Efectul de scădere a acidului uric și mecanismul de acteozid și echinacosid extras din Cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstract:Scopul de a explora efectele și mecanismele de scădere a acidului uric de acteozidă (AS) și echinacosidă (ECH) extrase dinCistanche tubulosa.
MetodeHiperuricemia (HUA) Modelul de șobolan a fost stabilit folosind oxonat de potasiu (1,5 g · kg -1 · d -1) combinat cu adenină (100 mg · kg -1 · d -1). Șobolanii cu model HUA au fost împărțiți aleatoriu într -un grup de control al modelului, un grup alopurinol (30 mg · kg -1 · d -1), la fel de scăzut și înalt (50, 100 mg · kg -1 · d -1} grupuri de doză, iar grupurile de doză scăzute și mari (50, 100, 100 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100 mg · kg -1 · d -1) grupuri de doză. Un grup de control normal a fost stabilit anterior. După patru săptămâni de administrare, analizatorul de biochimie din sânge a fost utilizat pentru a detecta nivelurile Sua Uree, Crea, Adenozina deaminază (ADA) și acidul uric (UUA) în urină. Testul imunosorbent legat de enzimă a fost utilizat pentru a detecta nivelurile de xantină oxidază (XOD) în ser. A fost colectat țesutul rinichilor, iar coeficientul de rinichi a fost cântărit și calculat. Colorarea cu hematoxilină eozină (HE) a fost utilizată pentru a observa modificări patologice renale. Imunohistochimia (IHC) și PCR în timp real au fost utilizate pentru a detecta nivelurile de expresie a proteinei și ARNm ale transportorului de urate 1 (Urat1), transportorului de glucoză 9 (GLUT9), transportorului de anion organic 1 (OAT1) și transportatorului de anion organic 3 (OAT3) în țesutul renală. Rezultatele ca și ECH ar putea îmbunătăți funcția renală la șobolanii cu model HUA, pot reduce nivelul de acid uric din sânge, ar promova excreția de acid uric, reglați nivelul seric de ADA și XOD și reglementați proteina și expresia ARNm a Urat1 și GLUT9 în țesutul renal, în timp ce reglarea proteinei și a expresiei ARNm a OAT1 și OAT3 în țesutul renal.
Concluzii Glicozidele feniletanoide ca și Ech de la Cistanche tubulosa pot exercita efecte de scădere a acidului uric prin îmbunătățirea funcției renale la șobolanii model HUA, reducerea nivelului ADA și XOD și reglarea expresiei Urat1, GLUT9, OAT1 și OAT3.
Cuvinte cheie: Cistanche tubulosa; acteozid; echinacosid; hiperuricemie; reducerea acidului uric; mecanism
Extract Cistanche Tubulosa cu 16% acteozid
Hiperuricemia (HUA) este o boală metabolică cauzată de metabolismul purin dezordonat în corpul uman, ceea ce duce la creșterea nivelului de acid uric din sânge [1]. Este de obicei diagnosticat când nivelurile de acid uric din sânge depășesc 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) la bărbați și 6. 0 Mg · dl⁻¹ (357. 0 μmol·l⁻¹ (357. Dezvoltarea hiperuricemiei este legată în principal de factori precum dietele cu mare purină, consumul cronică de alcool, consumul de medicamente și hipotiroidismul. Nu numai că crește riscul de boli cardiovasculare, diabet și hipertensiune arterială [3-4], dar, de asemenea, are un impact semnificativ asupra sănătății pacienților.
În prezent, tratamentele clinice pentru hiperuricemie includ în principal medicamente care inhibă producția de acid uric și promovează excreția de acid uric. Cu toate acestea, aceste tratamente au anumite limitări pentru pacienții cu funcție de ficat sau rinichi afectat [5-6]. Prin urmare, explorarea medicamentelor eficiente cu efecte secundare scăzute are o importanță deosebită pentru prevenirea și tratamentul hiperuricemiei.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, utilizat frecvent în medicina tradițională chineză ca plantă de tonifiere a rinichilor, este utilizat pentru a trata afecțiuni precum impotența, infertilitatea, deficiența esenței și sângele, slăbiciunea în partea inferioară a spatelui și a genunchilor, slăbiciunea musculară și constipația din cauza uscăturii intestinale [7]. Studiile au arătat căCistanche tubulosaPosedă neuroprotector [8], antiinflamator [9], reglarea metabolismului osoasă [10] și efecte de îmbunătățire a eficacității la chimioterapie pentru pacienții cu cancer [11]. Printre diversele sale componente active, glicozidele feniletanoide sunt cele mai abundente.
Acteoside (AS) și echinacosidă (ECH), două glicozide feniletanoide cu conținut ridicat înCistanche tubulosa, prezintă o activitate biologică puternică și deține un potențial semnificativ de dezvoltare și aplicare. În consecință, grupul nostru de cercetare a selectat AS și ECH pentru studii suplimentare. Prin predicții de farmacologie de rețea și pre-experimente la șoareci, am descoperit că extractele de glicozidă feniletanoidă dinCistanche tubulosapoate avea un anumit efect de scădere a acidului uric. Cu toate acestea, căile și mecanismele acestor efecte rămân neclare.
Astfel, folosind mecanismele producției de acid uric și căile sale de excreție primară ca focalizare a cercetării, am investigat efectele de scădere a acidului uric al extractelor de glicozid feniletanoid ca și Ech. Acest studiu își propune să elucideze căile și mecanismele prin care ca și ECH își exercită efectele de scădere a acidului uric.
1 Materiale
1.1 Animale experimentale
Șaptezeci de șobolani masculi SPF-grade SPF-Dawley (SD), cu o greutate de 150-180 g, au fost achiziționate de la Centrul de animale experimentale al Universității Medicale Xinjiang. Numărul licenței de producție de animale: scxk (xin) 2023-0001. Acest experiment a fost aprobat de Comitetul de Etică Animală al Institutului de Cercetare a Medicinei Uygur Medicine din regiunea autonomă Xinjiang, cu numărul de aprobare a eticii animale: IACUC- (ZHUN) -2024-009.
1,2 medicamente și reactivi
Extracte de glicozidă feniletanoidă (AS și ECH)dinCistanche tubulosa (purity >98%, verificate prin cromatografie lichidă de înaltă performanță) au fost extrase, purificate și preparate de laboratorul cheie al științei formulării Uygur, Institutul de Cercetare a Medicinei Uygur din regiunea Xinjiang. Numere de lot: 20220617 (AS) și 20220526 (ECH).
Tablete cu alopurinol, Numărul lotului: 62208726, fabricat de Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Oxonat de potasiuşiAdenină, numere de lot: I2130050 și C2202255, achiziționate de la Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
CREA (creatinină), UA (acid uric), uree și ADA (adenozină deaminază) kituri de analiză, numere de lot: 141123010, 141223004, 141323008 și 043624005, achiziționate de la Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Kit de analiză a activității XOD (xantină oxidază), Numărul lotului: Y10001219, achiziționat de la Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Anticorpi (Urat1, GLUT9, OAT1, OAT3), numere de lot: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2i44618, achiziționată de la Affinity Biosciences.
IgG anti-iepure marcat cu HRP, Numărul lotului: 245440113, achiziționat de la ZSGB-BIO.
Soluție de colorare a hematoxilinei, Numărul lotului: 24135741H, achiziționat de la Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
Kit de reactivi cromogeni DAB, Numărul lotului: 240010512, achiziționat de la ZSGB-BIO.
DEPC (pirocarbonat dietil), numărul de catalog: D 60029-500 ml, achiziționat de la Amresco (SUA).
M5 Hiclear DL2000 ADN marker, numărul de catalog: MF025, achiziționat de la Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Reactiv TRIZOL ™, numărul de catalog: 15596026, achiziționat de la Thermo Fisher Scientific (SUA).
5x All-in-One RT MastermixşiEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, numere de catalog: G492 și G891, ambele achiziționate de la Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 metode
2.1 Model de înființare și grupare
Șaptezeci de șobolani masculi Sprague-Dawley (SD) au fost aclimatizați și împărțiți în două grupuri: un grup de control normal (1 0}) și un grup de control al modelului (60 de șobolani). Grupul de control normal a fost administrat 0,5% CMC-NA prin Gavage. Grupul de control al modelului a fost administrat oxonat de potasiu (1,5 g · kg⁻¹) combinat cu adenină (100 mg · kg⁻¹) la o doză de 10 ml · kg⁻¹, o dată pe zi timp de 14 zile consecutive. Modelul a fost considerat stabilit cu succes atunci când nivelurile de uree, Crea și SUA au crescut semnificativ, măsurată de un analizor biochimic.
The hyperuricemia model rats were further divided into the following groups based on SUA, UREA, and CREA levels: model control group, allopurinol group (30 mg·kg⁻¹), low-dose AS group (50 mg·kg⁻¹), high-dose AS group (100 mg·kg⁻¹), low-dose ECH group (50 mg·kg⁻¹), and high-dose Ech Group (100 mg · kg⁻¹), cu 10 șobolani în fiecare grup. Pentru a menține hiperuricemie stabilă, toate grupurile, cu excepția grupului de control normal, au fost administrate oxonat de potasiu (500 mg · kg⁻¹) combinate cu adenină (100 mg · kg⁻¹) prin Gavage dimineața, urmată de administrarea medicamentelor respective în fiecare grup de tratament după -amiaza. Grupul de control normal a primit 0,5% soluție CMC-NA dimineața și apă potabilă după-amiaza, la o doză de 10 ml · kg⁻¹, o dată pe zi pentru 14 zile consecutive. După aceea, administrarea de agenți de modelare a fost oprită, iar medicamentele respective au fost administrate continuu zilnic timp de 14 zile suplimentare.
2.2 Colectarea eșantionului
După doza finală, șobolanii au fost postați peste noapte (apa nu a fost restricționată). Urina din fiecare grup a fost colectată pentru testarea acidului uric. Greutatea corporală a fost măsurată după post, iar probele de sânge au fost colectate sub anestezie. Serul a fost separat prin centrifugare și păstrat pentru utilizare viitoare. Țesuturile renale au fost colectate și cântărite. Un rinichi a fost fixat într-o soluție de paraformaldehidă de 4%, în timp ce celălalt a fost înghețat în azot lichid pentru analize suplimentare.
2.3 Măsurarea acidului uric în urina de șobolan
Probele de urină din fiecare grup au fost centrifugate (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raza de centrifugă 14 cm), iar supernatantul a fost colectat. Probele de urină au fost diluate 1: 9 cu soluție salină și analizate pentru conținutul de acid uric folosind un analizor biochimic.
2.4 Măsurarea ADA, Urea, Crea și Sua în serul de șobolan
Probele de sânge din fiecare grup au fost centrifugate (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raza de centrifugă 14 cm) și s -a colectat ser. Nivelurile ADA, uree, Crea și Sua în ser au fost măsurate folosind un analizor biochimic.
2,5 Măsurarea XOD în serul de șobolan
Modificările nivelurilor XOD în serul de șobolan au fost măsurate folosind un test enzimatic în conformitate cu instrucțiunile producătorului. S -a înregistrat absorbția inițială (A₁) și absorbția finală (A₂) la 290 nm și ΔA (ΔA=a₂ - a₁) a fost calculată. ΔA a fost înlocuit în formula:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × sistem de reacție Volumul total ÷ (coeficientul de extincție molară de acid uric × lungimea căii optice) × 10⁹] ÷ volum de probă ÷ timp=4262 × ΔA,
Pentru a calcula cantitatea de acid uric catalizat pe minut pe mililitru de ser.
2,6 Măsurarea coeficientului de rinichi
Țesuturile renale au fost colectate, spălate cu soluție salină și excesul de apă a fost îndepărtată. Greutatea organului a fost măsurată cu exactitate, iar coeficientul rinichilor a fost calculat după cum urmează:
Coeficientul de rinichi=Greutate renală (mg) / greutate corporală (g).
2.7 Observarea histopatologică a țesutului rinichi prin colorare
Țesuturile renale fixate într -o soluție de paraformaldehidă de 4% au fost deshidratate cu concentrații de etanol gradate, curățate cu xilen, încorporate în parafină și secționate în felii 4- μm. Secțiunile au fost deparafinizate cu xilen, hidratate cu etanol gradat, colorate cu hematoxilină și eozină (HE) și sigilate cu gumă neutră. Modificările morfologice ale țesutului rinichi au fost observate la un microscop ușor, iar imaginile au fost capturate la mărire 400 ×.
2.8 Detectarea expresiei proteice Urat1, GLUT9, OAT1 și OAT3 în țesutul rinichilor de către IHC
Țesuturile renale fixate în soluție de 4% paraformaldehidă au fost deshidratate cu concentrații de etanol gradate, curățate cu xilen, încorporate în parafină și secționate. Au fost efectuate regăsirea antigenului și blocarea serului de capră. Au fost adăugați anticorpi primari (Urat1, GLUT9, OAT1, OAT3) la o diluție 1: 200 și incubate peste noapte la 4 grade. A doua zi, secțiunile au fost spălate cu PBS, uscate cu aer și incubate cu IgG anti-iepure de capră marcată cu biotină la 37 de grade timp de 30 de minute. Secțiunile au fost spălate cu PBS și incubate cu reactiv cromogen DAB timp de 10 minute, urmată de clătirea PBS, colorarea cu hematoxilină timp de 3 minute, diferențierea cu soluția de etanol cu acid clorhidric, albastru de carbonat de litiu, deshidratare cu etanol gradient, curățare cu xilenă și sigilare cu gumă neutră.
Pentru fiecare șobolan, au fost selectate două câmpuri aleatorii 4 0 0 × câmpuri ale secțiunilor renale. Colorarea pozitivă (galben-maro) a fost analizată, iar densitatea optică integrată (IOD) a fiecărui câmp a fost măsurată folosind Image-Pro Plus 6.0 pentru analiza statistică.
