Polizaharidele Cistanche Deserticola au un efect neuroprotector

pentru mai multe informații:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu și colab

Abstract:

Accidentul vascular cerebral ischemic este o boală cu morbiditate și mortalitate ridicată.Cistanchedeserticolapolizaharide(CDP) posedă o gamă largă de efecte benefice, inclusiv hepatoprotecția și homeostazia imună. Din câte știm, efectul protector al CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)pe neuronii afectați de privarea/reperfuzia de oxigen-glucoză (OGD/RP) nu a fost investigat. În acest studiu, OGD/RP a rănit un model de celule PC12. Pe scurt, CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)({{0}},05, 0,5 și 5 ug/ml) a fost administrat înainte de reperfuzie. Efectul protector al CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a fost apoi evaluată pe baza viabilității celulare, scurgerii de lactat dehidrogenază (LDH), [Ca2 plus ] I, potențialul membranei mitocondriale (MMP) și apoptoza celulară și starea redox după reperfuzie a fost evaluată prin testarea speciilor reactive de oxigen (ROS), catalazei ( CAT), glutation peroxidază (GSH-Px) și capacitate antioxidantă totală. Pe baza faptului că proteina asociată bolii Parkinson DJ-1 participă la antioxidarea endogenă și efectueazăneuroprotectorefectele după ischemiastroke, am investigat interacțiunea dintre CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)și DJ{{0}}. Expresia DJ-1 a fost detectată prin ELISA și analiză Western blot, iar translocarea DJ-1 a fost evaluată prin imunofluorescență. Rezultatele au arătat că CDP (0,05, 0,5 și 5 ug/ml) a atenuat moartea celulelor PC12, a păstrat MMP și homeostazia calciului; a inhibat stresul oxidativ și a scăzut apoptoza celulară. În plus, CDP (5 ug/ml) a stimulat semnificativ secreția și expresia DJ-1. În general, rezultatele au sugerat că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)exercită aneuroprotectorefect împotriva leziunilor induse de OGD/RP prin inhibarea stresului oxidativ și reglarea căii DJ-1

Cuvinte cheie:Cistanche deserticola, Polizaharide, Neuroprotectoare, Privare/reperfuzie de oxigen glucoză, Stres oxidativDJ-1

Faceți clic pentru produsele Cistanche UK

1. Introducere

Accidentul vascular cerebral ischemic este a doua cauză principală de mortalitate și cauza principală a dizabilității pe termen lung la nivel global [1]. Decesul din cauza accidentului vascular cerebral este de așteptat să crească la 7,8 milioane în 2030 [2]. În China, între 58 și 142 la 100,000 oameni mor din cauza accidentului vascular cerebral în fiecare an. Astfel, trebuie dezvoltate strategii eficiente care să inverseze leziunea ischemie-reperfuzie. Dovezi extinse susțin că stresul oxidativ este un factor major care promovează dezvoltarea și progresia infarctului cerebral în timpul reperfuziei[3,4]. Prin urmare, descoperirea eficientăneuroprotectoragenții capabili să reducă ROS și să suprima stresul oxidativ a atras un interes considerabil în cercetare. ProteinaDJ-1 asociată bolii Parkinson mediază neuroprotecția prin stimularea expresiei genelor anti-apoptotice și antioxidante [4,5]. DJ-1 poate fi translocat în mitocondrii prin stres oxidativ și stimulare mitogenă și poate fi secretat în matricea extracelulară în condiții patologice, cum ar fi cancerul de sân, melanomul și leziuni OGD/RP [6]. Mai mult, DJ-1 este util în țintirea terapeutică pentru neurodegenerarea ischemică datorită rolului său critic în antioxidare [4,7]. În ultimii 10 ani, mai multe grupuri au confirmat că DJ-1 a făcut-oneuroprotectorefecte asupra modelelor de ischemie cerebrală in vivofocală și modelelor OGD/RP in vitro [6–9]. Între timp, unele medicamente, inclusiv ciclosporina A și fenilbutirat de sodiu, abrog moartea celulelor neuronale prin intermediul inischemiei de reglare DJ-1 [9,10] ].

Cistanchedeserticola, planta integrală uscată aCistanchedeserticolaYCMa și Cistanche tubulosa Wight, este produsă în principal în zonele deșertice din nordul și nord-vestul Chinei [11]. C. deserticola este comestibilă și a fost onorat drept „Ginsengul deșerților”. În prescripție de acupunct, este utilizat ca tratament pentru boli renale cronice, impotență sexuală, infertilitate feminină, leucoree, metroragie și constipație senilă [12].C. polizaharide deserticola, o componentă activă majoră izolată dinCistanche deserticola. CDP, modulează funcția imunitară și echilibrul lipidic și oferă protecție împotriva îmbătrânirii, oxidarii și leziunilor hepatice. În plus, CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)previne leziunile de ischemie-reperfuzie la nivelul inimii și ficatului [13,14]. Studii recente au raportat că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)sunt netoxice[12,15,16] și alte substanțe fitochimice extrase din C. Deserticola, inclusiv echinacozide, izoacteozide, acteozide și salidrozide, prezintăneuroprotectorefecte [11,12]. Cu toate acestea, utilizarea potențială a CDP pentru ameliorarea leziunilor ischemice accident vascular cerebral nu a fost raportată până în prezent.

În studiul de față, formulăm ipoteza că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)inhibă stresul oxidativ pentru neuroprotecție. Efectele potențiale de protecție ale CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)afectarea accidentului vascular cerebral inischemie a fost examinată utilizând celule PC12 lezate OGD/RP. Au fost apoi explorate interacțiunile de bază asociate cu DJ-1.

2. Metode

2.1. Cultură celulară și model OGD/RP

Celulele PC12 au fost cultivate în mediu RPMI 1640 care conține 10% FBS la 37 de grade într-un incubator normoxic care conține 5% CO2. Mediul a fost înlocuit la fiecare 48 de ore. A fost elaborat modelul OGD/RP. Celulele PC12 au fost spălate și expuse la soluția echilibrată de sare a lui Earle. Apoi, celulele au fost transferate într-o cameră anaerobă care conține 5% CO2 și 95% N2 la 37 de grade timp de 4 ore și apoi au fost lăsate să sufere reoxigenare. În timpul acestei etape, același volum de mediu de cultură a fost adăugat la celule. După reoxigenare, celulele au fost plasate într-un incubator normoxic timp de 24 de ore.

2.2. Administrarea medicamentelor

CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a fost achiziționat de la Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, China (C23J7Y18405, puritate > 98%). Nimodipina, un medicament preventiv de primă linie pentru accidentul vascular cerebral ischemic, a fost utilizat ca compus de control pozitiv [17-19]. Nimodipină injectată a fost de la Bayer Company. Celulele au fost împărțite aleatoriu în șase grupuri, și anume, control, vehicul (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)(0,5 ug/ml) și CDP (5 ug/ml). Nimodipină și CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)au fost adăugate înainte de reperfuzie. Grupul de control a fost cultivat într-un mediu normal și incubat într-o stare normoxică.

2.3. Viabilitatea celulară: teste MTT și NRU

Celulele PC12 (6 × 103 per godeu) au fost însămânțate într-o placă de cultură 96-godeuri. Celulele au fost tratate în conformitate cu cerințele fiecărui grup. MTT (Solarbio, China) a fost adăugat la celule la o concentrație de 5 mg/ml și incubat timp de 4 ore la 37 de grade. Formazanul este produsul de reducere al succinat dehidrogenazei în celulele vii [20]. S-a adăugat DMSO pentru dizolvarea formazanului albastru generat. Absorbanța la lungimea de undă de 490 nm a fost detectată cu Microplate Reader (Thermo, SUA) după ce celulele au fost agitate timp de 10 minute la 25 de grade. Rezultatele viabilității celulare s-au manifestat ca procent din grupul de control [21].

Testul de captare a roșului neutru (NRU) a fost efectuat conform protocolului publicat anterior [22]. Când perioadele de reperfuzie s-au încheiat, roșu neutru (Solarbio, China) a fost adăugat celulelor la o concentrație de 50 ug/ml. Amestecul a fost incubat timp de 3 ore. Apoi, celulele au fost spălate rapid cu o soluție care conține 0,5% formaldehidă și 1% clorură de calciu. Celulele au fost apoi adăugate la un amestec care conține 1% acid etilic și 50% anhidruetanol. Plăcile au fost citite la o absorbanță de 540 nm după ce celulele au fost agitate timp de 20 de minute la 37 de grade. Rezultatele viabilității celulare s-au manifestat ca procent din lotul martor.

polizaharide de Cistanche deserticolaia oEfect neuroprotector

2.4. Evaluarea citotoxicității

LDH este o enzimă citoplasmatică care catalizează oxidarea lactatului topiruvat. LDH este eliberată rapid în lichidul extracelular atunci când membrana celulară este deteriorată. Prin urmare, detectarea LDH este de obicei efectuată pentru evaluarea citotoxicității. [23]. Procedura experimentală a urmat instrucțiunile kitului comercial furnizate de kitul de testare LDH (Jiancheng, China). Absorbanța fiecărei probe a fost detectată la 440 nm cu un cititor de microplăci. Procentul de moarte celulară a fost calculat utilizând următoarea formulă: Viabilitate (procent)=(tratament OD - martor tratament ODT)/(activitate OD Max LDH - OD Max activitate LDH) × 100 la sută .

2.5. Detectarea concentrației intracelulare de Ca2 plus

Concentrația intracelulară de Ca2 plus a fost măsurată cu Fluo-3/AM [15]. Celulele PC12 au fost spălate cu PBS de trei ori și apoi incubate cu 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, China) timp de 30 de minute la 37 de grade în întuneric. Celulele au fost apoi spălate cu PBS de trei ori pentru purjarea colorantului extracelular. Intensitatea fluorescenței Fluo-3/AM a fost determinată pe un microscop confocal cu scanare laser (Olympus, Japonia). Pachetul software Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer și ImageJ au fost utilizate pentru calcularea valorilor pe scară de gri

2.6. Măsurarea MMP

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetracloro-1,1′,3,3′-tetraetil-imidacarbocianina; Beyotime, China) este o sondă convenabilă, sensibilă la tensiune, utilizată în general pentru colorare celule și evaluarea MMP [24]. Celulele PC12 au fost spălate de două ori cu PBS rece și apoi incubate cu un amestec care conține 50% mediu și 50% lichid de lucru timp de 15 minute la 37 de grade în întuneric. Apoi, amestecul a fost aruncat și înlocuit cu un mediu proaspăt. Imaginile cu fluorescență roșie și verde au fost capturate prin microscopie confocală cu scanare laser. Proporția relativă de semnale de fluorescență roșu și verde a fost utilizată pentru măsurarea MMP [25]. Pachetul software Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer și ImageJ au fost utilizate pentru calcularea valorilor pe scară de gri.

2.7. Test de detectare a apoptozei, Hoechest33342 și analiza citometriei în flux

Hoechst33342, un colorant de legare la ADN, a fost utilizat pentru examinarea apoptozei celulare [26]. După reperfuzie, celulele PC12 au fost spălate cu PBS de trei ori și incubate cu Hoechst33342 (Beyotime, China) la o concentrație de 5 ug/ml timp de 15 minute la 37 de grade în întuneric. Apoi, celulele au fost observate la un microscop confocal cu scanare laser. Celulele teapoptotice au prezentat fluorescență albastră intensă și condensare a nucleului. Pentru fiecare experiment de colorare, au fost capturate și cuantificate trei câmpuri aleatorii. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer și ImageJ au fost utilizate pentru calcularea valorilor pe scară de gri. Procentele celulelor apoptotice au fost calculate prin următoarea formulă: cantitate apoptotică/cantitate totală × 100 la sută [27].

2.8. Măsurarea generării ROS

Sonda fluorescentă 2′,7′-diacetat de diclorofluoresceină (DCFH-DA; Jiancheng, China) poate pătrunde în membranele celulare și poate fi hidrolizată la DCFH nefluorescent. DCFH este oxidat de ROS intracelular DCF tofluorescent [29]. După reperfuzie, celulele au fost spălate de două ori cu PBS și apoi incubate cu DCFH-DA la o concentrație finală de 10 μM timp de 45 de minute la 37 de grade în întuneric. Fluorescența a fost observată cu un spectrofotometru de afluorescență cu o lungime de undă de excitație de 485 nm și o lungime de undă de emisie de 535 nm.

polizaharide de Cistanche deserticolaia oEfect neuroprotector

2.9. Determinarea indicatorilor de stres oxidativ: CAT, GSH-Px și T-AOClevels

Celulele au fost răzuite și resuspendate în PBS. Suspensiile de celule obţinute au fost supuse cu ultrasunete de 45 de ori pe gheaţă şi centrifugate la 1000r/min timp de 10 minute la 4 grade. Supernatanții au fost reținuți și folosiți pentru detectare [24]. Conținutul total de proteină al supernatantului celular a fost măsurat cu un kit de reactiv pentru analiza proteinei BCA (KeyGEN, China). Activitățile nivelurilor CAT, GSH-Px și T-AOC au fost măsurate conform instrucțiunilor producătorilor (Jiancheng, China). Absorbanța fiecărei probe a fost detectată cu un cititor de microplăci.

2.10. Măsurarea concentrației extracelulare de DJ-1

Celulele PC12 (6 × 103 per godeu) au fost însămânțate în 96-plăci de cultură de godeuri. După reperfuzie, supernatantul celular a fost colectat și analizat de DJ-1/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, SUA ) conform instrucțiunii producătorului [9]. Absorbanța fiecărei probe a fost detectată cu Microplate Reader la o lungime de undă dublă de 450 nm sau 540 nm.

2.11. Analiza Western blot

Proteinele celulare au fost extrase cu tampon de liză rece ca gheață conform instrucțiunilor producătorilor (KeyGEN, China). Concentrația de proteine ​​a fost determinată cu un kit de reactivi pentru analiza proteinei BCA. Cantități egale de lizate de proteine ​​(20 ug) din fiecare grup au fost rezolvate prin electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă 12% și ulterior transferate pe o membrană de nitroceluloză. Membrana a fost incubată cu PBS care conține 5% lapte degresat timp de 2 ore la temperatura camerei și apoi testată cu anticorpi anti-PARK7/DJ-1 (ab76008, Abcam; diluție 1:1000) peste noapte la 4 grade. Apoi, membrana a fost spălată de trei ori cu PBST și incubată cu anticorp secundar de capră anti-iepure IgG (SA00001-2, Proteintech Group; diluție 1:5000) la temperatura camerei timp de 2 ore. Anticorpul anti- -Tubulină (10759-1-AP, Proteintech Group; diluție 1:1000) a fost considerat drept martor. Benzile de proteine ​​au fost vizualizate prin reactivi de reacție de chemiluminiscență îmbunătățită (ECL). Densitățile benzilor au fost măsurate cu software-ul QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Analiza imunocitochimică

Celulele PC12 au fost fixate în paraformaldehidă 4% timp de 15 minute la temperatura camerei după tratamentul de reperfuzie [9]. După ce excesul de paraformaldehidă a fost îndepărtat, celulele au fost incubate în PBS care conține 0,3 procente Triton X{-100 timp de 10 minute la temperatura camerei. Apoi, celulele au fost spălate cu PBS de trei ori înainte de a fi incubate cu 5% ser normal de capră timp de 1 oră. Celulele au fost apoi incubate cu lanț monoclonal anti-ATP sintetază de șoarece de iepure (MABS1304, EMD Millipore, diluție 1:200) pentru colorarea mitocondriilor și ulterior incubate cu anticorp anti-PARK7/DJ-1 (diluția 1: 100) pentru sondarea proteinei DJ-1. Celulele au fost spălate și incubate cu IgG de capră anti-iepure-Alexa 488 (verde; A11034, Invitrogen; diluție 1:1000) și IgG de capră anti-șoarece-Alexa 594 (roșu; A11032; Invitrogen; diluție 1:1000) pentru 1:1000) min. În cele din urmă, celulele au fost spălate de trei ori cu PBS și montate pe lame de sticlă cu un mediu de montare care conține DAPI. Imaginile imunofluorescente au fost vizualizate folosind un microscop confocal cu scanare laser.

polizaharide de Cistanche deserticolaia oEfect neuroprotector

2.13. Date/analiza statistică

Toate valorile au fost prezentate ca medie ± SD. Semnificația a fost determinată de o analiză unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul de comparație multiplă Dunnett. p < .05="" a="" fost="" considerată="" semnificație="" statistică.="" datele="" experimentale="" au="" fost="" analizate="" folosind="" software-ul="" statistic="" spss="">

3. Rezultate

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a inhibat deteriorarea celulară indusă de OGD/RP

Celulele PC12 expuse la OGD/RP au prezentat o scădere semnificativă a numărului. Forma celulei a fost schimbată și membrana celulară a fost ruptă. În testul MTT, viabilitatea celulelor în CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile ({{0}},05, 0,5 și 5 ug/ml) au fost 58,91 la sută ± 5,40 la sută, 61,13 la sută ± 3,81 la sută și, respectiv, 68,57 la sută ± 3,24 la sută, p < 0,05="" (fig.="" 1a)="" ,="" iar="" cel="" cu="" vehicul="" a="" avut="" 51,68="" la="" sută="" ±="" 3,89="" la="" sută="" .="" aceste="" valori="" au="" indicat="" că="">(Cistanchedeserticolapolizaharide)a protejat celulele împotriva leziunilor OGD/RP și a scăzut moartea celulară. În plus, viabilitatea celulară în grupul Nimo a fost de 77,02 la sută ± 5,22 la sută, ceea ce este aproape egal cu cea din CDP de 5 ug/ml.(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupul tratat.

În testul NRU, viabilitățile celulelor din CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile ({{0}},05, 0,5 și 5 ug/ml) au fost 52,03 la sută ± 4,72 la sută, 58,49 la sută ± 2,50 la sută și, respectiv, 69,17 la sută ± 3,91 la sută, (Fig. 1B) și că cu vehicul a avut 47,14 la sută ± 2,88 la sută . Valorile au indicat efectul protector dependent de concentrație al CDP.

Spre deosebire de un vehicul (44,73 la sută ± 3,30 la sută), eliberarea de LDH a fost redusă semnificativ în CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupuri. În CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile ({{0}},05, 0,5 și 5 ug/ml), ratele de scurgere a LDH au fost de 32,41 la sută ± 3,70 la sută, 27,13 ± 2,79 la sută și, respectiv, 23,13 la sută ± 4,59 la sută, p < 0,01="" (fig.="" .1c).="" mai="" mult,="" ratele="" de="" scurgere="" a="" ldh="" în="" grupul="" nimo="" au="" fost="" de="" 21,99%="" ±="" 4,02%,="" ceea="" ce="" a="" fost="" aproape="" egal="" cu="" cel="" din="" grupul="" tratat="" cu="" 5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)creșterea atenuată a [Ca2 plus ]i indusă de OGD/RP

Nivelurile intracelulare de Ca2 plus din celulele PC12 au fost crescute la 4146,60 ± 195,97 după leziunea OGD/RP, spre deosebire de grupul de control (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile ({{0}},05, 0,5 și 5ug/ml) ar putea scădea în funcție de doză nivelul de Ca2 plus intracelular la 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 și, respectiv, 1768,43 ± 426,43 ± 426,12A (Fig. ). Mai mult, nivelul de Ca2 plus în grupul tratat cu 5 ug/ml CDP a scăzut la un nivel comparabil cu cel din grupul Nimo (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)disiparea MMP indusă de OGD/RP atenuată

Comparativ cu grupul de control (1,67 ± 0,89), grupul de vehicule (0,48 ± 0,1{0) a prezentat mai multă fluorescență verde FL decât roșu FL fluorescență (Fig. 2B și D). Raporturile dintre fluorescența FL roșie și verde au scăzut la 1,11 ± 0,26 și 1,18 ± 0,16 în CDP de 0,5 și 5 ug/ml(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupele tratate respectiv, p < .01.="" fluorescența="" verde="" fl="" a="" fost="" semnificativ="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a prevenit apoptoza celulară indusă de OGD/RP

Celulele care prezintă cromatine condensate sau nuclee fragmentate au fost marcate ca celule apoptotice [30]. Rezultatele testului Hoechst33342 au evidențiat apariția nucleelor ​​condensate după OGD/RP (Fig. 3A și C). O intensitate ridicată a fluorescenței FL a fost observată în nucleele din grupul vehicul. Intensitatea fluorescenței FL a nucleelor ​​a fost slăbită în CDP de 5 ug/ml(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupul tratat. Am analizat rata apoptotică în celulele PC12 prin citometrie colegilor utilizând colorarea dublă FITC-Annexin V/PI (Fig. 3B și D). Grupul de control a avut o rată de apoptoză celulară de 4,16% ± 0,24%, în timp ce grupul vehicul a avut 22,98% ± 0,66% . În grupul tratat cu 5 ug/ml CDP, rata apoptozei celulare a fost de 7,86 la sută ± 1,16 la sută.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)acumularea intracelulară de ROS indusă de OGD/RP și starea redox păstrată

Efectele CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)asupra stresului oxidativ au fost demonstrate pe baza generării de ROS, a activităților GSH-Px, CAT și a nivelurilor de T-AOC. Nivelurile ROS din celulele PC12 lezate de OGD/RP au crescut și au devenit semnificativ mai mari decât cele din grupul de control (p < 0,01).="" între="" timp,="" nivelurile="" ros="" din="">(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile ({{0}}.05, 0.5 și 5 ug/ml) au scăzut într-o manieră dependentă de doză (p <.01; fig.="" 4a).="" în="" plus,="" cdp="" a="" crescut="" semnificativ,="" de="" asemenea,="" nivelurile="" t-aoc="" (p=""><.05; fig.="" 4b),="" cat="" (p=""><.05; fig.="" 4c)="" și="" gsh-px="" (p=""><.05; fig.="" 4d)="" în="" comparație="" cu="" vehiculul="" grup.="" activitățile="" antioxidanților="" endogeni="" în="">(Cistanchedeserticolapolizaharide)grupurile au crescut.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a stimulat secreția de DJ-1 și a îmbunătățit expresia DJ-1

Au fost detectate modificări ale concentrației DJ-1 în supernatantul celular și au dezvăluit posibila relație dintre DJ-1 și CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide). S-a observat eliberarea DJ-1 din celulele PC12 lezate de OGD/RP (Fig. 5). DJ-1 a fost considerabil supra-reglat în CDP de 5 ug/ml(Cistanchedeserticolapolizaharide)-grupul tratat (38,66 ± 8,44 pg/ml) și a crescut semnificativ față de grupul vehicul (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) și grupul martor (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

Pentru a investiga efectele CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)asupra expresiei intracelulare a DJ-1, am măsurat nivelurile de proteine ​​DJ-1 prin Western blot. Nivelurile de expresie a proteinei DJ-1 au crescut semnificativ la 24 de ore după reperfuzie. Prin contrast, post-tratamentul de 5 ug/ml CDP a îmbunătățit semnificativ supraexprimarea DJ-1 în comparație cu grupul de vehicul (p <.01, fig.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)translocare îmbunătățită a DJ-1 în mitocondrii

Celulele PC12 au fost colorate cu anticorpi anti-PARK7/DJ-1 și anti-ATP sintază (Fig. 7 și 8). Anticorpul anti-ATP sintetaza - lanț se leagă de complexul I mitocondrial, iar antigenul de legare a fost localizat în membrana interioară mitocondrială. Rezultatele au arătat că DJ-1 s-a translocat în membrana interioară mitocondrială în urma insultei OGD/RP (Fig. 8). Între timp, rezultatele colorării duble DJ-1 și mitocondriilor au arătat că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a facilitat translocarea și co-localizarea mitocondrială DJ- 1 (Fig. 8). Aceste rezultate au indicat o interacțiune directă între DJ-1 șineuroprotectorefectul CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)(Fig. 9).

4. Discutie

În acest studiu, am raportat direct că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)reduce eficient daunele celulelor PC12 induse de OGD/RP prin reglarea în creștere a proteinei DJ-1. CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)a îmbunătățit viabilitatea celulară, a redus deteriorarea membranei celulare, a menținut Ca2 intracelular plus homeostazia, a prevenit pierderea MMP, a scăzut apoptoza celulară, a suprimat stresul oxidativ, a promovat expresia DJ-1 și a îmbunătățit translocarea DJ-1 în mitocondrii. DJ-1 a fost recent implicat în reglementareaneuroprotectorefect și integritate mitocondrială. Aceste rezultate au oferit dovezi convingătoare aleneuroprotectorefectele CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)împotriva ischemiei. În plus, interacțiunea dintre CDP și DJ-1 redă aneuroprotectorrol în deteriorarea celulelor PC12 indusă de OGD/RP. Rezultatele de mai sus ne pot dezvolta înțelegerea efectului benefic al CDP și pot oferi informații utile pentru terapia accidentului vascular cerebral în viitor.

Accidentul vascular cerebral ischemic a fost atribuit unei serii complexe de mecanisme biochimice și moleculare, inclusiv excitotoxicitatea, supraîncărcarea cu calciu și stresul oxidativ [31]. OGD/RP este utilizat pe scară largă ca model in vitro de ischemie-reperfuzie și este utilizat pentru explorarea modificărilor neurologice și biochimice. Linia celulară PC12 este sensibilă la leziuni OGD/RP [2]. Prezintă o serie de proprietăți și caracteristici ale neuronilor simpatici [32] și, prin urmare, linii de celule neuronale utilizate pe scară largă pentru cercetarea legată de mecanismele de afectare neurologică din cauza accidentului vascular cerebral [33,34]. Numeroase studii au indicat că stresul oxidativ joacă un rol vital în accidentul vascular cerebral și afectarea ischemiei cerebrale [35–37]. Proteina DJ asociată bolii Parkinson-1 poate inhiba neurodegenerarea ischemică și disfuncția comportamentală prin reducerea leziunii neuronale mediate de ROS [7]. Prin urmare, am folosit modelul de celule PC12 cu leziuni OGD/RP pentru a investiganeuroprotectorefectul CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide).

Gradul de leziune în celulele PC12 indus de OGD/RP a fost evaluat prin teste de eliberare MTT, NRU și LDH. Administrarea CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)({{0}},05, 0,5 și 5 ug/ml) a îmbunătățit supraviețuirea celulară și a scăzut eliberarea de LDH. Efectele benefice ale tratamentului cu CDP au inclus, de asemenea, o scădere a supraîncărcării intracelulare de calciu și conservarea MMP. Anomaliile concentrației intracelulare de Ca2 plus, în special supraîncărcarea mitocondrială cu calciu, au fost legate de apoptoza neuronală și moartea indusă de accidentul vascular cerebral de ischemie [38]. MMP poate reflecta eficiența lanțului de transport de electroni și a fost indicat ca un indice de tulburare patologică a acestui sistem [39]. Ambele creșteri ale concentrației intracelulare de Ca2 plus și pierderea de MMP pot duce la destabilizarea structurii neuronului și, în cele din urmă, pot duce la deteriorarea celulelor sau moartea celulei [21,40]. În acest studiu, rezultatele au demonstrat că CDP a inhibat semnificativ Ca2 intracelular plus supraîncărcarea și a crescut nivelurile de MMP în celulele PC12 cu leziuni OGD/RP. Apoptoza joacă un rol vital în fiziopatologia complexă a leziunilor de ischemie-reperfuzie cerebrală. Creșterea datelor a sugerat că apoptoza a fost implicată în disfuncția mitocondrială; disiparea MMP este un eveniment precoce care are ca rezultat apoptoza celulară [8,39]. Apoptoza este un proces de moarte celulară programată dependentă de energie pentru a elimina celulele redundante. Mulți neuroni din accidentul vascular cerebral ischemic vor suferi apoptoză [41]. În acest studiu, am efectuat colorarea Hoechst33342 și Annexin V-FITC/PI pentru a examina efectul CDP asupra apoptozei [23,28]. Rezultatele au arătat că CDP menține integritatea nucleului și scade rata de apoptoză celulară. Toate aceste rezultate au indicat că activitatea anti-apoptotică a CDP a contribuit la efectul benefic în leziunile neuronale în celulele PC12.

Celulele care suferă leziuni ischemice cauzate de acumularea excesivă de ROS, care poate duce la peroxidarea lipidelor, deteriorarea membranei celulare, supraîncărcare cu calciu și disfuncție mitocondrială, ducând în cele din urmă la apoptoză și moarte celulară [42]. Consumul de antioxidanți endogeni, cum ar fi SOD, CAT și GSH-Px, a indicat, de asemenea, apariția Fig. 9. Posibile mecanisme pentru efectele protectoare ale CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)împotriva deteriorării celulelor PC12 induse de OGD/RP. Tratamentul CDP suprimă stresul oxidativ, stabilizează concentrația de Ca2 plus și MMP, îmbunătățește expresia și localizarea DJ-1 în mitocondrii. Y. Liu şi colab. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678de stres oxidativ în timpul ischemiei-reperfuziei. În acest studiu, grupul OGD/RP a arătat o creștere semnificativă a ROS și o scădere a CAT, GSH-Px și T-AOC în comparație cu grupul tratat cu 5 ug/ml CDP. Cu toate acestea, am observat scăderi substanțiale ale ratelor de generare a ROS și a consumului de antioxidanți endogeni (CAT, GSH-Px și T-AOC) în grupurile CDP. Efectele benefice în grupul CDP 5 ug/ml au fost apropiate de cele din grupul Nimo. Rezultatele au sugerat că CDP inhibă generarea de ROS și restabilește apărarea antioxidantă enzimatică.

DJ-1 este un reactiv cheie redoxneuroprotectorproteină implicată în reglarea stresului oxidativ în accident vascular cerebral. Efectele benefice ale supraexprimării DJ-1 includ supraviețuirea celulară din ischemie-reperfuzie și conservarea funcției și morfologiei mitocondriale, cum ar fi precipitarea deschiderii porilor de tranziție a permeabilității mitocondriilor [39,43]. Studiile anterioare au indicat că efectul protector al DJ-1 în celulele expuse la OGD/RP este legat de proprietățile sale antioxidante și de translocarea mitocondriilor [43–45]. DJ-1 efectuează o neuroprotecție endogenă eficientă în atenuarea defectelor mitocondriale prin translocație [46]. Mai multe studii au indicat că translocarea DJ-1 poate avea un efect asupra mișcării mitocondriale, poate îmbunătăți interacțiunea celulă-celulă și poate promova alte procese de supraviețuire a celulelor.

DJ-1 afectează mai multe procese, cum ar fi migrarea și aderența celulelor, chemotaxia, proliferarea și apoptoza, atât în ​​modelele in vitro, cât și in vivo [6,9,47,48]. Folosind modelul de accident vascular cerebral cu celule PC12 rănite OGD/RP, am explorat o relație potențială între CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)și DJ-1. Supraexpresia DJ- 1 a fost identificată prin ELISA și Western blot. Alături de această funcție, o descoperire majoră din experimente a demonstrat că supraexprimarea semnificativă a DJ-1 a avut loc atunci când CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)(5 ug/ml) a fost administrat înainte de reperfuzie. Acest lucru a sugerat un posibilneuroprotectorefect în relația dintre CDP și DJ-1. Mai mult, am observat că DJ-1 localizat în mitocondrii în condiții de OGD/RP și expresia abundentă a DJ-1 a scăzut sensibilitatea celulară la ROS și a inhibat stresul oxidativ [45]. Rezultatele au implicat că CDP reglează și îmbunătățește DJ-1, care acționează ca o legătură moleculară între disfuncția mitocondriilor și stresul oxidativ și asigură o progresie a morții celulare secundare inerentă accidentului vascular cerebral [5,47,49-51]. În tandem cu stabilizarea DJ-1 în mitocondrii, CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)tratamentul a crescut supraviețuirea celulară, a stabilizat Ca2 plus homeostazia, a ameliorat disiparea MMP și previne apoptoza mitocondrială [43]. În general, rezultatele noastre au indicat că CDP exercită un nouneuroprotectormecanism în tratamentul accidentului vascular cerebral ischemic.

5. Concluzie

Rezultatele noastre au indicat că CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)protejează celulele PC12 împotriva leziunilor induse de OGD/RP prin efectele sale antioxidante, care sunt parțial atribuite căii mediate de DJ-1. Aceste efecte includ o scădere a ratei de deteriorare a membranei celulare, păstrarea homeostaziei [Ca2 plus ]I, ameliorarea disipării MMP, inhibarea apoptozei celulare, atenuarea ROS intracelular și modularea nivelurilor DJ-1. Rezultatele au indicat, de asemenea, că interacțiunile dintre CDP și DJ-1 amplifică neuroprotecția și mențin integritatea mitocondrială. Prin urmare, neuronii vulnerabili pot fi protejați de CDP(Cistanchedeserticolapolizaharide)prin îmbunătățirea exprimării DJ-1 în timpul accidentului vascular cerebral de ischemie.

Mulțumiri

Acest studiu a fost susținut de Fundația Națională pentru Științe Naturale din China (grant 81360649), Programul Cheie Național pentru Știință și Tehnologie (grant 2015BAK45B01) și Programul de Sprijin pentru Știință și Tehnologie din Regiunea Autonomă Ningxia Hui (grant 2016BZ07).

polizaharide de Cistanche deserticolaia o Efect neuroprotector

Referințe

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans protejează neuronii corticali împotriva toxicității induse de hipoxie prin scăderea HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: un program de răspuns rapid pentru accident vascular cerebral în China, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Novel stroke therapeutics: unraveling stroke patophysiology and its impact on clinical treatments, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, Fiziopatologia legată de NADPH oxidază în modele experimentale de accident vascular cerebral, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} dictează soarta celulei ca răspuns la stresul oxidativ declanșat de 4-hpr: autofagie sau apoptoză? Semn antioxid Redox. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 ameliorează moartea celulelor ischemice in vitro, eventual prin calea mitocondrială, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} protejează împotriva neurodegenerării cauzate de ischemia cerebrală focală și reperfuzie la șobolani, J. Cereb. Circulație sanguină. Întâlnit. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Celulele neuronale primare de șobolan lipsite de oxigen-glucoză prezintă DJ-1 translocare în mitocondrii sănătoase: o țintă terapeutică puternică pentru accident vascular cerebral, CNS Neurosci. Acolo. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A abrogă moartea celulelor neuronale induse de ischemie prin păstrarea integrității mitocondriale prin reglarea în creștere a proteinei asociate bolii Parkinson DJ-1, CNS Neurosci. Acolo. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu și colab., Pretratament cu fenilbutirat de sodiu Atenuează ischemia cerebrală/ leziune de reperfuzie prin suprareglarea proteinei DJ-1, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. O revizuire de neurofarmacologie, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Unul dintre cele mai bune cadouri farmaceutice ale medicinei tradiționale chineze, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Efecte și mecanisme ale medicinei chineze din plante în ameliorarea leziunii de reperfuzie-ischemie miocardică, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimulează ciclul redox al glutationului celular prin speciile reactive de oxigen generate de respirația mitocondrială în cardiomiocitele H9c2, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, „Desert ginseng”: o recenzie, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticoladecoctul atenuează toxicitatea testiculară indusă de hidroxiuree la șoarecii masculi, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of theneuroprotectorimpactul nimodipinei asupra celulelor Neuro2a prin intermediul unui model de stres asemănător unei intervenții chirurgicale, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotectorefectul noscapinei asupra leziunilor cerebrale de privare de oxigen-glucoză, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A protejează împotriva deteriorării ischemice în cultura primară a neuronilor corticali de șobolan după privarea de oxigen-glucoză. prin reperfuzie, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, celulele PC12 protejate cu trans-cinamaldehidă împotriva lipsei de oxigen și glucoză leziuni induse de /reperfuzie (OGD/R) prin anti-apoptoză și stres antioxidant, Mol. Biochimie celulară. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Efectele protectoare ale aloinei asupra oxigenului și leziuni induse de privarea de glucoză în celulele PC12, Brain Res. Taur. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol protejează celulele ischemice PC12 prin inhibarea factorilor de transcripție asociați hipoxiei și creșterea nivelurilor de enzime de apărare antioxidante, ACS Chim. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B protejează celulele PC12 împotriva morții neuronale induse de privarea de oxigen-glucoză prin menținerea homeostaziei mitocondriale prin inducerea dependentei de ubiquitină degradarea proteinei p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Protective effects of aloperine on neonatal rat primary neuroni hipocampali de cultură răniți de privarea de oxigen-glucoză și reperfuzie, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib protejează neuronii corticali la șoarece împotriva neurotoxicității induse de OGD/R prin reglarea în sus a Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizează expresia HER2 și menține populația de celule stem canceroase în celulele de cancer ovarian, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Protejează celulele RGC-5 de H(2)O( 2)-insulte de stres oxidativ indus prin activarea căii de semnalizare PI3K/Akt/eNOS, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, extractele de propolis din diclormetan protejează celula de stresul oxidativ indus de lipsa de oxigen-glucoză Y. Liu și colab. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679prin reducerea apoptozei, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotectorefectul neuroserpinei în astrocitele de șobolan tratate cu privarea de oxigen-glucoză și reoxigenare in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Ionii de litiu atenuează apoptoza indusă de privarea serică în celulele PC12 prin reglarea semnalizării Akt/FoxO1 căi, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Rezumatul executiv al statisticilor privind bolile de inimă și accidentul vascular cerebral din 2016. Un raport de la American Heart Association, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Reglarea site-urilor de legare a ligandului muscarinic prin factorul de creștere a nervilor în celulele feocromocitomului PC12, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone atenuează apoptoza ridicată indusă de glucoză și previne durerea neuropatică diabetică experimentală: studii in vitro și in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrolul protejează celulele PC12 împotriva apoptozei induse de OGD/R prin calea de semnalizare mediată mitocondrial, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidaze ca sursă de stres oxidativ și țintă moleculară în ischemie/reperfuzie accidentare, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Efectele de protecție a organelor ale extractului de vin roșu, resveratrol, în leziunea de reperfuzie mediată de stres oxidativ, Oxid. Med. Cell Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Mecanisme distincte de activare a mPTP în ischemie-reperfuzie: contribuții ale Ca2 plus plus, ROS, pH și polifosfat anorganic, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Precondiționarea etanolului cu doze mici protejează împotriva privării de oxigen-glucoză/ leziuni neuronale induse de reoxigenare prin activarea conductanței mari , Ca2 plus plus -activat K plus plus Canale In Vitro, Neurosci. Taur. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Efectul inhibării fisiunii mitocondriale asupra metabolismului energetic în neuronii hipocampali de șobolan în timpul leziunilor de ischemie/reperfuzie, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun și colab., Protective effects of Polizaharidă Lycium barbarum pe neuronii hipocampici de cultură primară de șobolan neonatal răniți de privarea de oxigen-glucoză și reperfuzie, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Mecanisme apoptotice după ischemia cerebrală, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin protejează astrocitele de hipoxie in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, protein kinaza dependentă de calciu/calmodulină reglează PINK1/Parkin și DJ{{3} } căi de mitofagie în timpul sepsisului, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 este un mediator important al răspunsurilor celulare induse de hipoxie, Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase reglează PINK1/ Căile Parkin și DJ-1 ale mitofagiei în timpul sepsisului, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation from DJ-1 to PTEN attenuates neuronal cell death în modelele de boală Parkinson, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 protejează împotriva morții celulare în urma leziunii cardiace acute de ischemie-reperfuzie, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} este un biomarker seric de încredere pentru discriminarea cancerului endometrial cu risc ridicat, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan și colab., DJ-1 protejează nigrostriatalul axa de la neurotoxina MPTP prin modularea căii AKT, Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinson's disease protein DJ-1 esteneuroprotectordatorită localizării mitocondriale determinate de cisteină-acid sulfinic, Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglycemia-induced inhibition of DJ-1 expresia a compromis eficacitatea cardioprotecției ischemice postcondiționare la șobolani, Oxid. Med. Cell Longev. (2013) (2013) 564902.