Detectarea variantelor MUC1 la pacienții diagnosticați clinicopatologic cu boală renală tubulointerstițială autozomal dominantă

Introducere

Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă (ADTKD)-MUC1 este cauzată în principal de mutații de deplasare a cadrelor datorate unei inserții cu o singură bază în regiunea de repetiție în tandem cu număr variabil (VNTR) din MUC1. Datorită complexității hotspot-ului variante, identificarea folosind secvențiere cu citire scurtă (SRS) este o provocare. Deși studii recente au dezvăluit utilitatea secvențierilor cu citire lungă (LRS), prevalența variantelor MUC1 la pacienții cu ADTKD suspectată clinic rămâne necunoscută. Ne-am propus să clarificăm această prevalență și caracteristicile genetice și manifestările clinice ale ADTKD-MUC1 la o populație japoneză folosind un SRS și un LRS.

Metode

Din ianuarie 2015 până în decembrie 2019, analiza genetică a fost efectuată folosind un SRS la 48 de pacienți cu ADTKD suspectată clinic. S-au efectuat analize suplimentare folosind un LRS la pacienții cu rezultate negative SRS.

Rezultate

Rezultatele de secvențiere cu citire scurtă au evidențiat variante MUC1 la 1 pacient care adăpostește o inserție de citozină în a doua unitate de repetare a regiunii VNTR; cu toate acestea, regiunile VNTR mai profunde nu au putut fi citite de SRS. Prin urmare, am efectuat o analiză de secvențiere cu citire lungă a 39 de cazuri și am detectat variante MUC1 VNTR la 8 pacienți (în total, 9 pacienți din familii neînrudite). Odată cu includerea pacienților afectați de familie (n ¼ 31), vârsta medie la dezvoltarea bolii renale în stadiu terminal (ESKD) a fost de 45 de ani (IC 95%: 40-40 de ani).

Concluzie

În Japonia, rata de detectare a variantelor MUC1 la pacienții cu ADTKD suspectată clinic a fost de 18,8 la sută. Mai mult de 20 la suta dintre pacientii cu rezultate negative SRS au avut variante MUC1 detectate de un LRS.

Cuvinte cheie

ADTKD; ADTKD-MUC1; secvențiere de citire lungă; MCKD; NGS; Secvențierea SMRT.

Click aici pentru a obțineBeneficii Cistanche

ADTKD este un grup de boli renale ereditare caracterizate prin fibroză tubulointerstițială progresivă și atrofie tubulară care duce la ESKD. ADTKD poate fi împărțit în subtipuri pe baza defectelor genetice cauzale subiacente, inclusiv anomalii în UMOD, MUC1, REN, HNF1B și SEC61A1. Având în vedere nespecificitatea caracteristicilor comune unificatoare ale ADTKD, inclusiv anomalii blande ale sedimentului urinar și proteinurie ușoară până la negativă, se presupune că ADTKD este foarte subdiagnosticată.

MUC1 este o glicoproteină transmembranară foarte exprimată în membrana apicală a membrului ascendent gros al ansei lui Henle, tubii contorți distali și canalele colectoare. Cea mai frecventă cauză genetică a ADTKD-MUC1 este o variantă de deplasare a cadrului cauzată de inserarea unei singure baze în polimorfismul VNTR al MUC1 (OMIM 158340; 1q22) în exonul 2.5 Această mutație încheie sinteza proteinei MUC1 după regiunea VNTR și creează o nouă proteină scurtată (MUC1fs) care nu are un domeniu C-terminal (Figura 1a). MUC1fs se acumulează apoi în citoplasmă din cauza transportului anormal al proteinelor intracelulare. Regiunea VNTR prezintă variații interindividuale substanțiale, deoarece este compusă din 60-unități de nucleotide care se repetă de 20 până la 125 de ori, fiecare alelă având repetări unice (Figura 1b). Prin urmare, detectarea variantelor de gene folosind SRS-uri a fost o provocare din cauza complexității hotspot-ului variantei.

Studiile anterioare au folosit metode alternative, inclusiv spectrometria de masă și extensia sondei, după cum se spune, pentru a detecta variantele cauzale; cu toate acestea, aceste metode sunt solicitante din punct de vedere tehnic. Studii recente au descoperit utilitatea LRS-urilor, care utilizează o metodă de secvențiere în timp real cu o singură moleculă (SMRT) pentru a identifica variantele MUC1 VNTR. Cu toate acestea, variantele MUC1 VNTR nu au fost încă caracterizate în populația japoneză. În plus, prevalența variantelor MUC1 la pacienții cu ADTKD suspectată clinic rămâne necunoscută. Prin urmare, scopul acestui studiu a fost de a clarifica această prevalență, inclusiv caracteristicile genetice și manifestările clinice, ale ADTKD-MUC1 în populația japoneză. Aici, am diagnosticat 9 pacienți cu ADTKD-MUC1 care au avut variante VNTR detectate folosind fie un SRS (n ¼ 1) fie un LRS (n ¼ 8) dintre 48 de cazuri de ADTKD suspectate clinic.

Metode

1. Participanți

Între ianuarie 2015 și decembrie 2019, am efectuat analize genetice la 48 de pacienți cu ADTKD suspectată clinic. Participanții au avut disfuncție renală din cauze necunoscute, cu anomalii urinare ușoare până la negative. Pacienții au fost diagnosticați clinic cu ADTKD dacă aveau antecedente familiale pozitive de boală renală cronică și/sau hiperuricemie sau dacă rezultatele patologice la biopsia renală au evidențiat fie boală renală chistică medulară (termenul anterior pentru ADTKD-MUC1 și ADTKD-UMOD), tubulointerstițială. nefrită sau leziuni interstițiale cronice. Am exclus pacienții cu malformații renale și/sau simptome extrarenale. Probele de ADN au fost mai întâi analizate folosind un SRS. Au fost efectuate apoi investigații ulterioare la pacienții cu rezultate negative SRS (n ¼ 39) folosind un LRS. Toate probele și informațiile clinice au fost obținute de la spitalele de referință japoneze. Analizele genetice au fost efectuate după obținerea consimțământului informat scris din partea pacienților și/sau a tutorilor acestora dacă pacientul era minor. Acest studiu a fost aprobat de Consiliul de revizuire instituțional al Școlii de Medicină a Universității Kobe (numărul de aprobare 301).

2. Secvențierea cu citire scurtă

Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes using the QuickGene Mini 80 system (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Tokyo, Japan). For targeted sequencing using an SRS, samples were prepared using HaloPlex (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) according to the manufacturer's instructions. Paired-end sequencing was performed on the MiSeq platform (Illumina, San Diego, CA). HaloPlex was used for targeted sequencing of 128 genes (version 2, Supplementary Table S1), 172 genes (version 4, Supplementary Table S2), 159 genes (version 5, Supplementary Table S3), 164 genes (version 6, Supplementary Table S4), 181 genes (version 7, Supplementary Table S5), and 183 genes (version 8, Supplementary Table S6) associated with congenital anomalies of the kidney and urinary tract, cystic kidneys, ADTKD, and nephronophthisis. The HaloPlex version used for each patient is found in Supplementary Table S7. Reads were aligned to the reference human genome (GRCh37/Hg19) using SureCall 4.0, which is a desktop application combining algorithms for end-to-end next-generation sequencing data analysis from alignment to categorization of mutations (Agilent Technologies). We excluded called variants with minor allele frequencies >1% în bazele de date de variații umane disponibile public, cum ar fi următoarele: Human Genetic Variation Database (http://www.genome.med.kyoto-u.ac.jp/SnpDB/), gnomAD (https://gnomad.broadinstitute .org/) și bazele de date 1000 Genomes Project (1000G) (https://www.internationalgenome.org/data). Variantele candidate au fost selectate folosind software-ul de predicție computațională, SIFT (https://sift.bii.astar.edu.sg/), PolyPhen-2 (http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) , Mutation Taster (http://www.mutationtaster.org/) și CADD (https://cadd.gs.washington.edu/snv), și apoi clasificate ca fiind patogene, probabil patogenice sau cu semnificație incertă, în conformitate cu liniile directoare ale Colegiului American de Genetică Medicală și Genomică.9

3. Pregătirea bibliotecii și secvențierea cu citire lungă (secvențierea SMRT)

Ampliconii au fost reuniți în rapoarte echimolare și pregătiți pentru bibliotecile de secvențe SMRTbell folosind un kit de pregătire a șablonului SMRTbell Express 2.0 (Pacific Biosciences, Menlo Park, CA) conform instrucțiunilor producătorului. Ulterior, un șablon de secvență a fost construit prin atașarea primerului de secvență versiunea 2 și ADN polimerazei la adaptori la ambele capete ale bibliotecii de secvențe și șablonul a fost încărcat pe o celulă SMRT. Secvențierea SMRT a fost efectuată utilizând sistemul PacBio Sequel II cu Sequel II Sequencing Kit 2.0. Datele secvențiate au fost analizate cu SMRT Link versiunea 9.0.0 și s-au obținut secvențe de consens foarte precise. După aceea, gruparea secvenței a fost efectuată folosind instrumentul de analiză „pbaa”, care este potrivit pentru analiza secvențelor repetitive. Pregătirea bibliotecii, secvențierea și analizele bioinformatice ale secvențierii SMRT au fost efectuate de Takara Bio (Kusatsu, Shiga, Japonia). Secvența de nucleotide, numărul de citiri și frecvența alelelor au fost compilate într-un fișier Excel pentru fiecare pacient (datele nu au fost dezvăluite). Pentru fiecare secvență identificată, am reconstruit manual secvența la fiecare 60 de baze pe linie, așa cum este descris de Kirby și colab.5 (Figura 1b). Din cauza potențialelor erori PCR în secvența complexă VNTR, au fost detectate mai multe secvențe la fiecare pacient. Secvențele corecte au fost identificate prin compararea rezultatelor LRS cu electroferogramele ampliconilor obținute folosind un bioanalizator (Tabelul suplimentar S8). În cele mai multe cazuri, primele 2 secvențe cu cel mai mare număr de citiri au fost determinate a fi corecte. În unele cazuri, totuși, secvențele cu cel de-al treilea număr sau mai mic de citiri au fost determinate a fi corecte dacă dimensiunile lor erau potrivite cu vârfurile de electroforeză detectate de bioanalizator (SC449, SC511, SC534, SC560, SC566, SC593, SC616, și SC639) din cauza ineficienței amplificării PCR a alelelor lungi când dimensiunea regiunii VNTR a celor 2 alele a fost semnificativ diferită.

Pudră de Cistanche și extract de Cistanche

Discuţie

Din câte știm, acesta este primul raport al unei analize genetice a variantelor MUC1 VNTR detectate folosind o combinație de SRS și LRS într-o cohortă japoneză. Am identificat mutații MUC1 VNTR la 9 pacienți din familii neînrudite. În plus, rata de detectare a variantelor MUC1 în rândul pacienților cu ADTKD suspectată clinic a fost de 18,8 la sută.

Datorită complexității hotspot-ului variantei, detectarea variantelor MUC1 VNTR prin analiza genetică de rutină folosind un SRS este o provocare, iar alte metode, cum ar fi metoda instantanee sau spectrometria de masă, sunt de obicei necesare. Din păcate, aceste metode sunt solicitante din punct de vedere tehnic și sunt efectuate doar la câteva laboratoare din întreaga lume.5,6 Wenzel și colab.7 au efectuat secvențierea SMRT și au confirmat toate diagnosticele la participanții europeni din 9 familii cu variante MUC1 VNTR detectate anterior folosind metoda snapshot. Wang et al.8 au dezvăluit, de asemenea, utilitatea secvențierii SMRT pentru detectarea mutațiilor MUC1 VNTR într-o mare familie chineză. Cu toate acestea, datorită designului studiului lor, aceste 2 studii nu au determinat rata de detectare a variantelor MUC1 VNTR la pacienții cu ADTKD suspectată clinic. În acest studiu, am clarificat faptul că rata de diagnosticare a variantelor MUC1 la pacienții cu ADTKD suspectată clinic a fost de 18,8 la sută, ceea ce poate facilita probabilități mai precise, în special în timpul consilierii genetice.

Datele privind prevalența ADTKD-MUC1 sunt limitate, deși studiile anterioare au relevat o prevalență de 0,7 până la 4 per milion în Statele Unite și Irlanda.3,13 Un studiu din Anglia a dezvăluit o prevalență estimată a ADTKD. -UMOD de 9 per milion, sugerând că ADTKD-UMOD este cea mai frecventă boală renală nonpolichistică.14 În studiul nostru, 9 pacienți aveau variante MUC1, în timp ce 6 aveau variante UMOD, sugerând că ADTKD-MUC1 ar putea fi unul dintre cele mai frecvente subtipuri de boală ale ADTKD.

În ciuda complexității structurale a regiunii MUC1 VNTR, SRS a putut detecta variante la 3 pacienți, toți având aceeași mutație: o citozină inserată în 7 citozine consecutive la sfârșitul unității de 60-nucleotide în a doua repetare a VNTR. S-a presupus că variantele din partea superficială a MUC1 VNTR (până la a treia repetare a VNTR) ar fi detectabile chiar dacă ADN-ul a fost fragmentat (100-200 perechi de baze per citire) ca parte a pregătirii probei pentru analiza SRS. Yamamoto și colab.15 au identificat o altă mutație de deplasare a cadrelor localizată înaintea regiunii MUC1 VNTR utilizând o SRS (secvență de exom întreg). Această mutație generează, de asemenea, o proteină trunchiată anormal în același mod ca și mutația poziționată în VNTR.15 Aceste rezultate sugerează că analiza SRS poate fi utilă pentru detectarea variantelor poziționate înainte sau în regiunea superficială a VNTR.

În studiul nostru, 7 dintre cei 9 pacienți cu variante MUC1 VNTR au avut aceeași secvență de unități de 60-nucleotide care adăpostește citozina inserată (Tabelul 2). În studiile anterioare în care s-a efectuat analiza genetică de secvențiere cu citire lungă pentru MUC1 VNTR, aceeași variantă a fost detectată în 9 familii dintr-o cohortă europeană7 și o mare familie chineză.8 În plus, această mutație a fost detectată folosind metoda instantanee și a fost definit ca „27dupC”.12 Olinger et al.16 au raportat că prevalența variantei 27dupC a fost de 93,5% în 2 registre de ADTKD din Europa și Statele Unite. Prin aceste constatări, datele noastre au indicat că varianta 27dupC a fost cea mai frecventă mutație MUC1 într-o cohortă japoneză.

Suplimente de Cistanche

Numărul de repetări VNTR a fost raportat a fi de la 20 la 253; cu toate acestea, în studiul nostru, numărul de repetări VNTR a variat de la 30 la 82, 80% dintre alele având 30 până la 36 de repetări. Un studiu anterior din Europa a raportat că procentul de alele cu 30 până la 36 de repetări a fost de 39 la sută, ceea ce poate fi susținut de omogenitatea etnică a populației japoneze. Studiul de față a arătat că vârsta medie la dezvoltarea ESKD a fost de 45 de ani (95% CI: 40-50 de ani) la pacienții cu ADTKD-MUC1, inclusiv pacienții afectați familiali dintr-o cohortă japoneză (9 familii, n ¼ 31). Un studiu anterior a evaluat 147 de indivizi, inclusiv pacienți cu mutații MUC1 și membrii familiei lor afectați, și a arătat că vârsta medie la dezvoltarea ESKD a fost de 44,9-15,4 ani. 104 pacienți cu ADTKD-MUC1 a fost de 36 de ani (interval interquartil: 30–46 de ani), ceea ce poate fi explicat prin excluderea membrilor familiei afectați care nu au fost supuși analizei genetice.16 În plus, la pacienți au fost raportate variații interfamiliale și intrafamiliale. cu variante MUC1,8,17,18, deși existența genelor modificatoare sau a altor factori rămâne necunoscută. În aceeași perioadă de studiu, am detectat și mutații în HNF1B, o genă cauzală pentru ADTKD, la 19 pacienți. Cu toate acestea, pacienții cu mutații HNF1B suspectate clinic au fost excluși din studiul nostru la înregistrare, deoarece cei mai mulți dintre acești pacienți se distingeau clinic de cei cu ADTKD-MUC1 din cauza anomaliilor morfologice ale sistemului urinar renal și/sau a unui istoric familial autozomal dominant de diabet cu debut precoce și/sau hipomagnezemie și am raportat anterior asupra acestei populații de pacienți.19 Într-adevăr, un raport de consens Kidney Disease: Improving Global Outcomes și o revizuire recentă a ADTKD au sugerat că termenul ADTKD-HNF1B ar trebui rezervat doar pentru acele cazuri în care fibroza tubulointerstițială renală este manifestarea principală deoarece doar câteva cazuri sunt prezente numai cu boală tubulointerstițială.1,20 Anemia infantilă, hipotensiunea ușoară și hiperkaliemia ușoară sunt considerate a fi caracteristici specifice ale ADTKD-REN. Cu toate acestea, un studiu internațional recent de cohortă privind caracteristicile clinice ale 111 pacienți ADTKD-REN a raportat că aproximativ 70 la sută dintre pacienți s-au prezentat la instituții medicale pentru boală renală cronică sau gută.21 Conform acestui raport, anemia infantilă a fost prezentă la 75,8 la sută din pacienți, dar severitatea sa a fost relativ ușoară; nivelurile medii ale hemoglobinei au fost de 9,6, 10,1 și 10,5 g/dl pentru vârste<10 years, 10 to <15 years, and 15 to <20 years, respectively.21 Although hypotension was not reported in the article, the severity of hyperkalemia was mild and the mean serum potassium level in patients who were not taking fludrocortisone was 4.8 mEq/l.21 Childhood anemia, hypotension, or hyperkalemia may often be overlooked, and they are not always specific to ADRKD-REN; thus, we did not exclude participants with these findings. ADTKD-SEC61A1 is much rare than other ADTKD subtypes, with 6 families reported as of date.22 Patients harboring SEC61A1 mutation present with specific features, such as intrauterine growth retardation, cleft palate, congenital anemia, neutropenia, and immunodeficiency.3,22 Although the clinical manifestations of ADTKD-REN have not been completely clarified owing to the small number of reported cases, patients presenting with these specific features can be clearly distinguished from those with ADTKD-MUC1.

Cistanche tubulosa

Studii recente asupra mecanismelor moleculare și celulare ale ADTKD-MUC1 au arătat că această afecțiune este o proteinopatie toxică cauzată de acumularea intracelulară a proteinei MUC1 pliate greșit.11,23 Dvela-Levitt și colab.24 au raportat utilizarea unei molecule mici, BRD4780. , pentru a redirecționa calea secretorie către lizozomi, dezvăluind că MUC1fs au fost eliminate la șoarecii și organoizii pacienților și evidențiind potențialul terapeutic al BRD4780. În consecință, un diagnostic precis al variantelor MUC1 poate fi crucial pentru dezvoltarea agenților terapeutici eficienți. Studiul nostru a avut mai multe limitări. În primul rând, toți participanții la studiu au fost japonezi, iar dimensiunea eșantionului nostru a fost mică din cauza duratei scurte a studiului. Având în vedere natura retrospectivă a acestui studiu, nu am putut obține, de asemenea, informații clinice longitudinale, cum ar fi prognosticul renal. În al doilea rând, inserțiile cu o singură bază au fost observate chiar și în alelele fără mutații. Datorită ratei de eroare ridicate, a fost dificil să se realizeze un ansamblu de înaltă calitate pentru a detecta variante sau indeluri cu o singură nucleotidă folosind un LRS. A fost necesară combinarea tehnologiilor de secvențiere pentru a detecta toate tipurile diferite de variații genetice, ceea ce crește costul și complexitatea proiectelor. Astfel, PacBio a conceput un nou sistem de secvențiere, numit secvențiere consens circulară. Secvențierea circulară consens produce citiri de înaltă fidelitate, cu o precizie de 99,8% și o lungime medie de 13,5 kilobază, ceea ce reduce drastic rata de eroare de secvențiere.25 Această metodă de secvențiere a fost aplicată și în studiul nostru. Prin urmare, având în vedere îmbunătățirile în precizia secvențierii, inserțiile cu o singură bază au fost posibil cauzate de o eroare PCR. Chiar dacă ADN polimeraza KOD Hot Start a fost optimizată pentru amplificarea celor mai dificile ținte26, alte ADN polimeraze, a căror fidelitate este mai mare decât cea a KOD (de exemplu, Phusion), pot contribui la reducerea ratei de eroare PCR27. studiile au găsit un protocol fără amplificare pentru îmbogățirea țintită folosind sistemul de repetări palindromice scurte interspațiate în mod regulat în cluster/Cas9.28,29 Această nouă metodă ar oferi probabil rezultate mai bune. În al treilea rând, nu am validat o metodă alternativă care ar putea facilita un diagnostic, cum ar fi imunocolorarea probelor de rinichi sau a celulelor derivate din urină. Kirby et al., 5 care au raportat prima mutație cauzală pentru ADTKD-MUC1, au efectuat o analiză imunohistochimică a probelor de rinichi de la pacienți cu mutații MUC1. Ei au raportat că, deși imunocolorarea în controalele normale a dus la colorare nespecifică, pacienții cu mutații MUC1 au prezentat un model specific de colorare intracelulară în bucla lui Henle, tubii distali și canalele colectoare.5 Au fost raportate analize de imunocolorare similare ale proteinei MUC1 mutante. 11,13,18,30 Yamamoto și colab.15 au detectat proteina MUC1 mutantă în exozomii de urină. Deși manifestările clinice ale ADTKD-MUC1 sunt nespecifice, aceste analize negenetice pot susține diagnosticul clinic. Astfel, este necesar să se verifice utilitatea acestor analize negenetice împreună cu rezultatele studiului nostru. În concluzie, studiul nostru arată că analiza genetică combinată cu SRS și LRS este utilă pentru detectarea variantelor MUC1 VNTR într-o cohortă japoneză și că prevalența ADTKD-MUC1 poate fi mare în această populație. Analiza genetică combinată folosind SRS și LRS este probabil să îmbunătățească rata de diagnosticare a ADTKD-MUC1 și poate contribui la dezvoltarea abordărilor optime de tratament.

REFERINȚE

1. Eckardt KU, Alper SL, Antignac C, et al. Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă: diagnostic, clasificare și management - un raport de consens KDIGO. Rinichi Int. 2015;88:676–683. https://doi.org/10. 1038/ki.2015.28

2. Bolar NA, Golzio C, Zivná M, et al. Mutațiile heterozigote cu pierdere a funcției SEC61A1 provoacă boală renală tubulo-interstițială autozomal-dominantă și glomerulochistică cu anemie. Am J Hum Genet. 2016;99:174–187. https://doi.org/ 10.1016/j.ajhg.2016.05.028

3. Devuyst O, Olinger E, Weber S, et al. Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă. Nat Rev Dis Primers. 2019;5: 60. https://doi.org/10.1038/s41572-019-0109-9

4. Patton S, Gendler SJ, Spicer AP. Mucina epitelială, MUC1, a laptelui, glandei mamare și a altor țesuturi. Biochim Biophys Acta. 1995;1241:407–423. https://doi.org/10.1016/0304-4157 (95)00014-3

5. Kirby A, Gnirke A, Jaffe DB, et al. Mutațiile care provoacă boala renală chistică medulară de tip 1 se află într-un VNTR mare în MUC1 ratat de secvențierea masiv paralelă. Nat Genet. 2013;45: 299–303. https://doi.org/10.1038/ng.2543

6. Ekici AB, Hackenbeck T, Morinière V, et al. Fibroza renală este caracteristica comună a bolilor renale tubulointerstițiale autosomal dominante cauzate de mutații ale mucinei 1 sau uromodulinei. Rinichi Int. 2014;86:589–599. https://doi.org/10.1038/ki. 2014.72

7. Wenzel A, Altmueller J, Ekici AB, et al. Secvențierea în timp real cu o singură moleculă în ADTKD-MUC1 permite asamblarea completă a VNTR și poziționarea exactă a mutațiilor cauzale. Sci Rep. 2018;8:4170. https://doi.org/10.1038/s41598-018-22428-0

8. Wang GQ, Rui HL, Dong HR și colab. Secvențierea SMRT sa dovedit a fi o metodă eficientă pentru diagnosticul ADTKD-MUC1 prin analiza ulterioară a unei familii chineze. Sci Rep. 2020;10:8616. https://doi.org/10.1038/s41598-020-65491-2

9. Richards S, Aziz N, Bale S, et al. Standarde și linii directoare pentru interpretarea variantelor de secvență: o recomandare comună de consens a Colegiului American de Genetică Medicală și Genomică și a Asociației pentru Patologia Moleculară. Genet Med. 2015;17:405–424. https://doi.org/10.1038/ gim.2015.30

10. Kanda Y. Investigarea software-ului disponibil gratuit și ușor de utilizat „EZR” pentru statistică medicală. Transplant de măduvă osoasă. 2013;48:452–458. https://doi.org/10.1038/bmt.2012.244

11. Robinson JT, Thorvaldsdóttir H, Winckler W, și colab. Vizualizator genomic integrativ. Nat Biotechnol. 2011;29:24–26. https://doi. org/10.1038/nbt.1754

12. Zivná M, Kidd K, P ristoupilová A, și colab. Diagnostic imunohistochimic neinvaziv și mutații noi MUC1 care provoacă boală renală tubulointerstițială autozomal dominantă [corecția publicată apare în J Am Soc Nephrol. 2020;31: 892]. J Am Soc Nephrol. 2018;29:2418–2431. https://doi.org/ 10.1681/ASN.2018020180

13. Cormican S, Connaughton DM, Kennedy C, et al. Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă (ADTKD) în Irlanda. Ren Fail. 2019;41:832–841. https://doi.org/10.1080/ 0886022X.2019.1655452

14. Gast C, Marinaki A, Arenas-Hernandez M, et al. Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă – UMOD este cea mai frecventă boală renală genetică non-polichistică. BMC Nephrol. 2018;19:301. https://doi.org/10.1186/s12882-018- 1107-a

15. Yamamoto S, Kaimori JY, Yoshimura T, et al. Analiza unei familii ADTKD cu o nouă mutație frameshift în MUC1 dezvăluie trăsături caracteristice ale proteinei MUC1 mutante. Transplant Nephrol Dial. 2017;32:2010–2017. https://doi.org/10. 1093/ndt/gfx083

16. Olinger E, Hofmann P, Kidd K, et al. Spectrele clinice și genetice ale bolii renale tubulointerstițiale autosomal dominante datorită mutațiilor în UMOD și MUC1. Rinichi Int. 2020;98:717–731. https://doi.org/10.1016/j.kint.2020.04.038

17. Bleyer AJ, Kmoch S, Antignac C, et al. Prezentare clinică variabilă a unei mutații MUC1 care provoacă boală renală chistică medulară tip 1. Clin J Am Soc Nephrol. 2014;9:527– 535. https://doi.org/10.2215/CJN.06380613

18. Ayasreh N, Bullich G, Miquel R, et al. Boala renală tubulointerstițială autozomal dominantă: prezentarea clinică a pacienților cu ADTKD-UMOD și ADTKD-MUC1. Am J Rinichi Dis. 2018;72:411–418. https://doi.org/10.1053/j.ajkd.2018.03. 019

Eri Okada1,2 , Naoya Morisada1,3 , Tomoko Horinouchi1 , Hideki Fujii4 , Takayuki Tsuji5 , Masayoshi Miura6 , Hideyuki Katori7 , Masashi Kitagawa8 , Kunio Morozumi9 , Takanobu Toriyama10, Natsuki Natsuki11, Yuki Natsukashi11 do1, Yuya Aoto1, Shinya Ishiko1 , Rini Rossanti1 , Nana Sakakibara1 , China Nagano1 , Tomohiko Yamamura1 , Shingo Ishimori1 , Joichi Usui2 , Kunihiro Yamagata2 , Kazumoto Iijima13,14, Toshiyuki Imasawa15 și Kandai Nozu1