Efectul terapeutic al glicozidelor feniletanoide asupra diszoospermiei induse de ciclofosfamidă la șoareci și mecanismul său

Persoană de contact: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 e-mail:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAO Dong-grindină, ZHANG Lei?, ZHANG Yan², QI Ling', ZOU Xiang-ming'

Rezumat: Obiectiv Explorarea efectului terapeutic al glicozidelor feniletanoide asupra diszoospermiei induse de ciclofosfamidă (CTX) la șoareci și de a elucida preliminar mecanismele implicate în proces. Metode feniletanoid glicozidă a fost extrasă prin extracția etanolului, Patruzeci de șoareci de sex masculin BALB/C au fost împărțiți aleatoriu în grup de control, grup model, doză mică de grup de glicozide fenitanoide (50 mg·kg-I) și doză mare de grup de glicozide feniletanoide (100 mg·kg-). Cu excepția grupului de control, modelul șoarecelui de diszoospermie a fost stabilit prin injectarea peritoneală a CTX la doza zilnică de 80 mg· kg-i, o dată pe zi pentru succesive 5 d. După modelare, glicozidele feniletanoide au fost administrate intragastrically în doze corespunzătoare fiecărui grup de glicozide feniletanoide. Un volum egal de soluție salină normală a fost dat șoarecilor din grupul de control și grupul model de gastrogavaj. Toate medicamentele au fost efectuate o dată pe zi pentru succesive 30 d. Tesutul testiculului a fost obtinut la 24 de ore dupa ultima administrare intragastrica. Nivelul de testosteron din omogenatul țesutului testiculului a fost determinat de testul imunosorbant legat de enzime. Au fost comparate numărul de spermatozoizi, ratele de motilitate și ratele de teratozoospermie în diferite grupuri. Modificările morfologice ale țesutului testiculului au fost observate cu ajutorul colorării HE. Rezultate Comparativ cu grupul de control, numărul de spermatozoizi și rata motilității au fost scăzute, rata teratozoospermia a fost crescută, iar nivelul de testosteron din omogenatul țesutului testiculului a fost scăzut în grupul model(P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Cuvinte cheie: glicozide feniletanoide; ciclofosfamidă; insuficiență spermatogenă; șoareci, BALB /C

Cistanche deserticola are multe efecte, click aici pentru a afla mai multe

Datorită accelerării ritmului social, a obiceiurilor proaste de viață și a poluării mediului, precum și a altor factori, calitatea anormală a spermatozoizilor, cum ar fi oligospermia și astenospermia, a devenit principala cauză a infertilității masculine [1]. În prezent, există mai puține medicamente pentru tratarea oligospermiei și astenospermiei, iar efectul terapeutic nu este evident. Prescripțiile de medicină tradițională chineză sau ingredientele active au efecte bune în îmbunătățirea funcției reproductive masculine [2-6]. Cu toate acestea, datorită varietății largi de medicamente eliberate pe bază de rețetă, relația dintre efectele farmacologice și ingredientele eficiente ale medicamentului nu este clară, ceea ce limitează promovarea și aplicarea medicamentelor spermatogenice. Cercetarea și dezvoltarea ingredientelor eficiente ale medicinei tradiționale chineze și studiul efectelor sale terapeutice în leziunile reproductive au o valoare bună de aplicare. Celglicozide feniletanoideîn Cistanche cistanche sunt unul dintre cele mai importante ingrediente active din Cistanche. Acestea sunt, de obicei, glicozide naturale care conțin legături ester și oxo-glicozide cu β-glucoză ca nucleu. Ele sunt prezente pe scară largă în plantele dicotiledonate 7]. Studiile [8] au arătat că glicozidele fenetanolului Cistanche pot proteja sperma de șobolan de daune oxidative in vitro, dar nu există rapoarte despre spermatogeneza sa. Acest experiment studiază efectele terapeutice ale Cistancheglicozide feniletanoideprivind spermatogeneza șoarecilor cu spermatogeneză indusă de ciclofosfamidă și oferă o bază experimentală și teoretică pentru aplicarea glicozidelor alcoolului fenetil Cistanche în tratamentul tulburărilor de spermatogeneză.

1 Materiale și metode

1.1 Animale experimentale, reactivi principali și instrumente

40 Șoareci adulți SPF BALB/C, 6-8 săptămâni, greutate 20-22 g, achiziționate de la Centrul Experimental Animal al Școlii de Medicină de Bază a Universității Jilin, număr certificat animal: SCXK (Kârgâzstan) 2008-0005. Șoarecii au fost crescuți adaptiv timp de 5 zile înainte de experiment. Condiții de hrănire: 22 °C ~ 25 ° C, ritm circadian (12 h / 12 h), apă potabilă gratuită și alimente. Cistanche este un produs al Xinjiang Dakang Trading Company, ciclofosfamidă pentru injectare a fost achiziționat de la Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co, Ltd. (numărul lotului 11061921), țesutului testicular omogenat testosteron enzimatică legate de imunoteste kit a fost achiziționat de la Tianjin Jiuding Medical Bioingineering Co, Ltd. (numărul lotului 20120812), alți reactivi sunt toate produse pe piața internă clase analitice. Cititor de microplăci PLUS384 (MDC, SUA), microscop inversat TE2000U (Nikon, Japonia), centrifugă J-26XP (Nanodrop, SUA).

1.2 Prepararea cistancheiglicozide feniletanoide

10 g deCistanche tubulosapulbere a fost refluxat cu etanol 70%, de două ori, 2 ore de fiecare dată pentru a obțineglicozidă feniletanoidăconcentrat. Soluția concentrată a fost supusă cromatografiei în coloană de rășină macroporoasă D101 și eluată cu etanol 70% pentru a obțineCistanche glicozidă feniletanoidăalcool. Spectrofotometrul UV a identificat extractul la o lungime de undă de 333 nm.

1.3 Pregătirea modelului animal și a metodelor de administrare

40 de șoareci balb/C de sex masculin au fost hrăniți adaptiv timp de 5 zile, iar șoarecii au fost împărțiți aleatoriu în 4 grupe (10 șoareci din fiecare grup): grup de control, grup model, glicozide fenitanoide cistanche cistanche mici doza, și doze mari cistanche alcool fenetil grup glicozidă. Cu excepția grupului de control, celelalte trei grupuri de șoareci au primit o injecție intraperitoneală de ciclofosfamidă 80 mg·kg-1 pentru fiecare șoarece timp de 5 zile consecutive pentru a pregăti modele animale de tulburare de spermatogeneză. După ce modelul a fost pregătit, șoarecii din grupurile cu doze mici și mari deCistanche feniletanoids-au administrat 50 și, respectiv, 100 mg·kg-'·d-'. , 1 dată pe zi timp de 30 de zile consecutive. Toți șoarecii au fost sacrificați la 24 de ore după ultima administrare și au fost luate teste bilaterale. Testiculul drept a fost fixat în formaldehidă. Epididimul și testiculul au fost luate din partea stângă. Testiculul a fost omogenizat și centrifugat la 3.000 r·min timp de 10 min. Supernatantul a fost luat și depozitat într-un frigider la 20 °C pentru testare. Epididimul stâng a fost testat pentru densitatea spermatozoizilor, motilitatea spermatozoizilor și rata de deformare.

1.4 Determinarea densității spermatozoizilor, motilitatea spermatozoizilor și rata de deformare

Se pune o eprubetă care conține 10 ml de soluție nutritivă pentru spermatozoizi într-o baie de apă cu temperatură constantă pentru a se preîncălzi la 37 °C, se îndepărtează țesutul conjunctiv și grăsimea dintr-o parte a epididimului, se taie țesutul și se pune în eprubetă la 37 ° C timp de 10 minute. După ce sperma este complet liberă, luați 1 picătură pe placa de numărare a celulelor sanguine și calculați densitatea spermatozoizilor în conformitate cu metoda de numărare a celulelor. Rezultatul este exprimat ca numărul de spermatozoizi pe mililitru; în plus, luați 5 μL de suspensie de spermă din eprubetă și amestecați-o cu aceeași cantitate de Eosin-Y Uniform, puneți-o la temperatura camerei timp de 10 minute, adăugați un geam de acoperire și observați cu un microscop ușor. Spermatozoizii morți sunt colorați roz, iar spermatozoizii vii nu sunt colorați, dar citoplasma este transparentă. Numărați 200 de spermatozoizi pe probă, calculați viabilitatea spermatozoizilor, iar rezultatul este exprimat ca procent, viabilitatea spermatozoizilor = un număr de spermatozoizi vii / un număr total de spermatozoizi × 100%. Un alt 5 μL de suspensie de spermă a fost fixat în metanol timp de 5 minute, uscat și colorat cu soluție apoasă de eozină 2% timp de 1 oră, clătit și uscat prin suflare. Căutați părți cu mai puțină suprapunere a spermatozoizilor sub un microscop de putere scăzută și utilizați un microscop de mare putere pentru a verifica morfologia spermatozoizilor în ordine. Fiecare șoarece a inspectat 1000 de spermatozoizi completi. Capetele spermatozoizilor erau neîngrijite, în formă de banană, amorfe, cu cap gras, cu două capete etc. erau judecate ca deformări. Rata de deformare a spermatozoizilor a fost calculată, iar rezultatele au fost exprimate ca procent. Rata de deformare a spermatozoizilor = un număr de spermatozoizi deformați/numărul total de spermatozoizi × 100%.

1.5 Determinarea hormonilor de reproducere

Testiculul a fost decojit și plasat într-un vas pentru flacon, iar mediul de omogenizare pre-răcit (0,01 mol· L-zaharoză, 0,01 mol· L-1Tris-HCl, 0,1 mmol· Soluțiile L-1EDTA-Naz, pH 7,4), taie țesutul testicular cu foarfece oftalmologice, se toarnă într-un tub de omogenizare din sticlă și se omogenizează, se centrifughează la 4 000×g timp de 10 minute la temperatură scăzută, se iau supernatantul și se utilizează reactiv imunosorbant legat de enzime Nivelul de testosteron din omogenatul țesutului testicular a fost determinat de cutie și au fost testate 3 probe paralele pentru fiecare probă. Etapele și metodele experimentale au fost finalizate în conformitate cu instrucțiunile kitului.

1.6 Observarea morfologică a țesutului testicular

Luați secțiuni de parafină din testiculul mouse-ului, petele HE și observați distribuția spermatogonia și a celulelor speratogenice în țesutul testiculului sub microscopul ușor.

1.7 Analiza statistică

Analiza statistică a fost efectuată folosind software-ul statistic SPSS 17.0. Densitatea spermatozoizilor, rata motilității spermatozoizilor, rata de deformare a spermatozoizilor și nivelul de testosteron testicular al șoarecilor din fiecare grup au fost exprimate ca z±s, iar comparația dintre grupuri a fost efectuată prin analiza unidirecțională a varianței.

2. rezultate

2.1 Densitatea spermatozoizilor, viabilitatea spermatozoizilor și rata de deformare a spermatozoizilor pentru fiecare grup de șoareci

Comparativ cu grupul de control, densitatea spermatozoizilor și rata motilității spermatozoizilor din grupul model a scăzut (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Cistanche fenetil alcool glicozidăgrup creșterea densității spermatozoizilor și motilitatea spermatozoizilor (P<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Nivelurile de testosteron în țesuturile testiculelor de șoareci în fiecare grup

Nivelurile de testosteron din omogenizații țesutului testicular din grupul de control și grupul model au fost (10.26±0.57) și (5.33±0.84) nmol· L-", respectiv. Nivelul de testosteron al grupului model a fost semnificativ mai mic decât cel al grupului de control (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Cistanche feniletanoid glicozidăgrup au fost (7.55±1.21) și (10.35±0.94) nmol· L-1. Nivelurile de testosteron de cistanche doze mici și mariglicozidă feniletanoidăgrupurile au fost semnificativ mai mari decât cele ale grupului model (P<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Morfologia testiculului de șoarece în fiecare grupă

Observat printr-un microscop ușor; tubulii spermatogenici din testiculul grupului normal sunt aranjați dens, nivelul și numărul celulelor germinale sunt multe, epiteliul seminifer este aranjat frumos, iar tubulii seminiferi sunt toți formați de spermă. În grupul model, tubulii seminiferi din testiculele șoarecilor au fost atrofiați și degenerați, epiteliul seminifer a fost subțiat semnificativ, numărul de straturi epiteliale a fost redus, aranjamentul a fost dezordonat, iar numărul de spermatozoizi din cavitate a fost redus. Comparativ cu grupul de modele, numărul de tubuli seminiferi și straturi epiteliale seminifere în doze miciCistanche feniletanoid glicozidăgrupul a crescut, aranjamentul epitelial a fost mai regulat, iar deteriorarea tubulilor seminiferi a fost îmbunătățită semnificativ; doza mareCistanche feniletanoid glicozidăgrup îmbunătățit structura tubilor seminiferi mai semnificativ, Numărul și numărul de epiteliu seminifer au crescut semnificativ, ele sunt aranjate îngrijit, există spermatozoizi maturi în tubulii seminiferi, iar structura a revenit practic la normal. A se vedea figura 1 (inserția 6).