Progresul cercetării privind clasificarea limfomului difuz cu celule B mari

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Limfomul difuz cu celule B mari (DLBCL) reprezintă 25% până la 35% din toate limfoamele non-Hodgkin și este un grup eterogen și agresiv cu diferite caracteristici clinice, patologice și biologice. limfom. Studiile clinice anterioare au identificat rituximab, ciclofosfamidă, doxorubicină, vincristină și prednison (R-CHOP) ca tratament standard de primă linie pentru pacienții cu DLBCL, dintre care 50% până la 70% dintre pacienți pot. Cu toate acestea, un număr mare de pacienți arată remisie refractară sau completă și apoi recidivă, în timp ce doar 10% dintre pacienții refractari și recidivați pot fi vindecați prin imunochimioterapie tradițională de salvare combinată cu transplantul de celule stem hematopoietice autologe, iar restul de 90% dintre pacienți au rezultate slabe ale tratamentului. Prin urmare, modul de îmbunătățire a prognosticului acestor pacienți a devenit o provocare uriașă. În prezent, există și studii clinice care discută combinația de alte medicamente (cum ar fi lenalidomidă, ibrutinib etc.) pe baza R-CHOP pentru a îmbunătăți în continuare eficacitatea, dar nu s-au făcut progrese semnificative. DLBCL are o eterogenitate semnificativă, așa că modul de a face diagnostice stratificate precise și de a ghida tratamentul individualizat este, de asemenea, unul dintre punctele fierbinți de cercetare actuale. Acest articol rezumă progresul clasificării DLBCL.

cistamcheCreșteți proliferarea celulară

1. Tiparea COO a DLBCL folosind cip de profilare a expresiei genelor

DLBCL are o eterogenitate evidentă în morfologia celulară și prognostic. În 2000, ALIZADEH și alții au aplicat tehnologia cipului genetic pentru a detecta și a detecta 3 186 gene care joacă un rol important în dezvoltarea, diferențierea și carcinogeneza limfocitelor și au cartografiat expresia genică a DLBCL. Profilul de expresie a genelor (GEP) a arătat că DLBCL provine din limfocitele B în diferite stadii de diferențiere. Conform GEP, DLBCL poate fi împărțit în două subtipuri: tipul de celule B asemănătoare centrului germinal (GCB) și tipul de celule B activate (ABC). Studiile ulterioare ale lui ROSENWALD et al. a confirmat de asemenea acest rezultat. Studiile ulterioare au inclus mai multe cazuri și mai multe tipuri de screening genetic și au constatat că unii pacienți nu au putut determina sursa celulelor, care au fost caracterizate între două subtipuri, denumite tip 3, cunoscute și ca neclasificate. Pentru DLBCL de diferite origini, studiul a constatat că a arătat diferite prognostice, printre care DLBCL derivat din GCB ar putea obține un timp de supraviețuire mai lung. Tiparea celulară de origine (COO) a dezvăluit eterogenitatea DLBCL, iar sub tratamentul R-CHOP, au existat diferențe semnificative de supraviețuire între subtipuri, oferind o bază teoretică pentru evaluarea prognosticului și selecția regimului. Rezultatele testelor GEP bazate pe tehnologia cipului genetic sunt în prezent recunoscute ca standardul de aur pentru a judeca originea celulelor DLBCL. Rezultatele testelor sunt cele mai fiabile, dar sunt costisitoare și necesită specimene mari, de obicei specimene de țesut vii proaspăt congelate, astfel încât operabilitatea nu este puternică. Nu este utilizat pe scară largă în practica clinică.

2. Utilizarea tehnologiei NanoString pentru tastarea COO a DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) este o nouă tehnologie de profilare a expresiei genelor cu detecție de mare performanță, bazată pe măsurarea directă a codurilor de bare moleculare fluorescente pe sonde după ce moleculele de acid nucleic hibridizează la sonde. Fiecare etichetă de cod de bare corespunde unei secvențe specifice de ARNm și până la 800 de coduri de bare pot fi măsurate în aceeași probă, în timp ce volumul de probă necesar poate fi de până la 100 ng ARN. Tehnologia de cuantificare digitală NanoString elimină nevoia de transcriere, amplificare sau construcție de biblioteci, eliminând procedurile experimentale îndelungate și resursele umane și reducând la minimum prejudecățile potențiale introduse de reacțiile enzimatice. Pentru probele clinice cu mostre rare, tehnologia NanoString poate folosi direct probe încorporate în parafină pentru a cuantifica ARN-ul fără extracția ARN. Acest avantaj tehnic îl face mai practic în practica clinică. SCOTT şi colab. a verificat 20 de gene pe baza datelor de tipare GEP și a folosit tehnologia NanoString pentru a efectua tipări COO pe 119 mostre DLBCL. Consecvența dintre rezultatele cercetării și „standardul de aur” a atins 95 la sută, iar pacienții pot fi, de asemenea, împărțiți în tip GCB, tip ABC și tip neclasificat, ultimele două fiind denumite colectiv tip non-GCB, ceea ce arată, de asemenea, că prognosticul de tip GCB este mai bun decât cel de tip non-GCB. Alte studii bazate pe tehnologia NanoString au confirmat și mai mult valoarea acestei tehnologii în tiparea COO a DLBCL.

Planta medicinala traditionala chinezacistamche, este cunoscut și sub numele de „ginseng din deșert”

3. Tiparea COO a DLBCL folosind tehnologia PCR cantitativă

Atât tiparea cu cipuri genetice, cât și tiparea NanoString necesită echipament special scump, care este dificil de aplicat pe scară largă în practica clinică. PCR cantitativ este o metodă frecvent utilizată pentru verificarea expresiei genelor. Are caracteristicile unei operațiuni simple, sensibilitate ridicată și precizie și poate fi obținut din specimene încorporate în parafină. Echipa lui Li Xiaoqiu a folosit pentru prima dată PCR cantitativă pentru a efectua validarea clinică la scară largă în populațiile de pacienți chinezi și a dezvoltat un produs potrivit pentru testarea genetică clinică, și anume DLBCL-COO Assay. În acest studiu, 32 de gene legate semnificativ de tiparea DLBCL-COO au fost analizate în baza de date publică și au fost înrolați 160 de pacienți, iar apoi au fost utilizate metodele de imunohistochimie, PCR cantitativă și cip genetic pentru a detecta specimenele lor încorporate în parafină și proaspete corespunzătoare. Specimenele de țesut, rezultatele au arătat că rezultatele de tip DLBCL-COO Assay au fost 92 la sută în concordanță cu „standardul de aur”; analiza de supraviețuire a arătat că rezultatele de tipare ale testului DLBCL-COO au fost corelate semnificativ cu supraviețuirea globală, iar prognoza tipului GCB a fost semnificativ mai bună decât cea a tipului ABC (P =0.023), care este foarte în concordanță cu cea domestică. și rezultatele cercetărilor străine. Relativ vorbind, platforma metodei de tastare folosind tehnologia PCR cantitativă este mai deschisă, operația este mai simplă și este potrivită pentru dezvoltarea de rutină în majoritatea laboratoarelor de patologie moleculară.

4. Tiparea COO a DLBCL prin imunohistochimie

Pentru unele zone în care fondurile și tehnologiile sunt limitate, tehnologia de tipare bazată pe GEP este dificil de utilizat pe scară largă, astfel încât cea mai utilizată clinic este încă metoda de tipizare bazată pe imunohistochimie (IHC). În 2005, HANS și alții au aplicat tehnologia microarray de țesut pentru tipare și au stabilit un model de tipare IHC prin detectarea CD10, BCL6 și MUM-1. DLBCL poate fi împărțit în tip GCB și tip non-GCB. Prognosticul primului este semnificativ mai bun decât cel al celui din urmă. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Tastarea Choi se bazează pe cinci biomarkeri, inclusiv CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 și GCET1, și doi markeri, FOXP1 și GCET1 sunt adăugați la metoda de tastare Hans, care este 93% în concordanță cu „aurul”. standard". Studiile anterioare au arătat că FOXP1 este foarte exprimat în tipul ABC, iar expresia ridicată este asociată cu un prognostic prost. Când valoarea critică a lui FOXP1 este de 80 la sută, tipul ABC DLBCL poate fi distins în mod specific. Cu toate acestea, GCET1 este foarte exprimat în celulele B derivate din centrul germinal, așa că adăugarea GCET1 la tiparea Hans este utilă pentru a distinge DLBCL de tip GCB și de tip ABC. În ceea ce privește predicția prognosticului, clasificarea Choi a fost folosită pentru a prezice 3-rata de supraviețuire pe ani a pacienților, dintre care tipul GCB a fost de 88 la sută, tipul ABC a fost de 44 la sută și rezultatele predicției din clasificarea GEP „standardul de aur”. (Tipul GCB a fost de 92 la sută, tipul ABC a fost de 44 la sută) 44 la sută) este destul de aproape. Li Min și colab. a comparat capacitatea de predicție a clasificării Choi și a clasificării Hans și, de asemenea, a arătat că prima era mai precisă. Supraviețuirea globală a grupului GCB și a grupului non-GCB în conformitate cu clasificarea Hans nu a arătat nicio diferență semnificativă (P=0.102), în timp ce clasificarea Choi nu a arătat nicio diferență semnificativă în supraviețuirea globală (P{=0 .102). Prognosticul grupului GCB a fost semnificativ mai bun decât cel al grupului non-GCB (3-ratele de supraviețuire pe ani au fost de 61,8 la sută și, respectiv, 42,5 la sută, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

După cum sa menționat mai sus, tiparea Hans și tiparea Choi pe bază de IHC au funcții similare, iar rezultatele mai multor anticorpi sunt judecate într-o anumită ordine, rezultând că unii anticorpi au prioritate mai mare decât alții. Metoda tip permite excluderea rezultatelor ulterioare de anticorpi dacă sunt îndeplinite condițiile anterioare. Cu toate acestea, tastarea GEP nu urmează o anumită ordine sau exclude anumite rezultate. Pentru a reduce astfel de diferențe, MEYER și colab. a dezvoltat o metodă de tipare care nu judecă rezultatele anticorpilor într-o anumită ordine, și anume metoda de tipizare Tally. Cea mai mare concordanță cu „standardul de aur” a fost de 93 la sută, în timp ce atât tastarea Hans, cât și Choi au fost de 87 la sută. Metoda tipului de contorizare include cantități egale de anticorpi GCB (GCET1 și CD10) și ABC (FOXP1 și MUM-1), iar clasificarea este determinată de perechea imunofenotipică care este mai pozitivă pentru antigen. Pentru fiecare tip sunt utilizați doi anticorpi, astfel încât în ​​cazul aceluiași rezultat pozitiv pentru fiecare tip, este necesar LMO2 pentru a determina imunofenotipul (LMO2 mai mare sau egal cu 30 la sută este valoarea limită). Studiile au confirmat că LMO2 este exprimat în mod specific în limfocitele sau limfoamele B derivate din GCB, iar expresia sa ridicată este asociată semnificativ cu un prognostic bun în DLBCL.

În concluzie, deși metoda de tip COO a DLBCL bazată pe IHC nu este la fel de bună ca tiparea NanoString și tiparea PCR cantitativă, consistența cu „standardul de aur” este, de asemenea, de 74% -93%. Are avantajele cerințelor scăzute și alte avantaje, care sunt convenabile pentru dezvoltarea de rutină a diferitelor spitale. Printre acestea, metodele de tastare ale lui Choi și Tally sunt mai în concordanță cu „standardul de aur”, dar GCET1, FOXP1 și LMO2 nu sunt anticorpi în picioare, ceea ce limitează aplicarea lor largă într-o anumită măsură.

cistamche felii pentru consumul zilnic pentru a îmbunătăți proliferarea celulară și a reduce apoptoza celulară

5. Explorarea tipării DLBCL pe baza mutației genelor

Aproape toți pacienții cu DLBCL au mutații genetice, iar pacienții cu anumite mutații pot afecta eficacitatea medicamentelor țintite specifice și astfel pot afecta prognosticul. Prin urmare, subtipizarea DLBCL bazată pe semnături mutaționale are utilitate clinică. SCHMITZ şi colab. a selectat specimene proaspete congelate de la 574 de pacienți DLBCL și a folosit secvențierea exomului și a transcriptomului pentru a analiza numărul de copii ale ADN-ului cipului genei. Dintre acestea, 372 de gene au fost selectate pentru amplificare și resecvențiere direcționată pentru a le identifica pe cele cu gene reproductibile. Gene mutante sexual. Rezultatele studiului au împărțit DLBCL în 4 genotipuri: tipul MCD (în principal co-mutația MYD88L265P și CD79B), tipul BN2 (în principal fuziunea BCL6 și mutația NOTCH2), tipul N1 (în principal mutația NOTCH1) și tipul EZB (în principal mutația EZH2) Mutația și BCL2 translocarea), printre care tipurile MCD și N1 sunt derivate în principal din ABC, tipul EZB este derivat în principal din GCB, iar tipul BN2 reprezintă o anumită proporție de pacienți ABC, GCB și, respectiv, neclasificați (Tipul GCB a reprezentat 19 la sută, ABC tipul a reprezentat 41 la sută, iar tipul neclasificat a reprezentat 40 la sută). De asemenea, studiul a constatat că noile genotipuri pot determina mai bine prognosticul, printre care tipurile BN2 și EZB au un prognostic mai bun decât tipurile MCD și N1. Tipurile MCD, N1, BN2 și EZB prezic 5-rate de supraviețuire pe ani de 26 la sută , 36 la sută , 65 la sută , 68 la sută , analiza multivariată a arătat, de asemenea, că noul genotip a fost un factor independent care afectează prognosticul și nu a fost afectat după scorul IPI. Echipa de cercetare a creat algoritmul LymphGen pentru a clasifica DLBCL în 7 genotipuri pe baza cercetărilor anterioare, adăugând A53 (cu inactivare TP53), ST2 (cu mutații SGK1 și TET2) și alte neclasificabile. Această metodă de genotipizare ar putea identifica 63,1% din genotipurile DLBCL. . Dintre acestea, subtipul BN2 are cel mai bun prognostic în tipul ABC, iar subtipul ST2 în tipul GCB are un prognostic mai bun decât subtipul EZB. Prin urmare, se crede că noua genotipizare dezvăluie în continuare patogeneza DLBCL, cu patogeneză diferită între subtipuri, iar genotipurile diferite răspund diferit la imunochimioterapie, ceea ce poate afecta alegerea terapiei țintite, dar cea mai mare limitare a acestei metode de clasificare este că unele pacienții nu pot fi clasificați în niciun subtip, ceea ce merită un studiu suplimentar.

Prin secvențierea întregului exom a 3{{30}}4 pacienți DLBCL, CHAPUY și colab. a obținut date despre mutații cu frecvență joasă, mutații recurente, modificări ale numărului de copii somatice și variante structurale și au definit pacienții ca cinci genotipuri: tipul C1 (în principal BCL10, TNFAIP3, UBE2A, mutația CD70 și translocarea BCL6, majoritatea de origine ABC), Tipul C2 (există inactivarea bialelică a TP53, care afectează stabilitatea cromozomială și ciclul celular și nu are nimic de-a face cu originea ABC/GCB), tip C3 (în principal mutații BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14, în principal originea GCB), Tipul C4 (în principal mutații SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF și CD83, în principal de origine GCB), tip C5 (în principal CD79B, MYD88L265P, ETV6), mutații PIM1 și TBL1XR1, mai ales de origine ABC, frecvente în sistemul nervos central primar și DLBCL testicular) și de tip C0 (lipsa unor drivere genetice clare). De asemenea, studiul a analizat în continuare relația dintre noile genotipuri și prognostic. Rezultatele au arătat că C0, C1 și C4 au avut un prognostic mai bun, în timp ce C3 și C5 au avut un prognostic prost. Printre pacienții derivați din ABC, prognosticul tipului C1 a fost semnificativ mai bun decât cel al tipului C5. , în timp ce tipul C4 a fost semnificativ mai bun decât tipul C3 la pacienții derivați din GCB. Noua genotipizare definește, de asemenea, DLBCL de tip ABC cu risc scăzut (tip C1), ale căror celule pot avea originea în zona marginală extrafoliculară; și DLBCL de tip GCB cu risc ridicat cu variante structurale BCL2 și PETN și enzime epigenetice. Alterări (tip C3), în timp ce DLBCL de tip GCB cu risc scăzut este asociat cu modificări ale kinazelor și proteinelor recombinate multiple ale căilor multiple (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (tip C4); tipare fără legătură cu originea ABC/GCB Cu inactivarea bialelice a TP53, instabilitatea 9p21.3/CDKN2A și genele înrudite (tip C2). Caracteristicile genetice cheie ale acestor DLBCL includ mutații, modificări ale numărului de copii somatice și variații structurale și modificări ale acestor trei clase de informații genetice care pot fi utilizate pentru a explica diferențele dintre boli și rezultatele tratamentului.

Pe baza secvențierii țintite a 293 de gene, LACY și colab. au analizat caracteristicile mutației genice ale a 928 de pacienți DLBCL și a împărțit pacienții în 5 subtipuri: tip MYD88 (în principal mutații MYD88L265P, PIM1, CD79B, în principal origine ABC, majoritatea pacienților DLBCL originari cu sistemul nervos central, testicul și sânul aparțin acestui subtip). ); Tip BCL2 (cu EZH2, BCL2, CREBBP, T

Mutațiile NFRSF14, KMT2D și MEF2B sunt în principal, în principal din GCB, unii pacienți cu limfom de grad înalt și DLBCL transformați din limfom folicular aparțin acestui tip); Tipul SOCS1/SGK1 (incluzând în principal mutațiile SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E și STAT3 sunt derivate în principal din GCB, iar majoritatea DLBCL mediastinale primare aparțin acestui tip); Tipul TET2/SGK1 (incluzând în principal mutațiile TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 și KRAS, în principal de origine GCB); tip NOTCH2 (incluzând în principal mutațiile NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS și CD70, compuse din ABC, GCB și origine neclasificată, cu caracteristici similare cu limfomul din zona marginală); subtip neclasificat (neclasificat în altă parte, NEC). Studiul a analizat relația dintre diferite genotipuri și prognostic, iar rezultatele au arătat că MYD88 a avut cel mai prost prognostic, cu o 5-rată de supraviețuire pe ani de 42 la sută; BCL2, SOCS1/SGK1 și TET2/SGK1 au avut un prognostic bun, cu o 5-rată de supraviețuire pe ani de 64,9%, respectiv 62,5% și, respectiv, 60,1%; în timp ce prognoza tipurilor NOTCH2 și NEC a fost între cele două, iar ratele de supraviețuire 5-anale au fost de 48,1 la sută și, respectiv, 53,6 la sută.

În concluzie, se poate observa că cele trei sisteme de clasificare nu numai că sunt diferite, dar au și unele conținuturi care se suprapun. Printre acestea, tipurile MYD88, C5 și MCD sunt toate legate de sursa ABC. Sistemul nervos central primar și limfoamele testiculare apar mai ales la aceste trei tipuri, iar prognosticul este prost. Tipul C2 este caracterizat prin mutația/deleția TP53 și majoritatea au un prognostic prost, iar A53 corespunde lui C2. Tipurile BCL2, C3 și EZB sunt asociate cu sursa de GCB, au aceeași semnătură mutațională ca și limfomul folicular și, deși limfoamele dublă și de grad înalt sunt mai frecvente la acest tip, prognosticul general este bun. Tipurile SOCS1/SGK1 și C4 sunt în principal DLBCL derivate din GCB, care au caracteristici genetice similare cu limfomul mediastinal primar cu celule B mari și au cel mai bun prognostic. Cu toate acestea, tipizarea actuală a mutațiilor este complexă, iar metodele și rezultatele diferitelor studii sunt diferite. Prin urmare, procesul de analiză trebuie să fie simplificat în viitor pentru a clarifica în continuare impactul genelor de mutație de bază asupra prognosticului și tratamentului.

cistamcheconține echinacozidă bogată și acteozidă care pot hrăni și preveni organismul de viruși și boli

rezumat

Tastarea COO bazată pe GEP este „standardul de aur”, dar necesită specimene mari, este costisitoare și nu este ușor de efectuat în mod obișnuit în practica clinică. Ca alternativă, tastarea COO bazată pe NanoString, PCR cantitativ și tehnici imunohistochimice au fost optimizate în continuare în ceea ce privește cerințele de specimen, dificultatea tehnică și costurile experimentale, dar acuratețea judecății prognostice și rolul de ghidare a tratamentului este încă mai mare decât Standarde de aur. Există un anumit decalaj. Studiile actuale au arătat, de asemenea, că aproape toți pacienții cu DLBCL conțin mutații genetice, iar mutațiile genetice nefavorabile pot afecta semnificativ prognosticul. Terapia țintită a unor mutații specifice poate îmbunătăți, de asemenea, prognosticul, astfel încât noua clasificare bazată pe mutațiile genetice are o semnificație clinică importantă. Tiparea mutației genetice este complementară tipării COO, explicând faptul că există, de asemenea, o eterogenitate semnificativă în cadrul aceluiași subtip COO. Cu toate acestea, tiparea mutațiilor genetice nu poate include toți pacienții și sunt necesare cercetări suplimentare pentru a confirma semnificația de ghidare a prognosticului clinic și dacă medicamentele tradiționale și noi, utilizate în prezent, pot ghida tratamentul prin această tipizare.