Cercetarea farmacologică a acteoside pe acțiunea inhibat începe hiperlazia prostatică la șobolani

Cercetarea farmacologică a acteosidei asupra acțiunii inhibate începe hiperplazia prostatică la șobolani

Pentru mai information:ali.ma@wecistanche.com

ABSTRACT:A fost stabilit modelul de șobolan de hiperplazie prostatică inițială (HBP) și a fost stabilit trei grupuri de doze deacteosidau fost administrate pe cale orală timp de 4 săptămâni, pentru a studia efectul de acteoside distilate din Cistanche tubulosa pe apoptoza si ultramicro structura de prostata teren la șobolani cu BPH. Schimbarea ultrastructurală a prostatei a fost observată prin microscopie electronică de transmisie. Rezultatele au arătat căApoptozade prostată șobolan normal nu a fost evident, a existat o rată scăzută de pro-statapoptozaîn grupul model, în tratamentul cu doze mari de acteosidă, șobolan pro-statapoptozaa fost semnificativ mai mare decât cea a grupului de modele.Acteosidar putea promova proptoza prostatei de șobolan și ar putea juca un rol în inhibarea hiperplaziei benigne de prostată

CUVINTE CHEIE:acteosid, Cistanche, începe hiperplazia prostatică

Click pentru a cistanche tubulosa doza și Cistanche produse

Apoptoza în timpul hiperplaziei prostatice (HBP) este unul dintre mecanismele actuale mai îngrijorătoare, care este codificat genetic și permite celulelor să controleze moartea celulelor răspunzând la semnale specifice. După ce prostata se dezvoltă la dimensiunea adultă, rata de proliferare a celulelor prostatei este menținută la 1% - 2% prin acțiunea echilibrată a ratei medii a apoptozei, iar odată ce acest echilibru este rupt, este considerat a fi cauza predispozantă a BPH. În condiții normale, nivelurile de femele și androgeni din glanda prostatică și circulația normală a acesteia sunt o stare de homeostazie existentă între proliferare și apoptoza. Când proliferarea este în afara echilibrului cu apoptoza, aceasta duce la creșterea și extinderea în continuare a glandei, permițând în principal extinderea compartimentului intercelular epitelial să apară. În acest test, am observat și analizat efectul uneia dintre componentele chimice aleCistanche, acteoside(cum ar fi fi filode), pe apoptoza și modificările ultrastructurale ale prostatei șobolanului prin stabilirea unui model de șobolan de hiperplazie de prostată, pentru a evalua utilitatea acteosidelor în inhibarea hiperplaziei prostatei și pentru a oferi o bază științifică pentru dezvoltarea unei noi utilizări aCistanche, un medicament chinezesc.

1 material și metode

1. 1 animale de testare

Cincizeci de șobolani SD de sex masculin în vârstă de 6-7 săptămâni, grad curat, cântărind 80-100 g, au fost furnizate de centrul de medicină comparativă al Universității Yangzhou.

1. 2 reactivi și medicamente

Testosteronul propionat injecție a fost produs de Shanghai General Pharmaceutical Co, Ltd., caietul de sarcini 25 mg · ML - 1, lot 060708. Soluția de colorant PI a fost furnizată de centrul de testare al Universității Yangzhou. conținut de acteosid 945 g · kg - 1, preparat în departamentul de analiză a medicinei tradiționale chineze, Universitatea farmaceutică din China.

1. 3 aparate experimentale

Microscop electronic cu transmisie Philips TECNAI 12 olandez Philips; Citometru de debit facsaria fabricat pentru Becton Dickinson.

1. 4 grupări și modelări

Modelul hiperplaziei prostatei a fost stabilit prin injectare subcutanată de propionat de testosteron în partea din spate a șobolanilor timp de 4 săptămâni, conform metodei literaturii de specialitate. Șobolanii model au fost împărțiți aleatoriu în patru grupe: grup model, grup model acteoside cu doze mari, grup model acteoside cu doză medie, model acteoside grup cu doză mică, cu 10 șobolani în fiecare grup; Alți 10 șobolani normali au fost luați ca un grup de control.

1. 5 metode de administrare

La o săptămână după modelare, șobolanii din grupurile cu doze mari, medii și mici au primit 60, 30 și 15 mg · (kg · d) - 1 prin gavaj, respectiv. Modelul și grupurile de control au fost administrate intragastrically cu volum egal salină normală, o dată pe zi timp de 4 săptămâni, iar greutatea corporală a fost cântărită o dată pe săptămână pentru a ajusta doza în funcție de greutatea corporală.

1. 6 colectarea și prelucrarea eșantioanelor

1) Probe și preparare: la 24 de ore după ultima hrănire, greutatea corporală a șobolanilor de post a fost cântărită, iar șobolanii au fost sacrificați prin dislocare cervicală, iar abdomenul inferior a fost imediat deschis și țesutul prostatic din jur a fost îndepărtat, iar prostata liberă a fost îndepărtată, iar o parte din prostată a fost omogenizată într-un omogenizator de țesut într-o baie de gheață pentru a pregăti suspensiile unicelulare ale prostatelor, care au fost colorate cu iodură de propidiu într-o procedură într-o singură etapă; O altă porțiune a țesutului prostatic a fost fixată în 25 g · L - 1 glutaraldehidă și au fost pregătite secțiuni ultrathin.

2) Prepararea suspensiilor unicelulare: prostata șobolan intactă a fost îndepărtată într-un recipient în condiții sterile, sângele și cheagul de sânge de pe suprafața țesutului prostatic au fost clătite cu PBS pentru a elimina grăsimea colaterală din jur și membranele fibroase și citoplasmatice în exces, iar un țesut prostatic proaspăt cu o dimensiune de aproximativ 0,5 cm3 a fost recoltat de la aceeași prostată de șobolan, tocat, și o suspensie de celule de prostată a fost pregătit.

Un bloc de țesut prostatic a fost plasat într-un vas Petri și a fost adăugată o cantitate mică de PBS; Țesutul a fost forfecat cu foarfece oftalmice într-o baie de gheață, omogenizator sol la suspensie, 10 ml PBS a fost adăugat, omogenatul de țesut a fost aspirat cu pipetă, filtrat în tuburi de testare cu plasă de nailon de dimensiune a porilor de 0,074 mm, centrifugat la 1500 R · min - 1 timp de 3 minute, iar peletul a fost spălat de trei ori mai mult cu PBS, de fiecare dată cu 500 R · min - 1 centrifugare de scurtă durată cu viteză redusă pentru a îndepărta resturile celulare și o plasă de nailon de dimensiune a porilor de 0,037 mm filtrată pentru a elimina aglomerările celulare. Celulele au fost numărate și ajustate la o concentrație celulară de 2 × 109 · L - 1. Patați cu 1 ml soluție de colorant PI timp de 10 minute la 4 ° C în întuneric.

3) Pregătirea secțiunii ultrathin: pregătirea secțiunii țesutului ultra-subțire.

2 rezultate și analize

Din rezultate se știe că acteosidul are un efect proapoptotic. Analiza statistică a rezultatelor apoptozei celulare a arătat că rata apoptotică a șobolanilor tratați cu doze mari, medii și mici de acteozidă a crescut semnificativ, iar diferența față de grupul normal, grupul model și grupul pozitiv a fost extrem de evidentă. Acesta a indicat că acteosidul ar putea induce apoptoza celulară, iar efectul a fost semnificativ mai puternic decât cel al medicamentului de control pozitiv alprostadil.

Efectul acteosidei asupra ultrastructurii celulelor hiperplaziei prostatei a fost demonstrat prin microscopie electronică: în prostata normală a șobolanului, nucleele vizibile sunt intacte, nucleolii sunt evidenti, iar distribuția cromatinei nucleare este uniformă; Reticulul endoplasmatic dur a fost consistent în dimensiune, aranjat în ordine, fără fenomen de vacuolizare, fără proeminențe microvilli asemănătoare degetelor pe suprafața epitelială, nu s-a observat un fenomen de umflare mitocondrială și au existat puține secreții luminoase. În grupul model, nucleele celulelor prostatei au fost în mod evident deformate și micșorate, iar citoplasma a fost abundentă; Reticulul endoplasmatic dur a fost foarte dilatat și semnificativ vacuolat, iar veziculele au fost umplute cu granule proteice de înaltă densitate; Mitocondriile au fost ușor umflate cu secreții dense moderate în lumen și granule secretorii au fost observate în unele celule. La șobolanii tratați cu acteozide, nucleele au fost intacte în comparație cu cele din grupul model, cu nuclee ușor condensate, compactitate nucleară crescută, acumulare de heterocromatină, unele vacuole în citoplasmă și mai puține vacuole în reticulul endoplasmatic dur; În grupul de acteoside cu doze mici, nucleul a fost ușor micșorat, neregulat, iar citoplasma a fost mai abundentă, iar reticulul endoplasmatic dur a fost redus.

3 Discuții

Detectarea cantitativă a celulelor apoptotice de către FCM este simplă, rapidă și obiectivă și poate fi efectuată cu teste multiparametrice, oferind o înțelegere mai profundă a modificărilor apoptozei și a posibilelor sale mecanisme de reglementare.

Apoptoza este un proces programat de moarte celulară în organismele multicelulare pentru reglarea dezvoltării organismului și menținerea homeostaziei determinate de codurile genetice. Celulele apoptotice au caracteristicile lor morfologice și biologice unice: pyknosis de cromatină în nucleu, degradarea extensivă a pauzelor ADN, contracția completă a celulei, contracția completă a celulei, contracția membranei celulare cu procese exterioare care învăluie organitele și fragmente ale nucleului care formează corpuri apoptotice caracteristice, astfel încât celulele apoptotice să păstreze nu numai structura și funcția membranei celulare intacte, ci și integritatea structurii organelle, care este diferită de necroza celulară. Mecanismul molecular al apoptozei nu a fost pe deplin elucidat până în prezent, iar studiile au arătat că o varietate de gene sunt implicate în reglarea genelor implicate în apoptoza.

Apoptoza prezintă în prezent un interes mai mare în procesul de HBP, care este codificat genetic și permite celulei să controleze moartea celulelor răspunzând la semnale specifice. După ce prostata se dezvoltă la dimensiunea adultă, rata de proliferare a celulelor prostatei este menținută la 1% - 2% prin acțiunea echilibrată a ratei apoptozei, iar întreruperea acestui echilibru a fost mult timp considerată a fi cauza BPH. În condiții normale, estrogenul la nivelul androgenilor din prostată și ciclismul normal este o stare de homeostazie care există între procesele proliferative și apoptotice. Când proliferarea este în afara echilibrului cu apoptoza, aceasta duce la creșterea și mărirea în continuare a glandei, în principal prin expansiunea între septurile celulelor epiteliale. Perturbarea acestui echilibru poate rezulta din modificări ale nivelului de androgeni sau funcția; Fie răspunsul poate apărea, de asemenea, de la stimularea DHT de AR sau de la modificări ale nivelurilor de factor de creștere mediate de DHT. În acest studiu, FCM a fost efectuat pentru a detecta apoptoza celulară și s-a constatat că rata de apoptoză în prostata șobolanilor cărora li s-a administrat o doză mare de acteozidă a fost semnificativ crescută în comparație cu grupul model. Microscopia electronică a arătat că nucleul celulelor prostatei din grupul model a fost deformat, reticulul endoplasmatic dur a fost foarte dilatat în vezicule, veziculele au fost umplute cu particule proteice de înaltă densitate, iar vacuolizarea a fost evidentă; Mitocondriile au fost ușor umflate, în concordanță cu rapoartele din studii conexe

Gradul de hiperplazie prostatică la șobolani a fost redus semnificativ după intervenția actozidă. Grupul cu doze mari a dezvoltat, de asemenea, semne timpurii de apoptoza: nucleele celulelor prostatei au rămas în mare parte intacte, iar vacuolele reticulului endoplasmatic au fost reduse semnificativ. Nucleele au fost condensate cu o compactitate nucleară crescută și acumulare de heterocromatină, similar cu caracterizarea celulelor din țesutul prostatic post-castrare la șobolani. S-a ilustrat că actosidul ar putea induce apoptoza la șobolanii cu hiperplazie prostatică, ar putea reglementa și restabili echilibrul dintre apoptoza și proliferarea celulelor prostatei și ar putea exercita un efect inhibitor asupra proliferării celulelor prostatei. Rezultatele prezentului studiu și studiile anterioare sugerează că inhibarea hiperplaziei prostatei de către componenta chimică Cistanche, acteozida, poate fi asociată cu promovarea apoptozei celulare și atenuarea supraexpresiei AR și tgf-ur1, iar mecanismul detaliat rămâne de investigat pe deplin.