Discuţie

Populația îmbătrânită continuă să crească într-un ritm fără precedent la nivel mondial. Îmbătrânirea este asociată cu o scădere a funcțiilor celulare, acumularea de daune și o probabilitate crescândă de boli cronice care duc la colapsul sistemelor și la moartea eventuală [3-7]. Prevalența patologiilor legate de vârstă la sfârșitul vieții are un impact semnificativ asupra calității vieții și a costurilor asistenței medicale. Astfel, este nevoie urgentă de intervenții cu o activitate anti-îmbătrânire eficientă care să poată fi exploatate ca un geroprotector pentru a întârzia îmbătrânirea și a prelungi durata sănătății.

Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. prin radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate puternică de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și are capacitatea de a elimina speciile reactive de oxigen și de a preveni degradarea colagenului indusă de radicalii liberi și, de asemenea, are un bun efect de reparare asupra daunelor anionice a radicalilor liberi de timină.

Faceți clic pentru a obține produse Cistanche pentru vânzare cu amănuntul

【Pentru mai multe informații: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Îmbătrânirea celulară este controlată de o rețea de procese biologice complexe interconectate [8, 9]. Studii recente au arătat că intervenția în procesele biologice de îmbătrânire poate crește substanțial durata de viață sănătoasă a organismelor model, inclusiv a mamiferelor [10, 14]. Îmbătrânirea cronologică în drojdia în devenire Saccharomyces cerevisiae este sistemul model bine stabilit pentru determinarea intervențiilor de îmbătrânire post-mitotică a celulelor umane [16–19].

Am dezvoltat o metodă cantitativă nouă, rapidă și ieftină numită PICLS pentru măsurarea CLS utilizând (1) celule de drojdie incubate cu medii și compuși de testare pe plăci de 96-godeuri transparente; (2) colorantul fluorescent iodură de propidiu (PI), un impermeabil celular care intră numai în celulele moarte [23–25]; și (3) un cititor de microplăci pentru citirea cantitativă a supraviețuirii celulelor. De remarcat, măsurarea densității celulare (și a creșterii celulelor) la OD600nm poate fi efectuată de pe aceeași placă. Pentru celulele de drojdie moarte de pe plăcile de 96-godeuri, am găsit o corelație liniară ridicată între fluorescența PI și absorbanța OD600nm într-un interval optim de densitate celulară care corespunde cu 0,05-12 OD. Această abordare metodică poate fi utilizată pentru cuantificarea viabilității celulelor în teste de mare randament.

Există câteva inovații importante asociate cu PICLS: (i) PICLS este în prezent singura metodă fără excrescențe pentru cuantificarea CLS. Un pas critic care necesită timp și resurse este decupat din protocol și, prin urmare, PICLS este primul screening cu randament ridicat (HTS) pentru agenți chimici și condiții de cultură pentru măsurarea CLS. (ii) Ideea metodică din spatele PICLS poate fi formulată în general ca o metodă bazată pe plăci în care (a) fracția de celule moarte/supraviețuitoare și (b) cantitatea totală de celule este determinată direct simultan din aceeași placă cu o intensitate optică. dispozitiv de măsurare (cititorul de plăci disponibil în mod obișnuit). În această lucrare, am folosit 96-plăci pentru godeuri, dar 384-plăcile pentru godeuri par de asemenea aplicabile (cu o anumită sensibilitate redusă din cauza cantității mai mici de cultură). Poate fi utilizat orice agent de colorare care distinge celulele moarte și cele supraviețuitoare și care are fluorescență sau absorbție într-un canal care nu interferează cu măsurarea generală a densității celulare (de exemplu, prin absorbție la OD600nm). Am aplicat iodură de propidiu care marchează selectiv celulele moarte, dar acest lucru nu este critic pentru PICLS.

Fig. 7 Testarea efectului analogilor de 2,5-anhidro-D-manitol asupra duratei de viață cronologice a drojdiei. Tulpina de drojdie prototrofică (CEN.PK113-7D) a fost crescută în mediu definit sintetic cu diferite concentrații de 2,5-Dmanitol anhidru (2,{5-AM), D-fructoză , D-manitol, D-maltoză și D-sorbitol în 96-plăci de godeuri la 30 de grade . O creștere celulară OD600nm a fost măsurată în diferite momente de timp 24 h, 48 h și 72 h utilizând un cititor de microplăci și graficul reprezentat grafic în funcție de diferite concentrații de 2,5-AM, fructoză, manitol, maltoză și sorbitol. B Durata de viață cronologică (CLS) a diferitelor concentrații de 2,5-AM, fructoză, manitol, maltoză și celule incubate cu sorbitol a fost determinată utilizând metoda pe bază de fluorescență cu iodură de propidiu. Supraviețuirea celulelor la diferite puncte cronologice de vârstă a fost cuantificată și punctul de timp de creștere 72 h a fost considerat ca ziua 1. C CLS-ul celulelor îmbătrânite a fost determinat prin metoda de creștere în mediul lichid YPD. Timpul de creștere 72 de ore a fost considerat ca fiind ziua 1. La diferite puncte cronologice de vârstă, o cultură de 3-μL a fost transferată pe o a doua placă de 96-godeuri care conține 200μL de mediu YPD. Excreșterea OD600nm în mediu lichid YPD a fost măsurată după incubare timp de 24 de ore la 30 de grade folosind un cititor de microplăci. Graficul este reprezentat grafic în raport cu ziua 1. D Creșterea în mediu lichid YPD a unei plăci de godeuri a fost fotografiată după incubare timp de 24 de ore la 30 de grade. E La diferite puncte cronologice de vârstă, culturi de 3-μL au fost reperate pe placa de agar YPD. Excrescența a fost fotografiată după incubare timp de 48 de ore la 30 de grade. Toate datele reprezintă ca mijloc±SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Remarcăm că microplăcile negre sunt de obicei recomandate pentru testele de fluorescență, deoarece acest material stinge parțial autofluorescența. Cu toate acestea, am evaluat metoda în microplăci transparente și am găsit eficacitate similară cu microplăcile negre. Întrucât microplăcile negre sunt asociate cu costuri ridicate, acesta este un avantaj semnificativ pentru proiectele de screening la scară mare de mare capacitate.

Am validat metoda noastră dezvoltată cu intervenții anti-îmbătrânire cunoscute, cum ar fi administrarea de rapamicină și restricția calorică [10–16] prin reproducerea efectului acestora asupra CLS al drojdiei. Aceste rezultate sugerează că metoda noastră este eficientă pentru identificarea de noi intervenții anti-îmbătrânire. Am exploatat protocolul nostru nou dezvoltat pentru screeningul agenților chimici pentru a identifica noi compuși anti-îmbătrânire (Fig. 8). Am identificat 2,5-anhidro-D-manitol (2,5-AM) extinzând CLS al drojdiei. Pe baza rezultatelor noastre, sugerăm utilizarea 2,5-AM individual sau în combinație cu alte intervenții anti-îmbătrânire.

2,5-AM este un analog al fructozei și ambele zaharuri pot intra în calea glicolitică. Glicoliza este un proces metabolic în care glucoza este mai întâi fosforilată de hexokinază pentru a forma glucoză-6-fosfat (G6P). Fosfoglucoizomeraza interconversează G6P în fructoză-6-fosfat (F6P), care este metabolizat în continuare în diferiți intermediari glicolitici din aval, inclusiv piruvat care intră în ciclul mitocondrial TCA. Ca și glucoza, fructoza este, de asemenea, fosforilată de hexokinază pentru a forma F6P. Fosfofructokinaza transformă F6P în fructoză-1,6-bisfosfat (FBP), care este metabolizată în continuare în diferiți intermediari glicolitici din aval. 2,5-AM poate fi, de asemenea, fosforilat de hexokinază pentru a forma 2,5-AM- 6-fosfat (2,{5-AM6P) [39–41]. În plus, fosfofructokinaza transformă 2,5-AM6P în 2,5-AM{- 1,6-bifosfat (2,5-AMBP). Cu toate acestea, 2,5-AMBP nu poate fi metabolizat în continuare în intermediari glicolitici din aval [39-41].

Deoarece 2,5-AM este un analog al fructozei, am investigat dacă fructoza poate prelungi și durata de viață a drojdiei. Cu toate acestea, nu am observat activitatea anti-îmbătrânire a fructozei în extinderea CLS al drojdiei. Manitolul și maltoza pot, de asemenea, să intre în glicoliză și să se metabolizeze în intermediari glicolitici din aval. De asemenea, am examinat efectul manitolului și maltozei asupra duratei de viață a drojdiei. De asemenea, fructoza, manitolul și maltoza nu pot extinde CLS al drojdiei.

Ca sorbitol, un alt zahăr încă nemetabolizat a fost raportat anterior că afectează CLS la concentrații foarte mari (18% echivalent cu 1 M) [20, 45], am dorit să clarificăm dacă activitatea anti-îmbătrânire a 2,{{7 }}AM se poate datora osmolarității crescute a mediului de cultură. Experimentele noastre au arătat că sorbitolul nu reușește să crească CLS al drojdiei la concentrațiile mai mici care sunt eficiente în cazul 2,5- AM. Deoarece sorbitolul necesită concentrații mai mari pentru a crește CLS al drojdiei, mecanismul anti-îmbătrânire al 2,5-AM este independent de efectele osmolarității. Aceste constatări au arătat că activitatea anti-îmbătrânire a 2,5-AM este specifică și nu este paralelă cu alți analogi cu structuri chimice similare.

Cu toate acestea, modul în care 2,5-AM extinde durata de viață rămâne de investigat. Va fi interesant de examinat dacă 2,5-AM modulează direct semnele de îmbătrânire [8]. TORC1 și AMPK sunt complexele sensibile la glucoză implicate în procesul de îmbătrânire [32, 43]. Cu toate acestea, durata de viață cronologică extinsă prin inhibarea TORC1 este redusă atunci când AMPK este inhibat. Glucoza și intermediarii glicolitici reglează activitatea TORC1 și AMPK [34, 46, 47]. 2,5-AMBP s-a demonstrat că inhibă activitatea aldolazei care catalizează conversia FBP în gliceraldehidă-3-fosfat (G3P) și dihidroxiacetonă fosfat (DHAP) [39, 40]. DHAP este interconvertit în G3P de către triozofosfat izomeraza. Dovezi recente sugerează că DHAP este molecula semnal importantă de glucoză care activează TORC1 [48].

Fuxul glicolitic este compromis atunci când sinteza G3P și DHAP este afectată, ceea ce duce la o producție mai mică de ATP. Interesant, AMPK este activat atunci când starea energetică a celulelor este compromisă și inhibă creșterea celulelor prin inhibarea TORC1 [46, 47]. Astfel, relația antagonistă a AMPK și TORC1 este o adaptare metabolică eficientă pentru a asigura echilibrul homeostaziei celulare pentru celulele sănătoase. Deși, nu am observat un efect de 2,5-AM asupra creșterii celulelor (Figurile 6 și 7). Aceste descoperiri au exclus orice efect de restricție a glucozei care a compromis creșterea celulelor (Fig. 5), cu toate acestea, au prelungit durata de viață cu un fenotip de creștere lentă [49]. Cu toate acestea, prelungirea duratei de viață de către rapamicină nu necesită o doză mai mare decât compromite creșterea celulară (Fig. 4). Prin urmare, nu putem exclude posibilitatea activității anti-îmbătrânire de 2,5-AM prin TORC1/AMPK sau independent de TORC1/AMPK.

Spre deosebire de efectul inhibitor al 2,5-AMBP asupra aldolazei, se raportează că activează piruvat kinaza, ultima enzimă de glicoliză [39-41]. Piruvat kinaza catalizează conversia fosfoenolpiruvatului în piruvat, una dintre sursele pentru generarea NAD plus (nicotinamidă adenin dinucleotidă). NAD plus este un metabolit important care reglează mai multe procese și funcții celulare esențiale pentru menținerea celulelor sănătoase și prelungirea duratei de viață [50, 51]. Piruvatul este, de asemenea, substratul major pentru reacțiile mitocondriale pentru a genera diferiți metaboliți de bloc pentru a sintetiza elemente vitale, inclusiv aminoacizi, acizi nucleici și ATP, în principal pentru supraviețuirea celulelor și îmbătrânirea sănătoasă [52-55]. Într-adevăr, scăderea activității mitocondriale este asociată cu îmbătrânirea și bolile legate de vârstă [53–56]. Recent, 2,5-AM a fost propus ca un potențial terapeutic pentru tratarea cancerului de leucemie mieloidă acută (AML) [57].

Ca o notă secundară, am numit noua noastră metodă PICLS (metoda CLS bazată pe PI) având în vedere jocul de cuvinte „murături”. În timp ce toate elementele noului nostru protocol au fost deja descrise independent în altă parte, combinația lor „fermentată” face măsurarea simplă și ieftină și, în sfârșit, gata pentru un randament ridicat.

În concluzie, am dezvoltat o metodă cantitativă pentru măsurarea duratei de viață cronologice a drojdiei și am identificat 2,5-AM ca un nou compus antiîmbătrânire. În prezent este în curs de desfășurare un studiu pentru a investiga mecanismele activității anti-îmbătrânire a 2,5-AM.

Materiale și metode

Tulpina de drojdie, medii și substanțe chimice

Fondul genetic al tulpinii prototrofice CEN.PK113-7D a fost utilizat în acest studiu [35, 36]. Mediu bogat standard YPD (1% extract de drojdie Bacto, 2% peptonă Bacto și 2% glucoză), agar YPD (2,5% agar Bacto) și mediu definit sintetic (SD) care conține 6,7 g/L bază de azot de drojdie cu sulfat de amoniu fără aminoacizi (DIFCO) și 2% glucoză. Soluția stoc de rapamicină (Enzo) a fost preparată în dimetil sulfoxid (Sigma). Concentrația finală de DMSO nu a depășit 1 procent în nicio analiză. 2,5-anhidro-D-manitol (Santa Cruz), D-fructoză (Sigma), D-manitol (Sigma), D-maltoză (Sigma) și D-sorbitol (Sigma) concentrații de lucru preparate proaspăt de dizolvând direct pulberea în mediu și sterilizată prin filtrare.

Condiții de creștere a drojdiei

Tulpina de drojdie a fost recuperată din stocul de glicerol congelat pe mediu de agar YPD la 30 grade. Drojdia a fost crescută în mediu SD peste noapte la 30 de grade cu agitare la 220 rpm. Celulele crescute peste noapte au fost diluate la OD600nm~0,2 în mediu SD proaspăt pentru a iniția experimentele cronologice privind durata de viață.

Analiza cronologică a duratei de viață

Experimentele privind durata de viață cronologică (CLS) au fost efectuate în plăci cu {{{0}}godeuri cu un total de 20{{10}} µL cultură de drojdie așa cum a fost descris anterior [58]. Inoculul celular a fost transferat în placa de godeuri 96-conținând concentrații dublu diluate în serie (0-10 nM) de rapamicină. Pentru testul de restricție calorică, inoculurile celulare au fost preparate în mediu SD care conține 2%, 0,5% și 0,25% glucoză și transferate pe plăci 96-godeuri. De asemenea, inoculul celular a fost transferat în plăcile de godeuri 96-conținând concentrații serial dublu diluate (0–8 mM) de 2,5-anhidro-D-manitol, D-fructoză, D-manitol, D-maltoză și D-sorbitol. Celulele au fost incubate la 30 de grade, iar creșterea a fost măsurată la diferite momente de timp. Timpul de creștere 72 h a fost considerat ziua 1 pentru testul CLS. Supraviețuirea celulelor a fost cuantificată la diferite momente de vârstă prin trei abordări diferite: (i) metoda bazată pe fluorescență cu iodură de propidiu, (ii) creșterea în mediu lichid YPD și (iii) testul de spotting.

(i) Metodă bazată pe fluorescență cu iodură de propidiu:Procedurile detaliate pentru dezvoltarea abordării bazate pe fluorescență cu iodură de propidiu (PI) sunt menționate în secțiunea cu rezultate. Pentru testul CLS, celule de drojdie de {{{0}}µl la diferite momente de vârstă au fost transferate într-o a doua placă de 96-godeuri. Celulele au fost spălate și incubate în 100 ui 1 x PBS cu PI (5 ug/ml) timp de 15 min la întuneric. Probele de control pozitive și negative au fost incluse pentru analiza cantitativă. Martorul pozitiv (celule fierte la 100 de grade timp de 15 minute) a fost colorat cu PI și procesat în aceeași placă 96-godeu. Probele fără celule colorate cu PI au servit drept control negativ. După incubare, celulele au fost spălate și resuspendate în 100 ui PBS. Citirea fluorescenței probei (excitație la 535 nm, emisie la 617 nm) și OD600nm au fost măsurate cu cititorul de microplăci (BioTek). Intensitatea fluorescenței fiecărei probe a fost normalizată cu OD600nm. Intensitatea fluorescenței normalizate a fiecărei probe a fost scăzută din semnalul de fundal al probei negative necolorate. Intensitatea fluorescenței obținută a probei de control pozitiv (celule moarte fierte) a fost considerată 0 procente de supraviețuire celulară. Am confirmat moartea celulei b, permițându-i să crească în mediu. Supraviețuirea celulelor la probe de timp diferite de vârstă a fost calculată prin normalizarea intensității fluorescenței cu o probă de control pozitiv (celule fierte).

unde Iij(535nm∕617nm) este intensitatea fluorescentă măsurată la godeu cu coordonatele plăcii i și j cu excitație la 535 nm și emisie la 617 nm, ID(535nm∕617nm) este intensitatea fluorescentă măsurată pentru o celulă cu 100% moartă celule colorate cu PI, IC(535nm∕617nm) este intensitatea fluorescentă măsurată pentru celulele fără PI, iar valorile DO respective sunt absorbția măsurată pentru celulele respective la 600 nm de normalizare pentru numărul de celule.

(ii) Excrescență în mediul lichid YPD:Cultura staționară de drojdie (3-μL) de diferite momente de vârstă a fost transferată pe o a doua placă de 96-godeuri care conține 200μL mediu YPD și incubată timp de 24 de ore la 30 de grade. Creșterea (OD600nm) a celulelor îmbătrânite a fost măsurată de către cititorul de microplăci. Cuantificarea supraviețuirii celulare pentru fiecare punct de vârstă a fost determinată în raport cu ziua 1 (considerată supraviețuire celulară de 100 la sută) așa cum s-a descris anterior [19, 20, 58].

(iii) Test de localizare:Cultura staționară de drojdie (3 μL) de diferite momente de vârstă a fost reperată pe placa de agar YPD și incubată timp de 48 h la 30 de grade. Creșterea celulelor îmbătrânite de pe placa de agar YPD a fost fotografiată folosind sistemul de imagistică BioRad GelDoc.

Analiza datelor

Analiza statistică a tuturor rezultatelor, cum ar fi valoarea medie, abaterile standard, corelația (R2), semnificația și reprezentarea grafică a fost efectuată folosind software-ul GraphPad Prism v.9.3.1. Rezultatele au fost comparate statistic folosind ANOVA obișnuit și ANOVA bidirecțional, urmată de compararea multiplilor prin testul post-hoc al lui Dunnett sau testul post-hoc al lui Sidak. În toate graficele, valorile P sunt afișate ca *P<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

MulțumiriMA și FE ale autorului sunt inventatorii a două cereri de brevet (10202201534P și 10202201536U) care includ o parte a lucrării descrise în această lucrare.

Contribuția autoruluiMA a conceput proiectul, a efectuat experimentele și a analizat datele. FE a conceput proiectul, a evaluat datele și a conceput o strategie. MA și FE au scris lucrarea, iar toți autorii au revizuit lucrarea și au fost de acord cu versiunea sa finală.

FinanțareaAceastă lucrare a fost susținută de Institutul de Bioinformatică (BII), Fondul de dezvoltare a carierei A*STAR (C210112008) și grantul Global Healthy Longevity Catalyst Awards (MOH-000758-00).

Declarații

Interese concurenteAutorii nu declară interese concurente.

Acces deschisAcest articol este licențiat în baza unei licențe internaționale Creative Commons Atribution 4.0, care permite utilizarea, partajarea, adaptarea, distribuirea și reproducerea în orice mediu sau format, atâta timp cât acordați credit corespunzător autorilor originali. ) și sursa, furnizați un link către licența Creative Commons și indicați dacă s-au făcut modificări. Imaginile sau alte materiale ale terților din acest articol sunt incluse în licența Creative Commons a articolului, cu excepția cazului în care se indică altfel într-o linie de credit a materialului. Dacă materialul nu este inclus în licența Creative Commons a articolului și utilizarea dorită nu este permisă de reglementările legale sau depășește utilizarea permisă, va trebui să obțineți permisiunea direct de la deținătorul drepturilor de autor.

Referințe

1. das nações Unidas, O. Națiunile Unite, Departamentul pentru Afaceri Economice și Sociale, Divizia Populație (2019). Perspectivele populației mondiale, Repere (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Îmbătrânirea populațiilor: trăim vieți mai lungi, dar suntem mai sănătoși? Națiunile Unite, Departamentul pentru Economie și Afaceri Sociale, Divizia Populație, UN DESA/POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Îmbătrânirea ca factor de risc pentru boală. Curr Biol. 2012.

4. Hou Y, et al. Îmbătrânirea ca factor de risc pentru boli neurodegenerative. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Procesul de îmbătrânire: factor major de risc pentru boală și deces. Proc Natl Acad Sci US A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Face față provocărilor globale ale îmbătrânirii. Natură. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Cercetare medicală: tratați îmbătrânirea. Natură. 2014.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Semnele distinctive ale îmbătrânirii. Celulă. 2013.

9. Kennedy BK, et al. Geroscience: Legătura îmbătrânirii cu bolile cronice. Celulă. 2014.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Căutarea de a încetini îmbătrânirea prin descoperirea medicamentelor. Nat Rev Drug Discovery. 2020.

11. Mattison JA, et al. Restricția calorică îmbunătățește sănătatea și supraviețuirea maimuțelor rhesus. Nat Commun.

12. Bitto A, et al. Tratamentul tranzitoriu cu rapamicina poate crește durata de viață și durata sănătății la șoarecii de vârstă mijlocie. Elife. 2016.

13. Fontana L, Partridge L. Promovarea sănătății și longevității prin dietă: de la organisme model la oameni. Celulă. 2015.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. Rolul rapamicinei în extinderea duratei de sănătate prin întârzierea îmbătrânirii organelor. Aging Res Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. Efectul rapamicinei asupra îmbătrânirii și a bolilor legate de vârstă - trecut și viitor. GeroScience. 2021.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Extinderea duratei de viață sănătoase de la drojdie la oameni. Ştiinţă. 2010.

17. Zimmermann A, et al. Drojdia ca instrument de identificare a compușilor anti-îmbătrânire. FEMS Drojdie Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Îmbătrânirea replicativă și cronologică în Saccharomyces cerevisiae. Cell Metab. 2012.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Extinderea duratei de viață cronologice în drojdie prin scăderea semnalizării căii TOR. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner CR, Kennedy BK, Kaeberlein M. O metodă pentru analiza cantitativă de mare debit a duratei de viață cronologice a drojdiei. J Gerontol. Ser. Un Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. Cuantificarea morții celulare controlate genetic în drojdia în devenire. Metode Mol Biol. 2013.

22. Garay E, et al. Profilarea de înaltă rezoluție a supraviețuirii în fază staționară dezvăluie factorii de longevitate a drojdiei și interacțiunile lor genetice. PLoS Genet. 2014.

23. Alfatah M, et al. Hipoculozidul, un compus asemănător bazei sfingoide din Acremonium perturbă integritatea membranei celulelor de drojdie. Sci Rep. 2019.

24. Alfatah M, et al. Peisajul de interacțiune chimic-genetică a mono-(2-etilhexil)-ftalat folosind profilarea chemogenomică în drojdie. chimioferă. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Comparația metodelor utilizate pentru evaluarea viabilității și vitalității celulelor de drojdie. FEMS Drojdie Res. 2014.

26. Chadwick SR, et al. Un set de instrumente pentru evaluarea cantitativă rapidă a duratei de viață cronologice și a supraviețuirii la Saccharomyces cerevisiae. Trafic. 2016.

27. Pereira C, Saraiva L. Interferența mediilor de îmbătrânire asupra evaluării duratei de viață cronologice a drojdiei prin colorarea cu iodură de propidiu. Folia Microbiol. (Praha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapalogs și inhibitori mTOR ca terapii anti-îmbătrânire. J Clin Investig. 2013.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamicina: un inhibitor al îmbătrânirii iese din solul Insulei Paștelui. Reviste de Gerontologie - Seria A Științe Biologice și Științe Medicale. 2016.

30. Wilkinson JE, et al. Rapamicina încetinește îmbătrânirea la șoareci. Celulă îmbătrânită. 2012.

31. Saxton RA, Sabatini DM. Semnalizarea mTOR în creștere, metabolism și boală. Celulă. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovitch PS, Kaeberlein M. MTOR este un modulator cheie al îmbătrânirii și al bolilor legate de vârstă. Natură. 2013.

33. González A, Sala MN. Sensarea nutrienților și semnalizarea TOR la ​​drojdii și mamifere. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M, et al. TORC1 reglează răspunsul transcripțional la glucoză și ciclul de dezvoltare prin calea Tap42- Sit4-Rrd1/2 în Saccharomyces cerevisiae. BMC Biol. 2021.

35. Van Dijken JP, et al. O comparație interlaboratoare a proprietăților fiziologice și genetice a patru tulpini de Saccharomyces cerevisiae. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Mülleder M, și colab. O colecție de mutanți cu ștergere prototrofică pentru metabolomica drojdiei și biologia sistemelor. Nat Biotechnol. 2012.

37. Alvers AL, et al. Autofagia este necesară pentru extinderea duratei de viață cronologice a drojdiei de către rapamicină. Autofagie. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. Un parametru statistic simplu pentru utilizarea în evaluarea și validarea testelor de screening cu randament ridicat. J Biomol Screen. 1999.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Reglarea metabolismului carbohidraților de către 2,5-anhidro-D-manitol. Proc Natl Acad Sci US A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Mecanismul de acțiune al 2,5-anhidro-D-manitolului în hepatocite. Efectele metaboliților fosforilați asupra enzimelor metabolismului carbohidraților. J. Biol. Chim. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. Inhibarea de către 2,5-anhidromanitol a glicolizei în hepatocite izolate de șobolan și celule de ascită Ehrlich. Proc Natl Acad Sci US A.

42. Hardie DG. Protein kinaze activate de AMP/SNF1: gardieni conservați ai energiei celulare. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK la legătura dintre energie și îmbătrânire. Cell Metab. 2014.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa DG, Zhang BB, Schmidt MC. Analiza genetică a rezistenței și sensibilității la 2-deoxiglucoză în Saccharomyces cerevisiae. Genetica. 2014.

45. Burtner CR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. Un mecanism molecular de îmbătrânire cronologică în drojdie. Ciclul celulei. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie DG. AMPK: detectarea glucozei, precum și a stării energetice celulare. Cell Metab. 2018.

47. González A, Hall MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK și TOR: yinul și yangul de detectare a nutrienților celulari și controlul creșterii. Cell Metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. Fosfatul de dihidroxiacetonă semnalează disponibilitatea glucozei către mTORC1. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Deficiența hormonului de creștere: sănătate și longevitate. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nicotinamidă, nicotinamidă ribozidă și acid nicotinic—roluri emergente în îmbătrânirea replicativă și cronologică a drojdiei. Biomolecule. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD plus metabolismul și rolurile sale în procesele celulare în timpul îmbătrânirii. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021.

52. Spinelli JB, Haigis MC. Contribuțiile multiple ale mitocondriilor la metabolismul celular. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. O perspectivă energetică asupra geroștiinței: forța protonmotivă mitocondrială și îmbătrânirea. Gero-știință. 2021.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Baza mitocondrială a îmbătrânirii. Celula Mol. 2016.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Mitocondriile mamiferelor și îmbătrânirea: o actualizare. Cell Metab. 2017.

56. Bratic A, Larsson NG. Rolul mitocondriilor în îmbătrânire. J Clin Investig. 2013.

57. Chen WL, şi colab. Utilizarea îmbunătățită a fructozei mediată de SLC2A5 este o caracteristică metabolică unică a leucemiei mieloide acute cu potențial terapeutic. Celula canceroasă. 2016.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. Suplimentarea cu fier întârzie îmbătrânirea și prelungește durata de viață celulară prin potențarea funcției mitocondriale. Celulele 11, (2022).

Nota editoruluiSpringer Nature rămâne neutră în ceea ce privește revendicările jurisdicționale din hărțile publicate și afilierile instituționale.

【Pentru mai multe informații: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】