Cistanche ameliorează infecția rinichilor din cauza lupusului eritematos sistemic

CD4 reactiv la antigenul nuclear^{la care se adauga}celulele se extind în lupusul eritematos sistemic activ, produc citokine efectoare și infectează rinichii

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Dimas Abdirama, Sebastian Tesch și etc

Sistemicălupuseritematoseste o boală autoimună sistemică și cronică caracterizată printr-o pierdere a toleranței față de antigenele nucleare cu CD4 autoreactiv.^{la care se adauga}Celulele T implicate în patogeneza bolii. Cu toate acestea, se cunosc foarte puține despre specificitatea receptorului lor de la detectarea CD4-ului specific autoantigenului uman^{la care se adauga}Celulele T au fost extrem de provocatoare. Vă prezentăm aici o analiză a CD4^{la care se adauga} Celulele T reactive la antigenele nucleare folosind două metode complementare: biblioteci de celule T și îmbogățirea celulelor T reactive la antigen. Frecvențele CD4 specifice antigenului nuclear^{la care se adauga} Celulele T au corelat cu severitatea bolii. Aceste celule T autoreactive produc citokine efectoare, cum ar fi interferon-g, interleukina-17 și interleukina-10. Comparativ cu sângele, aceste celule s-au îmbogățit în urina pacienților cu nefrită lupică activă, sugerând o infiltrare a celor infectați.rinichi. Astfel, aceste caracteristici nerecunoscute anterior susțin un rol pentru A CD4 specific antigenului nuclear^{la care se adauga}celulele T însistemiclupuseritematos.

Drepturi de autor ª 2020, Societatea Internațională de Nefrologie. Publicat de Elsevier Inc. Acesta este un articol cu ​​acces deschis sub licența CC BY-NC-ND

CUVINTE CHEIE: lupuseritematos, rinichi,

Sistemicălupuseritematoseste o boală autoimună sistemică și cronică caracterizată prin pierderea toleranței față de antigenele nucleare din cauza eliminării defectuoase a deșeurilor biologice, cum ar fi materialul apoptotic care conține ribonucleoproteine ​​și nucleozomi.1 Autoanticorpul direcționat împotriva antigenelor nucleare este caracteristic pentrusistemiclupuseritematosși apare de obicei înaintea bolii manifeste. În plus, CD4 autoreactiv^{la care se adauga}Celulele T sunt implicate în patogenezasistemiclupuseritematosprin promovarea producției de autoanticorpi de către celulele B și prin propagarea directă a afectarii organelor în organele țintă infectate. Deși detectarea celulelor T reactive la antigenul nuclear a fost raportată anterior, dovezile pentru existența lor rămân circumferențiale până în prezent și în prezent nu este clar cum interacționează ele în patogeneză. Înțelegerea modului în care aceste celule participă la autoimunitate va fi esențială pentru proiectarea unui tratament eficient.

Detectarea celulelor T specifice autoantigenului este împiedicată de frecvențele lor extraordinar de scăzute în sângele circulant. Studii anterioare despre CD4 naiv uman^{la care se adauga}Repertoriile celulelor T au folosit tehnologie bazată pe tetrameri pentru a furniza în mod eficient informații precise despre răspunsurile celulelor T la epitopi antigeni specifici; totuși, această metodă necesită cunoștințe prealabile despre tipurile de antigen leucocitar uman ale donatorului. Tehnici alternative pentru detectarea și enumerarea simultană a populațiilor rare de celule T cu reactivitate la diferiți antigeni, fără cunoștințe prealabile despre tipurile de antigen leucocitar uman, au fost dezvoltate prin utilizarea bibliotecilor de celule T policlonale amplificate și prin îmbogățirea celulelor T care exprimă CD154-după stimulare. cu un antigen numit ARTE (îmbogățirea celulelor T reactive la antigen).

Sistemicălupuseritematoseste dăunător pentrurinichi, dar cistanche se poate îmbunătățirinichifuncții.

CD4^{la care se adauga} Celulele T își exercită funcția în principal prin secreția de citokine la activarea antigenică16 și prin propagarea inflamației tisulare, cum ar fi înlupusnefrităcare reprezintă una dintre cele mai grave complicaţii alesistemiclupuseritematos. Analiza repertoriului de celule T prezent înrinichibiopsii de la pacienti culupusnefrităa relevat oligoclonalitate arinichi-infiltrarea CD4^{la care se adauga} Celulele T, indicând acumularea de celule T specifice antigenului la cei infectațirinichi. Studiul nostru anterior a dezvăluit celule T urinare la pacienții cu activlupus nefrităca biomarker precis care seamănă cu fenotipul celulelor intrarenale. Deși aceste celule sunt îmbogățite pentru receptorul de chemokină CXC 3 și receptorul de chemokină CC 5 care exprimă celule T care indică o populație de celule T helper 1 (Th1) și conțin CD154^{la care se adauga}Celulele T care sugerează întâlnirea recentă cu antigen, specificitatea antigenului lor față de antigenele nucleare rămâne neclară.

În acest studiu, prezentăm o analiză a CD4^{la care se adauga} Celulele T reactive la antigenele nucleare la un total de 17 indivizi sănătoși, 12 subiecți cu inactivsistemiclupuseritematos, și 20 de subiecți cu activsistemiclupuseritematosprin utilizarea bibliotecilor de celule T și a tehnicilor ARTE pentru a analiza frecvențele CD4 autoreactive^{la care se adauga} Celulele T din sângele periferic și urina pacienților culupusnefrităprecum și producția de citokine.

REZULTATE

CD4 reactiv la antigenul nuclear^{la care se adauga}Celulele T sunt extinse lupus eritematos sistemic inactiv, așa cum s-a determinat folosind biblioteca de celule T și ARTE

cu activsistemiclupuseritematos. Aceste celule au fost detectabile și la 5 din 6 pacienți cu inactivsistemiclupuseritematos, în timp ce doar 3 din 6 controale sănătoase au prezentat circulanteautoreactivT celule. Interesant, pacienții cu activsistemiclupuseritematosa arătat, de asemenea, o varietate mai largă de răspunsuri autoreactive ale celulelor T, fiecare pacient având celule T reactive împotriva a cel puțin 3 antigene nucleare. În comparație, portofoliul țintă a fost mai puțin variabil la pacienții cu inactivsistemiclupuseritematosși controale sănătoase. Luate împreună, celulele T reactive la antigenul nuclear circulant nu sunt exclusiv pentrusistemiclupuseritematos, dar inactivsistemiclupuseritematos, numărul lor este mai mare, iar structurile țintă sunt mai variabile.

Deoarece celulele T autoreactive joacă un rol în propagarea răspunsurilor autoimune, am comparat numărul de celule T autoreactive cu severitatea bolii, evaluată desistemiclupuseritematosindicele de activitate a bolii (sistemiclupuseritematosscorul DAI). Doar frecvențele CD4^{la care se adauga}Celulele T reactive la RNP70, Ro și La au corelat pozitiv cusistemiclupuseritematosDAI (RNP70: P ¼ 0.04, r ¼ 0.4865; Ro: P ¼ 0.005 , r=0,6299; La: P=0,01, r=0,5651) (Figura 1d). În schimb, frecvența celulelor T reactive la transtiretină a fost găsită la un nivel destul de similar în toate cele 3 grupuri (Figura 1e), respingând astfel o posibilă părtinire experimentală din cauza hiperreactivității generale a celulelor T non-specifice pentru antigen.sistemiclupuseritematos.

Bibliotecile de celule T oferă o serie de avantaje, inclusiv sensibilitate ridicată pentru a detecta celule foarte rare într-un număr redus de celule de intrare. Cu toate acestea, această tehnică se bazează pe expansiunea celulelor, care poate modifica compoziția celulelor și oferă doar o posibilitate limitată de a caracteriza fenotipic celulele reactive. Prin urmare, ne-am validat observațiile cu metoda ARTE. Protocolul ARTE necesită cantități mai mari de celule de intrare, ceea ce este deosebit de dificil la pacienții cusistemiclupuseritematoscare se prezintă adesea cu limfopenie şi anemie. Din cauza acestei limitări și, de asemenea, pentru a crește citirea așteptată a celulelor reactive, am reunit toate cele 5 antigene nucleare canonice și am folosit acest grup pentru a stimula celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC) înainte de îmbogățirea celulelor care exprimă CD154-(n ¼ 15). pacientii cusistemiclupuseritematos; n ¼ 6 controale sănătoase). Folosind o combinație de markeri de suprafață CD154 și CD69, celulele T reactive lasistemiclupuseritematos-antigenele nucleare asociate ar putea fi identificate într-o populație de fond (Figura 1f). Deși expresia de fond a CD154 și CD69 a fost observată din abundență la toți indivizii, pacienții cu activsistemiclupuseritematosau avut frecvențe semnificativ crescute ale celulelor CD154 plus CD69 plus T atunci când au fost stimulate cu antigeni nucleari, comparativ cu stimularea de fond (P=0.008), în timp ce persoanele sănătoase și pacienții cu inactivsistemiclupuseritematosau avut frecvențe similare între celulele stimulate cu antigen și cele nestimulate (indivizi sănătoși: P ¼ 0,44; pacienți cu inactivsistemiclupuseritematos: P ¼ {{0}}.56) (Figura 1g). În plus, scăzând frecvențele de fond, frecvențele celulelor T reactive la antigenul nuclear au fost mai mari la pacienții cu boală activă decât la persoanele sănătoase și la pacienții cu boală inactivă (P ¼ 0.02 și P ¼ 0.11, respectiv) (Figura 1h). Frecvența celulelor T reactive la antigenul nuclear scăzut de fond s-a corelat astfel pozitiv cu activitatea bolii (P=0,004, r=0,5978), sugerând rolul lor potențial însistemiclupuseritematos.

Bibliotecile de celule T oferă o serie de avantaje, inclusiv sensibilitate ridicată pentru a detecta celule foarte rare într-un număr redus de celule de intrare. Cu toate acestea, această tehnică se bazează pe expansiunea celulelor, care poate modifica compoziția celulelor și oferă doar o posibilitate limitată de a caracteriza fenotipic celulele reactive. Prin urmare, ne-am validat observațiile cu metoda ARTE. Protocolul ARTE necesită cantități mai mari de celule de intrare, ceea ce este deosebit de dificil la pacienții cu boli sistemicelupuseritematoscare se prezintă adesea cu limfopenie şi anemie. Din cauza acestei limitări și, de asemenea, pentru a crește citirea așteptată a celulelor reactive, am reunit toate cele 5 antigene nucleare canonice și am folosit acest grup pentru a stimula celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC) înainte de îmbogățirea celulelor care exprimă CD154-(n ¼ 15). pacientii cusistemiclupuseritematos; n ¼ 6 controale sănătoase). Folosind o combinație de markeri de suprafață CD154 și CD69, celulele T reactive lasistemiclupuseritematos-antigenele nucleare asociate ar putea fi identificate într-o populație de fond (Figura 1f). Deși expresia de fond a CD154 și CD69 a fost observată din abundență la toți indivizii, pacienții cu activsistemiclupuseritematosa avut frecvente semnificativ crescute ale CD154^{la care se adauga}CD69^{la care se adauga}Celulele T atunci când sunt stimulate cu antigeni nucleari în comparație cu stimularea de fond (P ¼ 0.008), în timp ce indivizii sănătoși și pacienții cu inactivsistemiclupuseritematosau avut frecvențe similare între celulele stimulate cu antigen și cele nestimulate (indivizi sănătoși: P ¼ 0,44; pacienți cu inactivsistemiclupuseritematos: P ¼ {{0}}.56) (Figura 1g). În plus, scăzând frecvențele de fond, frecvențele celulelor T reactive la antigenul nuclear au fost mai mari la pacienții cu boală activă decât la persoanele sănătoase și la pacienții cu boală inactivă (P ¼ 0.02 și P ¼ 0.11, respectiv) (Figura 1h). Frecvența celulelor T reactive la antigenul nuclear scăzut de fond s-a corelat astfel pozitiv cu activitatea bolii (P=0,004, r=0,5978), sugerând rolul lor potențial însistemiclupuseritematospatogeneza (Figura 1i). Mai mult, CD4^{la care se adauga}Celulele T reactive la un antigen de retragere Candida albicans MP65 au demonstrat frecvențe similare la nivelul donatorilor (Figura 1j), excluzând posibilitatea unei părtiniri generale către frecvențe mai mari de celule T reactive la antigen la pacienții cu activ.sistemiclupuseritematos.

În mod colectiv, datele noastre generate folosind biblioteca de celule T și metodele ARTE arată extinderea CD4 specific autoantigenului^{la care se adauga}celule T la pacienții cu activsistemiclupuseritematos. Ambele tehnici sunt comparabile, după cum indică valorile similare ale indicelui median de stimulare între răspunsurile celulelor T stimulate cu antigen și nestimulate (indexul de stimulare median-bibliotecă de celule T: 1,857; ARTE: 1,614; P=0,33), deși tehnica ARTE a evidențiat frecvențe mai mari de CD4 reactiv la antigenul nuclear^{la care se adauga} Celulele T decât a făcut tehnica bibliotecii de celule T (Figura 1k).

Cistanchepoate îmbunătăți infecțiarinichi.

Celulele T reactive la antigenul nuclear la indivizii sănătoși sunt CD4 autoreactive de bună calitate^{la care se adauga}celulele T

Atât biblioteca de celule T, cât și tehnicile ARTE au demonstrat detectareaautoreactivT celulela indivizii sănătoși, care reprezintă o posibilă origine pentru dezvoltarea autoimunității umane. Cu toate acestea, numărul lor nu a fost semnificativ diferit de frecvențele de fundal, lăsând nesigur dacă subiecții sănătoși trebuie într-adevăr să circule CD4 reactiv la antigenul nuclear.^{la care se adauga}celulele T. Pentru a dezvălui specificitatea antigenului celulelor T autoreactive la subiecții sănătoși, am generat clone de celule T unice din CD154^{la care se adauga}CD69^{la care se adauga}CD4^{la care se adauga}Precursori de celule T izolați de la indivizi sănătoși după stimularea PBMC-urilor cu antigene nucleare individuale și un antigen de control derivat din lizat de Aspergillus fumigatus. Un număr considerabil desistemiclupuseritematos-clonele de celule T specifice autoantigenului asociate au răspuns la antigenele corespunzătoare după restimularea antigenului, așa cum este evidențiată de coexpresia IFN-g cu CD154 (număr de clone specifice - Aspergillus fumigatus: 5 din 5; SmD1: 4 din 8; RNP70: 3) din 11; histonă: 5 din 5; Ro: 4 din 9; La: 5 din 7) (Figura suplimentară S2A și B). Mai mult decât atât, răspunsul antigen (prezentat reprezentativ pentru SmD1) a fost dependent de doză, subliniind faptul că celulele T reactive la antigen nuclear la indivizii sănătoși sunt CD4 autoreactive de bună calitate.^{la care se adauga}Celule T (Figura suplimentară S2C). Astfel, am confirmat existența celulelor T reactive la antigen nuclear la subiecții sănătoși în semnalul de fond al metodelor de detecție aplicate.

Producția de citokine de celule T CD4 plus reactive la antigenul nuclear

Apoi am examinat producția de citokine a CD4 reactiv cu antigenul nuclear^{la care se adauga}celulele T. Celulele care exprimă CD154-au fost colorate intracelular pentru citokine efectoare, cum ar fi IFN-g, interleukina (IL)-17, IL-4 și IL{-10 după stimularea cu un grup desistemiclupuseritematos-antigeni nucleari asociati (Figura 2a). Frecvențele CD154 producătoare de IFN-g–, IL-17– și IL-10^{la care se adauga}CD4^{la care se adauga}Celulele T au fost semnificativ crescute la pacienții cu activsistemiclupuseritematos(toate citokinele: P ¼ {{0}}.004), în timp ce frecvența celulelor T autoreactive producătoare de IL-4 a rămas nediferențiată de frecvența de fond (P ¼ 0,125) (Figura 2b). În plus, numărul absolut de celule T autoreactive producătoare de IFN-g și IL-10 a fost mai mare la pacienții cusistemiclupuseritematosdecât la indivizii sănătoși și la pacienții cu inactivsistemiclupuseritematos(Figura 2b). Scăzând frecvențele de fond, pacienții cu activsistemiclupus eritematosau avut frecvențe semnificativ mai mari ale celulelor T autoreactive producătoare de IFN-g- și IL-10 decât persoanele sănătoase (IFN-g: P ¼ 0.003; IL{{5} }: P ¼ 0,004), precum și a celulelor T autoreactive producătoare de IFN-g–, IL-17– și IL-10 decât au făcut-o pacienții cu inactivsistemiclupuseritematos(IFN-g: P=0.002; IL-17: P=0.00 2; IL-10: P ¼ 0.0{05) (Figura 2c). În plus, frecvența celulelor T reactive cu antigenul nuclear care produce IFN-g– și IL-10– dar nu și a celulelor T reactive IL-17– și IL-4 a fost corelată cu activitatea bolii. Cu toate acestea, doar frecvența celulelor producătoare de IL-4 a arătat o corelație mai mică cu activitatea bolii (IFN-g: P <{0.{0001, r="0,7574;" il{{20}="" }:="" p="0,005," r="0,5889;" il-4:="" p="0,14," r="0,3717;" il-="" 10:="" p="0,0004," r="0,6977)" (figura="" 2d).="" judecat="" după="" frecvența="" producătorilor="" de="" ifn-g,="" cd4="" reactiv="" la="">^{la care se adauga}Celulele T au fost în principal din linia Th1. În schimb, IL-17, precum și producătorii de IL-10, au fost detectați numai la frecvențe mai mici.26 În comparație cu nivelurile de autoanticorpi, frecvențele CD4 producătoare de citokine^{la care se adauga}Celulele T nu s-au corelat cu concentrația de ADN anti-dublu catenar și cu titrul seric al anticorpilor antinucleari (Figura suplimentară S3A și B). Nu există altă corelație între CD4 reactiv antigen nuclear^{la care se adauga}Au fost observate celule T și autoanticorpi, cu excepția CD4 reactiv La^{la care se adauga}Celulele T față de autoanticorpi La (Figura suplimentară S3C).

Detectarea celulelor CD4 plus T reactive la antigenul nuclear în urină la pacienții cu lupus eritematos sistemic activ și nefrită lupică

Populația de celule Th1 reactive la antigenul nuclear este suspectată că invadeazărinichițesut, unde ar putea întâlni antigenul lor înrudit aproape omniprezent. Prin investigarea repertoriului receptorului celulelor T (TCR)-b al CD4^{la care se adauga}Celulele T izolate din sângele periferic comparativ cu cele izolate din urina a 5 pacienţi cusistemiclupuseritematossi activlupusnefrită, am observat un repertoriu TCR deformat oligoclonal de celule derivate din urină (Figura 3a). Frecvența cumulativă a celor mai abundente 20 de clone de celule T a fost semnificativ mai mare în urină, corespunzător unui indice de diversitate mai scăzut (Figura suplimentară S4A). Pentru a testa dacă aceste celule demonstrează și reactivitate la un set desistemiclupuseritematos-antigeni nucleari asociati, am generat biblioteci formate din CD4 urinar^{la care se adauga}Celule T izolate de la 3 pacienți cusistemiclupuseritematossi activlupusnefrită(Figura suplimentară S4B). CD4 urinar^{la care se adauga} T cells were metabolically and functionally active cells indicated by the ability to proliferate upon stimulation with SEB but with signs of exhaustion shown by a reduced proliferation capacity after polyclonal activation (Supplementary Figure S4C and D). Because of these circumstances, only microcultures with a SEB stimulation index of >4 au fost incluse pentru enumerarea CD4 urinar^{la care se adauga}celulele T specifice antigenului nuclear individual. În paralel cu CD4 urinar^{la care se adauga}Celulele T, frecvența CD4 reactiv la antigenul nuclear^{la care se adauga}Au fost determinate celule T din sângele periferic, permițând o comparație directă a frecvențelor respective în cadrul acelorași indivizi (Figura 3b). Am găsit că inactivlupusnefrită, frecvențele CD4 reactive la antigenul nuclear urinar^{la care se adauga}Celulele T au fost mai mari decât cele din sângele periferic. Pentru a confirma această observație, am etichetat celulele urinare izolate din 4 activelupusnefritădonatori cu ester succinimidilic al carboxifluoresceinei și au amestecat celulele marcate cu PBMC-uri potrivite cu donatorul pentru a permite o comparație directă a celulelor reactive la antigen într-un singur test folosind tehnica ARTE. Frecvența CD154^{la care se adauga}CD69^{la care se adauga}Celulele T din probele stimulate și nestimulate de celule din sângele periferic și urinare compatibile cu donatorul au fost utilizate pentru a evalua dacă celulele T reactive la antigenul nuclear sunt îmbogățite în urină ca proxy pentrurinichiprin calcularea indicelui de stimulare (Figura 3c). Deși biblioteca de celule T urinare și metodele ARTE diferă în ceea ce privește indicele lor mediu de stimulare față de antigenele nucleare (indicele de stimulare - biblioteca de celule T urinare: 17; ARTE: 2,79; P ¼ 0.4) (Figura 3d) , analiza autoreactivității în CD4 periferic și urinar^{la care se adauga} Celulele T din ambele metode (în total n=7) au demonstrat un indice de stimulare specific antigenului nuclear crescut în urină (P=0.0156) (Figura 3e). Aceste observații sugerează că CD4 reactiv la antigenul nuclear^{la care se adauga}Celulele T invadează și se acumulează îninfectatrinichi. Astfel, inflamația locală a țesuturilor însistemiclupuseritematosar putea fi un fenomen specific antigenului și direct modulat de infiltrareautoreactivT celule.

Pentru a continua, pentru partea 2, vă rugăm să faceți clic aici.