Studiu despre extracția și proprietățile antioxidante ale flavonoidelor din Cistanche

Pentru mai multe informații:ali.ma@wecistanche.com

Song Yang

(Institutul Anshan de Supraveghere și Inspecție a Calității Produselor, Anshan 114006, Liaoning)

Abstract: TotalulflavonoideînCistancheau fost extrase prin „metoda vibrațiilor cu ultrasunete” și „metoda de extracție Soxhlet”, iar conținutul șiantioxidantau fost analizate proprietăți. Rezultatele determinării au arătat că conținutul totalflavonoideînCistancheextras prin metoda vibrației ultrasonice a fost mai mare decât cel extras prin metoda de extracție Soxhlet. Rata de recuperare determinată de experimente este de 96,85 la sută -99,46 la sută, precizia este mare, iar soluția de probă este foarte stabilă în 2 ore, ceea ce indică faptul că spectrofotometria UV-Vis are o precizie ridicată, o abatere mică și control ușor al condițiilor experimentale. Analizarea și determinareaantioxidantactivitatea deflavonoideînCistancheprin metoda fluorescenței, rata clearance-ului a fost de 91,5 la sută, indicând faptul căflavonoideînCistancheau puternicantioxidantproprietăți. În experiment, s-a constatat că folosind analiza fluorescenței pentru a determinaantioxidantcapacitate totalăflavonoideîn extract are avantajele rapidității, simplității, sensibilității ridicate și reproductibilității bune.

Cuvinte cheie: Cistanche; Flavonoide; Ecografie; Antioxidant

Număr de clasificare a bibliotecii chineze: TQ028 Cod de identificare a documentului: A Număr articol: 1004-0935 (2013) 01-0013-03

Cistanche

Click pentru Cistanche organic pentru anti-imbatranire

Cistancheeste utilizat pe scară largă ca medicament tonic. Cercetarea efectelor farmacologice și a componentelor chimice aleCistanchea făcut progrese mari în ultimii ani. Mongolia Interioară AlxaCistancheGroup a dezvoltat o serie de Cistanche care hrănește yin și yang, hidratează intestinele, îmbunătățește funcția imunitară umană, reglează sistemul endocrin și întârzie îmbătrânirea. lichior,cistanchelichid de sănătate. În Japonia, hernia de carne este folosită ca agent de ameliorare sau terapeutic pentru disfuncția sexuală și amnezie. În Statele Unite, echinacea este, de asemenea, transformată în produse de sănătate pentru a îmbunătăți imunitatea organismului. Pe această bază, ar trebui să efectuăm cercetări aprofundate asupra ingredientelor active ale efectelor sale farmacologice și a mecanismului lor de acțiune. Sub premisa asigurării eficacității, ar trebui să îmbunătățim preparatele din medicina tradițională chineză, să îmbunătățim nivelul de control al calității și să dezvoltăm efecte curative clare, utilizare în siguranță și calitate controlabilă. Produse noi din medicina tradițională chineză; pe de altă parte, ar trebui, de asemenea, să consolidăm cercetarea tehnologiei de cultivare a Cistanche, să realizăm plantarea standardizată și producția industrializată de Cistanche, să plantăm artificial cistanche și să stabilim o bază de cultivare industrializată a cistanche și a plantelor sale gazdă și să rezolvăm problema deficitului de resurse. În același timp, guvernarea mediului în zona deșertică de vest va fi realizată în continuare. Odată cu cercetările continue aprofundate în diverse aspecte, această medicină tradițională chineză a țării noastre va fi cu siguranță promovată pe piața internațională și va accelera modernizarea medicinei chineze.

1 Parte experimentală

1.1 Instrument experimental

H, H, S, 21-incalzire electrica de tip baie de apa cu temperatura constanta (fabrica de instrumente medicale nr. 5 din Shanghai); Balanță analitică electro-optică TG328A (Fabrica de instrumente Shanghai Tianping); Sită cu ochiuri de 40 (Zhejiang Hongxing Instrument Factory) KQ-250B extractor cu ultrasunete (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Extractor Soxhlet (Fabrica de instrumente Zhejiang Hongxing); Model 766-2 Uscare cu radiații în infraroșu îndepărtat (Shanghai Sunshine Instrument Co., Ltd.); Model HX-200Un concasator de medicamente chinezești de mare viteză (Xi'an Hardware, Zhejiang Yongkang) Fabrică de medicamente); Spectrofotometru UV TU-1201 (Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd.); Contor de aciditate digital de precizie PHS-3C (fabricat de Shanghai Tianda Instrument Co., Ltd.); Spectrofotometru cu fluorescență (VARIAN)

1.2 Reactivi și medicamente experimentale

Cistanche(furnizat în laborator); etanol absolut (puritate analitică) (Shenyang Xinhua Reagent Factory); rutina (standard) (furnizat in laborator); 50 g/L soluție de nitrit de sodiu (de casă); 100g/L soluție de azotat de aluminiu (de casă); 40 g/L soluție de hidroxid de sodiu (de casă); PH=6,5 soluție de fosfat mixt: 0,1mol/L fosfat acid disodic, 0,1mol/L fosfat bihidrogen de potasiu; acid benzoic Soluție: 0,400 0 g acid benzoic (AR Shenyang Reagent Factory), dizolvat într-o soluție mixtă de fosfat cu pH=9,5, se diluează cu apă la 100 ml și se păstrează la întuneric timp de utilizare ulterioară; Soluție Cu*: 1,0 x IO"g/mL; Peroxid de hidrogen (AR, Shenyang No. 1 Reagent Factory): 30 la sută; 0,1 MoVL fosfat mixt (hidrogenofosfat disodic, AR, Uzina chimică Shenyang Xincheng; fosfat dihidrogen de potasiu, AR, Shenyang Hefu Chemical Reagent Distribution Soluție; Apa este apă de două ori distilată.

1.3 Extracția flavonoidelor totale în Cistanche

1.3.1 Extracția flavonoidelor din Cistanche deserticola (metoda cu ultrasunete)

Cântăriți cu precizie 2,000 g (trecând o 40-sită cu plasă) deCistancheîntr-un balon conic de 100 ml, adăugați reactiv etanol 95 la sută la temperatura camerei la un raport solid-lichid de 1:15 și efectuați extracția cu ultrasunete de fiecare dată. După 30 de minute, efectuați filtrarea prin aspirație, recuperați reziduul de filtru, adăugați reactiv etanol 95% pentru agitare cu ultrasunete, filtrare prin aspirație, extracție cu ultrasunete de 3 ori, combinați cele 3 filtrate pentru a obține extractul dorit, adăugați reactiv etanol 95% pentru a face volumul constant Se pune intr-un balon cotat de 100 ml si se pune deoparte.

1.3.2 Extracția flavonoidelor din Cistanche (metoda de extracție Soxhlet) P]

Cântăriți cu precizie 10.000 Og (trecut printr-o 40-sită cu plasă) de piure de vinete, înfășurați-l cu hârtie de filtru degresată, legați un capăt și puneți-l în tubul de extracție al extractorului Soxhlet. Adăugați reactivul de etanol 95% al ​​extractantului în sticla de extracție timp de cca. Este 1/2 din volum, apoi instalați extractorul Soxhlet, utilizați o baie de apă cu temperatură constantă puțin mai mare decât punctul de fierbere al extractantului (etanol) pentru extracția Soxhlet timp de 4 ore, apoi răciți, efectuați evaporarea rotativă, concentrarea și utilizați reactiv etanol 95 la sută pentru a determina Puneți-l într-un balon cotat de 100 ml și lăsați deoparte.

Anti îmbătrânire

1.3 Determinarea conținutului de material extras și experimentul ratei de recuperare

1.3.1 Determinarea conținutului și experimentul de recuperare

Luați șase baloane cotate de 25 ml, extrageți 0.10, 0}.2{0 și 0,30 ml din proba de lichid Shuangrong de carne extras prin metoda ultrasonică în primul 3 baloane cotate, se adaugă aceeași cantitate de probă de lichid în ultimele 3 baloane cotate, apoi se adaugă 1,0 ml de soluție standard de rutină, se adaugă 1 ml de soluție de azotat de sodiu 50 g/L în cele 6 baloane cotate, se agită bine , și lăsați să stea timp de 7 minute; se adaugă 1 ml de soluție de azotat de aluminiu 100 g/L, se agită bine și se lasă să stea 7 min; se adaugă 10 ml de soluție de hidroxid de sodiu 40 g/L și se agită bine și se lasă să stea 7 min; se diluează până la semn cu soluție de etanol 95 la sută, se agită bine și se lasă să stea 15 minute; Soluția martor a tonerului este o referință, absorbanța A este măsurată la 503 nm și concentrația este calculată din curba standard

Tabelul 1 Conținutul deflavonoide in Cistanche

Luați șase baloane cotate de 25 mL, extrageți 15 mL din metoda Soxhlet de extracție a striatei: soluție de probă de piure și reumpleți volumul într-un balon cotat de 100 mL și pipetați 0 .40, 0,50 și 0,60 ml din acesta. În 3 baloane cotate, adăugați aceeași cantitate de soluție de probă în ultimele 3 baloane cotate, apoi adăugați 1,0 ml de soluție standard, adăugați 1 ml de soluție de azotat de sodiu 50 g/L, agitați bine și lăsați să stea 7 min; Apoi se adaugă 1 ml de soluție de azotat de aluminiu 100 g/L, se agită bine și se lasă să stea 7 min; apoi se adaugă 10 ml de soluție de hidroxid de sodiu 40 g/L, se agită bine și se lasă să stea 7 min; se diluează până la semn cu soluție de etanol 95 la sută, se agită bine, se lasă timp de 15 minute, se folosește soluția martor ca referință, se măsoară absorbanța A la 503 nm și se calculează concentrația C din curba standard.

1.3.2 Determinarea experimentului de stabilitate

Se pipetează 0,2 ml de soluție de probă, se adaugă 1 ml de soluție de nitrit de sodiu cu 50 g/L de reactiv de culoare, se agită bine și se lasă să stea timp de 7 minute; se adaugă 1 ml de soluție de azotat de aluminiu 100 g/L, se agită bine și se lasă să stea 7 min; se adaugă 10 ml de soluție de hidroxid de sodiu 40 g/L și se agită bine și se lasă timp de 7 minute; se diluează până la semn cu soluție de etanol 95 la sută, se agită bine și se lasă timp de 15 minute; luați soluția martor cu revelatorul ca referință, Și apoi măsurat cu un spectrofotometru ultraviolet-vizibil, timpul a fost stabilit pentru 2 ore și s-a constatat că absorbanța soluției de probă a fost stabilă în 2 ore și a rămas practic neschimbată.

Tabelul 2 Conținutul deflavonoidein Cistanche

1.4 Analiza activității antioxidante a flavonoidelor din Cistanche cistanche, determinarea fluorimetrică cinetică catalitică a ratei de eliminare a plantelor medicinale chineze asupra radicalilor liberi hidroxil

1.4.1 Metoda experimentală

Adăugați soluție de acid benzoic într-o serie de tuburi colorimetrice de 25 ml, apoi adăugați o anumită cantitate de Co? plus și peroxidul de hidrogen, la rândul său, se diluează cu o soluție mixtă de fosfat de pH=6.5 până la un volum constant de 25 ml, se agită bine și se pune în apă clocotită După ce a stat în baie timp de 45 de minute, fluorescența a fost măsurată intensitatea fiecărei soluții.

1.4.2 Determinarea vitezei de captare a probei la radicalii hidroxil

Prepararea soluției de probă: Cântăriți cu precizie 1.000 Og dintr-o probă cu o dimensiune a particulei de 450 μm și, la temperatura camerei, extrageți ultrasonic de 3 ori cu 60 ml etanol absolut, folosind 20 ml de reactiv de fiecare dată, cu un interval de timp de 10 min. Se combină cele 3 extracții Filtru și se diluează filtratul cu etanol absolut într-un balon cotat de 100 ml.

Prepararea reactivului: Se cântăresc 7,16 g de fosfat acid disodic și se adaugă 200 mL de apă pentru a obține o soluție de 0,1 mol/L; se cântăresc 2,72 g de fosfat dihidrogen de potasiu și se adaugă 200 ml de apă pentru a obține o soluție de 0,1 mol/L. Se amestecă cele două soluții și se folosește un pH-metru pentru a prepara un amestec de fosfat cu pH=6,5; se cântăresc 0,400 0 g de acid benzoic (AR Shenyang Reagent Factory), se dizolvă cu o soluție mixtă de fosfat cu pH=9,5 și se diluează la volum cu apă WOmL, păstrată la întuneric pentru mai târziu utilizare; Se cântăresc 0,1547 g Ci/ și se dizolvă cu] mol/L acid clorhidric pentru a prepara 100 ml de soluție de 1 mol/L Cu*. Se prepară soluție de peroxid de hidrogen 30%.

Luați 0,2 ml de soluție de probă într-un tub colorimetric de 25 ml, adăugați acid benzoic, peroxid de hidrogen și ochi de Cu în secvență, diluați la 25 ml cu o soluție mixtă de fosfat cu pH=6. 5, se agită bine și se măsoară conform formulei ratei de clearance. Obține rata de captare a probei la radicalii hidroxil.

1.4.3 Rezultatele calculului

Tabelul 3 Rezultatele calculului

Concluzie: Flavonoidele din Cistanche au proprietăți antioxidante puternice.

flavonoidele din cistanche au un efect anti-îmbătrânire

2 Rezultate și discuții

(1) Folosind „metoda cu ultrasunete” și „metoda de extracție Soxhlet” pentru a extrage totalulflavonoideînCistanche deserticola, compararea acestor două metode arată că metoda cu ultrasunete scurtează foarte mult timpul de extracție și îmbunătățește rata de extracție a ingredientelor eficiente. Rata de utilizare economisește astfel materii prime. Dimpotrivă, metoda de extracție Soxhlet este consumatoare de timp și laborioasă, iar efectul de extracție nu este bun. Prin urmare, extracția cu ultrasunete a totaluluiflavonoideeste cel mai bun proces de extracție, care are o semnificație practică puternică.

(2) Analiza calitativă a totaluluiflavonoideprin spectroscopie UV a arătat că rutina este un produs standard foarte potrivit. Calculul experimental arată că conținutul totalflavonoideînCistancheeste foarte mare, cu precizie ridicată, iar rata de recuperare este de 96,85 la sută ~ 99,46 la sută, proba a rămas stabilă în 2 ore.

(3) Analiza antioxidantă și determinarea totaluluiflavonoideînCistanchedesert au fost efectuate prin metoda fluorescenței. Concluzie: Rata de eliminare calculată a fost de 91,5 la sută, ceea ce indică faptul căcistanchePasta în sine are un efect antioxidant puternic, care poate elimina radicalii liberi și poate inhiba lipidele. Oxidarea, etc., este de mare valoare în cercetarea anti-îmbătrânire, carcinogeneză, inflamație, ischemie tisulară prin radiații și alte boli din domeniul medical.

Referinte:

[1] Cheng Xiyu, Guo Bin, Ni Wen, Liu Chunchao. Progresul cercetăriiCistanche[J]. Cercetare și dezvoltare de produse naturale, 2005, 17 (2): 235-240.

[2] Hou Dongyan, Hui Ruihua și colab. Analiza spectrală a totaluluiflavonoideîn caprifoi și determinarea activității antioxidante [J]. Test analitic, 2004, 23 (11): 52-55.

[3] Zhou Gui, Deng Guanghui, Liang Dawen.'Studiu privind extragereaflavonoidedin frunze de păducel prin metoda ultrasonică[J]. Journal of Southwest Agricultural University, 2005, 27 (5): 605-607.