Extractul bogat în polifenoli de Ocimum Gratissimum lasă efectele toxice prevenite ale ciclofosfamidei asupra funcției renale a șobolanilor Wistar

Pentru mai multe vă rugăm să contactați la:oscar.xiao@wecistanche.com

Abstract

Fundal:Ciclofosfamida (CP) este una dintre chimioterapiile puternice și cu costuri reduse utilizate în mediile clinice împotriva unei varietăți de tumori. Cu toate acestea, asocierea sa cu nefrotoxicitatea îi limitează utilizarea terapeutică. Ocimum gratis simum leaf este o plantă medicinală cu numeroase eficiențe farmacologice și terapeutice, precum proprietăți antioxidante, antiinflamatorii și antiapoptotice.

Metode: Prezentul studiu a fost conceput pentru a evalua efectul protector al Ocimum gratissimum (OG) împotriva disfuncției renale induse de CP la șobolani. Șobolanii au fost tratați în prealabil cu 400 mg/kg bw de extract de frunze de Ocimum gratissimum (Ocimum G.) timp de 4 zile și apoi s-au administrat concomitent 50 mg/kg bw de CP din ziua 5 până în ziua 7 împreună cu Ocimum G. Markeri ai funcției renale și au fost evaluate stresul oxidativ, aportul de alimente și apă, electroliții, aldosteronul, inflația leucocitelor, inflamația și alterarea histopatologică.

Rezultate:Inflamația renală evidentă și leziuni renale au fost observate în grupurile tratate cu CP. Cu toate acestea, administrarea de extract de frunze de Ocimum G. a prevenit stresul oxidativ, leziunile renale, inflamația atenuată, creșterea producției de aldosteron și pierderea redusă de ioni de sodiu și apă la șobolani. Concentrația plasmatică a creatininei, ureei și albuminei urinare s-a normalizat după administrarea extractului de Ocimum G. la șobolani tratați cu CP. Ocimum G. a scăzut, de asemenea, concentrațiile plasmatice de Interleukin-(IL)-6, proteina C-reactivă și activitatea mieloperoxidazei și malondialdehidei la șobolanii tratați cu CP.

Concluzie: Ocimum G. a prevenit leziunile renale și a îmbunătățit funcția renală prin inhibarea inflamației și a toxicității CP indusă de oxidanți. Eficacitatea Ocimum G. este legată de prezența diferitelor substanțe fitochimice în plantă.

Cuvinte cheie:Antioxidant, creatinina, ciclofosfamida, frunza de Ocimum gratissimum, rinichi, sodiu.

fundal

Ciclofosfamida (CP) este un compus antineoplazic care este asociat cu muștarul cu azot. Este utilizat în cadrul clinic pentru a trata o mare varietate de boli canceroase și în terapia imunosupresoare după transplantul de organe, tratamentul bolilor autoimune precum artrita reumatoidă, granulomatoza Wegener și sindromul nefritic la copii [1]. Indiferent de spectrul larg de utilizări clinice ale medicamentului, se știe că CP provoacă numeroase leziuni ale organelor dependente de doză, care, prin urmare, îi limitează utilizarea terapeutică în cadrul clinic. Deoarece se știa că este benefic în tratamentul sindromului nefrotic la copii [1], a fost raportat invers în unele studii anterioare că induce leziuni ale vezicii urinare [2, 3] și provoacă toxicitate renală atunci când este utilizat în mod necorespunzător din cauza utilizării CP. supradozaj [4–6]. Metabolitul activ CP, 4-Hidroxiciclofosfamida, este parțial tautomerizat în aldosfosfamidă, care, la rândul său, este descompusă de fosfatază în circulație și celulele vii și dă naștere la doi metaboliți citotoxici, muștarul fosforamidă și acroleină [6]. Acțiunea terapeutică a muștarului fosforamidă a fost raportată anterior ca fiind responsabilă pentru efectele antitumorale [6], în timp ce acroleina este responsabilă de efectele citotoxice ale CP, cum ar fi cistita hemoragică în timpul administrării medicamentului [2, 7]. Metabolitul toxic al CP dăunează țesuturilor vii prin atenuarea sistemului antioxidant endogen al țesuturilor prin generarea de radicali liberi reactivi de oxigen care sunt mutageni pentru celulele vii. Sa raportat că administrarea unei doze mari de CP crește peroxidarea lipidelor și determină o reducere a antioxidanților enzimatici și neenzimatici endogeni [7, 8]. Studiile anterioare au descris utilizările benefice ale substanțelor antioxidante împreună cu chimioterapia în prevenirea efectelor secundare ale medicamentului asupra țesuturilor corpului [7, 9, 10]. Agenții antioxidanti precum kolaviron s-au dovedit a fi eficienți în prevenirea cardiotoxicității CP la șobolani [11]. Astfel, combinația dintreagent antioxidantîmpreună cu medicamentele pentru chimioterapie poate fi o abordare terapeutică potențială pentru a preveni sau a opri dezvoltarea citotoxică a PC. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) este o familie de Lamiaceae care aparțin speciilor de plante erbacee. Este cunoscut sub numele de cuișoare sau busuioc african în multe țări tropicale (Asia, India, Brazilia și Africa de Vest etc.). Se găsește foarte mult în Nigeria [12]. Multe state din această țară (Nigeria) au folosit Ocimum G. ca sos și supă de legume. S-a descoperit că frunzele și florile de Ocimum G. posedă polifenoli și alți compuși bioactivi [13, 14]. Plantele Ocimum gratissimum sunt folosite pentru a trata diferite boli precum diareea, colita ulceroasă, febra și catarul [14-17]. Planta are multe avantaje farmacologice datorită capacităților sale antiinflamatorii, antioxidante, antibacteriene, antidiabetice și antimalarice [14, 18-20]. Activitatea antimicrobiană a extractului de Ocimum G. a fost testată in vitro împotriva diverșilor agenți patogeni umani cum ar fi pneumonia Klebsiella, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis etc. Activitatea antifungică a uleiului esențial de Ocimum G. extractele s-au observat in vitro [19, 21, 22], iar Ocimum G. a fost folosit ca apelant la țânțari [23]. Un studiu recent pe animale a sugerat importanța efectului protector al extractelor de Ocimum G. în prevenirea neregulilor tensiunii arteriale împotriva toxicității clorurii de cobalt [24], precum și a atenuării anomaliilor cardiace asociate cu fibroza hepatică prin reglarea în jos a interleukinei-6 cale de semnalizare [25] sau prin inducerea efectelor antioxidante [26]. Extractul apos de frunze de Ocimum G. a arătat efecte antioxidante împotriva leziunilor cardio-renale induse de clorură de cobalt [24] și a prevenit ulcerele gastrice prin reducerea secreției de acid gastric și a ulcerației [27]. De asemenea, acidul ursolic din extractele de Ocimum G. a demonstrat activitate anti-falciformă [28] și anticancer [29, 30]. Mai mult, s-a demonstrat că uleiurile esențiale de Ocimum G. prezintă proprietăți vasorelaxante dependente de endoteliu la șobolani [31]. Studiile in vivo și in vitro au evaluat eugenolul, un constituent medicinal al Ocimum G., pentru a scădea nivelurile de glucoză din sânge prin inhibarea alfa-glucozidazei [32]. Mai mult, un studiu clinic a stabilit adecvarea farmacologică a Ocimum G. de a prezenta o activitate similară ca și clorhexidina împotriva plăcii și gingivitei [33]. Cu toate aceste caracteristici ale Ocimum G., am emis ipoteza că Ocimum G. ar putea fi un posibil medicament atunci când să fie utilizat împreună cu CP pentru a preveni sau opri efectele adverse ale CP. Prin urmare, acest studiu a fost conceput pentru a examina efectele benefice ale unui extract bogat în polifenoli de frunze de Ocimum gratissimum asupra nefrotoxicității induse de CP la șobolanii Wistar masculi.

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

Materiale și metode

Injecția de ciclofosfamidă (200 mg/10 ml) a fost procurată de la Celon Laboratory (Hyderabad, India); Clorhidrat de ketamină (50 mg/10 ml) injectabil a fost achiziționat de la Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladesh); Trusele de analiză pentru parametrii biochimici au fost obținute de la Randox Laboratories Limited, (Crumlin, Marea Britanie), etc. S-au achiziționat 1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH), metanol, carbonat de sodiu, Trolox și reactiv Folin–Ciocâlteu de la Merck & Co., Kenilworth, NJ, SUA. Instrumentele utilizate includ cromatografie gazoasă-spectrometru de masă (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonia) și spectrofotometru ultraviolet-vizibil (Beckman, DU 7400, SUA), aparat Soxhlet, evaporator rotativ, microscop (Olympus CH; Olympus). , Tokyo, Japonia); cameră (Leica DM 750).

Prepararea extractului polifenolic de Ocimum gratissimumleaves

Frunzele de Ocimum gratissimum au fost colectate dintr-o grădină din Usi, statul Ekiti, Nigeria. Au fost obținute permisiuni instituționale relevante pentru a colecta Ocimum gratissimum. Prezentul studiu respectă ghidurile internaționale, naționale și/sau instituționale pentru utilizarea diferitelor părți ale plantei. Exemplarele plantei au fost autentificate de domnul Omole, curatorul la herbarul Departamentului de Botanică, Universitatea Obafemi Awolowo, Ile-Ife, unde a fost depus un exemplar bon (1945) în Herbarul Universității. Extractul bogat în polifenoli a fost obținut din frunzele de Ocimum G. (900g) conform metodelor noastre anterioare de extracție a plantei [14]. Metanolul a fost folosit pentru a obține produsul final de extracție, extract bogat în polifenoli din frunze de Ocimum gratissimum (PREOG) sub presiune redusă la 40 grade folosind un evaporator rotativ. Concentratul de extract rezultat a fost liofilizat cu ajutorul unui liofilizator. Reziduul (8{{40}},85 g) a fost păstrat în vase Petri cu un capac etanș și depozitat la -2{0 grade până când a fost necesar pentru studiu. Extractul OG obţinut a fost dizolvat în apă (0,2 ml/administrare) şi dat şobolanilor conform dozei proiectate. Cromatografie gazoasă-analiza spectrometrică de masă a extractelor OG (GC-MS) Compoziția chimică a extractului obținut a fost verificată folosind cromatografie gazoasă-spectrometrie de masă (GC-MS). Chavez și colab. [34] metoda a fost adoptată cu ușoare modificări. Pentru determinarea compuşilor a fost utilizată o coloană capilară cu silice topită (grosimea filmului de 30×0,25 HP-5Ms, 0,25μm) care conţine heliu ca gaz purtător (debit de 1/mL). Temperatura cuptorului la 40 de grade a fost setată și menținută timp de 5 minute, apoi a crescut treptat cu 3 grade / min până la 270 de grade. 60:1 a fost setat ca raport de împărțire. A fost setată o temperatură de 180 de grade pentru părțile de conectare și sursele de ioni, iar o temperatură de interfață de 240 de grade a fost setată pentru spectrometrul de masă. Pentru cantitatea de energie de ionizare, s-a folosit 70 eV, în timp ce modul de impact electronic (EI) a fost ales pentru a produce spectre de masă stabile și reproductibile și a fost utilizat un interval de valori de 50–650 m/z pentru rularea probelor. Timpul de întârziere MS înainte de scanare a fost de 5 minute. Compușii obținuți au fost afișați în Tabelul 2. Determinarea conținutului de fenolic total Conținutul de fenolic total (TPC) al extractelor a fost evaluat folosind tehnica Folin–Ciocâlteu așa cum este descrisă de Gulcin și colab. [35], cu câteva modificări. Pe scurt, 100μL (0,5 mg/mL) din extractele bogate în polifenoli de Ocimum G. au fost plasate în tuburi simple separate. Aproximativ 500 μL (1 la sută v/v) de reactiv fenol Folin-Ciocâlteu au fost adăugate în fiecare tub care conține extract de Ocimum G. și tuburile au fost lăsate să stea timp de 5 minute. și apoi vortexată. După ce s-au lăsat să stea timp de 5 minute, s-au adăugat aproximativ 400 μL (20 procente g/g) de carbonat de sodiu la alicote, care au fost apoi incubate la întuneric la temperatura camerei timp de 90 de minute. Pentru dezvoltarea culorii. Absorbanța fiecărui amestec a fost evaluată cu un spectrofotometru ultraviolet-vizibil (Beckman, DU 7400, SUA) la 765 nm. Ca martor a fost utilizată soluție de carbonat de sodiu fără nicio adăugare de reactiv fenol Folin-Ciocâlteu. Pentru curba de calibrare s-au folosit standarde de acid galic. TPC-urile probelor au fost determinate din regresia liniară a standardelor de acid galic. Rezultatele au fost reprezentate ca echivalent acid galic (GAE) per gram de greutate uscată de extract de Ocimum gratissimum (mg GAE/g). Procedura a fost efectuată în trei exemplare (n=3). Testul de captare a radicalilor liberi DPPH Activitatea de captare a radicalilor liberi a extractului a fost determinată conform metodei descrise de RakMai et al. [36], cu mici modificări. S-au adăugat aproximativ 2 ml de soluție de DPPH-metanol (180 μmol/L) și s-au amestecat cu extract la 0,1 mg/mL. Alicotele au fost incubate la întuneric la 25 de grade. Absorbanța probei a fost determinată folosind un spectrofotometru la 517 nm la diferite intervale de timp între 0 și 60 min. S-au folosit ca martori alicote din extracte fără adăugarea de soluție de DPPH-metanol. Trolox, un analog sintetic alvitaminaE, a fost folosit ca martor pozitiv. Ecuația de mai jos a fost utilizată pentru a evalua proprietățile de captare ale extractelor. Procedura a fost efectuată în trei exemplare (n=3). Unde O probă este un extract plus DPPH, Ablank este doar extractul, Un martor este absorbanța soluției de control (conținând numai DPPH). Îngrijirea animalelor Pentru studiu au fost utilizați douăzeci și opt (28) de șobolani Wistar masculi cu o greutate de 120-180 g. Tey a fost procurat de la Animal Holding al Colegiului de Științe ale Sănătății, Universitatea Obafemi Awolowo, Ile-Ife. Toți șobolanii au fost ținuți în cuști convenționale timp de 1 săptămână pentru a se aclimatiza la condițiile de mediu la grade 28-32 și li sa permis să aibă acces liber la dietă și apă potabilă curată. Experimentul a fost aprobat de Comitetul de etică a cercetării în sănătate (HREC) al Universității Obafemi Awolowo și studiul a fost descris în conformitate cu ghidurile ARRIVE (animale în cercetare: raportare experiment in vivo) [37].

Cistanche pentru anti-oboseala

Studii histopatologice

Țesuturile au fost tăiate în secțiuni groase de {{{0}}μm cu ajutorul unui microtom, fixate pe lame și colorate cu PAS. Diapozitivele au fost observate la microscop cu lumină (Olym pus CH; Olympus, Tokyo, Japonia) și au fost făcute microfotografii cu o cameră Leica DM 750 la x400 notificări mag. Secțiunea de țesuturi renale a fost evaluată de un patolog certificat care a fost orbit la protocolul experimental. Leziunile glomerulare au fost notate între gradele 0 și 4 prin evaluarea proliferării mezangiale, a grosimii membranei bazale și a modificărilor fibrinoide. Leziunile tubulare au fost notate între gradele 0 și 4 prin evaluarea degenerescenței vacuolare, descuamării, degenerescenței tubulare, necrozei tubulare proximale și formării gipsului. Infiltratele inflamatorii tubulointerstițiale au fost notate între gradele 0 și 2 prin evaluarea diversității celulelor inflamatorii din mediu și a prezenței infiltratelor în epiteliul tubular (Tabelul 1) [44]. Un scor total de afectare renală de 0–2 a reprezentat nefrotoxicitate nefrotoxicitate ușoară, 3–6 nefrotoxicitate moderată și 7–10 nefrotoxicitate severă [44].

Rezultate

Analiza cromatografiei gazoase-spectrometrie de masă, conținutul fenolic și capacitatea de captare a DPPH a extractului de frunze de Ocimum gratissimum Analiza GC-MS a relevat unii compuși bioactivi ai extractului de frunze de Ocimum gratissimum (Tabelul 2). Conținutul polifenolic al extractului a fost recunoscut prin metoda Folin–Ciocâlteu (Tabelul 2). Conținutul fenolic total (TPC) (80.36±{0.50mg GAE/100g) obținut în extractul de Ocimum G. a arătat că extractul de Ocimum gratissimum este bogat în conținuturi fenolice. Capacitatea de captare a DPPH a extractului a fost de asemenea evaluată prin calcularea valorii IC50, care se referă la cantitatea de extract care este capabilă să elimine 50 la sută din radicalii liberi conținuti în amestecul de reacție. Valoarea IC50 (22,12±0,43mg/ml) a extractului a fost ridicată și aceasta a indicat valoarea ridicată.antioxidantactivitatea Ocimum gratissimum frunze. Astfel, funcția conținutului ridicat de fenolici al plantei a fost demonstrată în capacitatea sa de a elimina activitatea radicalilor liberi (Tabelul 2).

Efectul PREOG și ciclofosfamidei asupra clearance-ului creatininei

O scădere semnificativă a clearance-ului creatininei renale a fost observată în grupul cu CP numai în comparație cu controlul (p.<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Discuţie

În studiul actual, există indicii ale unor niveluri crescute ale parametrilor stresului oxidativ, cum ar fi peroxidarea lipidelor, peroxidul de hidrogen (H2O2) și oxidul nitric (NO), sugerând că lipidele membranei și proteinele rinichilor șobolanilor tratați cu Numai CP au fost deteriorate. De asemenea, activitățile enzimelor antioxidante precum superoxid dismutaza și catalaza și nivelul de antioxidant neenzimatic, glutation redus au fost scăzute în grupul tratat numai cu CP. Scăderea antioxidanților din celulele renale ale șobolanilor tratați numai cu CP a fost un indiciu al dezechilibrului redox-homeostazie. Sa demonstrat anterior că CP induce leziuni oxidative, inflamație și necroză celulară sau apoptoză după activarea și promovarea speciilor reactive de oxigen (ROS) prin metabolitul său, acroleina [7, 11, 14], care declanșează ulterior dezactivarea și diminuareaapărare antioxidantăcapacitățile organismelor afectate [10, 11, 45]. În acest studiu, supraproducția de ROS depășește cea endogenăcapacitate antioxidantă, declanșează stresul oxidativ și, ulterior, dăunează celulelor renale ale șobolanilor tratați cu CP, așa cum a fost reflectat de nivelurile crescute de markeri ai stresului oxidativ și nivelurile scăzute deparametrii antioxidanti. De asemenea, vizualizarea histologică a acestor șobolani a arătat leziuni glomerulare și necroză tubulară a celulelor renale. În plus, dezechilibrul redox determină supraproducția de citokine proinflamatorii [3, 14]. Supraproducția observată de ROS a declanșat peroxidarea lipidelor și mobilizarea citokinelor proinflamatorii și a exercitat concomitent leziuni inflamatorii ale celulelor renale. Evaluarea IL-6 în acest studiu a fost semnificativ crescută la șobolanii tratați cu CP, ceea ce indică atacul de stres oxidativ și inflamația celulelor renale. S-a constatat că creșterea IL-6 declanșează și/sau stimulează ficatul să inițieze un răspuns de fază acută care are ca rezultat o creștere a producției de proteină C reactivă circulantă (CRP) și alți mediatori bioactivi [46]. CRP a fost semnificativ crescută la șobolanii tratați cu CP, iar nivelul ridicat al acestui biomarker a fost un indiciu al unui sistem de apărare timpurie împotriva infecțiilor, informațiilor și leziunilor tisulare [47, 48]. Creșterea nivelului CRP în acest studiu a confirmat în continuare inflamația la șobolanii tratați numai cu CP. S-a observat că CP declanșează reducerea antioxidanților endogeni ai rinichilor, cum ar fi suprautilizarea GSH de către rinichi din cauza acumulării de produse metabolite de ciclofosfamidă în celulele tubulare renale [9]. Ca rezultat al acestui proces, rinichiul șobolanilor tratați numai cu CP ar putea crește răspunsul imun împotriva celulelor sale, ceea ce a dus ulterior la inflamație, așa cum se arată prin creșterea CRP plasmatică. În acord, CP are potențialul de a induce inflamație și leziuni imunologice probabile în rinichiul șobolanilor tratați cu CP.

Concluzie

În concluzie, rezultatele prezentelor descoperiri au arătat că extractul bogat în polifenoli de Ocimum gratissimum a prevenit efectele secundare adverse ale CP asupra funcției renale prin scăderea stresului oxidativ, a prevenit supraproducția de citokine pro-inflamatorii și inflația leucocitelor și ameliorarea antioxidantului enzimatic. activitatea țesuturilor renale. Mai mult, s-a confirmat că CP a indus reducerea secreției de aldosteron și a facilitat pierderea excesivă de sodiu și apă prin urină la șobolani. Cu toate acestea, extractul de Ocimum G. a îmbunătățit funcția renală a crescut producția de aldosteron și a prevenit pierderea excesivă de sodiu și apă la șobolanii tratați cu CP. Prezența polifenolului și a antioxidanților în frunzele de Ocimum gratissimum îl fac un candidat perfect pentru tratamentul și/sau prevenirea efectului nefrotoxic al ciclofosfamidei.

Referințe

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Agenți antineoplazici. În: Harnam JG, Libmirde LE, editori. Goodman și Gilman sunt baza farmacologică a terapiei. a 10-a ed. New York: McGraw Hill; 2001. p. 1389–459.

2. Chabner BA, et al. Agenți antineoplazici. În: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, editori. Goodman și Gilman sunt baza farmacologică a terapiei. a 11-a ed. New York: McGraw Hill; 2006. p. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Efectele citoprotectoare ale lipozomului acidului gliciretinic împotriva cistitei induse de ciclofosfamidă prin inhibarea stresului inflamator. Int Imunofarmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Efectele protectoare ale spirulinei în nefrotoxicitatea și urotoxicitatea indusă de ciclofosfamidă la șobolani. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin protejează împotriva hepatotoxicității și nefrotoxicității induse de ciclofosfamidă prin modularea stresului oxidativ, inflamației, apoptozei, autofagiei și leziunilor ADN. Environ Sci Pollut Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W și colab. Metabolismul și transportul oxazafosforinelor și implicațiile clinice. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Reglarea în jos a dezechilibrului redox și a semnalizării iNOS/NF-ĸB/caspază-3 cu suplimentarea cu zinc previne urotoxicitatea cistitei hemoragice induse de ciclofosfamidă la șobolani. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Acidul galic ameliorează neurotoxicitatea indusă de ciclofosfamidă la șobolanii Wistar prin activitatea de captare a radicalilor liberi și îmbunătățirea sistemului de apărare antioxidantă. J Diet Suppl. 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Efectele glutaminei orale asupra nefrotoxicității induse de ciclofosfamidă la șobolani. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Sherif IO. Mecanismul neuroprotector alquercetinăîmpotriva urotoxicității induse de ciclofosfa- șoareci: efect asupra stresului oxidativ și a markerilor inflamatori. J Cell Biochim. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG, şi colab. Efectul protector al kolavironului asupra toxicității cardiace induse de ciclofosfamidă la șobolani. J Evid Based Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Studii histopatologice privind toxicitatea extractului de lasă de Ocimum gratissimum pe unele organe ale iepurilor. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Componenta fitochimică și activitatea antioxidantă a extractului din frunzele de Ocimum gratissimum. Eseuri Sci Res. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. Extractul bogat de polifenoli din frunze de Ocimum gratissimum ameliorează colita prin atenuarea leziunilor mucoasei colonului și prin reglarea producției de citokine proinflamatorii și a stresului oxidativ la șobolani. Biomed Pharmacother. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Efectele antidiareice ale extractului de frunze de Ocimum gratissimum la animalele de experiment. J Etnofarmacol. 1999;68:327–30.