Studiul efectelor anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra celulelor ucigașe naturale umane in vitro Ⅱ

3. Rezultate

Acest studiu sa concentrat pe efectele anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra celulelor NK. Rezultatele au arătat că Calcitriola scăzut expresia biomarkerilor legați de îmbătrânire, inclusiv CD16, TIM3, PD-1, KIR șia crescut expresia NKG2A a celulelor NK. de asemeneainhiba proliferarea celulelor NKșiarestați-i în faza G1. Calcitriola scăzut eliberarea factorilor inflamatoricum ar fi IL-5, IL-13, IFN- și TNF- și au avut anumiteefecte antioxidante, care ar putea contribui la eaefecte anti-imbatranire.

Faceți clic aici pentru a cunoaște efectele antioxidării Cistanche și pentru a obține o probă

3.1 Calcitriol a inversat expresia markerilor de îmbătrânire de suprafață, a încetinit amplificarea celulelor NK și a menținut celulele NK în faza G1.

Celulele NK senescente au prezentat o expresie ridicată a biomarkerilor legați de îmbătrânire, cum ar fi CD16, PD-1, TIM3 și KIR și o expresie scăzută a NKG2A. Am constatat că nivelurile de expresie ale biomarkerilor legați de îmbătrânire NKG2A (Figura 1a) (*P <{8}}.05) au crescut, în timp ce expresia CD16 (Figura 1b), TIM3 (Figura 1c). ), PD-1 (Figura 1d) și KIR (Figura 1e) (* P < 0,05) au fost scăzute după tratamentul cu calcitriol timp de 72 de ore. Efectele de inversare au fost corelate pozitiv cu concentrația de calcitriol (Figura 1 suplimentară).

Am extins celulele din probele de sânge periferic uman in vitro. Apoi am izolat celulele NK (CD{{0}}CD56 plus ) prin sortarea mărgelelor magnetice (figura 1f). Celulele NK sortate au fost apoi cultivate cu diferite concentrații de calcitriol sau rapamicină timp de 72 de ore. Rezultatele colorării CCK8 au arătat că rata de creștere a celulelor NK tratate cu calcitriol de concentrație mare (10- [7] M) a fost mai lentă decât cea a grupului martor negativ (NC) (*P < {{17). }}.05) (Figura 1g). În plus, calcitriolul a reglat ciclul celulelor NK. După tratamentul cu calcitriol timp de 48 de ore, celulele NK au prezentat o schimbare mare dependentă de concentrația de calcitriol către faza G1 (* P < 0,05), în timp ce proporția de celule în faza G2 (# P < 0,05) a scăzut. Proporția de celule NK tratate cu calcitriol în faza S nu a prezentat nicio modificare, indiferent de concentrația de calcitriol (Figura 1h, Figura 2 suplimentară). Apoi am testat dacă această oprire a fazei G1 derivată de calcitriol a indus apoptoza celulelor NK și am constatat că biomarkerul apoptotic al celulelor NK, imunoglobulina celulelor T și domeniul inhibitor al imunoreceptorului pe bază de tirozină (ITIM) (TIGIT), nu au prezentat nicio schimbare semnificativă (P > 0,05). , NS) (Figura 1i). Aceste rezultate au implicat că adăugarea de calcitriol a redus rata de creștere a celulelor NK, a scăzut proliferarea acestora și a indus oprirea fazei G1 a celulelor NK în loc să provoace apoptoză.

3.2 Calcitriol a scăzut eliberarea de citokine inflamatorii în celulele NK și a inhibat citotoxicitatea celulelor NK

Inflamația este o inflamație cronică de grad scăzut. Accelerează îmbătrânirea celulelor NK, deoarece celulele NK participă la această inflamație cronică. Figura 2a demonstrează că nivelurile de IL-5, IL-13, IFN- și TNF- au scăzut semnificativ în toate grupurile decât în ​​controlul negativ (*P <0.05). IFN- și TNF- sunt citokine proinflamatorii bine-cunoscute, dar unele studii au arătat, de asemenea, proprietățile proinflamatorii ale IL-5. S-a raportat că IL-13 contribuie la diferite tipuri de inflamație a mucoasei, cum ar fi astmul alergic, colita ulceroasă, esofagita eozinofilă și câteva boli legate de fibroză.

Cu toate acestea, citotoxicitatea celulelor NK implică în principal eliberarea de citokine inflamatorii și degranularea celulelor. Am etichetat celulele K562 cu DIO și am co-cultivat celulele DIO-K562 cu celule NK tratate cu calcitriol timp de 4 ore. Procentul de celule DIO plus PI plus a fost mai mic în toate grupurile de raport efector (E)/țintă (T) decât în ​​controlul negativ (*P <0.05) (Figura 2b, c). Expresia dedusă a grupului de diferențiere 107 (CD107) a indicat o degranulare mai mică (* P < 0,05) (Figura 2d). Aceste rezultate arată inhibarea funcției de distrugere a NK de către calcitriol.

3.3 Calcitriol a activat expresia SIRT1- ∆Exon8 și a căii SIRT1/pERK legate de anti-îmbătrânire

Pentru a investiga efectele anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra celulelor NK, am detectat căile de semnalizare legate de îmbătrânire prin imunoblot. Analiza Western blotting a fost efectuată pentru a evalua nivelurile de expresie ale VDR, SIRT1-∆Exon8, SIRT1 și PERK în celulele NK tratate cu calcitriol. Analiza statistică a arătat că triolul de calciu a activat axa VDR/SIRT1/pERK la concentrații mari. Între timp, calcitriolul a activat expresia SIRT1-∆Exon8 (*P <0.05). (Figura 3a).

Figura 1. Fenotipul legat de îmbătrânire, expansiunea celulară și analiza ciclului celular al celulelor NK. (ae) Celulele NK umane tratate cu calcitriol sau rapamicină timp de 72 de ore au arătat următorii biomarkeri celulari: grupul natural killer 2 membru A (NKG2A), grupul de diferențiere 16 (CD16), imunoglobulină de celule T și proteina 3 care conține domeniul mucin ( TIM3) a programat moartea celulară-1 (PD{-1) și receptorul asemănător imunoglobulinei ucigașe (KIR), care au fost legate de îmbătrânire. Rapamicina 50 nM (RAPA) a fost utilizată ca martor pozitiv. n=3 pentru fiecare grup. *P < 0.05 și **P < 0.01 au fost comparați cu grupul martor negativ (NC). (f) Celule NK (dreapta) izolate din celulele mononucleare din sângele periferic uman (PBMC, stânga) prin sortarea magnetică a mărgelelor. (g) Analiza proliferării celulare măsurată prin trusa de numărare a celulelor 8 (CCK8). (h) Efectul calcitriolului sau al rapamicinei asupra ciclului cel în celule nk sortate după tratament timp de 72 de ore, wp 0.0, 0.05 și fp < 0,05 au indicat semnificativ diferențe în fazele G1, S și, respectiv, G2. Toate grupurile au fost comparate cu NC, respectiv. n=3. ) Procentul de celule NK pozitive din celulă T imunoa globulină și imunoreceptori pe bază de tirozină (M)-domeniu (TGI) pozitive după tratamentul cu calcitriol sau rapamicină timp de 72 h.*p < 0,05 și **p < 0,01 au fost comparate cu NC. n=3.

3.4 Calcitriol a rezistat îmbătrânirii celulelor NK indusă de stresul oxidativ in vitro

Este larg acceptat faptul că îmbătrânirea este cauzată de acumularea daunelor oxidative datorită numărului mare de dovezi găsite de-a lungul anilor [31]. Am cultivat celulele NK cu diferite concentrații de H2O2 timp de 24 de ore și am constatat că 1{{1{{20}}}}0 μM a fost cea mai apropiată concentrație de doza letală medie (DL50) (Figura 3b) . Expresia TIM3 în populația de celule NK a crescut prin adăugarea de H2O2, în timp ce expresia a scăzut după tratamentul cu calcitriol (* P < 0,05) (Figura 3c). În plus, celulele NK îmbătrânite au fost colorate cu albastru în prezența -galactozidazei. Această culoare albastră a celulelor este un semn distinctiv specific al celulelor senescente. Analiza statistică a demonstrat că celulele NK netratate au o activitate celulară -galactozidază mai mică, în timp ce celulele NK expuse la H2O2 au prezentat o activitate -galactozidază crescută. Calcitriol a redus populația - galactozidază-pozitivă, indicând prezența a mai puține celule îmbătrânite (* P < 0,05) (Figura 3d). Scăderea potențialului membranei mitocondriale a fost, de asemenea, observată într-o varietate de celule îmbătrânite de la mai multe specii de mamifere. Am evaluat potențialul membranei mitocondriale al celulelor NK în acest studiu. Rezultatele statistice au arătat că H2 O2 a scăzut semnificativ activitatea celulară a celulelor NK în comparație cu cea a celulelor netratate, în timp ce calcitriolul a crescut daunele cauzate de H2 O2 (* P < 0,05) (Figura 3e).

Figura 2. Efectele calcitriolului asupra funcțiilor celulelor NK. (a) Analiza citokinei eliberate de celulele NK tratate cu calcitriol în 48 de ore. b) Rezultatele sortării celulelor activate prin fluorescență (FACS) au arătat celule K562 moarte marcate cu 3,3 -octadecil-oxacarbocianinaDlO) și iodură de propidiu (P). Celulele K562 au fost co-cultivate cu diferite rapoarte de celule Nk tratate cu calcitriol timp de 4 ore. (C) Analiza FACS a celulelor K562 moarte în testele de ucidere. (d) Efectele de degranulare ale celulelor Nk tratate în testele de distrugere. n=3 pentru eaciyroup. *p < 0.05 și **p < 0,01 au fost comparate cu NC

3.5 Calcitriol a rezistat la apoptoza celulelor NK indusă de stresul oxidativ in vitro

Apoi, am măsurat numărul de celule apoptotice. Rezultatele citometriei în flux au arătat că tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore a condus la apoptoza semnificativă a celulelor NK. Cu toate acestea, tratamentul cu calcitriol a scăzut raportul apoptotic (* P < 0,05) (Figura 4a). Toate rezultatele de mai sus au demonstrat rezistența calcitriolului împotriva stresului oxidativ cauzat de H2O2. Cu toate acestea, am detectat proteine ​​apoptotice în celulele NK sub stres oxidativ. Înainte de tratamentul cu H2O2, 10- [7] M calcitriol a fost adăugat la celulele NK timp de 24 de ore. Nivelurile proteinelor legate de apoptoză, caspaza-3 p17 și caspaza{-3 p20, au crescut semnificativ după tratamentul cu H2O2. Calcitriolul a scăzut apoptoza derivată din H2O2-și a reglat în jos expresia caspazei-3, p17 și caspazei-3 p20 (*P < 0,05) (Figura 4b). Aceste rezultate au indicat că calcitriolul a rezistat apoptozei induse de H2O2.

Figura 3. Theefecte anti-imbatranirede calcitriol pe celulele NK. (a) Expresia receptorului de vitamina D (VDR), a sirtuinei 1 (SIRT1), a SIRT1- ∆Exon8 și a kinazei reticulului endoplasmatic asemănător proteinei R (pERK) în celulele NK a fost detectată prin analiza Western blot după tratament cu calcitriol timp de 48 de ore. Ca control al încărcării a fost utilizată gliceraldehida-3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH). Diagrama cu bare care ilustrează rezultatele western blot (n=3). *P < 0.{{10}}5 și **P < 0.01 au fost comparate cu NC (n=3). (b) Curba de mortalitate a dozei celulelor NK după tratamentul cu peroxid de hidrogen (H2O2) timp de 24 de ore. ( c ) Procentul de celule TIM3 care prezintă o expresie ridicată după tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore. (d) Rezultatele colorării și analizei cu galactozidază asociată senescenței. Celulele senescente au fost colorate cu albastru și indicate prin săgeți roșii. Bară de scară, 50 μm. ( e ) Celulele NK au fost colorate cu Hoechst și Clorometil-X-Rozamină (CMXRos) pentru a determina locația celulei și potențialul membranei mitocondriale. Celulele îmbătrânite și apoptotice au fost Hoechst plus CMXRos- și indicate prin săgeți albe. Bară de scară, 50 μm. Analiza statistică a arătat o intensitate relativă a fluorescenței. *P <0,05 și **P <0,01 au fost comparate cu grupul H2O2 din figurile C, D și E (n=3).

Figura 4. Efectele anti-apoptotice ale calcitriolului asupra celulelor NK. (a) Efectele anti-apoptotice ale calcitriolului în leziunile induse de H2O2-. Analiza FACS a arătat procentul de celule NK apoptotice după tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore. (b) Nivelurile de expresie ale caspazei-3 p20 și caspazei-3 p17 în celulele NK au fost detectate prin analiza Western blotting după tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore. GAPDH a fost folosit ca control al încărcării. Diagrama cu bare care ilustrează rezultatele western blot (n=3). *P <0,05 a fost comparat cu grupul H2O2.

4. Discutie

Interacțiunea pe termen lung dintre inflamație și stresul oxidativ este un factor important în îmbătrânire. În plus, inflamația și stresul oxidativ sunt sinergice [32]. Excesul de ROS generat de stresul oxidativ atacă celulele corpului. În timpul acestui proces, factorii inflamatori sunt eliberați de sistemul imunitar activat pentru a ucide celulele anormale, ceea ce duce la generarea în continuare de ROS. Lipsa calcitriolului poate provoca boli autoimune, boli metabolice cronice și tumori. Cu toate acestea, se cunosc puține despre efectele anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra sistemului imunitar, în special asupra celulelor NK.

În acest studiu, am investigat efectele anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra celulelor NK. Am descoperit că calcitriolul a crescut expresia NKG2A, în timp ce a scăzut expresia KIR in vitro. Subpopulația CD56− CD16 plus de celule NK, despre care se știe că este legată de inflamația cronică, este semnificativ crescută la vârstnici [33]. Prin urmare, reducerea expresiei CD16 indusă de calcitriol ar putea fi atribuită efectului său antiinflamator. S-a raportat că TIM-3 și PD-1 sunt receptorii inhibitori și de epuizare ai celulelor NK. Studiul nostru a arătat că cal citriol a reglat în jos nivelurile de expresie ale TIM-3 și PD{-1 și a prevenit apoptoza celulelor NK.

În plus, calcitriolul a inhibat expansiunea celulelor NK și a menținut populația de celule NK în faza G1 in vitro. Cu toate acestea, celulele din faza S nu au fost afectate. TIGIT, care este cunoscut ca un factor de control al celulelor NK, a rămas neschimbat. Aceste rezultate au indicat că Figura 4. Efectele anti-apoptotice ale calcitriolului asupra celulelor NK. (a) Efectele anti-apoptotice ale calcitriolului în leziunile induse de H2O2-. Analiza FACS a arătat procentul de celule NK apoptotice după tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore. (b) Nivelurile de expresie ale caspazei-3 p20 și caspazei{-3 p17 în celulele NK au fost detectate prin analiza Western blotting după tratamentul cu 100 μM H2O2 timp de 24 de ore. GAPDH a fost folosit ca control al încărcării. Diagrama cu bare care ilustrează rezultatele western blot (n=3). *P <0,05 a fost comparat cu grupul H2O2. BIOENGINEERED 6851calcitriol nu a dus la moartea celulelor NK, ci doar a încetinit rata de expansiune a celulelor NK.

Este bine cunoscut faptul că inflamația duce la imunosenescență [34,35]. Mai mult, am descoperit că calcitriolul a redus nivelurile de IL-5, IL{-13, IFN- și TNF- în celulele NK. Citotoxicitatea celulelor NK este parțial mediată de eliberarea de factori inflamatori [36]. Mai mult, a existat o scădere a mortalității celulelor tumorale K562 și a degranulării celulelor NK. Aceste rezultate au fost în conformitate cu așteptările noastre. Rapamicina este un medicament bine-cunoscut care reduce rata metabolică pentru a preveni îmbătrânirea[37], care este folosit ca control pozitiv în acest studiu. Are ca rezultat imunosupresie și crește riscul potențial de apariție a tumorii și a sarcinii tumorale. Această povară a fost confirmată în modelele de șoarece de cancer de sân [38]. Dacă calcitriolul prezintă efecte similare cu rapamicina rămâne necunoscut. Ar trebui efectuate mai multe studii clinice și animale pentru a verifica efectele acestora asupra organismului uman.

În cele din urmă, am studiat efectele calcitriolului asupra senescenței antioxidante. Resveratrolul, un medicament anti-îmbătrânire bine-cunoscut, poate regla în jos calea NF-κB prin activarea axei SIRT1/PERK. Această reglare descendentă s-a dovedit, de asemenea, a fi benefică în tulburările neurodegenerative și bolile cardiovasculare [39]. Deacetilarea SIRT1 este asociată cu controlul metabolic și biogeneza mitocondrială. În acest tip de reglare, nivelurile crescute de SIRT1 pot promova acumularea de receptori gamma activat de proliferator peroxizom activat-1 alfa (PGC-1) în nucleu, ceea ce are ca rezultat transcrierea genelor care sunt necesare pentru funcția mitocondrială [40]. În plus, SIRT1 suprimă ținta mamiferelor a căii de semnalizare a rapamicinei (mTOR), care poate proteja nervii și poate rezista îmbătrânirii creierului la șoareci [41]. În acest studiu, am identificat o cale de reglementare similară pentru calcitriol. Calcitriol a activat SIRT1 prin VDR și a crescut axa SIRT1/pERK.

În plus, am descoperit că calcitriolul a reglat în plus expresia SIRT1-∆Exon8. Stresurile sunt cunoscute ca un factor de reglare în sus al SIRT1-∆Exon8. Deși SIRT1-∆Exon8 în sine prezintă o activitate redusă de deacetilare p53, el exercită un efect aditiv de deacetilare asupra p53 atunci când este exprimat împreună cu SIRT1 de lungime completă [42]. Acest efect a indicat funcția anti-apoptotică a calcitriolului asupra celulelor NK. Cu toate acestea, rolul SIRT1-∆Exon8 în căile legate de vârstă rămâne mai bine înțeles. Deoarece declinul SIRT1 s-ar putea datora leziunii oxidative [43], am stabilit un model de celule NK cu îmbătrânire acută in vitro folosind H2O2. Îmbătrânirea oxidativă indusă de H2O2 a crescut expresia TIM3, precum și activitatea -galactozidazei în celulele NK. Am descoperit că calcitriolul a rezistat leziunilor oxidative și a menținut activitatea mitocondrială și viabilitatea celulară a celulelor NK, prevenind în același timp apoptoza celulară. Cu toate acestea, calcitriolul nu a fost încă identificat ca un medicament anti-îmbătrânire în medicina clinică, deoarece sunt necesare mai multe dovezi cu privire la efectele anti-îmbătrânire ale acestui medicament in vivo. În rezumat, am furnizat dovezi preliminare pentru a implica efectele anti-îmbătrânire ale calcitriolului asupra celulelor NK in vitro. Credem că efectele acestui medicament ar trebui explorate în continuare în studiile viitoare pe animale și clinice.

5. Concluzie

În acest studiu, am demonstratefecte anti-imbatranirede calcitriol pe celulele NK. Calcitriol a inversat expresia luibiomarkeri de îmbătrânireasupra celulelor NK. A încetinit amplificarea NK și le-a menținut în faza G1. În plus, calcitriolul a inhibat eliberarea de citokine inflamatorii și a reglat în jos degranularea celulelor NK. Activarea axei SIRT1-∆Exon8 și VDR/SIRT1/pERK de către calcitriol ar putea fi principalul mecanism al efectului anti-îmbătrânire a calcitriolului, pe baza tuturor celor de mai sus. În cele din urmă, calcitriolul a rezistat senescenței oxidative a celulelor NK in vitro. Studiile ulterioare ar trebui să se concentreze pe cercetarea clinică și pe animale.

Repere

(1) Calcitriol a scăzut expresia biomarkerilor legați de îmbătrânire, inclusiv CD16, TIM3, PD-1, KIR și a crescut expresia NKG2A a celulelor NK. (2) Calcitriolul a fost capabil să inhibe proliferarea celulelor NK și să le oprească în faza G1. (3) Calcitriolul a scăzut eliberarea factorilor inflamatori majori, cum ar fi IL-5, IL{-13, IFN- și TNF- ai celulelor NK. (4) Efectul anti-îmbătrânire al calcitriolului asupra celulelor NK poate să fie realizat prin calea semnalului Sirt1- pERK.

Mulțumiri Am dori să mulțumim tuturor membrilor personalului din grupul nostru pentru sprijinul acordat și Comitetului pentru inovare în știință și tehnologie din Shenzhen pentru sprijinul acordat pentru finanțarea acestui studiu.

Finanțare Această lucrare a fost susținută financiar de Comitetul de inovare pentru știință și tehnologie din Shenzhen (JCYJ20170412155231633), Fondul de construcție a disciplinei medicale cheie Shenzhen (nr. SZXK062), Chengdu Wecistanche Biotech și proiectul Sanming de medicină din Shenzhen (nr. SZSM202011010); Comitetul pentru inovare în știință și tehnologie din Shenzhen [JCYJ20170412155231633]; Fondul de construcție pentru disciplina medicală cheie Shenzhen [Nr. SZXK062]; Proiectul Sanming de Medicină în Shenzhen [Nr. SZSM202011010].

Aprobare etică Toate procedurile au fost aprobate de Comitetul de etică al Spitalului Popular Shenzhen Luohu (ZLNK 12/2019, Shenzhen, China). A fost obținut consimțământul informat pentru experimentarea cu probe umane.

Declarație de divulgare Toți autorii au aprobat trimiterea acestui manuscris. Autorii declară că nu au interese financiare concurente cunoscute sau relații personale care ar fi putut influența munca raportată în această lucrare.

Referințe

[1] Ovadya Y, Landsberger T, Leins H, et al. Supravegherea imunitară afectată accelerează acumularea de celule senescente și îmbătrânirea. Nat Commun. 2018;9 (1):5435.

[2] López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, și colab. Semnele distinctive ale îmbătrânirii. Celulă. 2013;153:1194–1217.

[3] Hodgins JJ, Khan ST, Park MM și colab. Killers 2.0: terapiile cu celule NK în fruntea combaterii cancerului. J Clin Invest. 2019;129(9):3499–3510.

[4] Zhu H, Blum RH, Bjordahl R, și colab. Celulele NK pluripotente derivate din celule stem cu CD16a neclivabil de mare afinitate mediază o activitate antitumorală îmbunătățită. Sânge. 2020;135(6):399–410.

[5] Mandal A, Viswanathan C. Natural killer cells: in health and disease. Hematol Oncol Stem Cell Ther. 2015;8(2):47–55.

[6] Le Garff-Tavernier M, et al. Celulele NK umane prezintă modificări fenotipice și funcționale majore pe durata vieții. Celulă îmbătrânită. 2010;9(4):527–535.

[7] Le Garff-Tavernier M, Béziat V, Decocq J, et al. Modelele de expresie ale NKG2A, KIR și CD57 definesc un proces de diferențiere a celulelor NK CD56dim decuplat de educația celulelor NK. Sânge. 2010;116 (19):3853–3864.

[8] Manser AR, Uhrberg M. Modificări legate de vârstă în repertoriile celulelor ucigașe naturale: impactul asupra funcției celulelor NK și a supravegherii imune. Cancer Immunol Immunother. 2016;65(4):417–426. [9] Bi J, Tian Z. NK Cell Exhaustion. Front Immunol. 2017;8:760.

[10] Furman D, Campisi J, Verdin E, et al. Inflamația cronică în etiologia bolii pe durata vieții. Nat Med. 2019;25(12):1822–1832.

[11] Liu Y, și colab. Un anticorp specific pentru peptida citomegalovirusului modifică homeostazia celulelor ucigașe naturale și este împărtășit în mai multe boli autoimune. Microbul gazdă celulară. 2016;19(3):400–408.

[12] Campus X, Pera A, Solana R, et al. Celulele NK în îmbătrânirea sănătoasă și bolile asociate cu vârsta. J Biomed Biotechnol. 2012;2012:195956.

[13] Liu Y, Mu R, Gao YP, et al. Efectul îmbătrânirii asupra populației de celule nk și a proliferării lor în condițiile culturii ex vivo. Patologia celulelor anale (Amst). 2018;2018:7871814.

[14] Sintov AC, Yarmolinsky L, Dahan A, et al. Efectele farmacologice ale vitaminei D și ale analogilor săi: evoluții recente. Drug Discov Astăzi. 2014;19 (11):1769–1774. [15] Halicka HD, Zhao H, Li J și colab. Atenuarea semnalizării leziunilor ADN constitutive prin

Cere mai mult:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950