care afectează numeroase procese, inclusiv mișcarea metaboliților polari de-a lungul membranelor celulare. În acest context, Li și colab. [26] a folosit un model de pește-zebră pentru a demonstra astaacteozidar putea pătrunde în bariera hemato-encefalică și a propus că glicozidul feniletanoid ar putea avea un potențial efect terapeutic în boala Parkinson.

Neurotransmițătorii monoaminergici sunt principalele ținte ale antidepresivelor moderne, deoarece deficiențele lor sunt responsabile pentru simptomele debilitante ale depresiei. Un studiu recent in vivo a demonstrat că extractele etanolice și apoase de Lippia citriodora (Verbenaceae) și componenta lor principalăacteozidau prezentat efecte anxiolitice, hipnotice și relaxante musculare, iar aceste proprietăți au fost atribuite, parțial, unei interacțiuni cu receptorul acidului gamma-aminobutiric de tip A (GABAA) [27].

Studiile clinice au arătat că medicamentele cu capacitatea de a bloca citokinele inflamatorii, cum ar fi TNF- sau alte componente ale căii de semnalizare inflamatorie, de exemplu, ciclooxigenaza-2 (COX-2), sunt eficiente în reducerea simptome depresive la pacienții cu poliartrită reumatoidă, psoriazis și cancer, precum și cei care suferă de tulburări psihice majore [28]. În acest context, s-a raportat căacteozidpoate atenua producția și eliberarea de molecule inflamatorii, cum ar fi oxidul nitric (NO), TNF- și interleukina 12 (IL-12) în macrofagele stimulate cu lipopolizaharide/interferon-gamma (LPS/IFN-) [29] , precum și histamina și acidul arahidonic în mastocitele RBL-2H3 [30]. În plus,acteozideste capabil să reducă nivelurile de TNF-, IL-1, IL-8, IL{-6 și NO și să activeze caspaza{-1, factorul nuclear-kappa-B

(NF-κB), NO sintetaza și proteina activatoare-1 [31] induse de IL-32 și/sau LPS în celulele TH{-1 și macrofage [32].

Unii dintre acești mediatori inflamatori, cum ar fi IFN, IL-6, IL-8 și IL{-1 , au fost găsiți la niveluri anormale atât în ​​probele de țesut periferic, cât și post-mortem de la indivizi depresivi. și au fost legate de simptomele depresiei [33]. Activarea acestor molecule de către factorii de stres psihosocial poate promova schimbări funcționale semnificative în creier, ducând la dezvoltarea comportamentului depresiv și a altor tulburări psihice. IFN-urile, IL-1 și TNF-, de exemplu, pot crește expresia și funcția pompelor receptorilor serotoninei, noradrenalinei și dopaminei, reducând astfel disponibilitatea acestor neurotransmițători în fanta sinaptică [28]. În plus, IFN-, IL-6, TNF- și stresul oxidativ pot activa indoleamin 2,3 dioxigenaza (IDO), o enzimă responsabilă de degradarea triptofanului și, prin urmare, pot reduce concentrația precursorului primar al sinteza serotoninei [34].

Acteozid, izoacteozidul și 6’-acetilacteozidul conțin fragmente hidroxi-feniletil și cafeoil despre care se știe că sunt asociate cu proprietăți antioxidante [35, 36], iar acteozida în sine prezintă o activitate antioxidantă considerabilă [37]. Studiile au arătat căacteozidinhibă agregarea peptidei -amiloid (A) într-o manieră dependentă de doză, funcționează ca un agent neuroprotector și îmbunătățește memoria, iar aceste proprietăți au fost atribuite activității antioxidante a agentului [38, 39]. Având în vedere că numeroase specii bogate în fenolici cu proprietăți antioxidante sunt utilizate în tratamentul tulburărilor neurologice [15], s-a sugerat că efectele antidepresive și anxiolitice aleglicozide feniletanoideizolate din A. polystachya pot rezulta si din activitatile lor antioxidante. Această presupunere a fost susținută de Xu și colab. [40], care a prezentat dovezi referitoare la relația dintre creșterea stresului oxidativ și depresie/anxietate.

Pe baza celor de mai sus, concluzionăm că proprietățile antidepresive ale extractului hidroetanolic din frunzele de A. polystachya și ale feniletanoizilor purificați izolați din acesta, pot fi explicate prin moduri de acțiune multi-țintă care implică inhibarea MAO-A, reglarea în jos a moleculele inflamatorii și neutralizarea reacțiilor de oxidare. Prin urmare, rezultatele prezentate aici susțin ipoteza noastră originală că activitățile anxiolitice și antidepresive ale extractului hidroetanolic de A. polystachya rezultă, cel puțin parțial, din inhibarea MAO-A. Cu toate acestea, relația structură-activitate aglicozide feniletanoideidentificate în acest studiu necesită o atenție suplimentară, astfel încât molecule noi să poată fi proiectate pentru tratamentul tulburărilor neurologice specifice.

Materiale și metode

Material vegetal

Frunzele de A. polystachya au fost recoltate la Farmácia da Natureza da Terra de Ismael (Jardinópolis, SP, Brazilia) în ianuarie 2016. Materialul vegetal a fost identificat de Dr. Lúcia Rossi (Instituto Botânico, São Paulo, SP, Brazilia), iar un exemplar de bon a fost depus în Herbarul de Plante Medicinale de la UNAERP cu număr de bon

HPM-1213.

HPM-1213. Permisiunea de a evalua bioactivitățile extractelor din plante braziliene a fost acordată de Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis ​​(nr. 02001.005074/ 2011-19).

Prepararea extractului hidroetanolic de Aloysia polystachya

Frunzele (1000 g) au fost uscate timp de 72 de ore într-un cuptor cu aer circulant la 45 de grade, pulverizate și trecute printr-o sită cu plasă. Materialul sub formă de pulbere a fost înmuiat în apă: etanol (20:80; v/v) timp de 7 zile şi ulterior filtrat prin hârtie de filtru Whatman No. 41. Filtratul a fost redus la sec pe un evaporator rotativ și liofilizat pentru a se obține

130,2 g de extract brut uscat, rezultând un raport de extract de medicament de 7,6:1.

Separarea și identificarea constituenților prin cromatografie lichidă ultra-performantă-spectrometrie de masă

Analizele cromatografice au fost efectuate utilizând un sistem Waters Acquity UPLC H-Class echipat cu un detector cu matrice de diode (DAD) și un spectrometru de masă cu patrupol tandem Waters Xevo TQ-S cu o sursă de pulverizare Z care funcționează în modul de ioni negativi. Soluții stoc care conțin 1,0 mg/mL de extract sau standardeacteozid, izoacteozidă, 6'-acetillacteozidă şi 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O–C7''] -flavonele în metanol de calitate LC au fost preparate separat, cu sonicare timp de 30 min fiecare, atunci când este necesar, și filtrate prin filtre Millipore de 0,45 μm (Merck Millipore). soluțiile au fost diluate la 10 µg/mL cu metanol și alicote (5 µL) au fost injectate pe o coloană Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 (100 × 4,6 mm id; dimensiunea particulei de 2,7 µm). Faza mobilă a constat din apă conţinând 0,1 procente acid formic (solvent A) şi metanol conţinând 0,1 procente acid formic (solvent B) furnizate la un debit de 0,5 ml/min conform profilului de eluţie: izocratic cu 3 procente B între 0 şi 4 min, urmat de gradienți liniari de la 3 la 60 la sută B între 4 și 19 min și de la 60 la 90 la sută B între 19 și 23 min, iar în final a revenit la 3 la sută B între 23 și 28 min. Efluentul a fost monitorizat de DAD în intervalul 210 până la 720 nm și de MS cu sursa optimizată și parametrii de funcționare, după cum urmează:

vârsta de 2,50 kV, temperatura sursei de pulverizare Z 150 de grade, temperatura de desolvatare (N2) 350 de grade, debitul de gaz de desolvatare 600 L/h și intervalul de masă de m/z 150 până la 600 în modul de scanare completă.

Purificarea constituenților identificați

Extractul hidroetanolic brut (10 g) a fost dizolvat în apă: etanol (50:50; v/v) şi împărţit consecutiv cu hexan, acetat de etil şi n-butanol. Fracția de butanol a fost concentrată într-un evaporator rotativ și o probă de 3 g din extractul fracționat a fost aplicată pe o coloană de sticlă (10 × 3 cm diametru) umplută cu silicagel C-18 RP (230-400 plasă; Sigma; -Aldrich) și eluat cu apă, urmat de amestecuri succesive de apă: metanol (90:10, 50:50 și 10:90; v/v). Subfracția obținută prin eluare cu apă: metanol (90:10; v/v) a fost purificată în continuare prin RP-HPLC utilizând un sistem Shimadzu LC-20AP cuplat la un detector SPD-20un UV/Vis și echipat cu o coloană Phenomenex Luna® C-18 (250 × 10 mm id; dimensiunea particulei de 5 μm). Faza mobilă a fost apă: metanol începând cu 90:10 (v/v) și trecând la 30:70 (v/v) în 100 de minute pentru a produce cei patru compuși cunoscuțiacteozid(750 mg), izoacteozidă (430 mg), 6'-acetilacteozidă (42 mg) şi 4',4''',5,5''-tetradroxi-6,6'',3''' -trimetoxi-[C7–O–C7'']-flavonă (13 mg). Debitul fazei mobile a fost de 1 mL/min, volumul de injectare a fost de 500 μL, cromatograma a fost înregistrată la 340 nm și s-au obținut spectre UV în intervalul de la 240 la 400 nm. Identitățile constituenților purificați au fost confirmate din spectrele lor 1H- (500 MHz) și 13C-RMN (125 MHz) înregistrate pe un spectrometru Bruker model DPX 500 și compararea datelor cu cele disponibile în literatură [18, 19, 41]. Puritățile compușilor izolați au fost confirmate de UPLC-DAD-MS (▶Fig. 1b–d) și RMN (▶Fig. S1–S12, Informații de sprijin).

Cuantificarea actozidei printr-o matrice de diode HPLCdetector

această soluție a fost analizată pe un sistem Shimadzu LC{{{{1{0}}}}APvp cuplat la un SPD-M10Avp DAD și echipat cu o coloană Phenomenex Luna C18 (250 × 4,6 mm id, 5 µm) protejat de o precoloană Phenomenex C18 (4,0 × 3,0 mm id, 5 µm). Separările au fost efectuate la temperatura camerei (22 ± 1 grade) folosind o fază mobilă cuprinzând acid acetic 0,1 procente în apă (solvent A) şi metanol (solvent B);

JT Baker HPLC grad) furnizat la un debit constant de 1.0 mL/min conform programului: gradient liniar de la 10 la 70 la sută B între 0 și 32 min, de la 70 la 10 % B între 32 şi 35 min şi o eluţie finală izocratică cu 10 % B între 35 şi 40 min. Lungimea de undă de detecție a fost setată la 330 nm.

Conținutul de acteozid din extract a fost estimat folosindacteozid(Sigma-Aldrich; CAS nr. 61276-17-3) ca standard extern. Au fost preparate soluții care conțin 500, 250, 125, 62,5, 31,2 și 15,6 ug/mL de standard de referință și au fost construite curbele de calibrare supunând fiecare soluție analizei HPLC în trei exemplare [42 ]. Raportul dintre aria de vârf a actozidei standard și concentrația corespunzătoare de analit a fost stabilit prin regresia liniară a curbelor standard (▶Fig. S13, Informații justificative). Datele analitice au fost validate în ceea ce privește liniaritatea, precizia și acuratețea, conform ghidurilor emise de Agência Nacional de Vigilância Sanitária [42]. Limitele de detecție (LoD) și cuantificare (LoQ) ale actozidei au fost 0,30 și, respectiv, 0,92 µg/mL.

Teste de inhibare a monoaminooxidazei-A

MAO-A umană recombinantă, tiramină, clorgilină, acid vanilic, 4-amino antipirină și peroxidaza de hrean au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich. Testele de inhibare a MAO-A au fost efectuate folosind plăci de godeuri 96-, urmând o versiune modificată a metodei descrise de López și colab. [43]. Fiecare godeu a fost încărcat cu 50 μL de soluție cromogenă (0,8 mM acid vanilic, 2,5 mM 4-amino antipirină și 4 U/mL peroxidază de hrean în tampon fosfat la pH 7,6), 100 μL de 3 mM tiramină și o alicotă de 50-μL din extractul hidroetanolic brut sau unul dintre feniletanoizii purificați dizolvați în metanol. În cele din urmă, s-au adăugat alicote de 50 μL de 8 U/mL MAO-A în fiecare dintre godeuri și placa a fost incubată la 37 de grade timp de 30 de minute, timp în care absorbanțele au fost înregistrate la fiecare 5 minute folosind un cititor de microplăci. Clorgylina (mai mare sau egală cu 97% GC; Sigma-Aldrich) și metanolul au fost incluse ca martori pozitivi și, respectiv, negativ, pe fiecare placă de analiză.

analize statistice

Au fost efectuate trei evaluări independente ale activităților inhibitoare MAO-A și datele obținute au fost analizate folosind software-ul Graph-Pad Prism. Valorile IC50 ale extractului hidroetanolic, ale feniletanoizilor purificați și ale controlului pozitiv au fost calculate prin regresie neliniară, simulând diagrame de log (concentrație de inhibitor) versus inhibarea procentuală normalizată.

Informatii justificative

Spectrele H- și 13C-RMN aleacteozid, izoacteozidă, 6'-acetillacteozidă şi 4',4''',5,5''-tetrahidroxi-6,6'',3'''-trimetoxi-[C7–O–C7''] - Analizele de corelare a flavonelor și HSQC/HMBC pentru cei trei feniletanoizi sunt disponibile ca informații de sprijin.

primit 04.06.2018

revizuit 19.10.2018

acceptat 24.10.2018

Bibliografie

DOI https://doi.org/10.1055/a-0787-1665

Planta Med Int Open 2019; 6: e1–e6

© Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York ISSN 2509-9264

Corespondenţă

Ana Maria S. Pereira

Departamento de Biotecnologia em Plants Medicinais

Universitatea de Ribeirão Preto Av. Costábile Romano 2201 14096-900 Ribeirânia

Ribeirão Preto, SP

Brazilia

Referințe

[1] Organizația Mondială a Sănătății. Depresia și alte tulburări mentale comune: estimări globale de sănătate. Geneva: OMS; 2017

[2] Ferguson JM. Medicamente antidepresive ISRS: efecte adverse și tolerabilitate. Prim Care Companion J Clin Psychiatry 2001; 3: 22–27

[3] van der Watt G, Laugharne J, Janca A. Medicina complementară și alternativă în tratamentul anxietății și depresiei. Curr Opin Psihiatrie 2008; 21: 37–42

[4] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Medicamente pe bază de plante pentru tulburările de anxietate, partea 1: O revizuire a studiilor preclinice. CNS Drugs 2013; 27: 207–219

[5] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Medicamente pe bază de plante pentru tulburările de anxietate, partea a 2-a: O revizuire a studiilor clinice cu dovezi preclinice de susținere. CNS Drugs 2013; 27: 301–319

[6] Del Vitto LA, Petenatti EM, Petenatti ME. Recursos herbolarios de San Luis (Republica Argentina). Prima parte: Plantas Nativas. Multequina 1997; 6: 49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito", Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben-aceae), cultivado en Paraguay. Rojasiana 2014; 13: 31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellión-Ibarrola MC. Efectele anxiolitice și antidepresive ale extractului hidroalcoolic din Aloysia polystachya la șobolani. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. The anxiolytic-like effects of Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) la șoareci. J Ethnopharma- col 2006; 105: 400–408

[10] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J, De Lima TCM, Mora S. The antidepressant-like effects of Aloysia polystachya (Griseb. ) Moldenke (Verbenaceae) la șoareci. Fitomedicina 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H. -Carboline alcaloids in Peganum harmala and inhibition of human monoamine oxidase (MAO). Food Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Identification, occurrence and activity of quinazoline alcaloids in Peganum harmala. Food Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Inhibarea monoaminoxidazei-A și activitatea antioxidantă asociată în extractele de plante cu potențiale acțiuni antidepresive. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. Selective MAO-B inhibitors: A lesson from natural products. Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. Tratamentul anxietății și depresiei: Plante medicinale în retrospectivă. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. Medicamentele sunt legate de activitatea monoaminoxidazei. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. Monoaminoxidaza de tip A și serotonina sunt implicate coordonat în tulburările depresive: de la dezechilibrul neurotransmițătorilor la neurogeneza afectată. J Neural Transm 2017; 125: 53–66