Partea 1: Efluxul de magneziu din celulele Drosophila Kenyon este esențial pentru memoria pe termen lung normală și îmbunătățită de dietă

pentru mai multe informații:Ali.ma@wecistanche.com

Vă rugăm să faceți clic aici pentru partea 2

Yanying Wu1, Yosuke Funato2, Eleonora Meschi1, Kristijan D Jovanoski1, Hiroaki Miki2, Scott Waddell1*

1Centrul pentru circuite neuronale și comportament, Universitatea din Oxford, clădirea Tinsley, Oxford, Regatul Unit; 2Departamentul de Reglementare Celulară, Institutul de Cercetare pentru Boli Microbiene, Universitatea Osaka, Suita, Japonia

Rezumat Suplimentarea alimentară cu magneziu (Mg2 plus) poate îmbunătățimemoriela șobolani tineri și în vârstă.Memorie-capacitatea de îmbunătățire a fost atribuită în mare măsură creșterii densității sinaptice a hipocampului și exprimării crescute a subunității NR2B a receptorului de glutamat de tip NMDA. Aici arătăm că hrănirea cu Mg2 plus îmbunătățește și pe termen lungmemorieîn Drosophila. Normal și Mg2 plus - muscă îmbunătățitămemorieapare independent de receptorii NMDA din corpul ciupercii și, în schimb, necesită exprimarea unui transportor conservat de tip CNNM Mg2 plus eflux codificat de gena neextinsă (uex). UEX conține un domeniu de omologie de legare ciclică a nucleotidelor, iar mutația sa separă un rol vital pentru uex de o funcție înmemorie. În plus, localizarea UEX în celulele Kenyon (KC) din corpul ciupercii este modificatămemorie-muștele defecte care adăpostesc mutații în genele legate de cAMP. Imagistica funcțională sugerează că efluxul dependent de UEX este necesar pentru menținerea ritmică lentă a KC Mg2 plus. Propunem că efluxul neuronal reglat Mg2 plus este esențial pentru normal și Mg2 plus -amplificat.memorie.

Apasa peMagazin de vitamine Cistanche si Cistanche pentru memorie

Introducere

Magneziul (Mg2 plus) joacă un rol critic în metabolismul celular și este considerat a fi un co-factor esențial pentru mai mult de 350 de enzime (Romani și Scarpa, 2000; Vink și Nechifor, 2011). Ca urmare, modificările Mg2 plus homeostaziei sunt asociate cu o gamă largă de afecțiuni clinice, inclusiv cele care afectează sistemul nervos, cum ar fi glaucomul (DeToma și colab., 2014), boala Parkinson (Hermosura și colab., 2005; Hermosura și Garruto, 2007; Lin et al., 2014; Shindo et al., 2016), boala Alzheimer (Andra´si et al., 2000; Andra´si et al., 2005; Cilliler et al., 2007; Durlach et al., 2007; ., 1997; Glick, 1990; Lemke, 1995; Chui et al., 2011; Vural et al., 2010), anxietate (Sartori et al., 2012), depresie (Whittle et al., 2011; Murck, 2002; Murck, 2013; Rasmussen et al., 1990; Ghafari et al., 2015) și dizabilitate intelectuală (Arjona și colab., 2014).

Poate în mod surprinzător, creșterea Mg2 plus creierului prin dietă poate îmbunătăți plasticitatea neuronală șimemorieperformanța rozătoarelor tinere și în vârstă, măsurată într-o varietate de sarcini comportamentale (Slutsky și colab., 2010; Landfield și Morgan, 1984; Mickley și colab., 2013; Abumaria și colab., 2013). În plus, Mg2 crescut plus deficitele cognitive reduse într-un model de șoarece al bolii Alzheimer (Li și colab., 2013) și au sporit stingerea amintirilor de frică (Abumaria și colab., 2011). Aceste efecte aparent benefice au condus la propunerea că Mg2 plus alimentar poate avea valoare terapeutică pentru pacienții cu o varietate dememorie-probleme conexe (Billard, 2011).

În ciuda unui număr mare de site-uri potențiale ale Mg2 plus acțiune în creier,memorie- îmbunătățirea proprietății la rozătoare a fost în mare măsură atribuită creșterii densității sinaptice a hipocampului și activității receptorilor de glutamat N-metil-D-aspartat (NMDAR). Mg2 extracelular plus blochează porii canalului NMDAR și, prin urmare, inhibă trecerea altor ioni (Mayer și colab., 1984; digest) Proverbiala zicală „ești ceea ce mănânci” rezumă perfect conceptul că dieta noastră poate influența atât mentalul, cât și Sănătatea fizică. Știm că alimentele care sunt bune pentru inimă, cum ar fi nucile, peștele gras și fructele de pădure, sunt, de asemenea, bune pentru creier. Știm și că vitaminele și mineralele sunt esențiale pentru o sănătate generală bună. Dar există vreo dovadă că creșterea aportului de vitamine sau minerale specifice ar putea ajuta la creșterea puterii creierului?

Deși ar putea suna aproape prea frumos pentru a fi adevărat, există unele dovezi că acesta este cazul pentru cel puțin un mineral, magneziul. Studiile efectuate la rozătoare au arătat că adăugarea de suplimente de magneziu la alimente îmbunătățește cât de bine îndeplinesc animalele sarcinile de memorie. Atât animalele tinere, cât și cele bătrâne beneficiază de magneziu suplimentar. Chiar și rozătoarele în vârstă cu o afecțiune similară cu boala Alzheimer arată mai puținmemoriepierdere atunci când sunt administrate suplimente de magneziu. Dar cum rămâne cu celelalte specii?

Wu şi colab. arată acum că suplimentele de magneziu sporesc, de asemenea, performanța memoriei la muștele de fructe. Un grup de muște a fost hrănit cu făină de porumb standard timp de câteva zile, în timp ce celălalt grup a primit făină de porumb suplimentată cu magneziu. Ambele grupuri au fost apoi instruite să asocieze un miros cu o recompensă alimentară. Muștele care primiseră magneziu în plus s-au arătat mai binememoriepentru mirosul la testare la 24 de ore după antrenament.

Wu şi colab. arată că magneziul se îmbunătățeștememorieîn muște printr-un mecanism diferit de cel raportat anterior pentru rozătoare. La rozătoare, magneziul a crescut nivelul unei proteine ​​receptor pentru o substanță chimică a creierului numită glutamat. La mustele de fructe, prin contrast, celmemorieimpulsul depindea de o proteină care transportă magneziul din neuroni. Muștele mutante care nu aveau acest transportor prezentau tulburări de memorie. Spre deosebire de muștele normale, cei fără transportor nu au prezentat nicio îmbunătățire a memoriei după ce au consumat alimente îmbogățite cu magneziu. Rezultatele sugerează că transportorul poate ajuta la ajustarea nivelurilor de magneziu din interiorul celulelor creierului ca răspuns la activitatea neuronală.

Oamenii produc patru variante ale acestui transportor de magneziu, fiecare codificată de o genă diferită. Unul dintre acești transportatori a fost deja implicat în dezvoltarea creierului. Descoperirile lui Wu et al. sugerează că transportatorii pot acționa și în creierul adult pentru a influența cogniția. Sunt necesare studii suplimentare pentru a testa dacă țintirea transportorului de magneziu ar putea fi în cele din urmă promițătoare pentru tratamentmemoriedeficiențe.

Bekkers și Stevens, 1993; Jahr și Stevens, 1990; Nowak și colab., 1984). Important este că depolarizarea neuronală prealabilă, condusă de alți receptori transmițători, este necesară pentru a elibera blocul Mg2 plus pe NMDAR și a permite influxul de Ca2 plus dependent de glutamat. Prin urmare, NMDAR joacă un rol important în plasticitatea neuronală ca un potențial detector de coincidențe Hebbian. Creșterea acută a concentrației extracelulare de Mg2 plus ([Mg2 plus ]e) în intervalul fiziologic (0,8–1,2 mM) poate antagoniza inducerea potențării pe termen lung dependentă de NMDAR (Dunwiddie și Lynch, 1979; Malenka și colab., 1992; Malenka; şi Nicoll, 1993; Slutsky şi colab., 2004). În schimb, creșterea [Mg2 plus ]e timp de câteva ore în culturile neuronale duce la îmbunătățirea curenților mediați de NMDAR și la facilitarea expresiei LTP (Slutsky și colab., 2004). Efectele de îmbunătățire ale creșterii [Mg2 plus ]e au fost, de asemenea, observate in vivo în creierul șobolanilor hrăniți cu Mg2 plus -L-treonat (Slutsky și colab., 2010). Circuitele neuronale hipocampice suferă plasticitate homeostatică (Turrigiano, 2008) pentru a se adapta [Mg2 plus ]e crescut prin reglarea exprimării NMDAR-urilor care conțin subunitatea NR2B (Slutsky și colab., 2004; Slutsky și colab., 2010). Se crede că densitatea mai mare a sinapselor hipocampale cu NMDAR care conțin NR2B compensează creșterea cronică a [Mg2 plus ]e prin creșterea curenților NMDAR în timpul arderii în explozie. În sprijinul acestui model, șoarecii care sunt modificați genetic pentru a supraexprima NR2B prezintă LTP și comportament comportamental îmbunătățit în hipocamp.memorie(Tang şi colab., 1999).

Olfactivmemorieîn Drosophila implică un mecanism heterosinaptic condus de întărirea neuronilor dopaminergici, care are ca rezultat deprimarea presinaptică a conexiunilor colinergice dintre celulele Kenyon (KC) activate de mirosuri (MB) și neuronii de ieșire ai corpului de ciuperci (MBON) din aval (Schwaerzel și colab., 2003). ; Aso și colab., 2010; Aso și colab., 2012; Claridge-Chang și colab., 2009; Burke și colab., 2012; Liu și colab., 2012; Plac¸ais și colab., 2013; Owald și colab. ., 2015; Hige și colab., 2015; Barnstedt și colab., 2016; Parisse și colab., 2016; Aso și colab., 2014; Oswald și Waddell, 2015). În plus, informațiile olfactive sunt transmise către KC prin transmiterea colinergică de la neuronii de proiecție olfactivă (Yasuyama și colab., 2002; Leiss și colab., 2009). Deși este de imaginat ca glutamatul să fie livrat în rețeaua MB printr-o rută care nu a fost încă identificată, în prezent nu există o locație evidentă pentru plasticitatea dependentă de NMDAR în arhitectura cunoscută a straturilor de intrare sau de ieșire colinergice (Barnstedt și colab., 2016). ). Musca, prin urmare, oferă un model potențial pentru a investiga alte mecanisme prin care Mg2 plus alimentar ar putea îmbunătățimemorie.

Efectele de întărire ale dopaminei depind de receptorul de dopamină de tip Dop1R D1-(Kim et al., 2007; Qin et al., 2012; Handler et al., 2019), care este cuplat pozitiv cu producția de cAMP (Tomchik). și Davis, 2009; Boto și colab., 2014). Mai mult, studiile timpurii în Drosophila au identificat fosfodiesteraza cAMP codificată dunce și rutabaga și, respectiv, adenilat ciclaza stimulată de tip I Ca2 plus ca fiind esențiale pentru olfactiv.memorie(Dudai și colab., 1976; Byers și colab., 1981; Dudai și colab., 1984; Chen și colab., 1986; Livingstone și colab., 1984; Levin și colab., 1992). Studiile efectuate pe celule de mamifere au arătat că hormonii sau agenții care cresc nivelul de cAMP celular provoacă adesea o extrudare semnificativă dependentă de Na plus a Mg2 plus în spațiul extracelular (Romani și Scarpa, 1990b; Romani și Scarpa, 1990a; Romani și Scarpa, 2000; Vink și Nechifor, 2011; Vormann și Gu¨nther, 1987). Cu toate acestea, nu este clar dacă Mg2 plus extrudarea joacă vreun rol în procesarea în memorie.

Aici demonstrăm că Drosophila pe termen lungmemorie(LTM) poate fi îmbunătățit cu Mg2 dietetic plus suplimente. Găsim că gena neextinsă (uex) (Maeda, 1984; Coulthard și colab., 2010), care codifică un ortolog funcțional al muștei al proteinelor de mamifer Ciclin M2 Mg2 plus transportor de eflux (CNNM), este critică pentrumemorie-proprietatea de sporire a Mg2 plus. Funcția UEX în MB KC este necesară pentru LTM, iar restaurarea funcțională a uex dezvăluie că MB este locul cheie al îmbunătățirii memoriei dependente de Mg2 plus. Schimbarea cronică a metabolismului cAMP prin introducerea de mutații în genele dnc sau rut modifică localizarea celulară a UEX. Mai mult, mutarea domeniului de omologie de legare ciclică a nucleotidelor conservate (CNBH) în UEX decuplează un rol esențial pentru uex de funcția sa în memorie. Mg2 plus eflux condus de UEX este necesar pentru menținerea ritmică lentă a nivelurilor KC Mg2 plus, ceea ce sugerează un rol potențial pentru procesarea Mg2 plus flux în memorie.

Rezultate

Mg2 plus hrănirea îmbunătățește LTM al muștelor de tip sălbatic

Studiile anterioare au raportat că hrănirea șobolanilor cu hrană care conține o concentrație mare de Mg2 plus - le-a îmbunătățit capacitatea de învățare și memorie (Slutsky și colab., 2010; Landfield și Morgan, 1984; Abumaria și colab., 2011; Mickley și colab., 2013; Abumaria et al., 2013). Prin urmare, am testat dacă există efecte similare la muște, hrănindu-le cu alimente care conțin o concentrație mare de Mg2 plus înainte de antrenament. În mod surprinzător, muștele de tip sălbatic hrănite timp de 4 zile înainte de antrenament cu hrană suplimentată cu clorură de magneziu suplimentară (MgCl2) au prezentat performanțe de memorie semnificativ îmbunătățite pe 24 de ore. Îmbunătățirea memoriei depinde de concentrație și a fost maximă atunci când mâncarea a fost suplimentată cu 80 mM MgCl2 (Figura 1A). Performanța imediată a memoriei nu a fost îmbunătățită în mod evident (Figura 1B). Efectul de îmbunătățire al MgCl2 a fost observat și la muștele hrănite cu sulfat de magneziu (MgSO4), dar nu cu clorură de calciu (CaCl2) (Figura 1C). În plus, hrănirea muștelor timp de 4 zile cu hrană care conține între 5 și 80 mM clorură de stronțiu (SrCl2) a dus la niveluri ridicate de mortalitate, iar muștele care au supraviețuit hrănirii cu 5 mM SrCl2 nu au prezentat performanțe îmbunătățite de memorie imediată sau de 24 de ore (datele nu sunt afișate) . Prin urmare, efectele de îmbunătățire a memoriei pot fi atribuite în mod specific suplimentării alimentare cu Mg2 plus divalent.

Memoria îmbunătățită Mg2 plus este independentă de NMDAR din corpurile ciupercilor

Deoarece memoria îmbunătățită cu L-treonatul de magneziu la șobolani a fost corelată cu o reglare în sus a subunității hipocampale NR2B care conțin NMDAR (Slutsky și colab., 2010), am testat modificările expresiei receptorului de glutamat la muștele hrănite cu MgCl2. Analizele RT-qPCR nu au evidențiat o diferență semnificativă în abundența ARNm pentru receptorii presupusi NMDA (Nmdar1, Nmdar2), AMPA (GluRIA) sau de tip kainat (GluRIIA) în capete luate de la muștele hrănite timp de 4 zile cu 80 mM MgCl2 față de cei hrăniți cu 1 mM MgCl2 (Figura 1D).

Apoi am testat direct dacă memoria îmbunătățită Mg2 plus necesita funcția NMDAR, prin distrugerea expresiei genelor Nmdar1 sau Nmdar2 utilizând interferența ARN transgenică determinată de UAS.

Figura 1. Mg2 dietetic plus suplimentarea îmbunătățește memoria pe termen lung a Drosophila. (A) Muștele de tip sălbatic au fost antrenate și testate pentru memorie apetitivă de 24 de ore după 1-5 zile de hrănire ad libitum cu alimente suplimentate cu Mg2 plus. Memoria a fost îmbunătățită semnificativ la muștele hrănite timp de 4 zile cu 80 mM MgCl2, în comparație cu cele hrănite cu 1 mM. 80 mM MgCl2 a produs o performanță marginal mai mare decât 50 mM sau 100 mM și, prin urmare, a fost considerat optim (asteriscurile indică p<0.05, t-test="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" groups="" for="" each="" time="" point,="" n="6–8)." (b)="" 4="" days="" of="" 80="" mm="" mgcl2="" food="" did="" not="" enhance="" immediate="" memory.="" (c)="" appetitive="" 24="" hr="" memory="" was="" enhanced="" by="" feeding="" wild-type="" flies="" for="" 4="" days="" with="" mgcl2="" and="" mgso4,="" but="" not="" cacl2.="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05, anova,="" n="6)" between="" mg2+="" fed="" and="" plain="" groups.="" (d)="" rt-qpcr="" showed="" no="" significant="" differences="" in="" glutamate="" receptor="" mrna="" expression="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" fed="" flies="" (t-test,="" n="5)." (e)="" c739-gal4;="" uas-magfret-1="" flies="" were="" fed="" for="" 4="" days="" on="" food="" supplemented="" with="" mg2+.="" brains="" were="" dissected="" and="" fixed="" and="" a="" fluorescence="" emission="" ratio="" measurement="" (citrine/cerulean)="" was="" taken="" as="" an="" indicator="" of="" [mg2+]i.="" the="" magfret="" signal="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" ab="" lobes="" of="" flies="" fed="" with="" 80="" mm="" mgcl2="" than="" those="" fed="" with="" 1="" mm="" mgcl2=""><0.05, t-test,="" n="52–60)." unless="" otherwise="" noted,="" all="" data="" are="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" the="" mean="" (sem).="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05), individual="" data="" points="" displayed="" as="" open="">

Versiunea online a acestui articol include următoarele suplimente pentru figura 1:

Suplimentul figura 1. Deteriorarea receptorului de glutamat N-metil-D-aspartat (NMDAR) în corpurile ciupercilor nu afectează memoria îmbunătățită de Mg2 plus.

(ARNi) constructe (Dietzl et al., 2007; Perkins et al., 2015). Dintre cele două linii independente UAS-Nmdar1R-NAi și patru UAS-Nmdar2RNAi pe care le-am testat, doar o linie Nmdar1RNAi (BDSC 25941), atunci când este condusă în toți neuronii de Synaptobrevin neuronal (nSyb)-GAL4, a prezentat o performanță semnificativă a memoriei pe 24 de ore, deoarece în comparație cu cea a muștelor martor heterozigote (Figura 1-figura suplimentul 1A). În schimb, expresia mai selectivă a acestui UAS-Nmdar1RNAi în KC-uri ab relevante pentru LTM folosind c739-GAL4 nu a afectat semnificativ performanța memoriei de 24 de ore (Figura 1 - suplimentul figura 1B). Mai mult, muștele care exprimă Nmdar1RNAi în neuronii ab au păstrat Mg2 robustă plus memorie îmbunătățită (Figura 1 - suplimentul figura 1C). Aceste rezultate sugerează că memoria îmbunătățită cu Mg2 plus nu modifică expresia receptorilor de glutamat și nici nu necesită funcție NMDAR în ab KC.

Concentrația de Mg2 plus în neuronii ab este crescută la muștele hrănite cu Mg2 plus Am folosit MagFRET, primul senzor fluorescent Mg2 plus codificat genetic (Lindenburg et al., 2013), pentru a testa dacă Mg2 plus hrănirea a modificat concentrația intracelulară de Mg2 plus ([Mg2). plus ]i). Am construit muște care adăpostesc o transgenă UAS-MagFRET-1 și am combinat-o cu c739-GAL4 pentru a exprima MagFRET- 1 în KC-uri ab. Am comparat semnalele FRET din creierele fixe de la c739; Muștele UAS-MagFRET-1 hrănite cu hrană de MgCl2 de 1 mM sau 80 mM timp de 4 zile. Semnalul MagFRET a fost semnificativ mai mare atât în ​​colateralele a și b ale ab KC ale muștelor hrănite cu 80 mM decât în ​​cele hrănite cu 1 mM (Figura 1E). Acest rezultat indică faptul că hrănirea cu Mg crește [Mg2 plus ]i neuronal. Având în vedere afinitatea MagFRET-1 (Kd=148 mM) și creșterea de ~50% a semnalului FRET la legarea Mg2 plus (Lindenburg et al., 2013), estimăm că îmbunătățirea de ~8% a semnalul MagFRET măsurat la muștele hrănite cu 80 mM MgCl2 corespunde aproximativ unei creșteri de 50 mM a ab KC [Mg2 plus ]i în medie.

Transportorul Mg2 plus codificat neextins de tip CNNM are un rol în memorie

Am identificat neextens (uex; Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) ca un LTM olfactiv apetitiv care modifică genele, întărit cu o recompensă de zaharoză. Muștele cu inserția MiMIC uexMI01943 (Venken și colab., 2011) au prezentat un defect puternic în memoria de 24 de ore, dar performanța lor imediat după antrenament nu se distingea de cea a controalelor de tip sălbatic. O analiză mai detaliată a muștelor uexMI01943 a dezvăluit o decădere constantă a memoriei care a devenit mai întâi semnificativ diferită de cea a muștelor de tip sălbatic la 12 ore după antrenament (Figura 2A). Nu a fost evident niciun defect de memorie la muștele heterozigote uexMI01943/ plus, demonstrând că această alela sexuală presupusă este recesivă.

uex ne-a atras atenția deoarece este singurul ortolog de muscă al celor patru gene CNNM umane care codifică transportorii Mg2 plus (Ishii și colab., 2016) și conține, de asemenea, un domeniu CNBH presupus care este înrudit structural cu cei din nucleotide ciclice. canale (Zagotta et al., 2003; Flynn et al., 2007; Kesters et al., 2015). Alinierea secvenței UEX de 834 de aminoacizi cu CNNM1-4 dezvăluie o conservare deosebit de ridicată a secvenței cu CNNM2 și CNNM4 în domeniile DUF21, perechea CBS și CNBH (Figura 2 - suplimentul figura 1A-C). Prin urmare, am emis ipoteza că UEX avea potențialul de a lega efectele de îmbunătățire a memoriei ale Mg2 plus dietetic cu plasticitatea neuronală dependentă de cAMP.

Although uexMI01943 is assigned to the uex gene, the MiMIC element is annotated to lie 17 kb downstream of the uex coding region (Venken et al., 2011; Figure 2B). RYa (Yoon et al., 2016) is the next nearest gene to uexMI01943 but is >230 kb mai departe. Am confirmat mai întâi locația MiMIC prin PCR inversă (Atrill și colab., 2016). Important, nu a fost detectată nicio inserție suplimentară MiMIC la aceste muște. Apoi am testat dacă uexMI01943 a fost responsabil pentru defectul de memorie prin îndepărtarea precisă a elementului MiMIC prin excizia mediată de transpozaza Minos (Arca` și colab., 1997; Figura 2 - suplimentul figura 2A și B). Eliminarea MiMIC în muștele uexMI01943.ex1 și uexMI01943.ex2 a restabilit performanța normală a memoriei de 24 de ore, demonstrând că inserarea MiMIC este necesară pentru uexMI01943memoriedefect (Figura 2C).

Atât analiza qRT-PCR a ARNm, cât și analiza Western blot a extractelor de proteine ​​din capete de muște nu au reușit să dezvăluie o diferență semnificativă în expresia uex/UEX la muștele uexMI01943. Prin urmare, am folosit CRISPR pentru a introduce un codon stop în al cincilea exon de codificare al locusului uex (Figura 2B și Figura 2 - suplimentul de figură 2C). Muștele homozigote pentru mutația uexD rezultată nu au fost viabile ca adulți, murind în stadiul larvar. În schimb, muștele heterozigote uexMI01943/uexD au fost viabile, dar apetitivitatea lor de 24 de orememoriea fost afectată semnificativ (Figura 2D). Aceste date demonstrează că uex este o genă esențială și că uexMI01943 este o alela hipomorfă viabilă a uex.

Am testat și aversivulmemorieperformanța muștelor mutante uexMI01943. Muștele homozigote uexMI01943 au fost expuse imediatmemoriecare nu se distingea de cel al controalelor heterozigote și de tip sălbatic (Figura 2E). Cu toate acestea, memoria lor de 24 de ore, formată în urma fie a cinci încercări de antrenament aversiv spațial (Tully și colab., 1994; Jacob și Waddell, 2020), fie a unui studiu de antrenament facilitat de post (Hirano și colab., 2013), a fost afectată semnificativ (Figura 2E). Aceste experimente sugerează că muștele uexMI01943 sunt în general compromise în capacitatea lor de a forma LTM. Dacă nu se specifică altfel, toate analizele ulterioare alememorieîn acest studiu utilizați condiționare apetitivă recompensată cu zahăr.

Figura 2. Muștele mutante uexMI01943 au defecte pe termen lungmemorie(LTM). (A) Reținerea memoriei apetitive a fost testată în diferite momente după antrenament. Muștele homozigote pentru uexMI01943 au arătat un defect semnificativ de memorie la 12 ore după antrenament, în comparație cu performanța muștelor heterozigote uexMI01943/ plus și a muștelor de control de tip sălbatic (p.<0.05, anova,="" n="6–10)." (b)="" the="" uex="" locus="" lies="" on="" chromosome="" 2r="" between="" 3,900,285="" and="" 3,949,425="" (light="" blue="" bar).="" the="" four="" alternate="" uex="" transcripts,="" uex-re,="" uex-rg,="" uex-rh,="" and="" uex-rf,="" all="" encode="" the="" same="" protein.="" the="" uexmi01943="" mimic="" (blue="" triangle)="" resides="" ~17="" kb="" downstream="" of="" the="" uex="" coding="" region.="" the="" crispr/cas9="" edited="" uexd="" allele="" replaces="" a="" 3047="" bp="" fragment,="" including="" exon="" 7="" of="" uex="" with="" a="" stop="" signal="" (termination="" codon="" in="" all="" three="" reading="" frames)="" and="" a="" gfp="" cassette,="" truncating="" the="" uex="" reading="" frame="" (dark="" blue="" bar).="" (c)="" precise="" excision="" of="" the="" uexmi01943="" mimic="" restores="" normal="" 24="" hr="" memory="" to="" uexmi01943.ex1="" and="" uexmi01943.ex2="" flies=""><0.05, anova,="" n="8–11)." (d)="" uexd="" fails="" to="" complement="" the="" 24="" hr="">memoriedefect al uexMI01943 (pag<0.05, anova,="" n="6–8)." (e)="" flies="" homozygous="" for="" uexmi01943="" showed="" a="" significant="" defect="" in="" aversive="" ltm,="" as="" figure="" 2="" continued="" on="">

Figura 2 a continuat

în comparație cu performanța muștelor de control heterozigote uexMI01943/ plus și de tip sălbatic (p<0.05, anova,="" n="8–12)." an="" ltm="" defect="" was="" also="" observed="" following="" five="" cycles="" of="" aversive="" spaced="" training="" and="" a="" 16="" hr="" fasting="" facilitated="" one-cycle="" training="" protocol.="" immediate="" aversive="">memorienu a fost afectată la muștele mutante homozigote uexMI01943.

Versiunea online a acestui articol include următoarele date sursă și supliment(e) pentru figura 2:

Sursă de date 1. Tabelul de control al zahărului și al acuității senzoriale olfactive pentru toate experimentele comportamentale din acest manuscris.

Suplimentul de figura 1. Conservarea UEX cu ortologii săi.

Figura supliment 2. Scheme de construcție pentru excizia lui uex Mino și crearea alelei uexD.