Vaccinul pe bază de MRNA pentru COVID-19: Sunt noi, dar nu necunoscuti!

Rezumat:

Vaccinurile cu ARNm profită de mecanismul pe care celulele noastre îl folosesc pentru a produce proteine. Celulele noastre produc proteine ​​pe baza cunoștințelor conținute în ADN-ul nostru; fiecare genă codifică o proteină unică. Informația genetică este esențială, dar celulele nu o pot folosi până când moleculele de ARNm o transformă în instrucțiuni pentru producerea de proteine ​​specifice. Vaccinările ARNm oferă instrucțiuni ARNm gata de utilizare pentru construirea unei proteine ​​specifice. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) și ARNm-1273 (Moderna) sunt ambele vaccinuri COVID-19 pe bază de ARNm recent aprobate, care au demonstrat o protecție și eficacitate excelente. În total, există încă cinci candidati de vaccin pe bază de ARNm pentru COVID-19 în diferite faze de dezvoltare clinică. Această revizuire se concentrează în mod special pe vaccinurile pe bază de ARNm pentru COVID-19, acoperind dezvoltarea, mecanismul și aspectele clinice ale acestuia.

cistanche beneficii pentru bărbați-întărește sistemul imunitar

Cuvinte cheie:

vaccin COVID-19; vaccinuri ARNm; dezvoltarea vaccinului; vaccinuri pe bază de vectori

1. Introducere

Boala coronavirus{{0}} (COVID-19) pandemie cauzată de sindromul respirator acut sever coronavirus-2 (SARS-CoV-2) s-a răspândit în întreaga lume. În prezent, la nivel global, au existat 662 de milioane de cazuri confirmate de COVID-19, inclusiv 6,6 milioane de decese raportate la Organizația Mondială a Sănătății (OMS) [1]. Virusul afectează peste 200 de țări din întreaga lume, majoritatea cazurilor raportate în Brazilia, Rusia și Statele Unite [2]. Primul raport al unui focar de COVID-19 a fost din orașul Wuhan, provincia Hubei din China, la 30 decembrie 2019. În Wuhan au fost înregistrate grupuri de cazuri de pneumonie. Mai târziu, pe 7 ianuarie 2020, s-a descoperit că un nou coronavirus (2019-nCoV) este agentul cauzal. În cele din urmă, OMS a numit boala COVID-19 [3,4]. Rata de letalitate estimată variază între 0,5-1,5%. SARS-CoV-2 aparține familieiCoronaviridaesi ordineaNidovirales. SARS-CoV-2 aparține Betacoronavirusului având o relație genomică strânsă cu doi virusuri, SARS-CoV și coronavirusul sindromului respirator din Orientul Mijlociu (MERS CoV). În comparație cu SARS și MERS, SARS-CoV-2 este foarte contagios. COVID-19 este o boală gravă de importanță globală. Boala nu poate fi tratată cu un medicament antiviral specific, cheia pentru prevenirea răspândirii bolii este întreruperea lanțului de transmitere [5]. Pentru a reduce prevalența și ratele mortalității, se utilizează imunizarea în masă împotriva pandemiei [6,7]. De când secvența genomului SARS-CoV-2 a fost lansată pe 11 ianuarie 2020, au fost studiate peste 150 de proiecte de imunizare ale autorităților. Scopul principal al vaccinării este de a induce un răspuns imun care oferă protecție pe termen lung împotriva severității bolii [8]. După cum au evaluat Paddy Ssentongo și colegii [9], eficacitatea vaccinului (VE) împotriva tuturor infecțiilor cu SARS-CoV-2 a scăzut de la 83% în prima lună după finalizarea primei serii de imunizare la 22% după 5 luni sau mai mult. . În mod similar, VE împotriva COVID simptomatic-19 a scăzut de la 94% în prima lună la 64% în a patra lună după imunizare. În general, VE împotriva COVID sever-19 a fost puternică la toate vârstele, cu un nivel de 90% (IC 95%, 87–92%) la cinci luni sau mai mult după vaccinarea completă.

Coronavirusul a crescut proteina (S) pe suprafața sa; această proteină S va interacționa cu domeniul de legare la receptor al receptorului enzimei de conversie a angiotensinei (ACE) [10,11]. Majoritatea candidaților la vaccin vizează această proteină S a virusului [12]. Vaccinul Pfizer BioNTech COVID-19-BNT162b2 este prima imunizare aprobată de Food and Drug Administration (FDA). Se bazează pe ARN-ul mesager (ARNm) produs de Pfizer, care a primit autorizație de utilizare de urgență pentru vârsta de 12-15 ani sau mai mult pentru prevenirea bolii COVID-19. Administrația americană pentru alimente și medicamente (USFDA) a aprobat vaccinul Pfizer la 23 august 2021 [13]. Diverse studii au raportat că imunizarea are o eficiență de 89,1% în prevenirea infecției cu SARS-CoV-2; în plus, vaccinurile au redus, de asemenea, spitalizările, decesele și prevenirea internării în UTI legate de COVID{19}. Răspândirea controlabilă a SARS-CoV-2 poate fi realizată mai devreme atunci când o mare parte a populației este imunizată (de exemplu, 70-80%). Imunizarea reduce semnificativ incidența COVID-19. Vaccinul oferă un răspuns imunitar robust și eficient pentru eradicarea infecției SARS-CoV-2 din corpul uman. Persoanele care au fost infectate au avut un răspuns puternic al celulelor T la virus, ceea ce poate ajuta la capacitatea lor de a se recupera după infecție [14,15]. Neutralizarea a rămas puternic corelată cu protecția împotriva infecției simptomatice cu variantele de îngrijorare ale SARS-CoV-2 [16]. Astfel, vaccinarea este strategia de control al pandemiei.

cistanche tubulosa-imbunatateste sistemul imunitar

Vaccinurile COVID-19 sunt dezvoltate pe o varietate de platforme. Un virus viu atenuat, vaccinuri inactivate, vectori virali nereplicanți, ARN și ADN sunt exemple ale acestora. Diferite tipuri de vaccinuri cu exemple sunt enumerate în Figura 1. O strategie pentru dezvoltarea vaccinului este utilizarea virusului SARS-CoV-2 ucis, acesta nu se poate replica, dar poate rămâne intact în organism. Sistemul imunitar își va declanșa răspunsul împotriva virusului producând anticorpi împotriva acestuia. COVAXIN® (BBV152) fabricat de Bharat Biotech, Hyderabad, India și CoronaVac, cunoscut și sub numele de sinovac® dezvoltat de Sinovac Biotech, Beijing, China, a folosit abordarea virusului inactivat pentru a dezvolta vaccinul [17]. Vectorul viral nereplicativ este, de asemenea, o tehnică adoptată de companii pentru producția de vaccin. Adenovirusul (Ads) este un vector viral utilizat pe scară largă, care are un genom dublu catenar care acționează ca agent cauzator pentru o răceală comună. CanSino Biologics Tianjin, China a dezvoltat Ad5-nCoV (Convidecia®) care codifică întreaga lungime a proteinei S a virusului SARS-CoV-2. Vectorul viral nu posedă proprietăți de replicare și, prin urmare, nu provoacă boală reală. Odată intrat în organism, ADN-ul viral este prezentat pe celulele prezentatoare de antigen și este generat un răspuns imun împotriva acestuia. Oxford/Astrazeneca a folosit adenovirusul de la cimpanzeu (ChAdOx1) care are potențialul de a minimiza interacțiunea cu anticorpii prevalenți împotriva adenovirusului. Vaccinul se numește AZD122 (Vaxzevria™). Institutul de Cercetare Gamaleya, Moscova, Rusia a dezvoltat vaccinul Sputnik V™ este, de asemenea, un vector viral având un serotip uman Ad26 recombinant. Vaccinul Janssen a fost fabricat de Johnson and Johnson, New Jersey, SUA folosind aceeași abordare [18].

ARNm este, de asemenea, considerat o nouă abordare pentru formularea unui vaccin. Vaccinurile ARNm sunt noi pentru public, dar oamenii de știință le cercetează de mult timp. Aceste vaccinuri ARNm sunt sintetizate din șablonul ADN care codifică proteina spike și este împachetat în purtătorul pe bază de lipoproteine ​​pentru a accelera intrarea ARNm în interiorul corpului și pentru a preveni degradarea [19]. Când vaccinul este administrat pe cale intramusculară, acesta este injectat în țesuturi mai adânci și moleculele de ARNm vor intra în interiorul celulei, facilitând procesul de translație [20]. La intrarea în organism, ARNm va fi recunoscut ca un antigen și va fi activat un răspuns imun umoral care va stimula celulele B să se dezvolte în celule B de memorie. Prin urmare, la expunerea secundară la antigen; celulele B de memorie vor neutraliza și bloca antigenele [21]. FDA a aprobat vaccinuri pe bază de ARNm, dintre care unul este Pfizer-BioNTech's, New York, NY, SUA BNT162b2 (Comirnaty®) și un altul este Moderna™, Cambridge, MA, SUA ARNm-1273 cunoscut și ca Spikevax. FDA a aprobat ARNm-1273 pentru autorizarea de utilizare de urgență (EUA) pentru utilizare la persoanele cu vârsta de 18 ani și peste. Analiza actuală va oferi informații detaliate despre vaccinologie și fapte despre COVID-19, dezvoltarea vaccinurilor pe bază de ARNm, modul în care funcționează vaccinurile ARNm, formularea și ingredientele utilizate, siguranță și eficacitate și provocările de reglementare pentru vaccinuri.

Figura 1. Diferite tipuri de vaccin pentru infecția cu COVID-19. (Creat cu BioRender.com accesat pe 31 decembrie 2022)

2. Vaccinologie și fapte despre COVID-19

În decembrie 2019, un grup de persoane care sufereau de tulburări pulmonare dintr-un motiv neidentificat a fost raportată în China. Centrul chinez pentru controlul și prevenirea bolilor (CDC) a investigat apoi incertitudinea cazurilor legate de pneumonie și originea acestora prin colectarea de specimene din corpul pacientului care au fost detectate folosind reacția în lanț a polimerazei în timp real [22]. Mai târziu, a fost cunoscută cauza afecțiunii pulmonare și s-a constatat că este cauzată de un coronavirus, care a mai fost denumit SARS-CoV-2 (sindrom respirator acut sever) sau COVID{-19. De atunci, s-a transformat într-o pandemie globală. Aparține unui grup de -coronavirusuri. Din punct de vedere structural, este o anvelopă, nesegmentată, aparținând subgenului Sarbecovirusului și subfamiliei Orthocoronavirinae. Materialul genomic prezent în structura sa este secvența de ARN cu sens pozitiv monocatenar [23]. Se găsesc în principal la gazde aviare și mamifere. Structura genomică a coronavirusului a fost descrisă în Figura 2, ceea ce reprezintă că structura virală posedă proteine ​​​​spike, având subunități, S1 și S2, pe membrana exterioară. Genomul viral ARN este încapsulat în interiorul membranei împreună cu nucleocapsidul. Astfel, putem spune că există patru proteine ​​structurale, adică proteina spike (S), proteina nucleocapside (N), proteina membranară (M) și proteina învelișului (E) [24]. În plus, sunt prezente și proteine ​​nestructurale (Nsp), care sunt șaisprezece în total. Proteinele cu vârf sunt locurile proeminente de legare a receptorilor, unde proteinele pot interacționa cu receptorii prezenți în organism [25]. Subunitatea S1 include domeniul de legare la receptor (RBD), în care enzima II de conversie a angiotensinei se leagă de proteina spike. De asemenea, constă din domeniul N-terminal (NDT). Subunitatea S2 posedă proteinele de fuziune (FP) și proteinele transmembranare (TM) [26]. La intrarea virusului în celulele gazdă, acesta duce la fuziunea și neacoperirea membranei virale, urmate de transcripția și translatarea ARNm, care este esențială pentru formarea ansamblului viral, care apoi exodează din gazdă prin exocitoză pentru a infecta. alte celule. Intrarea particulelor virale în celelalte celule ale corpului duce la stimularea răspunsului imun și la generarea de anticorpi [27].

Figura 2. Structura genomică a coronavirusului. (Creat cu BioRender.com accesat la 31 decembrie 2022).

La nivel global, imunizările au fost utilizate pe scară largă și sunt eficiente în scăderea ratelor mortalității. Pe baza științei și cunoștințelor solide, evaluarea siguranței și eficacității vaccinurilor și evaluarea absorbției acestora poate fi îmbunătățită [28]. Vaccinurile au evoluat de la vaccinuri tradiționale, cum ar fi vaccinurile vii atenuate sau ucise, la vaccinuri subunități și, în sfârșit, strategii de imunizare prime-boost omoloage sau heterologe [29]. Diferite strategii de vaccinare au fost descrise în Figura 3. În antichitate, vaccinurile vii atenuate s-au dovedit a fi un salvator împotriva diferitelor virusuri patogenice și sunt considerate a fi sigure împotriva a milioane de populații, dar sunt adesea neglijate. Multe vaccinuri, inclusiv vaccinuri MMR (rujeolă, oreion, rubeolă) și vaccinuri împotriva varicelei sunt vaccinuri vii atenuate [25,30]. Formele slăbite ale virusului pot fi obținute prin expunerea acestuia la condiții nefavorabile sau prin modificări genetice. Acest tip de vaccin, în special vaccinul antipolio oral (OPV) poate fi administrat pe căi neinvazive. În schimb, vaccinurile ucise, care sunt versiunile inactivate ale virusurilor, au o aplicație limitată în ceea ce privește răspunsul imunologic, dar vaccinul indian utilizat în prezent, COVAXIN®, fabricat de Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, India utilizează versiunea inactivată a virusul în formula sa de vaccin [31]. Virusul inactivat este suficient de capabil să-și păstreze conformitatea epitomului, care ajută la modularea răspunsului imun umoral [32].

Figura 3. Interacțiunea vaccinurilor cu celulele gazdă și particulele virale. (Creat cu BioRender.com accesat pe 31 decembrie 2022)

Tehnologiile recente, cum ar fi vaccinurile pe bază de ARNm sau vaccinurile pe bază de vectori, profită la maximum de acestea pentru siguranța și eficacitatea vaccinurilor COVID-19 [33]. Vaccinurile pe bază de vectori sunt, de asemenea, cunoscute ca vaccinare heterologă de stimulare, care ajută la inducerea răspunsurilor imune atât celulare, cât și umorale, în timp ce vaccinurile sub-unități vii provoacă doar un răspuns umoral [34-39]. Potrivit unui studiu, o creștere de 5-10 ori a răspunsului imun mediat de celulele T în cazul unui vaccin heterolog pe bază de vector în comparație cu aceeași formulare, preparată folosind o abordare omoloagă [40]. Prin urmare, vaccinurile pe bază de vectori, și anume pe bază de ADN și ARN, sunt mai preferate decât cele bazate pe subunități, adesea considerate mai robuste în comparație cu vaccinurile ARN și eficiente deoarece codifică proteina vârf a structurii virusului. În cazul virusului Chikungunya, strategia de coimunizare folosind ADN și particule asemănătoare virusului a generat un răspuns imun mai bun în studiile pe animale [41]. Uneori, vaccinurile ADN necesită sisteme de livrare specializate, cum ar fi electroforeza, matrice de microace și sisteme bazate pe purtători, cum ar fi lipozomii, pentru a îmbunătăți permeabilitatea. Microsferele pe bază de acid polilactic-co-glicolic au fost formulate pentru livrarea vaccinului ADN HIV-1 pe cale intramusculară [42]. Cu toate acestea, vaccinurile pe bază de ADN generează un răspuns imun slab și adesea necesită o altă dozare. Acest lucru poate fi depășit prin utilizarea vaccinurilor pe bază de ARNm [25,43].

cistanche tubulosa-imbunatateste sistemul imunitar

3. Dezvoltarea vaccinului pe bază de ARNm

Anterior, diferite forme de ARN au fost utilizate pentru formularea vaccinului, inclusiv mARN transcris in vitro, siARN (ARN de interferență mic), aptameri pe bază de ARN, riboswitches, molecule antisens și, mai târziu, mARN. Conștientizarea acidului ribonucleic mesager, adică ARNm provine din crearea sa de bază, în plus, economică, mișcarea sa tranzitorie și descompunerea lentă în celulele țintă, iar beneficiile sale de securitate contrastează cu terapia ADN, deoarece nu coordonează genomul uman, inhibând inserția. mutageneza și este accesibilă prompt pentru interpretare în proteine ​​din citoplasma celulară [44]. La începutul anilor 1990, cercetătorii au lucrat din abundență pentru a reuși dezvoltarea vaccinurilor pe bază de ARNm. Au fost efectuate diverse experimente in vitro și rezultatele au arătat o producție ulterioară a proteinelor dorite; prin urmare, s-a ajuns la concluzia că, deoarece ARNm este suficient de capabil să producă proteine, atunci poate fi un regim terapeutic probabil pentru tratarea bolii [45]. Conform lui Martinon și colab., vaccinul ARNm pe bază de nucleoproteine ​​pentru tratamentul gripei a fost sintetizat prin transcripție in vitro și a fost încorporat în veziculele lipozomale. Rezultatele au demonstrat inducerea celulelor T citotoxice și a anticorpilor, in vivo [46]. De atunci, a existat o dezvoltare progresivă în utilizarea ARNm ca instrument terapeutic datorită eficacității sale semnificative, extinderii ușoare și rentabilității, care este o cerință primară pentru tratamentul bolilor foarte contagioase și terapia cancerului. Studii recente de cercetare au arătat că terapiile bazate pe ARNm au protejat semnificativ șoarecii de simptomele Chikungunya și au menținut nivelurile dorite de anticorpi după două doze [47]. Vaccinurile pe bază de ARN vizează celulele imune ale organismului modificându-le funcțiile, țintind ribozomii pentru traducere, generând astfel un răspuns imun [19].

Imunizările pe bază de ARNm cuprind ARNm monocatenar, care codifică antigenul dorit. Ele pot fi transportate ca ARNm liber sau încapsulate în sisteme purtătoare adecvate pentru a facilita livrarea în celule. Odată ce ARNm intră în celulă, este tradus în structuri bazate pe proteine ​​prin mecanismele naturale ale celulei. Este supusă în continuare modificări post-translaționale pentru a obține o proteină de interes și generează un răspuns imun determinat de peptidele semnal [44,48]. Vaccinurile pe bază de ARNm se confruntă cu cel puțin două obstacole: degradarea nucleară atunci când sunt injectate în animale și imunogenitatea înnăscută similară cu cea a antigenului [49]. Pentru a depăși această problemă, pseudo-uridina (Ψ) este o modificare bine-cunoscută a ARN. Ψ înlocuiește uridina cu ARNm transcris in vitro (IVT), care este o nucleotidă foarte răspândită și care apare în mod natural în toate celulele cu ARN. Vaccinarea împotriva COVID-19, produsă de ambele, Moderna și Pfizer-BioNTech constă în Ψ modificat nou, cu o eficacitate de până la 90% împotriva simptomelor [50]. În care, un vaccin dezvoltat de CureVac NV nu avea ARNm modificat cu Ψ, iar studiile clinice au confirmat doar eficacitatea de 48% [51].

În timpul procesului de traducere, în primul rând, există două categorii diferite de vaccinuri ARNm, și anume, ARNm neamplificator (RMN) și ARNm auto-amplificator (SMR). Mecanismul de lucru al ARNm care nu se amplifica și al ARNm cu autoamplificare este explicat în Figura 4. Structural, așa cum se arată în Figura 5, ambele structuri posedă un CAP, 50 și 30 de regiuni netraduse (UTR), un cadru de deschidere (ORF), și o coadă de cal în comun [52,53].

Figura 4. Categorii de ARNm. (Creat cu BioRender.com accesat pe 31 decembrie 2022)

În plus față de aceasta, SMR posedă replicază ca segment care ajută la amplificarea ARNm intracelular. Mai mult, segmentele sunt traduse de ribozomi pentru a produce proteine ​​de interes. Proteinele secretate duc la generarea unui răspuns imun [54]. SMR-urile sunt comparativ mai mari decât RMN-urile și moleculele anionice. Studiile recente ale ARN-ului cu auto-replicare au arătat o expresie mai bună in vitro a sub-genomului proteinelor nestructurale ale repliconului de encefalită ecvină venezueleană (VEE) atunci când au fost observate diferite mutații. Un studiu clinic similar a fost efectuat pentru a viza glicoproteina Rabie folosind ARN-ul autoamplificator al virusului VEE-Sindbis, formulat în nano-emulsii, este în curs de desfășurare [55]. Principalele atribute critice de calitate (CQA) care definesc eficacitatea terapiilor cu ARNm sunt rezumate în Tabelul 1 [54].

Figura 5. Optimizarea secvenței ARNm. (Adaptat după [56] cu drepturi și permisiuni).

Tabelul 1. CQA pentru vaccinurile ARNm.

Fabricarea ARNm este un proces în două etape, care include producția și purificarea. Nu sunt prezente impurități în sistemele de fabricare a ARNm, deoarece nu conține materii prime animale sau derivate din celule, producția este relativ mai sigură [65]. Producerea secvenței de ARNm poate fi un proces enzimatic într-o singură etapă sau un proces enzimatic în două etape. Un analog de plafonare este utilizat în cazul unui proces de producție într-o singură etapă, care este, în general, utilizat la scară de laborator. Procesul este apoi realizat prin purificare, care implică separarea folosind tehnici cromatografice, așa cum se arată în Figura 6. Reacția enzimatică în două etape pentru producerea de ARNm cuprinde transcripția in vitro a matriței ADN pentru a forma o secvență de ARN polimerază [66]. Șablonul de ARNm astfel format poate fi acoperit folosind enzima de acoperire vaccinia și donor de metil. Producția de ARNm este relativ mare și, la scară industrială, este dificil de realizat reproductibilitatea [67].

Figura 6. Procesul de fabricație al secvenței ARNm. (Creat cu BioRender.com accesat la 1 ianuarie 2023)

4. Cum funcționează vaccinurile ARNm?

ARNm este o moleculă instabilă încărcată negativ care este încapsulată în nanoparticule lipidice. Prin endocitoză, aceste nanoparticule lipidice pătrund în celule. Odată intrat în citoplasmă, acești endozomi sunt direcționați imediat către lizozomi pentru degradare. Studiile arată că lipidele ionizabile joacă un rol important în evacuarea endozomilor și eliberarea ARNm. Grupul de cap al lipidelor este protonat în mediul acid al endozomilor, iar această stare cationică este atașată ulterior de capul anionic al fosfolipidei din membrana endosomală. Coada hidrofobă a lipidelor cationice și a fosfolipidei se extinde apoi, perturbând structura fosfolipidei cu două straturi și permițând ARNm să scape în compartimentul citoplasmatic. Ribozomii transformă ARNm în proteine ​​atunci când este eliberat. Această proteină poate activa un răspuns imun în două moduri: (1) Proteazomul degradează aceste proteine ​​în peptide, care sunt apoi prezentate ca un antigen pe suprafața celulei de moleculele MHC (complex major de histocompatibilitate) clasa I, care se leagă de TCR (T). receptorul celular) pentru a activa celulele CD8+ T, care ucid celulele infectate; proteina în sine poate activa un răspuns imun în două moduri. (2) Proteinele secretate extracelular sunt înghițite de APC-uri (celule prezentatoare de antigen) și degradate în peptide care sunt prezentate pe suprafața celulei de MHC clasa II și recunoscute de celulele T CD4+, care secretă citokine pentru a produce un celular. răspunsul și co-activarea celulelor B pentru a produce un răspuns imun umoral, așa cum se arată în Figura 7. În plus, vaccinurile ARNm au furnizat ARN dublu și monocatenar care se leagă de TLR (receptorul Toll-like) în endozom, rezultând în stimularea a numeroase gene stimulate de IFN-1 (interferon de tip I), activând astfel răspunsurile imune înnăscute antivirale.

Figura 7. Mecanismul prin care vaccinul ARNm provoacă imunitate la gazdă. (Creat cu BioRender.com accesat la 1 ianuarie 2023)

5. Aspecte de formulare ale vaccinurilor pe bază de ARNm

Odată ce ARNm-ul transcris este injectat, acesta va exprima proteine ​​în interiorul corpului. Se observă un răspuns imunologic datorită proteinei exprimate din ARNm. Acest proces este în principal baza dezvoltării vaccinului ARNm [68].

5.1. Șablon ADN

Identificarea antigenului din patogenul țintă este pasul principal. Dezvoltarea imunizării ARNm necesită adăugarea antigenului codificat într-un model ADN, care va ajuta la traducerea ARNm in vitro. Antigenul specific va fi produs in vivo prin transcrierea ARNm transcris, care va ajunge doar la citoplasmă; acest lucru va ajuta la declanșarea unui răspuns imun. ADN-ul plasmid (pDNA) conține o secvență promotor cu afinitate puternică pentru o ARN polimerază dependentă de ADN, cum ar fi T7, SP6 sau T3, precum și secvența adecvată pentru constructul de ARNm. Enzima va trece de-a lungul șablonului, extinzând transcriptul ARN până când ajunge la capătul șablonului [69].

5.2. Enzima de plafonare

Pentru o traducere eficientă a ARNm din matrița de ADN, este foarte importantă acoperirea la capătul 50 al ARNm. Mai mult, este necesară limitarea 50 în ARNm matur pentru protecția ARNm împotriva degradării, expresiei genelor și recrutării ribozomilor. O punte 5 0 -50 -trifosfat conectează cele 50 de capace ale ARNm eucariotic la 7-metilguanozină (m7G) (m7GpppN). O nouă tehnică de co-transcripție care a folosit un kit de capac curat pentru a adăuga precis o structură naturală de 50 cap1 la locul de pornire în timpul reacțiilor IVT a făcut ca generarea de 50 de ARNm cu capsă prin polimeraza T7 să fie o metodă de acoperire utilizată în mod obișnuit, cu o translație bună și reactogenitate minimă. În vaccinurile ARNm COVID-19 BNT162b1, 5 0 capace au fost adăugate folosind metoda clean cap [70]. ARNm transcris cu analogul capac are o coadă poli 1 și o coadă 30 (poli-A) este prezentă la cele 30 de capete ale ARNm eucariotic. Această coadă poli A îndeplinește funcții de transport, translație și stabilitate ARNm. Coada de 30 poli A și capac de 50 vor crea o structură stabilă în buclă închisă cu complexul eIF4F pentru începutul procesului de traducere. Datorită celor 120 de nucleotide (nt) din coada de 30 poli(A), vaccinul ARNm BioNTech are stabilitate și eficiență de translație superioare [71].

5.3. Substraturi nucleotide trifosfat (NTP)

Când plasmidele ADN sunt integrate cu polimeraza T7 și trifosfații de nucleotide, ARNm este tradus mai eficient și se produc mai multe randamente. După administrarea vaccinului, o preocupare ridicată este imunogenitatea. La activarea semnalizării din aval, organismul va recunoaște și va răspunde la ARN-urile virale. Această recunoaștere a ARN-ului simplu și dublu catenar se face de către receptorii endozomali, cum ar fi receptorii Toll-like (TLR3), TLR7 și TLR8. ARN-ul dublu catenar și modificat cu 50 -trifosfat este recunoscut de gena I inductibilă a acidului retinoic a receptorului citosolic (RIG-1) și proteina 5 asociată diferențierii melanomului (MDA-5). Reacții alergice și șoc anafilactic au fost raportate atunci când sistemul imunitar al organismului a fost activat într-o manieră necontrolată. Această suprastimulare a sistemului imunitar la nivel molecular va limita translația proteinelor, exprimarea antigenelor și eficacitatea vaccinului. Această limitare poate fi depășită prin modificări ale nucleobazelor. N1-metil pseudouridina, o nucleobază modificată, va crește producția de proteine ​​și va scădea activarea TLR3. Nucleotidele modificate prin RIG-1 nu numai că afectează interacțiunea proteină-ARN, ci și scad capacitatea ARNm de a disemina semnale imunologice. Eficiența translației ARNm în proteine ​​este îmbunătățită datorită N1-metilpseudouridinei. Inițierea translației care are loc rapid va crește în mod coordonat timpul de înjumătățire al ARNm [50].

cistanche tubulosa-imbunatateste sistemul imunitar

Faceți clic aici pentru a vedea produsele Cistanche Enhance Immunity

【Cereți mai multe】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Componente de nanoparticule lipidice pentru livrarea ARNm

În comparație cu toate celelalte vaccinuri, vaccinurile ARNm sunt dezvoltate relativ rapid și sunt mai eficiente. Cu toate acestea, cea mai mare provocare în fabricarea vaccinurilor ARNm este stabilitatea lor slabă. Stabilitatea și capacitatea vaccinului de a trata infecția cu COVID-19 sunt reduse deoarece vaccinul este descompus rapid de ribonucleaze după livrare, producând componente defalcate care sunt eliminate prin rinichi. Pentru a face față acestei provocări, ARNm poate fi formulat cu nanoparticule lipidice (LNP). Vaccinul ARNm-LNP va proteja ARNm de degradarea prematură și va facilita livrarea citoplasmatică către celulele prezentatoare de antigen [72]. Lipidele sunt agenți perfecți pentru a furniza ARNm la locul citosol, deoarece fuziunea lor este compatibilă cu membranele celulelor lipidice; conducând la eliberarea țintită și eficientă a ARNm. LNP-urile sunt particule nanodimensionate cu un diametru mai mic de un micron care conțin două sau mai multe lipide în proporții diferite. LNP-urile diferă de lipozomi datorită prezenței componentelor lipidice în miez ca un amestec discontinuu. LNP-urile care au fost supuse formulării au o structură veziculară multilamelară, o înveliș de miez omogen și un miez nanostructurat [73]. Există prezența apei în interiorul miezului LNP-urilor, care expune ARNm pentru interacțiunea cu un mediu apos. După cum se arată în Figura 8, ARNm este situat în interiorul LNP-urilor, ceea ce îl protejează de mediul extern. Cea mai comună compoziție, care alcătuiește sistemele ARNm LNP sunt o lipidă cationică/ionizabilă, o fosfolipidă („lipidă auxiliară”), colesterolul și un polietilen-glicol (PEG). Caracteristicile fizico-chimice din interiorul sistemului de livrare LNP, cum ar fi eficacitatea încapsulării, încărcarea suprafeței exterioare, dimensiunea particulelor și forma pot fi modificate cu ușurință prin ajustarea compoziției lipidelor. Rapoartele componentelor sunt ajustate în funcție de țesutul țintă dorit [74].

Figura 8. Structura nanoparticulelor lipidice utilizate pentru livrarea eficientă a ARNm. (Creat cu BioRender. com accesat la 1 ianuarie 2023)

5.4.1. Lipidele cationice

Cu o grupare amină care conferă o sarcină pozitivă netă, un lanț hidrofob și o grupare de legătură care permite atașarea fragmentului hidrofil la lanțul hidrofob, lipidele cationice prezintă proprietatea amfifilă. Au o sarcină pozitivă permanentă la capul lor polar, care ajută la interacțiunea cu acizii nucleici încărcați negativ, sporind eficiența captării. Evadarea endozomală a sistemului LNP și absorbția celulară sunt, de asemenea, crescute din cauza sarcinii pozitive nete. Pentru administrarea ARNm, au fost investigate lipidele cationice, lipidele ionizabile și alte tipuri de lipide. În comparație cu lipidele cationice neionizabile, lipidele ionizabile, care sunt încărcate pozitiv la pH scăzut și la pH fiziologic rămân neutre, sunt comparativ mai puțin toxice datorită variațiilor pH-ului. În interiorul membranei celulare, acestea sunt încărcate pozitiv, iar în fluxul sanguin, posedă proprietăți neîncărcate. Vaccinul BNT162b2 cuprinde lipide cationice ALC-0315 în timp ce ARNm-1273 cuprinde SM-102; la pH scăzut, ambele lipide sunt protonate, ceea ce va forma cu ușurință un complex cu ARNm. Un flux de ARNm în apă este combinat cu un amestec de lipide în etanol folosind un dispozitiv microfluidic. Pentru a capta ARNm încărcat negativ, componentele acestor două fluxuri se combină rapid pentru a genera nanoparticule [75]. Pentru vaccinul BNT162b2 raporturile molare ale lipidei cationice: PEG-lipide: colesterol: DSPC este (46,3:1,6:42,7:9,4) iar pentru ARNm-1273 este (50:1,5:38,5:10). Nanoparticulele au un diametru de 80–100 nm și aproximativ 100 de molecule de ARNm sunt acolo pentru o nanoparticulă lipidă [73].

5.4.2. Lipidele de polietilen glicol (PEG).

Pentru stabilitatea coloizilor și prevenirea legării proteinelor la nanoparticulele polietilenglicolului se folosesc lipide. Acestea oferă o circulație sistemică mai lungă, reducând la minimum clearance-ul nanoparticulelor. LNP-urile pot provoca agregare fizică în soluție, ceea ce poate crește dimensiunea particulelor LNP-urilor, iar lipidele PEG pot depăși eventual chiar și o eliberare prematură a ARNm-ului încapsulat, problema. Mai mult, stabilitatea de stocare a LNP-urilor va fi, de asemenea, îmbunătățită [76].

5.4.3. Colesterolul

Pentru transfecția celulelor și pentru stabilizarea LNP-urilor colesterolul are un rol vital. O temperatură de tranziție mai scăzută este atinsă atunci când conținutul de colesterol este crescut în LNP, acest lucru va ajuta la eliberarea ARNm din LNP și la translocarea acestuia prin membrana endosomală [77]. Într-un studiu realizat de Zhang și colab., lipozomii modificați au fost formulați utilizând peptida cationică modificată cu colesterol DP7 împreună cu propan de Dioleoil-3-trimetilamoniu (DOTAP) ca purtător pentru livrarea ARNm. Lipozomii au fost preparați prin tehnica de hidratare a filmului și apoi, evaluați pentru eficiența lor de transfecție. In vitro, studiile de transfecție au evidențiat o creștere a eficienței transfecției cu o creștere a concentrației de peptidă DP7. În plus, studiile in vivo antitumorale au arătat că complexul are o eficacitate mai bună împotriva tumorii [78].

5.4.4. Alți excipienți

Vaccinurile ARNm sunt compuse din stabilizatori de ex. Trometamina, care tamponează pentru a menține un pH de 7–8, Săruri: Ajută la echilibrarea acidității din organism, Zahăr care ajută moleculele să-și mențină forma în timpul înghețului, acționând ca un crioprotector și menține stabilitatea pe termen lung a formulării de nanoparticule lipidice-ARNm [73]. Un rezumat al ingredientelor cheie utilizate în vaccinurile pe bază de ARNm este oferit în tabelele 2 și 3.

Tabelul 2. Ingredientele cheie utilizate în vaccinurile pe bază de ARNm.

Tabelul 3. Ingredientele de formulare ale vaccinurilor ARNm Pfizer și Moderna.

5.5. Alt sistem de livrare pentru ARNm

5.5.1. Nanoparticule polimerice

Nanoparticulele polimerice pot fi sintetizate din polimeri sintetici sau naturali, cum ar fi PLGA [poli (acid lactic-co-glicolic)], chitosan, PLA (acid polilactic), policaprolactonă, gelatină și poli-alchil-cianoacrilați. Aceste nanoparticule polimerice pot încapsula compuși și proteine ​​hidrofobi și hidrofili, termen de valabilitate lung; și poate modifica eliberarea compușilor terapeutici. ARN-ul poate fi încapsulat în polimeri cationici auto-asamblați cu modificare hidrofobă [80,81].

5.5.2. Nano-emulsii cationice

Nano-emulsiile cationice s-au dovedit ca fiind un vehicul eficient de livrare pentru livrarea acizilor nucleici. Lipidele cationice prezente în nano-emulsii sunt importante pentru complexele cu acid nucleic prin interacțiuni electrostatice și îmbunătățesc eficiența de transfecție a acidului nucleic și stabilitatea acestuia. Studiile arată că sistemul de livrare a nano-emulsiilor cationice de ARNm îmbunătățește răspunsul imun prin recrutarea celulelor imune și provocând răspunsuri celulare la anticorpi și primate T la doze relativ mici [80,82].

5.5.3. Nanoparticule de silice

Nanoparticulele de silice mezoporoasă constau dintr-o matrice de silice amorfă cu porozitate bine aranjată în intervalul mezoporos. Aceste nanoparticule au suprafețe mari cu volume mari de pori și suprafața lor poate fi ușor modificată de anumite fragmente încărcate pozitiv pentru a transporta eficient ARN încărcat negativ. Mai mult, livrarea țintită a ARN-ului poate fi posibilă prin atașarea liganzilor specifici la suprafață [81]. Conform unui studiu realizat de Adam și colab., a fost formulat un vaccin nazal pe bază de microparticule de siliciu poros modificat (mPSM) pentru COVID-19. Formularea a condus la o creștere a celulelor T helper (Th1) și a răspunsurilor imune și mPSM a provocat absorbția antigenelor pe calea nazală. S-a constatat că încărcătura virală a fost redusă semnificativ [83].

5.5.4. Nanomateriale de carbon și aur

Nanotuburile de carbon, nanoparticulele de aur, oxidul de nanografen și punctele cuantice sunt nanostructuri sintetizate care au, de asemenea, potențialul de a furniza ARN la locul țintă și, de asemenea, de a-l proteja de degradare [81].

6. Provocări pentru depozitarea vaccinului

Stabilitatea și cerințele de depozitare sunt preocuparea majoră pentru vaccinurile ARNm. Stabilitatea depinde de factori precum excipienți, pH și temperatură. Vaccinul COVID-19 de la BioNTech/Pfizer trebuie păstrat la −80 ◦C și are o perioadă de valabilitate de până la 6 luni, în timp ce vaccinul COVID-19 de la Moderna trebuie păstrat la −20 ◦C și are aceeași perioadă de valabilitate. Vaccinul BioNTech/Pfizer necesită ambalare cu gheață carbonică în timpul transportului. Distribuția ambelor vaccinuri în țările sărace ale lumii este o provocare, deoarece vaccinurile ARNm trebuie păstrate la temperaturi ultra-reci. Aceste cerințe sunt costisitoare și în regiunile lumii cu resurse limitate, aranjamentele sunt dificile. Dezvoltarea unui vaccin ARNm termostabil care este eficient din punct de vedere clinic și poate fi păstrat pentru o perioadă mai lungă de timp fără a suporta costuri mari de depozitare este una dintre probleme. Conform recomandărilor de depozitare EMA, vaccinurile ARNm realizate de Moderna și BioNTech sunt stabile atunci când sunt congelate timp de până la 6 luni la -25 ◦ C, până la 30 de zile la temperatura frigiderului (4 ◦ C) și până la 6 ore la temperatura camerei. 84].

7. Siguranța și eficacitatea vaccinurilor ARNm

7.1. Siguranța vaccinurilor pe bază de ARNm

A fost efectuată o evaluare a rezultatelor legate de siguranță pentru vaccinurile ARNm. Au fost efectuate studii deschise de fază 1 cu escaladare a dozei cu ARNm-1273 pe participanți cu vârsta cuprinsă între 18 și 70 de ani sau mai mult [85]. Studiul a fost realizat în două grupuri în care participanții cu vârsta cuprinsă între 18 și 55 de ani au primit o doză de vaccin de 250 µg, iar subiecților mai în vârstă li sa administrat 25 µg sau 100 µg din doză. După vaccinare au fost observate evenimente adverse locale și sistemice solicitate, evenimente adverse nesolicitate, evenimente adverse grave și dezvoltarea de noi afecțiuni medicale cronice. Rezultatele nu au arătat nicio dezvoltare a evenimentelor adverse grave. Cele mai tipice reacții adverse raportate au fost dureri de cap, oboseală, mialgie, frisoane și durere la locul injectării. S-a demonstrat că nivelurile de anticorpi neutralizanți se corelează cu apărarea împotriva unei varietăți de viruși la oameni și cu apărarea împotriva SARS-CoV-2 în provocările animalelor. Vaccinul ARNm-1273 la adulții în vârstă a produs niveluri ridicate de anticorpi de legare și neutralizare, iar tendințele dependente de timp și de doză au fost similare cu răspunsurile la adulții mai tineri. Răspunsurile după cea de-a doua vaccinare au fost comparabile cu cele observate la pacienții care s-au vindecat de COVID-19 și au donat ser pentru convalescent, inclusiv unii care erau grav bolnavi. Pacienții mai în vârstă care au primit o doză de 100 ug au prezentat răspunsuri mai mari de anticorpi și celule T în comparație cu cei care au primit 25 ug și răspunsul a fost identic cu reacția la participanții cu vârsta cuprinsă între 18 și 55 de ani care au primit doza de 100 ug. Pacienții cu vârsta peste 56 de ani trebuie să primească o a doua doză de vaccin pentru a obține anticorpi neutralizanți. La primirea unei doze de rapel, titrurile de anticorpi cresc rapid. Rezultatele cheie de siguranță ale vaccinurilor Moderna și Pfizer observate în timpul diferitelor studii clinice au fost enumerate în Tabelul 4.

Tabelul 4. Studii de siguranță și eficacitate ale vaccinurilor ARNm în studiile clinice

Tabelul 4. Cont.

După a doua doză de vaccin, evenimentele de reactogenitate locală și sistemică au crescut în frecvență și au fost în primul rând de severitate moderată. Incidența eritemului a fost găsită la trei participanți și a durat între 5 și 7 zile. Evenimentele adverse sistemice solicitate, cum ar fi febra și oboseala, au apărut în mod proeminent la subgrupul mai în vârstă. Toate aceste constatări sugerează că evenimentele adverse solicitate sau nesolicitate au fost uşoare până la moderat severe. Astfel, ARNm-1273 a fost testat în continuare pentru studiile de fază 2/3 pentru a evalua siguranța și eficacitatea la populații mai mari [95]. Studiul clinic de fază 3 a fost un studiu randomizat, stratificat, orb de observator și controlat cu placebo, care a implicat 30420 de voluntari cu vârsta de 18 ani sau peste, desemnați aleatoriu să primească un vaccin (0,5 ml cu 100 µg de doză) sau placebo. Reacțiile locale timp de 7 zile după imunizare, evenimentele adverse sistemice, reacțiile adverse neprevăzute după 28 de zile de administrare a dozei și orice evenimente adverse semnificative au fost urmărite pentru evaluarea siguranței. Efectele adverse solicitate au fost predominante în ARNm- 1273 în comparație cu grupul placebo (84,2%, față de 19,8%). Unele dintre cele mai observate evenimente au fost durerea la locul injectării după vaccinare, eritemul, sensibilitatea și indurarea. Aceste evenimente au fost eliminate în 4-5 zile după vaccinare. După a doua doză, grupul ARNm-1273 a solicitat evenimente sistemice care au devenit mai severe. Prezența reacțiilor de hipersensibilitate a fost prezentă la 1,5% și, respectiv, 1,1% dintre participanții din grupurile cu vaccin și, respectiv, placebo. În afară de aceste plângeri, nu au fost ridicate probleme de siguranță după administrarea vaccinului [106].

A fost necesară o a treia doză de vaccin din cauza scăderii protecției în urma a două injecții de ARNm SARS CoV-2 și introducerea unor variații. După administrarea unei a treia doze de vaccin ARNm persoanelor care au primit anterior seria primară ARNm-1273 în studiul de fază 1, au fost evaluate siguranța și imunogenitatea lor timpurie. Un studiu transversal efectuat la Napoli (Italia) a evaluat gradul de pregătire pentru a lua rapelul de vaccin COVID-19. În acest grup, acceptarea dozei de rapel a fost de aproape 86%. În plus, persoanele în vârstă cu o sănătate mai bună după seria principală de vaccinuri, cei care locuiesc cu prieteni sau membri ai familiei care au fost testați pozitiv pentru COVID-19 și cei care au primit informații legate de boală de la instituțiile publice oficiale au fost dispuși să obțină rapelul. doza [107].

Vaccinarea bivalentă a conținut 25 mcg din fiecare ARNm-1273 și ARNm-1273.351, în timp ce formulările de vaccin de rapel au conținut 100 mcg de ARNm-1273 și 50 mcg de ARNm-1273 .351, care codifică proteina Spike varianta Beta. O a treia doză de vaccin ARNm a arătat reactogenitate și siguranță adecvate. În comparație cu răspunsurile de vârf după a doua doză, creșterile induse de vaccinare ale titrurilor de anticorpi de legare și neutralizare la variantele D614G, Beta și Delta au fost similare sau mai mari. S-a observat că anticorpii de neutralizare și de legare au fost reduse în mod constant. Cu toate acestea, detectarea anticorpilor a avut loc la 10-11 luni (înainte de a treia doză) la participanți, indiferent de vârstă și de doza inițială a seriei primare (de exemplu, 25, 50, 100 și 250 µg). Durerea la locul injectării, oboseala, mialgia și frisoanele au fost cele mai des raportate efecte adverse după a treia doză de vaccin ARNm, iar frecvența acestor evenimente a fost comparabilă între cele trei regimuri de vaccin de rapel (prototip monovalent, variantă monovalentă și grupuri bivalente). ). Odată cu utilizarea vaccinurilor cu variante Beta monovalente sau bivalente, nu s-a observat niciun avantaj sau dezavantaj specific în răspunsurile celulare la epitopii din peptidele mutante Beta. Toate aceste descoperiri susțin sugestia actuală că un prototip monovalent de ARNm-1273 boost să fie utilizat pentru a oferi protecție imunologică încrucișată extinsă între variante [95]. Conform unui sondaj, administrarea heterologe de BNT162b2 (BNT) la participanții cu amorsare ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) a demonstrat o imunogenitate neinferioară administrării de BNT omoloage (atât primar, cât și de rapel au fost vaccinuri BNT, BNT/BNT), cu reactogenitate tolerabilă și răspunsuri mai mari ale celulelor T. În comparație cu vaccinarea omoloagă ChA dOX1 (ChAd/ChAd), vaccinarea heterologă ChAd/BNT a provocat o imunogenitate mai puternică (ChAd/BNT vs. ChAd/ChAd, raportul titrului de anticorpi: 9,2) [108].

Un studiu de fază 1 pentru BNT162b2 a fost efectuat pe 76 de participanți; au fost randomizați pentru a primi doze de vaccin de 10 µg, 30 µg și 100 µg, iar celuilalt grup a primit placebo. 58,3% dintre subiecții cărora li sa administrat 10 µg și 100% din 30 µg și 100 µg au prezentat durere de reacție locală solicitată la locul injectării după prima doză. Severitatea tuturor reacțiilor locale a fost ușoară până la moderată. Oboseala și durerea de cap în BNT162b2 au fost evenimente sistemice comune. În plus, au fost observate, de asemenea, frisoane, dureri musculare și dureri articulare. La creșterea dozelor, evenimentele sistemice au fost raportate mai mult după administrarea celei de-a doua doze. Un total de 50,0% dintre participanții care au primit fie 10, fie 30 g de BNT162b1, 58,3% dintre persoanele care au primit 100 g de BNT162b1 și 11,1% dintre primitorii placebo au raportat reacții adverse. Nu au fost raportate evenimente adverse grave [109].

Într-un studiu clinic al vaccinului Pfizer/BioNTech (BNT162b2), care a fost un studiu de eficacitate multinațional, controlat cu placebo, orb de observator, randomizat și pivot, 43.548 de participanți cu vârsta de 16 ani sau mai mult au fost alocați aleatoriu. Un total de 21.720 de voluntari au primit 30 µg per doză de BNT162b2 și 21.728 cu placebo. Pentru a determina profilul de siguranță al BNT162b2, au fost evaluate caracteristici precum durerea la locul injectării, care este pe termen scurt, ușoară până la moderată în caz de severitate, oboseală și cefalee. Două injecții de BNT162b2 sau un placebo au fost administrate tuturor participanților, conform randomizării, la 21 de zile, în mușchiul deltoid [98]. Reacțiile locale la cei care au primit vaccinul BNT162b2 au fost raportate mai mult în comparație cu grupul placebo. Durerea ușoară până la moderată la locul injectării a fost cea mai frecventă plângere înregistrată în rândul primitorilor de BNT162b2 în decurs de o săptămână. Durerea severă a fost raportată la mai puțin de 1% din populație. Durerea a fost observată mai puțin la participanții mai în vârstă în comparație cu cea a celor mai tineri. Roșeața sau umflarea au fost mai puțin observate. După administrarea celei de-a doua doze, reacțiile locale au fost raportate mai puțin [110].

Participanții mai tineri care au primit vaccinul au întâlnit mai multe evenimente sistemice decât cei mai în vârstă. Oboseala și durerile de cap (59% și 52%) au fost evenimentele cel mai frecvent raportate și subiecții foarte puțin vaccinați (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Eficacitatea vaccinurilor ARNm

Pentru evaluarea eficacității ARNm-1273, obiectivele principale ale vaccinului au fost eficacitatea în prevenirea infecției simptomatice cu COVID-19 după 14 zile de la a doua doză de vaccin. Ca efect secundar, a fost utilizată prevenirea infecției severe cu COVID-19 cu simptome persistente. Rezultatele după vaccinare arată că au existat 11 cazuri de COVID-19 în grupul vaccinat și 185 de cazuri în grupul placebo, indicând o eficacitate de 94,1% a vaccinului ARNm-1273 pentru tratarea simptomatică a COVID-19 . Pentru obiectivele secundare de eficacitate, a fost efectuată o evaluare a prevenirii COVID sever-19. Rezultatele au indicat o eficacitate de 100% a vaccinului, deoarece 30 de participanți cu infecție virală au fost în grupul placebo. Un studiu efectuat în Qatar a arătat eficacitatea vaccinului (VE) a ARNm-1273 95,7% împotriva infecției severe, critice sau fatale cu COVID-19. După mai mult sau egal cu 14 zile de la prima doză, eficacitatea a fost de 88,1% față de varianta B.1.1.7 (alfa) și a fost de 100% după doza a doua. 61,3% și 96,4% din VE au fost raportate după prima și a doua doză de imunizare împotriva tulpinii B.1.351 (beta). Prin urmare, vaccinul are destul succes atât împotriva tulpinii, fie că este simptomatică sau asimptomatică, cât și împotriva oricărei spitalizări și deces COVID-19, chiar și după o singură doză [112].

Eficacitatea vaccinului BNT162b2 (VE) împotriva COVID-19 confirmat, având un debut de cel puțin 7 zile după a doua doză, la persoanele care nu prezentau dovezi virologice sau serologice de infecție cu SARS-CoV-2 a fost prima primară. punct final. Al doilea obiectiv principal a măsurat eficacitatea participanților cu și fără dovezi de infecție anterioară și prevenirea infecției severe cu COVID-19. În cadrul cercetării cu un total de 36.523 de persoane, au apărut 8 cazuri de COVID-19 cu începere la 7 zile după a doua doză în grupul de vaccinare, comparativ cu 162 de cazuri în grupul placebo. Aceasta arată 95% din eficacitatea vaccinului. Cu toate acestea, VE observată împotriva bolii virale a fost de 52% între prima și a doua doză și a fost de 91% în primele 7 zile după doza 2, obținând o eficacitate completă împotriva bolii cu debut la cel puțin 7 zile după doza 2. Doar 1 dintre cele 10 cazuri severe de COVID-19 care au fost observate după prima doză a avut loc în grupul care a primit vaccinarea. Această observație este în concordanță cu eficacitatea generală excelentă împotriva tuturor pacienților cu COVID-19. Două cazuri de infecție au existat la primitorii de vaccin în rândul pacienților cu hipertensiune arterială și 44 de cazuri în grupul placebo. Acest caz raportează 94,6% din eficacitatea vaccinului la pacienții cu hipertensiune arterială. Astfel, vaccinul BNT162b2 îndeplinește atât obiectivele primare, cât și cele secundare de eficacitate la participanții vaccinați [113]. În afară de infecția cu SARS-CoV-2, cu o singură doză de vaccin BNT162b2, eficacitatea vaccinării prezisă împotriva bolii simptomatice cu varianta delta (B.1.617.2) a fost de aproximativ 36%. După două doze, VE a fost de aproximativ 88 la sută [114].

cistanche plant-creșterea sistemului imunitar

8. Provocări de reglementare

Știința reglementării este baza pe care se iau deciziile de reglementare. Obiectivul său principal este de a dezvolta noi metode, instrumente și standarde pentru evaluarea siguranței, eficacității, calității și performanței produselor reglementate în toate etapele ciclului lor de viață [115]. Vaccinurile ARNm se confruntă cu aceleași tipuri de obstacole de reglementare ca orice alt tip de vaccin, inclusiv necesitatea de a demonstra siguranța și eficacitatea în studiile preclinice, studiile clinice și supravegherea post-comercializare, precum și menținerea unui standard ridicat pentru materii prime utilizate în producție și consistența producției. Testarea vaccinurilor se bazează în mare măsură pe fiabilitatea și reproductibilitatea enzimelor, nucleotidelor și șablonelor de ADN liniar [116]. Componentele brute, cum ar fi lipidele, ar trebui să fie strict reglementate, iar puritatea lor trebuie dovedită. Bunele practici de fabricație actuale (cGMP) ar trebui urmate atunci când se creează șablonul ADN liniar. Pentru a vă asigura că substanța medicamentoasă este de cea mai înaltă calitate, este esențial să urmăriți procentul de ARNm acoperit și poliadenilat, numărul de transcrieri scurte și prezența ARN-ului dublu catenar. Poliadenilarea și acoperirea capătului 50 al ARNm asigură stabilitatea și traducerea eficientă [21]. Eficiența translației este strâns legată de coada poli (A) [114]. Cuantificarea cantității de ARNm încapsulat în particule și determinarea distribuției de dimensiune a particulelor este critică pentru produsul medicamentos, deoarece permite producătorului să asigure uniformitatea de fabricație. Monitorizarea este de obicei efectuată pe un număr de caracteristici, inclusiv pe cele referitoare la stabilitate, identitate și sterilitate. Una dintre problemele pentru dezvoltatorii de vaccinuri, autoritățile de reglementare și utilizatorii este stabilitatea termică a vaccinurilor ARNm [115]. Vaccinările convenționale sunt supuse unor teste de stres, inclusiv expunerii prelungite la temperaturi ridicate, pentru a determina stabilitatea lor într-o varietate de circumstanțe de depozitare. Acest lucru trebuie efectuat și pentru vaccinurile ARNm, unde este necesar să se evalueze nu numai stabilitatea moleculei de ARNm, ci și păstrarea structurii particulei de vaccin în sine. Protocoalele de testare a integrității pentru componentele ARNm individuale din vaccinurile ARNm cu mai multe componente au încă nevoie de dezvoltare. Identificarea unui vaccin cu acid nucleic este determinată de secvența acestuia. În general, secvența primei plasmide ADN utilizată ca matriță este suficientă pentru vaccinările ARNm. Acest lucru se datorează faptului că ADN-ul este tradus instantaneu în ARN. Nu se știe că secvențierea ARNm, fie direct, fie prin conversia lui în cADN și apoi secvențierea acelui ADN, oferă informații suplimentare. Chiar dacă ratele de eroare ale ARN polimerazelor sunt substanțial mai mari decât cele ale ADN polimerazelor, ratele de eroare declarate de 1 eroare la fiecare 104-105 nucleotide ar fi dificil de detectat în ARN din cauza naturii aleatorii a erorilor. Pe baza cercetărilor actuale care sugerează că vaccinurile ARNm oferă imunitate de protecție la modelele animale, această rată de eroare nu pare să modifice formarea unui antigen imunogen. Cuantificarea lipidelor poate fi efectuată prin LC-MS/MS [116]. Dacă proteina este tradusă prea repede, este posibil să nu se plieze corespunzător într-un antigen funcțional, ceea ce poate avea drept consecință neintenționată scăderea eficacității vaccinului.

9. Discuție

În 2021, vaccinurile ARNm au atras atenția pentru poziția lor critică în reacția industriei farmaceutice la COVID-19. Spre deosebire de vaccinurile virale tradiționale, care folosesc copii slăbite, nereplicative ale virușilor pentru a afișa antigene și pentru a provoca un răspuns imun, strategia ARNm utilizează molecule de ARNm monocatenar optimizate care pot oferi inducere biologică. Odată ce aveți vaccinul, celulele îl vor prelua, „citi” secvența de ARNm și vor produce proteina de vârf. Deoarece organismului tău îi lipsesc proteinele care seamănă cu acel vârf, sistemul tău imunitar îl interpretează ca dăunător și lansează un atac împotriva lui. În plus, dacă ești infectat cu coronavirus mai târziu, sistemul imunitar își amintește de proteina spike și chiar o recunoaște. Ritmul remarcabil în care primele două vaccinuri COVID-19 au fost dezvoltate și puse la dispoziția publicului în SUA susține ideea că vaccinurile ARNm de la Pfizer și Moderna au primit permisiunea de utilizare de urgență de la FDA în decembrie 2020-mai puțin de la un an după ce oamenii de știință chinezi au anunțat structura genetică a coronavirusului. Beneficiul major al tehnologiilor de vaccinare bazate pe ARNm este potențialul lor de a fi modificat rapid pentru diferite boli, deoarece procesarea antigenului țintă este „externalizată” celulelor gazdă, ceea ce înseamnă că numai codul genetic al antigenului este utilizat pentru a proiecta un vaccin. candidat. Timpul dintre guvernul chinez și-a schimbat structura genetică SARS-CoV-2 și Moderna și-a transportat candidatul la vaccin la Institutul Național de Sănătate (NIH) din Statele Unite pentru studii de fază 1 a fost de doar 44 de zile. Vaccinurile cu ARNm nu au obținut în mod istoric o autorizație de reglementare pentru utilizare în umanitate din cauza lipsei percepute de studii clinice pentru această metodă, precum și a provocărilor tehnice legate de stabilitatea și distribuția produsului. Cu o astfel de creștere a vaccinurilor ARNm de pe piață, sunt posibile sfaturi mai precise pentru a ajuta la dezvoltarea și evaluarea noilor vaccinuri ARNm. Controlul este un alt domeniu în care știința vaccinului ARNm este la început. În prezent, nu există ghiduri oficiale de la Administrația SUA pentru Alimente și Medicamente sau Agenția Europeană pentru Medicamente pentru vaccinurile ARNm, chiar dacă medicamentele sunt suficient de sigure pentru studii clinice majore.

10. Observații finale și perspective de viitor

Înainte de 2020, ARNm nu era un termen științific binecunoscut în lumea vaccinurilor. La mai bine de un an de la începutul catastrofală pandemie globală COVID-19, programele clinice bazate pe ARNm au înregistrat o creștere substanțială a sprijinului, atât din partea publicului larg, cât și din partea marilor farmaceutice. Peste 80 de milioane de americani au fost vaccinați împotriva SARS CoV-2-virusul care provoacă COVID{-19, folosind posibilitățile inovatoare ale tehnologiei ARNm. „Domeniul vaccinurilor a fost pentru totdeauna transformat și avansat pentru totdeauna din cauza COVID-19”, spune Dan Barouch, MD, Ph.D., director al Centrului pentru Virologie și Cercetare a Vaccinurilor de la Harvard Medical School. În cea mai mare parte, în situația vaccinului COVID-19, catena de ARNm este proiectată pentru a produce „proteina vârf” a coronavirusului unic, care produce un răspuns imunitar care ar putea proteja împotriva infecției cu virusul real. Vaccinurile dezvoltate de Moderna și Pfizer/BioNTech au fost singurele vaccinuri pe bază de ARNm care au obținut aprobarea de urgență de la autoritățile de reglementare cheie, iar dovezile din lumea reală de la lansarea globală a COVID-19 ar fi esențiale pentru a-și justifica eficacitatea pe termen lung. și caracteristici de siguranță împotriva coronavirusului și a altor agenți virali. Livrarea ARNm pe bază de exozomi va fi, de asemenea, viitorul terapiei bazate pe ARNm [117,118]. În mare parte, cu implicațiile tehnologiei bazate pe ARNm care devin evidente pe măsură ce aceste vaccinuri de prima generație încep să fie implementate la nivel global, există în prezent un boom în cercetarea clinică ARNm pentru boli infecțioase, iar cercetătorii din industrie anticipează o creștere a interesului pentru platformele ARNm pentru alte domenii terapeutice. , în special oncologie, dar chiar și afecțiuni autoimune mai puțin frecvente și gene neurode.

Referințe

1. CINE. WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard 2023. Disponibil online: https://covid19.who.int/ (accesat la 17 ianuarie 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. Pandemia COVID-19 în India: scenariu prezent și urcare abruptă înainte. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexandru, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: apariție, răspândire, tratamente posibile și povară globală. Față. Public Health 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Un impact al COVID-19 asupra îngrijirii cancerului: o actualizare. Vaccinuri 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): O revizuire a literaturii. J. Infectează. Public Health 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Populația în vârstă și pacienții imunocompromiși: impactul asupra variantelor SARS-CoV-2 și rezultatelor tratamentului. Biologics 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomics and Other Imunological Studies. Vaccins 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO Strategii de vaccinare SARS-CoV-2: o revizuire cuprinzătoare a candidaților de faza 3. Vaccinuri Npj 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Soare, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Părinte, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Eficacitatea vaccinului împotriva infecției, COVID simptomatic și sever-19: o revizuire sistematică și meta-analiză. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vaccinul Vihol, DR COVAX-19®: blochează complet transmiterea virusului către persoanele neimune. Clin. Complement Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, Alaska; Patravale, VB Vaccinuri intranazale pentru SARS-CoV-2: de la provocări la potențial în managementul COVID-19. Drug Discov. Astăzi 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. COVID-19 Vaccin: A Comprehensive Status Report. Virus Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Revizuirea vaccinurilor COVID-19 aprobate în Statele Unite ale Americii pentru utilizare în situații de urgență. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Real-World Effectiveness of COVID-19 Vaccins: A Literature Review and Meta-Analisis. Int. J. Infectează. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagoz, O.; Sethi, Alaska; Patterson, BW; Churpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. The Impact of Vaccination to Control COVID-19 Burden in the United States: A Simulation Modeling Approach. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, Alaska; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP Neutralizing Antibody Titres as Predictors of Protection against SARS-CoV-2 Variants and the Impact of Boosting: O meta-analiză. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; et al. COVID-19: Actualizări privind dezvoltarea vaccinului împotriva coronavirusului. Față. Imunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID-19 Vaccine Frontrunners and Their Nanotehnology Design. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Messenger Vaccinuri pe bază de ARN: direcții trecute, prezente și viitoare în contextul pandemiei COVID-19. Adv. Livrare droguri. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; et al. Sindrom respirator acut sever-Coronavirus-2 Candidați la vaccinul pe bază de proteine ​​Spike (S): stadiul tehnicii și perspectivele de viitor. Rev. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA Vaccins for COVID-19: What, Why and How. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Song, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Un nou coronavirus de la pacienții cu pneumonie din China, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MY; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Structură, biologie și dezvoltare terapeutică bazată pe structură. Față. Celulă. Infecta. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Vaccinuri cu acid nucleic pentru COVID-19: o schimbare de paradigmă în arena dezvoltării vaccinurilor. Biologics 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. Vaccinuri ADN pentru SARS-CoV-2: către era de vaccinare de a treia generație. Expert Rev. Vaccins 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Biologia structurală a SARS-CoV-2 și implicațiile pentru dezvoltarea terapeutică. Nat. Rev. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK Răspunsul imun al gazdei și imunobiologia infecției umane SARS-CoV-2. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Educație avansată în vaccinare: amenajarea peisajului creșterii și amprentei globale. Vaccin 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Strategia de vaccinare Prime-Boost împotriva infecțiilor virale: mecanisme și beneficii. Vaccin 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM Ar trebui ca lumea să colaboreze iminent pentru a dezvolta vaccinuri vii atenuate neglijate pentru COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. The Vaccine World of COVID-19: India's Contribution. Vaccins 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Vaccinurile Bae, YS COVID-19 (revizuite) și sistemul de vectori oral-mucoase ca o potențială platformă de vaccin. Vaccins 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Vaccination for COVID-19: Benchmarks in Public Health and Virus Transmission. Sănătate Publică 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Este strategia de doză de rapel suficientă pentru varianta Omicron a SARS-CoV-2? Vaccins 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Replicarea vaccinurilor virale pe bază de vectori pentru COVID-19: Potential Avenue in Vaccination Arena. Viruși 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID-19 Design de vaccin și strategie de vaccinare pentru variante emergente. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Revizuire recentă a managementului COVID-19: diagnostic, tratament și vaccinare. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 și Vaccinarea: Mituri vs Știință. Expert Rev. Vaccins 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Variantele Delta și Omicron ale SARS-CoV-2: Ce știm până acum. Vaccins 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. Vaccinuri ADN: Dezvoltarea de noi strategii împotriva cancerului. J. Biomed. Biotehnologia. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Song, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; et al. Co-imunizarea cu CHIKV VLP și vaccinuri ADN induce un răspuns umoral promițător la șoareci. Față. Imunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Siguranța și imunogenitatea comparativă a unui vaccin HIV-1 ADN în combinație cu plasmida interleukina 12 și impactul electroporării intramusculare pentru livrare. J. Infectează. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Sisteme de livrare bazate pe nanoparticule pentru vaccinuri. Vaccins 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. Vaccinuri MRNA: trecut, prezent, viitor. Asian J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Istoria încurcată a vaccinurilor MRNA. Natura 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined Aplicarea in vivo a ARN conduce la inducerea limfocitelor și anticorpilor T citotoxici specifici. EURO. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; et al. Un MARN încapsulat în lipide care codifică un anticorp monoclonal uman cu potențial neutralizare protejează împotriva infecției cu Chikungunya. Sci. Imunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutică bazată pe MRNA - Dezvoltarea unei noi clase de medicamente. Nat. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Răspunsul imun al celulelor T împotriva SARS-CoV-2. Nat. Imunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modificări în caz de urgență: rolul N1-metilpseudouridinei în vaccinurile COVID{-19. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; et al. Eficacitatea și siguranța candidatului vaccin MRNA CVnCoV SARS-CoV-2 în zece țări din Europa și America Latină (HERALD): un studiu randomizat, orb de observator, controlat cu placebo, fază 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. Blakney, Alaska; Ip, S.; Geall, AJ O actualizare privind dezvoltarea vaccinului MRNA cu autoamplificare. Vaccins 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Noi speranțe în tehnologia vaccinurilor: vaccinuri ARNm. Microbiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Promisiunea vaccinurilor MRNA: o perspectivă biotehnologică și industrială. Vaccinuri Npj 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Auto-amplificare vaccinuri ARN pentru boli infecțioase. Gene. Acolo. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Principii pentru proiectarea unui vaccin optim de nanoparticule lipidice MRNA. Curr. Opinează. Biotehnologia. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. Evoluția in vitro a repliconilor de ARN îmbunătățit pentru imunoterapie. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Adaptarea vaccinului MRNA pentru a echilibra răspunsul imun înnăscut/adaptativ. Trends Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Probă, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Biotehnologia. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, TV Inhibarea traducerii de către membrii familiei IFIT este determinată de capacitatea lor de a interacționa selectiv cu 50 -regiunile terminale ale Cap0-, Cap1-și 50 Ppp-MRNA. Acizi nucleici Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; et al. Analogii cu capac modificați cu 1,2-porțiune de ditiodifosfat protejează MRNA-ul de decapsulare și își sporesc potențialul de translație. Acizi nucleici Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; et al. Analogii de capac MRNA substituiți în lanțul de tetrafosfat cu CX2: Identificarea O-la-CCl2 ca prima modificare de legătură care conferă rezistență la decapsulare fără a afecta traducerea. Acizi nucleici Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) Tails. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Principiile de organizare a recrutării ribozomilor eucariote. Annu. Rev. Chim. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. Marele mesaj al mesagerului pentru vaccinare. Expert Rev. Vaccins 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC Fabricarea de vaccinuri MRNA: provocări și blocaje. Vaccin 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger ARN: The Iefexpensive Biopharmaceutical. J. Multidisciplinar. ing. Sci. Tehnol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Román, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. Peisajul dezvoltării vaccinurilor COVID-19. Nat. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA ca tehnologie transformatoare pentru dezvoltarea vaccinului pentru controlul bolilor infecțioase. Mol. Acolo. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]