A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Katharina Artinger', Alexander H. Kirsch', Agnes A. Mooslechner', Daniel J. Cooper23, Ida Aringer', Max Schuller', Corinna SchabhüttI', Konstantin A. Klötzer', Kerstin Schweighofer', Philipp Eller,Hideo Yagit', Anna L. Illert’, Alexander R. Rosenkranz’, Peter J. Lane2 și Kathrin Eller

Cistanche poate ajuta foarte bine la funcționarea rinichilor

„Divizia Clinică de Nefrologie, Departamentul de Medicină Internă, Universitatea de Medicină din Graz, Graz, Austria; Centrul pentru Reglementarea Imună a Consiliului de Cercetare Medicală, Institutul de Cercetare Biomedicală, Universitatea din Birmingham, Birmingham, Marea Britanie; Divizia de Sănătate Globală și Tropicală, Menzies School of Health Research și Charles Darwin University, Darwin, Northern Territory, Australia; Unitatea de Terapie Intensivă, Departamentul de Medicină Internă, Universitatea Medicală din Graz, Graz Austria: „Departamentul de Imunologie, Facultatea de Medicină Universitatea Juntendo, Tokyo, Japonia; și gradul Departamentul de Medicină l, Centrul Medical-Universitatea din Freiburg, Facultatea de Medicină, Universitatea din Freiburg, Freiburg, Germania

Co-stimularea este o condiție prealabilă pentru activitatea patogenă în bolile mediate de celulele T și s-a demonstrat că atinge toleranța în autoimunitatea specifică organului ca țintă terapeutică. Aici, am evaluat implicarea membrilor familiei factorului de necroză tumorală CD30 și OX40 în complexul imun mediat.rinichi boala. Stimularea și proliferarea in vitro au fost efectuate studii cu celule CD4 plus de la șoareci de tip sălbatic și CD30/OX40 dublu knock-out (CD30OX40). Studiile in vivo au fost efectuate prin inducerea nefritei serice nefrotoxice la șoareci de tip sălbatic, CD30OX40, CD30', OX40, reconstituiți Rag1~ și C57Bl/6J tratați cu anticorpi CD30L aOX40L. CD30, OX40 și liganzii lor au fost suprareglați pe diferite leucocite în nefrita serică nefrotoxică. Șoarecii CD30OX40, dar nu și șoarecii CD30/sau OX40 au fost protejați de nefrita serică nefrotoxică. Protecție similară a fost găsită la șoarecii Rag1 injectați cu celule CD4 plus T de la șoarecii CD30OX40, comparativ cu șoarecii Rag1 injectați cu celule CD4T de la șoareci de tip sălbatic. erau pe deplin capabili

diferențierea în subseturi de celule T helper care mediază boala, dar a arătat niveluri semnificativ scăzute de proliferare in vivo și in vitro în comparație cu celulele de tip sălbatic. Blocarea anticorpilor împotriva CD30L și OX40L a ameliorat nefrita serică nefrotoxică fără a afecta populațiile de celule T pan-efectoare sau de memorie. Astfel, rezultatele noastre indică promovarea bolii prin semnalizarea CD30 și OX40 datorită facilitării proliferării exagerate a celulelor T și migrării celulelor T helper 17 în nefrita serică nefrotoxică. Prin urmare, blocada de co-stimulare care vizează căile de semnalizare CD30 și X40 poate oferi o nouă strategie terapeutică în autoimune.boală de rinichi.

Declarație translativă

Acest articol descrie aplicabilitatea căilor de semnalizare CD30 și OX40 ca ținte terapeutice viitoare în boala glomerulară mediată de complexul imun folosind modelul murin al nefritei serice nefrotoxice. Blocarea combinată a căilor de costimulare CD30 și OX40 este o modalitate de a obține toleranța periferică în autoimunitate prin reducerea hiperproliferării patogene în organele limfoide secundare și migrarea celulelor T helper 17 patogene către celule.rinichi. Deoarece opțiunile de tratament tradiționale au fost însoțite de efecte adverse severe, blocarea CD30 și OX40 combinată ar duce posibil la mai puține infecții care pun viața în pericol în comparație cu terapiile imunosupresoare tradiționale.

Semnalizarea costimulatoare este o condiție prealabilă pentru activarea celulelor T, diferențierea, funcția efectoră și supraviețuirea. Blocarea costimularii a fost identificată ca o strategie de atingere a toleranței imune. Alături de superfamilia Ig, inclusiv CD28 și B7, cele mai multe molecule costimulatoare sunt membri ai superfamiliei factorului de necroză tumorală (TNF) antică și foarte conservată din punct de vedere evolutiv.” CD30 și OX40 sunt membri proinflamatori ai superfamiliei TNF care nu numai că au căi de semnalizare comune, dar de asemenea functional actioneaza sinergetic.Factorii asociati receptorului TNF interactioneaza cu regiunile receptorilor intracelulari si promoveaza supravietuirea celulara prin semnalizarea factorului nu-dear-KB in ambele cazuri.CD30 si OX40, precum si liganzii lor CD30L si OX40L, pot fi exprimati pe T si celulele B și pe o varietate de celule prezentatoare de antigen.

CD30 joacă un rol proinflamator critic în diabetul autoimun, colita și encefalomielita murine.-1 Investigațiile asupra modelelor experimentale au descoperit roluri patogenice pentru OX40 în uveita autoimună, artrită și inflamația alergică,12-1 în timp ce un raport recent a sugerat calea OX40/OX40L pentru a proteja de glomerulonefrita semilună prin stimularea proliferării celulelor T reglatoare. Cu toate acestea, ambele molecule au fost legate în mod independent de patogeneza lupusului eritematos sistemic (LES). CD30 solubil este un marker al activității bolii în SLEl6,17a și un haplotip OX40L este asociat cu un risc crescut de a dezvolta boala.8 În plus, celulele T helper 17(Th17)exprimă niveluri crescute de OX40 la pacienții cu LES și Expresia OX40 este detectabilă pe leucocitele perivasculare în nefrita lupică.

Opțiunile terapeutice eficiente pentru tratamentul glomerulonefritei sunt asociate cu o morbiditate crescută și un risc ridicat de efecte adverse1; astfel, este necesară o terapie mai specific direcționată. O abordare tot mai mare în direcționarea răspunsurilor imune este inducerea toleranței.] Opțiunile terapeutice pentru a obține toleranța periferică includ ștergerea clonală, ignoranța, reglarea imunității și, în cele din urmă, energia, care sa dovedit deja o strategie imunosupresoare valoroasă atunci când limfocitele T citotoxice- au fost introduse proteine ​​asociate 4-lg proteine ​​de fuziune.

Blocada OX40L este în prezent în evaluare clinică; cu toate acestea, țintirea combinată a CD30 și OX40 nu a fost investigată complet până acum. Autoimunitatea dependentă de CD4-depende în mod critic de interacțiunea ambelor perechi receptor-ligand, demonstrată de necesitatea abrogarii combinate a semnalizării CD30 și OX40 pentru a proteja șoarecii cu deficiență P3(FoxP3) de la dezvoltarea letale timpurii. boala autoimuna. Nefrita serică nefrotoxică (NTS) este un model murin de glomerulonefrită cu complex imun care s-a dovedit a fi strict dependentă de celulele T, inclusiv celulele T helper 1(Th1) și celulele Th17. Prezentarea antigenului în acest model are loc în primul rând în organele limfoide secundare, dar și local în cadrulrinichi. Astfel, am emis ipoteza că activarea căilor costimulatoare CD30 și OX40 promovează probabil NTS.

METODE Animalele

Soarecii CD30OX407 dublu knockout cu deficit de CD30 si OX40 au fost generati asa cum s-a descris anterior. CD30OX40-și CD30OX40 plus /littermate de control, precum și CD30~ și OX40~-au fost crescute în casă. Șoarecii CD30√ au fost furnizați și de Dr. alert, Freiburg, Germania. Șoarecii C57BL/6J au fost obținuți de la Charles River Laboratories (Sulzfeld, Germania). Șoarecii Ragland B6.Thyl.1 au fost obținuți de la Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Toți șoarecii au fost pe fundal C57BL/6J.

Modelul NTS

NTS a fost indus așa cum s-a descris anterior. Pe scurt, șoarecii au fost preimunizați sc cu 2 mg/ml lgG de iepure (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) dizolvat în adjuvant Freund incomplet (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) cu Mycobacterium tuberculosis H37a, neviabil, deshidratat (Difco Laboratories, Detroit, MI) cu 3 zile înainte de administrarea de ser nefrotoxic anti-șoarece de iepure. Evaluarea a fost făcută după 4 sau 14 zile după injectarea serului NTS, după cum este indicat.

Transfer de celule în Rag1-/șoareci

Șoarecii Rag1-au fost injectați cu celule CD4 plus T de 1,5 × 10 grade de la spline fie de la șoareci de tip sălbatic (WT) fie CD30OX40--sau celule CD90.1 WT, iar celulele knockout CD90.2 transferat adoptiv într-un raport de 1:1. La o zi după transferul adoptiv, NTS a fost indus și evaluat după 4 sau 14 zile. Celulele CD4 plus T au fost izolate din splină folosind kitul de izolare a celulelor CD4 plus de șoarece (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania).

Blocarea experimentelor cu anticorpi

Șoarecii nefritici C57BL/6 au fost tratați cu anticorpi blocanți împotriva OX40L(clona RM134L) și CD30L(clona RM153) de șoarece fie în combinație, fie singuri, începând din ziua imunizării sau la 3 zile după NTSinduction. Şoarecii au fost injectaţi ip cu fie 0,5 mg x-OX40L şi/sau 0,5 mg a-CD30L anticorpi monoclonali sau 1 mg martor IgG (Sigma-Aldrich) de 3 ori pe săptămână.

Măsurarea albuminei urinare, a creatininei și a citokinelor supernatante

Pentru determinarea excreției urinare de albumină a fost utilizat un test imunoabsorbant dublu-sandwich legat de enzime (Abcam, Cambridge, MA), așa cum sa raportat anterior (interval de detecție, 0.781-200 ng/ml). Creatinina urinară a fost evaluată fotometric folosind un kit pe bază de acid picric disponibil comercial (Sigma-Aldrich). Detectarea citokinelor în supernatanți a fost efectuată așa cum este indicat în Metodele suplimentare.

Evaluarea răspunsului anticorpilor autologi

Plăcile au fost incubate peste noapte cu 100 ug/ml IgG de iepure (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Ulterior, serul a fost incubat în diluții de dublare în serie pentru detectarea Ig anti-iepure de șoarece în circulație. Folosind IgG anti-șoarece de capră conjugată cu peroxidază de hrean (Jackson ImmunoResearch Laboratories), a fost detectată IgG anti-iepure de șoarece.

Azot ureic din sânge

Azot ureic din sânge

Nivelurile (BUN) în ser au fost obținute folosind un kit de detectare colorimetrică BUN disponibil comercial (Invitrogen).

Evaluarea histopatologiei și imunopatologiei

Evaluarea acidului periodic-Schiff (PAS)-coloratrinichisecțiunile au fost făcute așa cum este descris anterior1,2 și în Metodele suplimentare.

O tehnică de colorare cu imunoperoxidază 3-stratificată a fost utilizată pentru evaluarea celulelor care infiltrează țesuturi (metode suplimentare).

Imunofluorescență și microscopie confocală

Probele de țesut congelate au fost colorate cu anticorpi marcați fluorescent (metode suplimentare) și evaluate pe un meta LSM510 (Zeiss, Oberkochen, Germania).

Figura 1| Ligand CD30, OX40, CD30 (CD30L) și ligand OX40 (OX40L) sunt exprimați diferențial pe leucocitele splenice în nefrita serică nefrotoxică (NTS). Exprimarea CD30, OX40, CD30L și OX40L pe celulele CD4 plus T la șoareci C57Bl/6J sănătoși și nefritici după 12 ore. 24 ore, 72 ore, 7 zile și 14 zile de NTS(n =5 șoareci/ Expresia receptorilor și liganzilor respectivi a fost evaluată pe (a) celule CD4 plus T, (b) celule CD8T, (c) celule B, (d) celule CD11cdendritice, (e) CD11bLv6G plus neutrofile SSChi, (f) CD11btLy6GCD115 plus Ly6C plus monocite clasice și (g) CD11btLy6G-CD115 plus monocite Ly6C neclasice.Toate datele arată intervale mediane și interquartile.Semnificațiile statistice sunt furnizate în comparație cu șoarecii sănătoși.*P<><><0.001,><>

Citometrie în flux

Liza celulelor roșii din sânge utilizând soluția tampon de liză 1× RBC (eBioscience) a fost efectuată cu probe de sânge înainte de a se obține o suspensie unicelulară din sânge, splină și ganglioni limfatici folosind strecurătoare de celule 70-um. Izolarea celulelor dinrinichia fost efectuată utilizând centrifugarea cu gradient de densitate Percoll după digestia tocatului finrinichiîn mediu Roswell Park Memorial Institute 1640 (Thermo Fisher Scientific) suplimentat cu colagenază D și ADNază I la 37 de grade, așa cum s-a descris anterior.

Colorațiile și evaluările prin citometrie în flux au fost efectuate așa cum este descris în Metodele suplimentare.

Testul de proliferare a celulelor T CD4 plus

Celulele CD4 plus T au fost incubate cu Celltrace Violet (CellTrace Violet Cell Proliferation Kit; Invitrogen), conform protocolului producătorului, și însămânțate la 2,5 × 10/ml pentru incubare fie cu 5 ug/ml concanavalin-A (Sigma-Aldrich) fie 5 ug/ml fitohemaglutinină (Sigma-Aldrich). După 7 zile, s-a folosit citometria în flux pentru a evalua intensitatea Celltrace Violet în aceste celule.

Stimularea splenocitelor

Splenocitele de la șoareci nefritici tratați cu anticorpi izotip sau anticorpi xCD30LxOX40L au fost recoltate după 14 zile de NTS. Splenocitele au fost însămânțate la 2 × 10 procente/ml în godeuri preacoperite cu IgG de iepure și restimulate timp de 24 de ore înainte de citometria în flux. Splenocitele de la șoareci nefritici WT și CD30OX40~ (ziua 14) au fost însămânțate la 2 x 1097 ml și stimulate cu xCD3 (5 ug/ml) și xCD28 (1 ug/ml) (ambele de la eBioscience) timp de 3 zile înainte de evaluarea supernatantului culturii celulare. .

Experimente de polarizare a celulelor T CD4 plus

Celulele CD4 plus CD62L plus T au fost izolate din splină folosind kitul II de izolare CD4 plus CD62L plus (Miltenyi Biotec) și stimulate așa cum este indicat în Metodele suplimentare.

Reacția în lanț a polimerazei de transcripție inversă în timp real ARN-ul total a fost extras din ganglionii limfatici șirinichiutilizând reactiv TRI (Sigma-Aldrich) și ulterior, cADN-ul a fost sintetizat utilizând kitul de transcripție Superscript II (Invitrogen) și primeri aleatoriu (Invitrogen) pentru transcrierea inversă a 2 ug de ARN total. Reacția în lanț a polimerazei în timp real a fost efectuată în duplicat pe un sistem în timp real CFX96 (BioRad, Hercules, CA). gena TaqMan

Figura 2| Șoarecii CD30OX40- sunt protejați de nefrita serică nefrotoxică (NTS). Soarecii CD30OX40-/-, șoarecii CD30 cu un singur knockout și șoareci cu un singur knockout OX40, precum și martorii de tip sălbatic (WT), (n =5-6 șoareci per grup) au fost supuși la 14 zile de NTS Au fost evaluate (a) albuminuria și (b) nivelurile serice de azot ureic (BUN) din sânge. (ce) Colorat cu acid periodic reprezentativ Schiff (PAS).rinichi, precum și scorurile PAS, (f) scorul semilună, (g) scorul trombi intralaminari, (h) formarea gipsului tubular și (i) scorul leziunii tubulare acute. Sunt furnizate () celule CD68 plus T cu infiltrare renală, (k) neutrofile, () celule CD4T și (m) celule T CD8 plus. Numărul total de celule și numărul de celule T CD45 plus CD4 în (n) ganglioni limfatici și (o) splina șoarecilor WT și CD30OX40-/- au fost evaluate prin citometrie în flux. (p) Numărul total de leucocite renale evaluat prin citometrie în flux și (g) procente de celule CD4 plus T, CD8 plus celule T, Ly6G plus neutrofile SSChi, Ly6C plus monocite și monocite Ly6C înrinichide șoareci CD30OX40 și W. (r) S-a evaluat lgG anti-iepure de șoarece (n=10 șoareci/grup). (s) Sunt prezentate numărul total de celule CD4 plus CD28 plus/ganglioni limfatici de șoareci nefritici WT (n=7) și CD30OX40-/ (n =5 șoareci). Mărirea originală ×40. Datele arată (a,b,r,s) medie ± SEM; (c,fg) medianele sunt indicate printr-o linie orizontală. Datele sunt reprezentative pentru 4 experimente independente. Semnificațiile statistice sunt furnizate în comparație cu șoarecii WT.*P<><0.01,><0.001,and>< 0.0001.hpf,="" high-power="" field;="" od,="" optical="" density.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

Au fost utilizate teste de expresie (Applied Biosystems, Foster City, CA) și SYBR green (BioRad) (metode suplimentare).

analize statistice

Toate evaluările statistice (Metode suplimentare) au fost efectuate folosind GraphPad Prism 6.0 pentru Macintosh (GraphPad Software, La Jolla, CA).

Declarație de etică

Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru etica experimentelor pe animale al Ministerului austriac (BMWFW-66.010/0054-WF/V/3b/2015).

REZULTATE

Expresia CD30 și OX40 și liganzii lor se modifică de-a lungul timpului NTS pe celulele cu imunitate înnăscută și adaptivă. Expresia CD30 și OX40 a crescut pe celulele splenice CD4 plus T de-a lungul timpului NTS (Figura la). Atât nivelurile de expresie CD30L, cât și OX40L au fost crescute semnificativ pe celulele T splenice CD4 plus ale șoarecilor nefritici după 7 și 14 zile (Figura la). Pe CD4 * CD25Foxp3 plus celulele T reglatoare (Tregs), o creștere similară a exprimării CD30, CD30L și OX40 a fost găsită în timp (Figura suplimentară S1A). CD30, OX40 și OX40L au crescut semnificativ pe celulele Th17 (Figura suplimentară S1D) după 14 zile de NTS în comparație cu șoarecii sănătoși. De asemenea, CD30 și OX40 au fost ambele crescute semnificativ pe celulele T CD8 începând cu 12 ore după inducerea NTS în comparație cu șoarecii sănătoși (Figura 1b). Celulele B au prezentat un profil de expresie similar cu cel al celulelor CD4 plus T (Figura 1c). OX40L a fost reglat în jos deja după 12 ore de NTS și a rămas ulterior scăzut pe celulele dendritice (Figura 1d). În mod similar, CD30L și OX40L au fost down-CD11b plus Ly6G plus SSChineutrofile, reglementate pe Ly6G-CD115 plus Ly6Ct și Ly6G-CD115Ly6C monocite de-a lungul timpului NTS (figura picior). Pe neutrofile, celulele dendritice și monocite CD30 și OX40 au avut tendința de a crește în NTS (Figura ld-g). CD30L a fost din ce în ce mai exprimat pe celulele limfoide înnăscute de tip 2 la 12 ore după inducerea NTS, iar CD30L și OX40L au fost, de asemenea, crescute după 14 zile de NTS (Figura suplimentară S1B). Numărul de leucocite care exprimă CD30, CD30L, OX40 și OX40L a crescut în NTS, ceea ce a fost în concordanță cu constatările privind celulele splenice (Figura suplimentară SIE-G). Expresia mARN Cd30 și Ox40l nu a fost detectabilă înrinichidupă 7 și 14 zile de NTS (Figura suplimentară S1H). Cu toate acestea, ARNm Cd30l a crescut după 7 și 14 zile de NTS, în timp ce expresia ARNm Ox40 a rămas neschimbată după 14 zile de NTS înrinichi(Figura suplimentară S1H).

Semnalizarea reciprocă CD30 și OX40 este necesară pentru dezvoltarea fenotipului NTS

Am găsit o scădere a albuminuriei și BUN la șoarecii nefritici CD30OX40-/ comparativ cu martorii WT (Figura 2a și b), în timp ce albuminuria la șoarecii CD{30- și OX{40-a fost comparabilă cu șoarecii martor WT. (Figura 2a).O scădere semnificativă a fost observată și înrinichiPozitivitatea PAS, formarea semilunii, scorul de trombi intraluminali, formarea gipsului tubular și scorul de leziune tubulară acută la șoareci CD30OX40-/ în comparație cu șoarecii WT (Figura 2c-i). Toate aceste caracteristici histologice nu au fost modificate semnificativ la șoarecii cu un singur knockout în comparație cu martorii WT (Figura 2c și fi). Am găsit un număr semnificativ mai mic de macrofage CD68 la rinichii șoarecilor CD30OX40-- comparativ cu martorii WT (Figura 2j). A existat o tendință către un număr redus derinichi-infiltrarea CD68 plus macrofage la șoarecii CD30- și OX40-/- un singur knockout (Figura 2j). Neutrofilele și celulele T CD8 au fost găsite în număr semnificativ redus înrinichide șoareci CD30OX40-în comparație cu martorii WT nefritici și șoarecii CD{30--, precum și OX40- au prezentat un număr mai mic de neutrofile și celule C8 plus T care infiltrează rinichii (Figura 2k și m). Celulele CD4 plus T au fost găsite în număr semnificativ mai mic la nefriticrinichide CD30OX40--(Figura 2l). Citometria în flux a rinichilor a evidențiat rezultate similare ale numărului redus de celule infiltrante (Figura 2p și q). De notat, șoarecii naivi simple și dublu knockout nu au prezentat diferențe în compoziția leucocitelor splenice în comparație cu șoarecii WT sănătoși, când au fost evaluate celulele T CD4 plus și CD8 plus, neutrofilele și monocitele (Figura suplimentară S2). Expresia Icos și Gitr a fost redusă înrinichide șoareci nefritici CD30OX40-(Figura suplimentară S3B). Răspunsurile celulelor B, măsurate de IgG anti-iepure de șoarece, au fost reduse la șoarecii CD30OX40-, comparativ cu martorii WT (Figura 2r).

Numărul celulelor CD4 plus T nu este redus în ganglionii limfatici ai șoarecilor CD30OX40-/-

Citometria în flux nu a evidențiat nicio diferență în celulitatea totală a ganglionilor limfatici și a splinei (Figura 2n și o) sau în numărul de celule CD4 plus. Interesant, nu am detectat nicio diferență în Treg între șoarecii WT și CD30OX40- (Figura suplimentară S3). De remarcat, citokinele (TNF-d, interleukina-6, interferon-Y, interleukina-17, interleukina{-4 și interleukina{-10) au fost măsurate în supernatantele splenocitelor restimulate izolate din Șoarecii WT și CD30OX40-la 14 zile după NTS nu au prezentat o diferență (datele nu sunt afișate).

Celulele T CD4 plus cu deficit de CD30 și OX40 nu reușesc să promoveze NTS Pentru a studia rolul exprimării CD30 și OX40 pe celulele CD4 plus din NTS, Rag1- a fost injectat cu celule CD4 plus (Figura suplimentară S4) din spline fie ele WT sau CD30OX40-/șoareci. Numărul total de CD4 splenic plus numărul de celule și ratele de celule moarte au fost comparabile în ziua 4 după inducerea NTS (Figura suplimentară S5). Deși șoarecii Rag1 ~ care au primit celule CD4 plus de la șoarecii WT au dezvoltat albuminurie și BUN semnificative după 14 zile de NTS, șoarecii Rag1-/ reconstituiți cu celule CD4 plus de la șoarecii CD30OX40 (Figura 3a) nu au făcut-o. Daunele histologice au fost reduse semnificativ la șoarecii Ragl1-care au primit celule CD4 plus T de la șoareci CD30OX40-- în comparație cu celulele WT, așa cum este determinat de scorul PAS, scorul semilunii, scorul trombilor intraluminali, scorul leziunii tubulare acute, și gipsuri tubulare (Figura 3b-g). Celulele care se infiltreazărinichide șoareci Ragl, inclusiv celule CD4 plus, macrofage CD68 și Ly6G plus neutrofile, au fost, de asemenea, reduse semnificativ dacă celulele CD4 plus transferate nu au exprimat CD30 și OX40 (Figura 3h-k). Celulele CD4 plus T izolate de la șoarecii WT care exprimă CD90 .1 și CD30OX40- șoarecii care exprimă CD90.2 au fost în continuare transferați adoptiv la Rag{1-/șoareci într-un raport de 1:1. Aici, numărul absolut de CD90.2 care exprimă CD30OX40-- CD4 plus celule T au fost scăzute în splină în comparație cu CD90.1 WT CD4 plus celule T (Figura 4t și u), dar procentele de Ifn-Y (Figura 4a). și b), celulele producătoare de l4 (Figura 4d și e) și Il17 (Figura 4g și h) au fost semnificativ mai mari în celulele knockout care exprimă CD90.2. Cu toate acestea, în același timp, s-a constatat că procente scăzute de celule knockout CD90.2 au un fenotip Th17 în rinichi în comparație cu celulele CD90.1 WT (Figura 4i), în timp ce opusul a fost găsit pentru celula helper The și T 2 (Th2). )celule înrinichi(Figura 4c și f). Totuși, un număr absolut de celule knockout CD90.2 transferate înrinichiau fost semnificativ mai mici în comparație cu celulele CD90.1 WT (datele nu sunt prezentate).

Deficiența de CD30 și OX40 perturbă migrarea Th17 de la organele limfoide secundare la rinichi

Receptorul de chemokine CXC (CXCR) 3 (Figura 4j și k) a fost crescut pe celulele CD90.2 CD30OX40-/- comparativ cu celulele CD90.1 WT, în timp ce nu au fost detectate diferențe pentru expresia CXCR6 (Figura 4l și m). . Mai important, am găsit o scădere semnificativă a receptorului de chemokine CC (CCR) 6 pe celulele knockout CD90.2 (Figura 4n și o). În următorul pas, celulele CD4 plus T naive au fost stimulate in vitro în condiții de diferențiere Th1 sau Th17 ( Figura suplimentară S6). Am observat o tendință către un potențial mai mare pentru diferențierea Th17 (Figura 5a și) și Th1 (Figura 5c și d) a celulelor CD4 plus T naive izolate de la șoarecii CD30OX40-/- în comparație cu șoarecii WT in vitro. În special, celulele CD4 plus T care exprimă CD28 au fost găsite în creștere semnificativă

Figura 3| Rag1-/șoarecii care primesc celule T CD4 plus de la CD30OX40-/sunt protejați de nefrita serică nefrotoxică (NTS). Rag1-/șoarecii care primesc celule T CD4 de la oricare dintre tipurile sălbatice (WT ) sau șoarecii CD30OX40-au fost supuși la NTS și au fost urmăriți timp de 14 zile (n =6 până la 7 șoareci per grup). (a) Au fost evaluate nivelurile de albuminurie și azot ureic din sânge (BUN).( e) Acid periodic reprezentativ-Schiff(PAS)-coloratrinichiprecum și (b) scorurile PAS, (C) scorul semilună, (d) scorul trombi, (t) gipsurile tubulare și (g) scorul leziunilor tubulare acute sunt afișate. (h) Numărul de celule CD4T (i) CD68 plus macrofage sunt prezentate neutrofilele și (j) Ly6Gt, precum și (k) imagini reprezentative. Mărirea originală × 40 (PAS, CD4, [continuare] numere în ganglionii limfatici ai CD30OX40-/șoareci nefritici în comparație cu șoarecii WT (Figura 2s).

Vă rugăm să faceți clic aici pentru partea 2