Influența polizaharidei de astragalus asupra stării renale și a indicilor de fibroză ai unui model de șobolan de nefropatie diabetică indusă de streptozotocină

Pentru mai multe informatii:emily.li@wecistanche.com

Yue Ji, Xue-Rou Yan, Hong-Tao Yang, Kang Yang, Qing-Yun Zhao, Shou-Ci Hu, Qi-Hang Su

1 Universitatea de Medicină Tradițională Chineză din Tianjin, Tianjin, China.

2 Primul spital didactic al Universității de Medicină Tradițională Chineză din Tianjin, Tianjin, China

Repere

Deși nu a fost observat niciun efect de reducere a zahărului din sânge, polizaharida de astragalus s-ar putea îmbunătățirenaltubularleziuni interstițiale la șobolanii cu nefropatie diabetică și stadiul incipient alrenalfuncţiedeteriora, care poate fi legat de reglarea în jos a TGF- 1 și -SMA.

Abstract

Obiect: Examinarea efectului polizaharidei de astragal (APS) asupra stării renale și a indicilor de fibroză la șobolani cu nefropatie diabetică. Metode: 72 de șobolani masculi au fost împărțiți aleatoriu în trei grupuri: grup martor negativ (NC, n=24); grup model de nefropatie diabetică (DNM, n=24); și model de nefropatie diabetică cu grupul APS (DNM plus APS, n=24). Șobolanii din grupurile DNM și DNM plus APS au fost supuși atât la nefrectomie unilaterală, cât și la injecție cu streptozotocină (STZ) (65 mg/kg). Şobolanii din grupul DNM plus APS li s-a administrat 50 UI/kg/zi APS prin injecţie subcutanată din prima săptămână după operaţie până la moarte. Șobolanii din grupul NC și DNM au fost injectați subcutanat cu un volum identic de soluție salină fiziologică. În săptămânile 3, 8 și 13 după operație, 6 șobolani din fiecare grup au fost sacrificați aleatoriu și s-a colectat sânge pentru a măsura creatinina serică și azotul ureic din sânge. Cu o zi înainte de sacrificiu, șobolanii au fost plasați într-o cușcă metabolică timp de 24 de ore pentru a colecta urina. În săptămâna 14 după operație, 6 șobolani din fiecare grup au fost selectați aleatoriu pentru a măsura greutatea corporală și indicele rinichilor. S-a recoltat sânge pentru a măsura glicemia. Rinichii au fost recoltați pentru a detecta modificări patologice prin colorarea cu hematoxilină și eozină. Rezultate: Evaluarea histologică a șobolanilor DNM a sugerat simptome de deteriorare, evidențiate prin hiperplazia matricei mezangiale glomerulare, atrofia tubilor renali și îngroșarea membranei bazale. În schimb, șobolanii cu nefropatie diabetică indusă de STZ tratați cu APS (50 UI/kg/zi) au prezentat rezultate histologice semnificativ îmbunătățite, sugerând că APS are un efect benefic asuprarenalșervețelela șobolanii DNM induși de STZ. Rezultatele noastre au indicat, de asemenea, că APS a atenuat leziunile renale și a îmbunătățit în mod eficient greutatea corporală la șobolanii DNM. Raportul dintre greutatea rinichilor și greutatea corporală a fost redus și stadiul incipient al afectarii funcției renale a fost îmbunătățit după tratamentul APS. În stadiile ulterioare ale bolii, proteina urinară de 24 de ore a scăzut semnificativ. Mai mult, APS a reglat în jos expresia TGF- 1 și -SMA a rinichiului. Concluzie: APS sa îmbunătățit semnificativrenaltubularleziuni interstițiale la șobolanii DNM și stadiul incipient al afectarii funcției renale. Mecanismul poate fi legat de reglarea în jos a expresiei TGF- 1 și -SMA care întârzie progresia fibrozei interstițiale renale la șobolanii DNM.

Cuvinte cheie: DiabeticNefropatie, polizaharidă de astragalus,Renalindex, Fibroză, TGF- 1, -SMA

Cistanche este bun pentru funcția renală

fundal

Nefropatia diabetică (DN) este o complicație cranian comună a diabetului zaharat cu morbiditate ridicată. Aproximativ 25-50 procente dintre pacienții cu diabet suferă de DN. Acești pacienți prezintă o pierdere progresivă arenalfuncţie, care poate duce la boală renală în stadiu terminal, cum ar fi insuficiența renală [1]. Patogenia și mecanismul DN nu sunt complet clare. Studii recente au arătat că disfuncția metabolismului energetic și distrofia pot declanșa memoria metabolică, care inhibă dezvoltarea și funcția de secreție a celulelor pancreatice, rezultând în final DN [2].

Medicina tradițională chineză (TCM) a fost utilizată pe scară largă pentru a trata DN și a demonstrat efecte bune. Conform teoriei TCM, factorul etiologic al DN este staza de sânge, care provoacă tulburări în funcționarea corpului, inhibă producția de Qi și sânge și declanșează o deficiență de Qi. Deficiența de Qi poate induce progresia DN. Studiile au sugerat că injecția Shuxuetong [extract de Shuizhi (Hirudo) și Dilong (lumbricus)] îmbunătățește dramatic nivelul de glucoză din sânge șirenalfuncţiea pacienților cu DN [3]. Huangkui Capsule extract de Huangkui (abelmosk)] îmbunătățește microinflamația la pacienții cu DN [4]. Pastilele de salvare ameliorează microinflamația și stresul oxidativ la pacienții care suferă de cronică indusă de DNrenaleșec[5]. În plus, pilula Tangweikang, inclusiv Huangqi (Radix Astragali seu Hedsari), Shuizhi (Hirudo) și Wuweizhi (Fructus Schisandrae Chinensis), sunt utilizate pe scară largă în practica clinică [6, 7]. Cercetătorii au demonstrat că Tangweikang Pill reglează în sus expresia metaloproteazei matriceale-9 și reglează în jos expresia inhibitorului tisular al metaloproteinazelor-1 la un rinichi de șobolani cu model de nefropatie diabetică (DNM) [8, 9].

Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari), care suplimentează Qi, activează circulația și reduce staza sângelui, este printre cele mai importante plante medicinale pentru tratarea DN în clinică[10,11]. După cum se menționează în unele cărți antice clasice ale MTC, inclusiv Tang Ye Ben Cao compilate de Wang Haogu[12] și Yi Zong. Jin Jian compilat de Wu Qian [13], simptomele DN sunt similare cu cele ale „boala setei de dispersie”, „hidros”, „urină tulbure” și „boală consumativă” din medicina chineză și principala patogeneză a DN. se datorează anomaliei Sanjiao (sus, mijloc sau inferior)[14]. Deficiența de Qi și Yin sunt manifestări ale disfuncțiilor viscerelor sau intestinelor. Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) a fost aplicat în DN[15] pentru a trata leziunile pulmonare, splinei, hepatice și renale, precum și pentru a îmbogăți Qi și Yin, pentru a crește fluxul sanguin și pentru a curăța vasele de rețea. Polizaharida Astragalus (APS) (Aprobat Nr. Z20040085) este una dintre principalele componente foarte active din Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari). În ultimii ani, s-a descoperit că APS are o gamă largă de efecte farmacologice asupra expresiei moleculelor de semnalizare a insulinei în țesutul renal al șobolanilor cu diabet de tip 2 [16]. Cu toate acestea, se cunosc puține despre factorii care influențează mecanismele fazei mijlocii și târzii ale DN. Scopul acestui studiu a fost de a investiga influența APS asupra stării renale și a indicilor de fibroză a șobolanilor cu DN.

Materiale și reactivi

Animale și tratament

Animale de laborator și mediul de hrănire. Șaptezeci și doi de șobolani masculi Sprague-Dawley sănătoși, cu o greutate corporală medie de 180± 20 g la vârsta de 8 săptămâni, au fost găzduiți la temperatura camerei (23± 1 grade) cu un ciclu de 12 ore de lumină și 12 ore de întuneric (lumini aprinse de la 6:00 am până la 6:00 pm). Mâncarea și apa erau disponibile ad libitum. Experimentele au fost efectuate conform reglementărilor instituționale și criteriilor naționale de experimentare pe animale. Comitetul de etică a animalelor a instituției a revizuit întregul protocol animal înainte de a efectua experimentele. Procedurile experimentale s-au conformat cu directiva 2010/63/UE a Parlamentului European și toate animalele au fost manipulate în conformitate cu liniile directoare ale Comitetului de Cercetare a Animalelor de la Universitatea din Tianjin din TCM (TCMLAEC2014005).

Gruparea și modelarea animalelor. DN a fost indus prin nefrectomie unilaterală și administrare intraperitoneală unică a 65 mg/kg de streptozotocină (STZ)[17. 21], care a fost dizolvat în tampon citrat de sodiu la pH 4.2.4.5. Animalele de control au fost injectate cu vehicule (tampon de citrat de sodiu, pH 4.2-4.5). Şobolanii au fost împărţiţi aleatoriu în trei grupuri grupul martor negativ (NC, n =24); DNM,n=24;și DNM cu grup APS (DNM plus APS,n =24). Şobolanii din grupul DNM plus APS li s-a administrat APS (50 UI/kg/zi) prin injecţie subcutanată din prima săptămână după operaţie până la moarte. Șobolanii din grupul NC și DNM au fost injectați subcutanat cu un volum identic de soluție salină fiziologică.

Indicatori și metode de detectare

Afirmație generală. În săptămâna 14 după operație, 6 șobolani din fiecare grup au fost selectați aleatoriu pentru măsurarea greutății corporale, a greutății rinichilor și a indicelui renal. Sângele a fost recoltat prin metoda canthus interior pentru testarea biochimică a glicemiei (ACCU -CHEK, Indianapolis, IN, SUA). Indicele de rinichi a fost calculat după cum urmează: indice de rinichi=greutate rinichi/greutate corporală × 100 la sută .

Funcția rinichilor și 24-h proteine ​​urinare. În săptămânile 3, 8 și 13 după operație, 6 șobolani din fiecare grup au fost sacrificați aleatoriu și sânge a fost colectat prin metoda aortei abdominale pentru testarea biochimică a creatininei serice (Scr) și a azotului ureic din sânge (BUN). Cu o zi înainte de sacrificiu, șobolanii au fost plasați în cuști metabolice timp de 24 de ore pentru a colecta urina, care a fost testată prin reacția biuretului timp de 24 de ore de proteină urinară. Probele de sânge au fost centrifugate la 3000 rpm timp de 15 minute, iar serul a fost colectat și depozitat la grade -80 până la analiză așa cum este descris mai jos. Scr, BUN și proteina totală din urină în 24 de ore au fost testate pe un cititor de plăci folosind un kit de reactivi experimental. Examen patologic și imunohistochimic. După cum s-a descris mai sus, după ce au fost obținute sângele și urina, toate animalele au fost sacrificate prin dislocare cervicală. Rinichii au fost complet expuși și separați cu grijă de țesutul periferic și de capsula renală. După efectuarea unei incizii longitudinale împreună cu țesuturile renale cu o lamă ascuțită și recoltarea, a fost efectuată fixarea cu formol de 10% pentru a detecta modificări patologice prin colorare cu hematoxilină și eozină (HE) și imunohistochimie (IHC). Țesuturile renale au fost apoi încorporate în parafină și tăiate în secțiuni de 5 uM pentru colorare cu HE, în timp ce expresia TGF- 1 și -SMA a fost detectată prin IHC folosind metoda streptavidin-peroxidază.

analize statistice

Datele au fost analizate cu software-ul SPSS 13.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL, SUA). Toate datele au fost exprimate ca medie ± abatere standard în tabele și indicate prin bare verticale în figuri. Diferențele dintre grupuri au fost determinate prin analiza varianței. O valoare de probabilitate a lui P mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă.

Rezultat

Caracteristici generale

Greutatea corporală în grupul DNM a fost semnificativ scăzută în comparație cu cea din grup (P=0.001, Tabelul 1). Greutatea corporală în grupul DNM plus APS a fost semnificativ crescută în comparație cu grupul DNM (P=0.017, Tabelul 1). Indicele de rinichi a fost mai mare în grupul DNM decât în ​​grupul NC (P=0.001, Tabelul 1). Mai mult, indicele de rinichi a fost scăzut în grupul DNM plus APS comparativ cu grupul DNM (P= 0.026, Tabel 1). Glicemia a fost crescută în grupul DNM comparativ cu grupul NC (P=0.001, Tabelul 1), în timp ce nu a existat o diferență evidentă în grupul DNM pentru glicemie, între grupul ] și DNM plus APPS indicând faptul că Numai APS pentru a menține nivelurile stabile de zahăr din sânge în săptămâna 14 nu este eficient.

Indici biochimici

Nu a existat nicio diferență semnificativă în nivelul Scr și BUN sau în nivelul proteinei din urină de 24 de ore la momente diferite în fiecare grup (Tabelul 2-3), în comparație cu grupul NC, șobolanii din grupul DNM au prezentat niveluri BUN în mod evident mai mari. la diferite momente de timp (P=0.021, P=0.012, P=0.008, respectiv, Tabelul 2). Comparativ cu grupul DNM, șobolanii DNM plus APS au prezentat niveluri BUN în mod evident mai scăzute în săptămânile 3 și 8 (P=0.017 și, respectiv, P= 0.015, Tabelul 2). Comparativ cu grupul NC, șobolanii din grupul DNM au prezentat niveluri Scr în mod evident mai mari la diferite momente de timp (P=0.033, P=0.026, P=0.028, respectiv, Tabelul 3 ) Comparativ cu grupul DNM. Șobolanii DNM plus APS au prezentat niveluri Scr în mod evident mai scăzute în săptămâna 8 (P= 0.021, Tabelul 3), în timp ce nu s-a observat nicio diferență în săptămânile 3 și 13. În comparație cu grupul NC, șobolanii din grupul DNM au prezentat 24 semnificativ mai mari. h nivelurile de proteine ​​din urină (P=0.021, P= 0.037, P{= 0.019, respectiv, Tabelul 4) și după săptămâna 8, proteina urinară a crescut dramatic (P{{{ 38}}.017, Tabelul 4). Comparativ cu grupul DNM. Șobolanii DNM plus APS au prezentat niveluri semnificativ mai scăzute de proteine ​​​​în urină de 24 de ore în săptămâna 13 (P=0.011, Tabelul 4).

Constatări patologice

Structura glomerulară a fost clară în grupul NC și nu a fost observată nicio anomalie evidentă hiperplazie mezenchimală sau îngroșare a membranei bazale. Corticala si medulararenaltubularstructurile au fost normale, aranjate în ordine, fără inflamație și fibroză (Figura 1A), în comparație cu grupul NC. Colorația HE în grupul DNM (Figura 1B) a evidențiat hiperplazia matricei mezangiale glomerulare, atrofia tubilor renali și îngroșarea membranei bazale. În unele zone, au fost observate glomeruloscleroza focală, îngroșarea capsulei Bowman și infiltrarea celulelor inflamatorii interstițiale renale și proliferarea fibroasă. Aceste modificări patologice în comparație cu grupul DNM au fost ameliorate în diferite grade în grupul DNM plus APS (Figura 1C). Mai mult, grupul DNM plus APS a arătat că atrofia tubului renal a scăzut dramatic și fibroza interstițială renală nu a fost observată clar în colorația HE.

Efectul de imunocolorare al TGF- 1 și -SMA în țesutul renal

Rezultatul imunocolorării TGF- 1 în grupul NC (Figura 2A) a evidențiat o expresie ușor pozitivă în celulele epiteliale tubulare renale care apar ca particule difuze maro-gălbui sau maro și majoritatea glomerulii au prezentat expresie negativă. În comparație cu grupul NC, au fost observate numeroase granule maro-gălbui pozitive în regiunile tubulare renale și interstițiale renale din grupul DNM (Figura 2B), indicând că expresia TGF- 1 înrinichia fost mai mare decât cea din grupul NC. Mai mult, în grupul DNM plus APS (Figura 2C) nivelul reactanților pozitivi granulari galbeni a arătat o ușoară pierdere de culoare și a fost scăzut în comparație cu cei din grupul DNM. În grupul NC (Figura 2D), expresia pozitivă a -SMA a apărut ca câteva particule maro-gălbui sau maro localizate în principal în celulele musculare netede vasculare arteriale renale și, ocazional, în tubii renali și interstițialul renal. În comparație cu grupul NC, zona interstițială mai renală a fost acoperită de particule maro-gălbui sau maro, ceea ce indică faptul că expresia a-SMA a fost îmbunătățită în grupul DNM (Figura 2E). Mai mult, în grupul DNM plus APS (Figura 2F) nivelul reactanților pozitivi granulari galbeni a arătat o ușoară pierdere de culoare și a fost scăzut în comparație cu grupul DNM.

Discuţie

DN este o complicație diabetică gravă, cu caracteristici clinice ale ratei de excreție a proteinelor urinare care cresc în timp și hipofuncția renală progresând spre nefroză în stadiul terminal. Multe produse patologice diabetice, inclusiv catecolamine, endotelina, factorul de creștere asemănător insulinei-1, produsele finale de glicație avansată și TGF- 1, au fost corelate cu fibroza de organ. Studiile anterioare au indicat că calea de semnalizare indusă de TGF- 1-exercită un rol participativ important înrenalfibrozăîn anumite stări patologice renale [22]. În acest studiu, am pregătit un model animal de DN prin uninefrectomie și injecție cu streptozotocină [23]. Șobolanii din grupul DNM au prezentat gravrenalrănireincluzând niveluri crescute de glucoză din sânge și BUN seric și niveluri crescute de proteine ​​​​în urină la 24 de ore, precum și o scădere semnificativă a greutății corporale. În plus, studiile de patologie la rinichi au evidențiat hiperplazia matricei mezangiale glomerulare, atrofia tubilor renali și infiltrarea celulelor inflamatorii, indicând faptul că DN la șobolani are ca rezultat un volum mare de proteinurie. Rezultatele studiului actual au indicat că APS, o componentă a TCM, reglează în jos expresia a-SMA și TGF- 1 în rinichii diabetici și joacă un rol important în dezvoltarea fibrozei renale asociate cu DN la șoareci. .

Acumularea matricei extracelulare este o cauză a glomerulosclerozei și fibrozei tubulointerstițiale în procesul patologic al DN, iar TGF- 1 joacă un rol important în fibroza tubulointerstițială. TGF- 1 poate induce aderența și sedimentarea matricei intercelulare și poate inhiba degradarea matricei celulare, contribuind la fibroza tubulointerstițială [24, 25]. Astfel, inhibarea TGF- 1 poate ușura progresia DN. Jeremiah [26] a efectuat experimente cu șobolani UUO și a arătat că, după îndepărtarea unei obstrucții, fibroza interstițială tubulară renală a fost ameliorată și expresia TGF- 1 a fost reglată în jos, susținând că inhibarea exprimării ridicate a TGF{- 1 poate ameliora sau întârzia. fibroza interstițială a tubului renal.

În ultimii ani, majoritatea studiilor despre TGF- au explorat calea de transducție a semnalului. TGF- poate induce activarea unei varietăți de molecule de semnalizare, cum ar fi proteinele Smad, protein kinazele activate de mitogeni și fosfatidilinozitol 3 kinaza/protein kinaza B etc., iar calea de semnalizare TGF- 1/Smad este o cale majoră. inductor [27] al fibrozei renale. -SMA este o proteină a citoscheletului din celulele eucariote care afectează structura microfilamentului celulelor [28]. În țesutul renal normal, -SMA se exprimă doar în mijlocul vasului renal și se exprimă rar în glomeruli și interstițiul renal. În condiții patologice în rinichi, -SMA poate fi exprimată și proliferată în jurul regiunii mezenchimale glomerulare, în zona înconjurătoare a glomerulului, în zona de fibroză înconjurătoare și în jurul vaselor de sânge [29].

Fibroblastele pot fi transformate în miofibroblaste în anumite condiții, iar modificările din micromediu pot afecta transformarea fibroblastelor în miofibroblaste. Nu numai transdiferențierea funcției celulelor epiteliale tubulare renale, ci și activarea fibroblastelor interstițiale renale duce la fibroză interstițială renală, având ca rezultat proliferarea fibroblastelor musculare de activare. Multe studii ale bolii renale au confirmat că numărul de fibroblaste musculare, nivelul de expresie a -SMA și gradul de fibroză interstițială renală sunt corelate pozitiv cu progresia bolii renale. Proteina marker -SMA este un indicator important al progresiei fibrozei interstițiale renale [30].

Alte studii au raportat că TCM are efecte benefice în tratarea DN. Chen și colab. [31] au indicat că un amestec de Gegen (Radix Puerariae) și Shanzha (Fructus Crataegi) inhibă leziunile renale în diabetul de tip 2 prin scăderea PI3K/Akt. Zhang și colab. [32] au indicat că granulele Shenkang ameliorează leziunea renală la un model de șobolan de DN prin prevenirea acumulării matricei extracelulare, scăderea expresiei colagenului I și III și inhibarea expresiei metaloproteinazelor matriceale-2 și { {5}} în țesutul renal. Deosebit de relevante pentru prezentul studiu sunt descoperirile recente conform cărora o combinație de APS și un alt extract de TCM, rhein, atenuează patologiile cronice.renaleșec, inclusiv afectarea funcțională a glomerulilor, inflamația interstițială și apoptoza celulelor tubulare renale [33].

În studiul de față, am constatat că APS a redus expresia -SMA și TGF- 1 in vivo și a atenuat leziunea țesutului renal. În comparație cu studiile anterioare ale TCM în DN, efectul protector a avut loc printr-un mecanism diferit, sugerând că o strategie terapeutică compusă TCM pentru DN poate fi eficientă.

Cu toate acestea, efectul de reglare în jos asupra zahărului din sânge nu a fost observat după tratamentul APS. Previzăm că, pe măsură ce boala a progresat (perioada de observație: 13 săptămâni), utilizarea APS în monoterapie pentru a menține nivelurile stabile de zahăr din sânge în timp nu este eficientă. Experimentele anterioare au arătat rezultate similare [34, 35], cu toate acestea, este necesară o confirmare suplimentară. În unele studii clinice, agenții TCM sunt prescriși ca agenți unici, iar administrarea concomitentă a doi sau mai mulți agenți (APS plus metformină sau APS plus insulină) poate fi necesară pentru majoritatea pacienților.

Concluzie

În concluzie, am demonstrat că APS are efecte semnificative asupra DN, APS nu numai că a scăzut semnificativ afectarea funcției renale în stadiul inițial și albumina urinară în stadiul mediu și târziu, dar și a îmbunătățit leziunea interstițială tubulară renală la șobolanii DN. Mecanismul poate fi legat de reglarea în jos a exprimării TGF- 1 și -SMA și, în consecință, o întârziere a progresiei fibrozei interstițiale renale la șobolanii DN.

Referințe

1 Pang GM, Yan Y, Zhu P și colab. Proiectul clinic al specificațiilor medicinei tradiționale chineze despre neuropatia periferică diabetică. Chin J Tradit Chin Med Pharm 2010,

2: 260-264. 2. Wang YZ, Zhang ZH. Mecanismul nefropatiei diabetice. Chin Rem Clin 2008, 8: 58-60.

3. Xiang HD. Patologic în nefropatia diabetică. Int J Endocrinol 2004, 24: 125-136.

4. Min XL, Lan LG. Efectul injecției Shu-Tong asupra nefropatiei diabetice. Shanxi J Tradit Chin Med 2008, 29: 407-409.

5. Gao ZT, Wang G. Efectul capsulei Huangkui asupra microinflamației la pacienții cu diabet. Chin J Integr Tradit West Nephrol 2011, 12: 1104-1105.

6. L Lin, Ni Q, Liu XM. Capsula Tang-Wei-Kang inversează nefropatia diabetică la 132 de pacienți. J Med Res 2008, 37: 46-50. 7. Wang HW, Qing N, Pang JL și colab. Studiul regulii despre medicina chineză în tratarea nefropatiei diabetice. Chin Arch Tradit Chin Med 2008, 26: 2365-2368.

8. Lin L, Guo L. Efectul TWK asupra expresiei MMP -9 în cortexul renal la șobolanii diabetici induși de streptozotocină. J Shanxi Coll Tradit Chin Med 2003, 4: 8-18.

9. Lin L, Qing Q, Liu XM. Efectele și mecanismele capsulei Tang-Wei-Kang care protejează funcția rinichilor la șobolan cu diabet zaharat. Chin J Chin Mat Med 2003, 28: 62-66.

10. Wang W, Koka V, Lan HY. Transformarea factorului de creștere-beta și semnalizarea Smad în bolile de rinichi. Nephrol 2005, 10: 48-56.

11. Alexopoulos E, Gionanlis L, Papayianni E, et al. Predictorii de rezultat în glomerulonefrita idiopatică rapid progresivă. BMC Nephrol 2006, 7: 1-13.

12. Wang HG. Decoctul si Material Medica. Editura Medicală Populară, 1986.

13. Wu Q. Oglinda de aur a medicinei. Presa de medicină chineză, 2002.

14. Ji Y, Li JC, Meng JY, et al. Studiul efectului de reglare dublă direcțională al perechii de medicamente Ban Xia (Pinellia ternata) și Huanglian (Coptis Chinensis) asupra mișcării gastrointestinale a șoarecilor. Tradit Med Res 2018, 3: 148-156.

15. Ji Y, Wang TR, Zhang KX, et al. Analiza literaturii de specialitate a regularității și reacției adverse a scorțișoarei și a preparatelor ei prescrise. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 163-168.

16. Zhou Y, Wu Y. Efectele polizaharidei de astragalus asupra transducției semnalului de insulină în țesutul renal al șobolanilor cu diabet zaharat de tip 2. J Hubei Med Univ 2005, 18: 242-247.

17. Xu Y, Zhou SW, Tang JL și colab. Selecția optimă a modelelor de șobolan de nefropatie diabetică experimentală. Acta Acad Med Milita 2006, 28: 2247-2249.

18. Li ZJ, Zhang Y. Progresele cercetării asupra unui model animal de nefropatie diabetică. Chin B Life Sci 2011, 23: 90-95.

19. Yang F, Tang LQ, Wang FL și colab. Factori influenți în stabilirea nefropatiei diabetice experimentale la șobolani. Anhui Med Pharma J 2012, 16: 735-738.

20. Yaribeygi H, Mohammadi MT, Rezaee R, et al. Fenofibratul îmbunătățește funcția renală prin ameliorarea exprimării NOX-4, IL{-18 și p53 într-un model experimental de nefropatie diabetică. J Cell Biochem 2018.

21. Zhao Y, Huang W, Wang J, și colab. Taxifolina atenuează nefropatia diabetică la șobolanii diabetici induși de streptozotocină. Am J Transl Res 2018, 10: 1205-1210.

22. Boukhalfa G, Desmouliere A, Rondeau E, et al. Relația dintre expresia actinei musculare alfa-netede și modificările fibrotice în rinichiul uman. Exp Nephrol 1996, 4: 241-247.

23. Hewitson TD, Becker GJ. Miofibroblaste interstițiale în glomerulonefrita IgA. Am J Nephrol 1995, 15: 111-117.

24. Tang WW, Van GY, Qi M. Miofibroblast și colagen alfa 1 (III) în nefrita tubulointerstițială experimentală. Kidney Int 1997, 51: 926-931.

25. Iwano M, Plieth D, Danoff TM, et al. Dovezi că fibroblastele derivă din epiteliu în timpul fibrozei tisulare. J Clin Invest 2002, 110: 341-350.

26. Grupp C, Lottermoser J, Cohen DI, et al. Transformarea fibroblastelor medulare interne de șobolan în miofibroblaste in vitro. Kidney Int 1997, 52: 1279-1290.

27. Ina K, Kitamura H, Tatsukawa S, et al. Semnificația -SMA în miofibroblastele care apar în fibroza tubulointerstițială renală. Histol Histopathol 2011, 26: 855-866.

28. Murphy JT, Duffy SL, Hybki DL, et al. Permeabilitatea mediată de trombină a celulelor endoteliale pulmonare microvasculare umane este dependentă de calciu. J Trauma 2001, 50: 213-222.

29. Satpathy M, Gallagher P, Lizotte-Waniewski M, et al. Fosforilarea indusă de trombină a lanțului ușor reglator al miozinei II în celulele endoteliale corneene bovine cultivate. Exp Eye Res 2004, 79: 477-486.

30. Birukova AA, Smurova K, Birukov KG, et al. Rolul Rho GT trece în disfuncția barierei celulelor endoteliale vasculare pulmonare indusă de trombină. Microvasc Res 2004, 67: 64-77.

31. Z Chen, Y Yuan, X Zou și colab. Amestecul Radix Puerariae și Fructus Crataegi inhibă leziunile renale în diabetul de tip 2 prin scăderea AKT/PI3K. Bmc Complementary & Alternative Medicine 2017, 17: 454-458.

32. Yu Zhang, N Zhou, H Wang, S Wang și colab. Efectul granulelor Shenkang asupra progresiei insuficienței renale cronice la 5/6 șobolani nefrectomizați. Medicină experimentală și terapeutică 2015, 9: 2034-2042.

33. Y Lian, L Xie, M Chen, et al. Efectele unei combinații de polizaharide de astragalus și ren asupra apoptozei la șobolani cu insuficiență renală cronică [J]. Evid Based Complement Alternat Med 2014, 27:1862-1868.

34. Lai YN, Yu MH, Zhu QY și colab. Efectul polizaharidelor de astragalus asupra TGF- 1 în țesutul renal al șobolanilor diabetici. Fudan Univ J Med Sci 2002, 29: 255-257. 35. Li ZJ, Zhang Y, Liu YM, et al. Efectul polizaharidelor de astragalus asupra expresiei nefrinei și podocinei în podocitele șobolanilor cu nefropatie diabetică timpurie. Chin J Pathophysiol 2011, 27: 1772-1776.