Studiu asupra efectelor estrogenice ale echinacozidei și acteozidei din Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Universitatea de Medicină Tradițională Chineză din Tianjin, Tianjin 300193, China
Abstract: În acest studiu, efectele estrogenice aleechinacozidșiacteozidde Herba Cistanche au fost cercetate. Pentru a detecta efectele estrogenice a fost folosită o lege plasmidică reporter lucifechinacozidșiacteozid. Experimentele de legare la competiția receptorilor de estrogen au fost utilizate pentru a detecta efectul lor competitiv cu estrogenul. Rezultatele au arătat căechinacozidșiacteozidpoate spori activitatea ERE. Cândechinacozidsauacteozideste adăugată în actele de estrogen, activitatea genei reporter determinată de ERE poate fi stimulată ca agonist de estrogen. Prin urmare, s-a ajuns la concluzia căechinacozidșiacteozida avut o activitate de fitoestrogeni prin stimularea activității genei reporter de creștere a ERE.Echinacozidulșiacteozidau fost potențiale SERM-uri.
Cuvinte cheie: echinacozid; actozid; fitoestrogeni;
Herba Cistanche este o plantă din genul Cistanche (Orobanchaceae) din genul Cistanche (Cistanche). Este o tulpină cărnoasă uscată, cu frunze solzoase. Are funcțiile de a hrăni yang-ul rinichilor, de a hrăni esența și sângele și de a umezi intestinul. Este folosit pentru deficiența de rinichi yang, deficiență de esență și sânge, impotență și infertilitate, durere de talie și genunchi, slăbiciune a mușchilor și oaselor, intestine uscate și constipație ¨. 2J. În prezent, principalele componente chimice izolate și identificate din Cistanche sunt fenil glicozide, iridoizi, lignani, flavonoide, polizaharide, oligozaharide, galactitol, componente volatile, alcaloizi etc. Dintre acestea, glicozidele alcoolului fenetil sunt principalele ingrediente active în Cistanche cistanche, și sunt, de asemenea, principalii indicatori de detecție pentru controlul calității Cistanche, și sunt reprezentați deechinacozid și verbascozid. Studiile farmacologice moderne au arătat că Cistanche are funcții de reglare imunitară, antioxidare, anti-îmbătrânire, anti-oboseală, neuroprotecție și protecție hepatică. Unele studii farmacologice arată, de asemenea, că Cistanche poate promova regenerarea osoasă-l"J, inhiba formarea osteoporozei și a fitoestrogenilor la femeile aflate în postmenopauză"]. În acest experiment, am selectat echinacozidul și verbascozidul, care sunt principalii indicatori de control al calității în Cistanche, și am testat substanțele estrogenice.efectele echinacozideiși verbascozidă prin metoda plasmidă reporter luciferază și experiment de legare competitivă a receptorului de estrogen. Explorați mecanismul estrogenului echinacozid și verbascozid
1 Material și metode
1.1 Material Celulele Hela (celule umane de cancer de col uterin), achiziționate de la Institutul de Biologie Celulară din Shanghai;echinacozida fost separat și purificat din Cistanche deserticola de către laboratorul nostru și a fost testat prin HPLC-ELSD. Theechinacozidsubstanța de referință (Institutul Național pentru Controlul Produselor Farmaceutice și Biologice din China, numărul de lot: 111670) a fost utilizată ca control, iar puritatea măsurată a fost de 95,1 la sută. Theacteozida fost separat și purificat din deșertul Cistanche de către laboratorul nostru și a fost obținut prin HPLC. Testul ELSD, cu substanță de referință glicozidă Verbascum (Institutul Chinez pentru Controlul Produselor Farmaceutice și Biologice, număr de lot: 111530) ca martor, puritatea măsurată a fost de 96,4 la sută; plasmide ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (extrase de laboratorul nostru) ; Estradiol (E), Sigma Company; Ser fetal bovin (FBS), Compania PAA; Ser fetal bovin tratat cu carbon activat (CS-FBS), Compania PAA; DMEM fără roșu de fenol, Compania Sigma; Dimetil Sulfoxid (DMSO)), Compania Amresco; LB mediu, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X Buffer, Compania Promega; Lipofectamine2000, Compania Promega; Trusa de extracție a plasmidelor, Compania TIANGEN; Trusa de detectare a genelor reporter Luciferase este un produs al companiei Promega.
1.2 Cultură celulară Celulele Hela au fost cultivate într-un mediu de cultură DMEM care conţine 10% ser fetal bovin. Cel puțin o generație înainte de experiment a fost înlocuită cu un mediu de cultură DMEM care conține 1% ser fetal bovin tratat cu cărbune activat.
1.3 Transfecția și determinarea activității luciferazei Celulele Hella au fost însămânțate într-o placă de 24-godeuri la o densitate de 70% până la 80%. După ce celulele au aderat la perete și densitatea celulelor a atins 90 la sută, urmați instrucțiunile din lipo. Instrucțiunile reactivului de transfecție Feetamine2000 transfectează ERa, plasmidele de expresie ER[3 și ERE, plasmidele reporter Renila, se schimbă mediul după 8 ore și se adaugă medicamente de testare de diferite concentrații. După incubare peste noapte, utilizați un cititor de plăci multifuncțional pentru a detecta răspunsul estrogenului. Componenta activitate luciferazei ERE, calculează influența relativă a medicamentelor asupra activității luciferazei.
1.4 Prelucrarea datelor și analiza statistică
Folosind software-ul statistic SPSS18.0, datele sunt exprimate ca medie±abatere standard (x±S). Analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) și testul t de comparație multiplă Dunnett au fost utilizate pentru a analiza datele dintre grupuri. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Acteozid
2 Rezultate experimentale
2.1 Efectul verbascozidei asupra activității elementului de răspuns la estrogen ERE luciferaza Rezultatele arată că, în comparație cu grupul de control, atunci când este mediat de ERa și ER[3, E (10 nmol) poate regla în mod semnificativ ERE luciferaza elementului de răspuns la estrogen Activitatea verbascozidei poate reglarea în sus a activității elementului de răspuns la estrogen ERE luciferaza la 10, 100, 1, 10 și 50 txmol. Când concentrația atinge 50 I~mol, reglarea în sus a activității luciferazei ERE este echivalentă cu cea a estradiolului. Este dependentă de doză, dar selectivitatea pentru receptorii de estrogeni ERa și EP~ nu este evidentă (Figura 2).
2 Efectele diferitelor concentrații deacteozidasupra activității luciferazei ERE
Notă: În comparație cu grupul de control, P
2.2 Efectulechinacozidasupra activității luciferazei elementului de răspuns la estrogen Rezultatele arată că, în comparație cu grupul de control, atunci când este mediat de ERa și ER[3, E(10nmol) poate regla semnificativ în creștere fluorescența elementului de răspuns la estrogen ERE Echinacozidul poate regla în sus răspunsul estrogenului activitatea luciferazei elementului ERE la 10, 100, 1, 10 și 50 Ixmol. Când concentrația atinge 50 Ixmol, reglarea în sus a activității luciferazei ERE este puțin mai mică decât cea a estrogenului. Diolul este, de asemenea, dependent de contor, dar are o ușoară diferență de selectivitate pentru receptorii de estrogeni ERa și E (Figura 3).
2.3 Efectul de legare competitivă a glicozidelor Verbascum și a estradiolului asupra receptorilor de estrogeni Rezultatele arată că glicozidele Verbascum se pot lega în mod competitiv la receptorii de estrogeni cu estradiol și antagonizează activitatea estradiolului asupra elementului de răspuns la estrogen ERE luciferaza. Efectul de reglare în sus. În comparație cu grupul E (10nmo1), verbascozidele pot regla în jos activitatea luciferazei estradiolului asupra elementului de răspuns estrogen ERE în grade diferite la 1, 10 și 50p, mol și verbascozide arată dependență de doză. , Când concentrația atinge 50 Ixmol, efectul antagonist asupra estradiolului este cel mai evident (Figura 4).
2.4 Efectul concurențial obligatoriu alechinacozidși estradiol pe receptorii de estrogeni. Rezultatele arată căechinacozidse poate lega, de asemenea, în mod competitiv de receptorii de estrogeni cu estradiol și antagonizează răspunsul estradiolului la estrogen. Reglarea în sus a activității luciferazei ERE. În comparație cu grupul E (10 nmol), verbascozidul poate regla în jos activitatea luciferazei estradiolului asupra elementului de răspuns la estrogen ERE în grade diferite la 1, 10 și 50 mol șiechinacozidprezintă o doză leneșă. Sex, atunci când concentrația atinge 50lxmol, efectul antagonist asupra estradiolului este cel mai evident (Figura 5)
3 Discuție
Acest experiment a arătat pentru prima dată că datele clare au arătat astaechinacozidși verbascozidul, principalele ingrediente active din Cistanche, se pot lega de receptorii de estrogeni ERa și EP~, pot regla activitatea luciferazei ERE și exercită efecte estrogenice, arătând activitate SERMs. Analiza datelor experimentale de mai sus arată că în sistemul ERa, reglarea în sus a verbascozidei asupra activității luciferazei ERE elementului de răspuns la estrogen la 50 lxmol este echivalentă cu 0,977 ori mai mare decât a E2 (1 0nmol), care este echivalent cu cel din sistemul ERI3. 0,970 ori; în mod similar, în sistemul ERa, efectul de reglare în sus al echinacozidei asupra activității luciferazei ERE a elementului de răspuns la estrogen la 50 lxmol este echivalent cu cel al E (10 nmol), care este echivalent cu 0 în sistemul ERI3. De 937 de ori, reglarea în sus a verbascozidei asupra activității elementului de răspuns la estrogen ERE luciferaza este puțin mai mare decât cea aechinacozid, iar selectivitatea pentru receptorii de estrogeni ERa și ER[3 nu este evidentă, în timp ce glicozidele echinaceei au diferențe de selectivitate slabe pentru receptorii de estrogeni ERa și ERI3. Aceste diferențe pot fi legate de diferitele grupuri conectate la poziția R4 a verbascozidei și echinacozidei. Estrogenul acționează în principal prin receptorul de estrogen. Există două subtipuri principale de receptori de estrogen, ERa și ER [3, estrogenul și substanțele care acționează estrogenul se combină cu receptorul de estrogen pentru a forma un dimer, iar apoi se dimerizează. [2l,. Fitoestrogenii și estrogenii au structuri și funcții similare. Studiile au arătat că fitoestrogenii pot regla metabolismul osos și joacă un rol extrem de important în menținerea echilibrului resorbției osoase și formării osoase. Este eficient pentru osteoporoză la pacienții cu hipofuncție senilă. Are un anumit efect clinic de prevenire și tratament¨. Prin urmare, se speculează că efectul Cistanche în promovarea regenerării osoase și inhibarea formării osteoporozei la femeile aflate în postmenopauză este prin fitoestrogenii săi. Acest experiment arată, de asemenea, că echinacozidul și verbascozidul se pot lega în mod competitiv la receptorii de estrogeni cu estradiol și pot antagoniza reglarea în sus a estradiolului asupra activității luciferazei ERE. Mecanismul acestei acțiuni este cunoscut resveratrolului. Efectul fitoestrogenilor este similar cu J. Se explică în continuare că echinacozidul și verbascozidul exercită efecte estrogenice prin legarea de receptorii de estrogeni ERa și ER3. Studiile de mai sus privind activitatea fitoestrogenului Cistanche și mecanismul efectului său estrogen indică faptul că Cistanche poate întârzia formarea osteoporozei postmenopauză la femei prin îmbunătățirea nivelului de estrogen din organism sau prin tratarea tratamentului cauzat de scăderea nivelului de estrogen. estrogen în organism. Osteoporoza prezintă posibilitatea și oferă o bază teoretică pentru extinderea domeniului de utilizare medicală clinică a Cistanche.
Referinţă
1 Comisia pentru Farmacopeea Chineză（(国家药典委员）). Farmacopeea Republicii Populare Chineze. Beijing: Chemical Industry Press, 2010. Vol. 1:126.
2 Li SZ（李时珍）.Compendium of Materia Medica. Beijing: Editura Medicală People * （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）,Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Activitatea imunobiologică și mecanismul său de acțiune al polizaharidelor cistanches. J Zhejiang Univ,Med Ed （浙江 大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
