Partea întâi DsbA-L interacționează cu VDAC1 în apoptoza celulelor tubulare mediată mitocondrion și contribuie la progresia bolii acute de rinichi

rezumat

1. Fundal

am demonstrat că proteina asemănătoare oxidoreductazei A (DsbA-L) a legăturii disulfurice a fost implicată în progresia fibrozei renale. Cu toate acestea, funcția precisă a DsbA-L în leziunea renală acută (AKI) și mecanismele implicate nu au fost încă elucidate.

2. Metode

Ilustram DsbA-L a interacționat cu VDAC1 prin co-IP (co-imunoprecipitare) in vitro și Viv și am găsit părțile de interacțiune ale acestora prin experiment de mutație. Constatările de mai sus au fost verificate prin co-localizare a acestora. În plus, am construit cele două modele de șoareci PT-DsbA-L și VDAC1 KO pentru a verifica funcția DsbAL și VDAC1 în modelele de AKI indusă de VAN, CL, P și I/R.

3. Constatări

Șoarecii PT-DsbA-L-KO au arătat o ameliorare a progresiei AKI indusă de I/R, VAN și CLP prin reglarea în jos a VDAC1. În cele din urmă, am confirmat aceste modificări ale moleculelor semnal prin examinarea celulelor HK-2 și a biopsiilor de rinichi prelevate de la pacienți cu AKI indusă de nefrită interstițială acută (AIN) ischemică sau. Din punct de vedere mecanic, DsbA-L a interacționat cu aminoacizii 9-13 și 22-27 ai VDAC1 din mitocondriile celulelor BUMPT pentru a induce apoptoza celulelor renale și leziuni mitocondriale.

4. Interpretare

Acest lucru a sugerat că DsbA-L, situat în celulele tubulare proximale, conduce la progresia AKI, prin reglarea directă a nivelurilor de VDAC1.

5. Finanțare

Fundația Națională de Științe Naturale din China, un grant de la Proiectul cheie al inovației științifice și tehnologice din provincia Hunan, Departamentul de Știință și Tehnologie al Provinciei Hunan Proiect de Cooperare și Schimburi Internaționale, proiect Biroul de Științe și Tehnologie Changsha, Fundația de Științe Naturale din Provincia Hunan, Fundamental Fonduri de cercetare pentru universitățile centrale ale Universității Centrale de Sud, Fundația de inovare a provinciei Hunan pentru departamentul postuniversitar de știință și tehnologie provincială din China Hunan.

Cuvinte cheie

DsbA-L; VDAC_I; Bax; Cyt-c; AKI

Faceți clic aici pentru a obține beneficiile Cistanche și pentru a cumpăra pastile Cistanche

Introducere

Leziunea renală acută (AKI), o complicație clinică devastatoare, cu rate ridicate de morbiditate și mortalitate, afectează milioane de pacienți din întreaga lume (1). AKI este de obicei indusă de sepsis, agenți nefrotoxici și leziuni de ischemie-reperfuzie (IRI)(2). Până în prezent, mecanismele moleculare care stau la baza AKI nu au fost încă pe deplin elucidate. În consecință, nu există strategii eficiente de tratament disponibile pentru AKI.

Leziunea celulelor tubulare a fost recunoscută de zeci de ani ca un factor important al AKI.3 Pe măsură ce cercetarea a progresat, un număr tot mai mare de cercetători au identificat că leziunile mitocondriale joacă un rol cheie în leziunea celulelor tubulare și că această leziune inițială este cauzată de acumularea de ROS, producerea de citokine și moartea celulară (inclusiv atât necroza, cât și apoptoza); în mod colectiv, toate aceste procese contribuie la AKI.4-6 Deși un număr tot mai mare de cercetări s-au concentrat pe mecanismele care stau la baza leziunilor mitocondriale în AKI,7- 12 mecanismul precis responsabil pentru leziunea mitocondrială nu a fost încă identificat.

Legătura disulfură O proteină asemănătoare oxidoreductazei (DsbAL) a fost identificată pentru prima dată ca o proteină mitocondrială în celulele hepatice de șobolan.13 Studiile anterioare au demonstrat că DsbA-L a prevenit obezitatea, inflamația, rezistența la insulină sau nefropatia diabetică (DN) induse de dieta sau leziuni renale.14-18 Interesant, studiul nostru recent a constatat că fibroza renală indusă de obstrucția ureterală unilaterală (UUO) mediată de DsbA-L. Cu toate acestea, rolul și mecanismul DsbA-L tubular în AKI sunt încă complet necunoscute.

În studiul de față, deleția tubulară proximală a DsbA-L (PT-DsbA-L-KO) într-un model de șoarece a dus la atenuarea notabilă a I/R, împreună cu vancomicină (VAN) și ligatura și puncția cecală (CLP). AKI indusă de ). În mod constant, DsbA-L a mediat și apoptoza indusă de I/R, VAN și LPS în celulele epiteliale tubulare proximale renale de șoarece (BUMPT). Interesant, am descoperit că DsbA-L a interacționat cu regiunile 9-13 și 22 27 ale canalului anionic dependent de tensiune 1 (VDAC1), un membru cheie al familiei de proteine ​​VDAC19 21; aceste efecte au fost observate atât în ​​probele mitocondriale in vivo, cât și in vitro și în probele de AKI umane. În plus, am demonstrat că PTVDAC1-KO a ameliorat și apoptoza celulelor renale atât în ​​modelele in vitro, cât și in vivo de AKI. În mod colectiv, am demonstrat că DsbA-L a interacționat cu VDAC1 în apoptoza celulelor tubulare mediată de mitocondrii și, prin urmare, a provocat progresia AKI.

Cistanche tubulosa

Materiale și metode

1. Declarație de etică

Studiul a fost aprobat de Consiliul de revizuire al celui de-al doilea spital Xiangya, Republica Populară Chineză (NR. 2018065) ​​și acest studiu a recrutat 18 pacienți. Toți participanții înainte de includerea în studiu au fost recrutați cu consimțământ informat scris. Toate experimentele pe animale au respectat principiile directoare aprobate de Comitetul de etică pentru îngrijirea animalelor al doilea spital Xiangya, Republica Populară Chineză (NR. 2020310).

2. Anticorpi și reactivi

Anti-COXIV (ab33985, RRID: AB_879754), VDAC1 (ab14734, RRID: AB_443084), and PGC-1a (ab191838, RRID: AB_2721267) antibodies were obtained from Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Anti-Caspase3 (9662, RRID: AB_331439) and cleavedcapase3 (9664, RRID: AB_2070042) antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-Bax (50599-2-Ig, RRID: AB_2061561), Cyt-c (10993-1-AP, RRID: AB_2090467), NRF1 (12482- 1-AP, RRID: AB_2282876), GAPDH (60004-1-Ig, RRID: AB_2107436), and b-tubulin (10094-1-AP, RRID: AB_2210695) antibodies were obtained from Proteintech (Rosemont, IL, USA). The anti-DsbA-L antibody was provided by Dr. Feng Liu(14). All secondary antibodies (MitoTracker Green FM and MitoTracker Red CMXRos) were obtained from Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). The calcium ionophore was purchased from Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Antimycin A (>95% pur, ab141904) și un kit de fracționare a mitocondriilor/citosolului (ab65320) au fost achiziționate de la Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, Marea Britanie). Secvența țintă pentru DsbAL de șoarece a fost descrisă anterior.22

3. Crearea modelelor AKI prin reperfuzie ischemică, CLP și VAN

Șoarecii masculi C57BL/6J (RRID: MGI:5657312) în vârstă de 8-10 săptămâni au fost achiziționați de la Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. Șoarecii care prezintă DsbA-L sau VDAC1 deleție specifică tubului proximal au fost produși prin încrucișarea DsbA-L șoareci (flox/flox) (furnizat de Dr. Feng Liu) sau șoareci VDAC1 (flox/flox) (obținut de la organisme model Shanghai) cu șoareci PEPCK-Cre (furnizat de Dr. Volker Haase (Universitatea din Pennsylvania, Philadelphia, PA) ) așa cum s-a descris anterior.22,23 Soarecii masculi (8-10 săptămâni) au fost supuși la ischemie, CLP și AKI nefrotoxică VAN, așa cum s-a descris anterior.23 27 Pentru AKI ischemică, artera renală bilaterală a fost tăiată continuu pentru 28 min urmat de reperfuzie timp de 24 h sau 48 h. Temperatura corpului șoarecilor a fost menținută la aproximativ 37 de grade. Pentru AKI indusă de CLP, cecumul a fost strâns legat la o poziție de 1,5 cm de vârf. Aceasta a fost urmată de un puncție timp de 18 h. Pentru rănirea VAN, șoarecii au fost injectați intraperitoneal cu o singură doză de VAN la o doză de 600 mg/kg timp de 7 zile consecutive, așa cum s-a descris anterior.28,29 În plus, șoarecii C57BL/6 au fost injectați cu plasmide DsbA-L sau VDAC1 sau siARN VDAC1 (la o doză de 15 mg/kg) prin vena cozii de două ori pe săptămână22; salină a fost folosită ca injecție de control. Pentru fiecare studiu, am analizat eșantioanele împreună pentru a evita părtinirea, pe baza studiilor anterioare și am folosit software-ul PASS pentru a determina dimensiunea eșantionului (n=6). Am exclus eșantionul care a murit sau a eșuat stabilirea modelului înainte de punctul final. Șoarecii experimentali au fost grupați pe tabel cu numere aleatorii. Anchetatorii nu au fost orbiți în timpul experimentului, ci au fost orbiți în timpul alocării, colectării probelor și analizei datelor. Toate experimentele pe animale au respectat principiile directoare aprobate de Comitetul de etică a îngrijirii animalelor al doilea spital Xiangya, Republica Populară Chineză. Șoarecii au fost găzduiți într-un mediu de 12-h lumina/întuneric, cu acces gratuit la o dietă standard pentru rozătoare și la apă.

Herba Cistanche

4. Cultura celulară și un model de ischemie-reperfuzie

Celulele BUMPT obținute de la Dr. Wilfred Lieberthal (Școala de Medicină a Universității din Boston) sau celulele HK{{0}} obținute de la Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotech au fost cultivate cu DMEM (Gibco, 11965092) adăugat 10% FBS (Gibco,10100147) și 1% penicilină-streptomicina (Gibco, 15140163) la 37 de grade în 5% CO2. Pentru modelul de celule ischemice, celulele BUMPT au fost tratate cu 10 mM antimicină A (un inhibitor al complexului mitocondrial III, Abcam, ab141904) și 1,5 mM ionofor de calciu (Sigma, A23187) în soluție de sare echilibrată Hanks (Hyclone, SH0300) 2 h.30 Apoi am înlocuit HBSS cu mediu DMEM timp de 0, 2 și 4 ore pentru etapa de reperfuzie. Apoptoza celulară a fost detectată prin morfologie și imunoblotting pentru indicatorii apoptotici, inclusiv clivată-caspaza3, Bax și Cyt-c. Mai multe plasmide au fost create și transfectate în celule prin lipofecție: DsbA-L, HA-VDAC1-1-25, HA-VDAC1-26-366, HA-VDAC1-de lungime completă, HA-VDAC{{33 }}D9-13,22-27, HAVDAC1-D{39-45,55-57 și HA-VDAC{1-D{9-13, 22-27 D{39-45,55-57 și siRNA pentru DsbA-L și VDAC1. La șase până la opt ore după transfecție, mediul de cultură a fost înlocuit cu DMEM. Secvențele de ARNsi DsbA-L și ARNsi VDAC1 pentru șoareci au fost 50 - GCAUGGAGCAACCAGAGAUTT -30 și, respectiv, 50 - CCAGAGCAACTTCGCAGTT -30; secvențele pentru siRNA NC amestecat au fost 50 -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-30. Secvențele de ARNsi DsbA-L și ARNsi VDAC1 pentru oameni au fost 50 - UCAUUUGCCAUGUAUAGUCCU-30 și, respectiv, 50 -UAUUAAAGCCAAAUCCAUAGCC -30; secvențele pentru ARNsi NC amestecat au fost 50 -AACCACUCAACUUUUUCC CAA -30. Modelul de IR a fost apoi indus când densitatea celulelor a ajuns la 90 la sută.

5. Citometrie în flux

Citometria în flux a fost operată conform instrucțiunilor kitului de detectare a apoptozei anexinei V FITC (BD, 556547). Celulele BUMPT sau HK-2 cu diferite tratamente au fost colectate folosind tripsină fără EDTA și spălate de trei ori cu PBS, urmat de FITC timp de 15 minute și PI timp de 5 minute la temperatura camerei și, în final, examinate prin citometrie în flux.

6. Pacienți cu AKI și colectarea probelor

Protocolul a fost aprobat de Consiliul de revizuire al celui de-al doilea spital Xiangya, Republica Populară Chineză. Acest studiu a recrutat 18 pacienți, inclusiv 12 bărbați și 6 femei. Principiul de recrutare s-a bazat pe biopsia renală. Informațiile despre pacient sunt suplimentate în Tabelul 1. Probele de biopsie renală au fost obținute de la pacienți care trăiesc cu boli cu modificări minime (MCD) (n=6) și AKI indusă de nefrită interstițială acută sau ischemică (AIN) (n{{6} }). Declarăm că toate studiile respectă toate reglementările etice relevante pentru cercetarea cu participanți umani și au fost efectuate în conformitate cu principiile Declarației de la Helsinki și că studiul este în conformitate cu îndrumările Ministerului Științei și Tehnologiei pentru revizuirea și aprobarea Resurse genetice umane. Criteriile de includere și excludere ale MCD au fost descrise în studiul nostru anterior.23 Pentru RI: Criterii de includere:1 Biopsie pentru pacienții cu ischemie-reperfuzie,2 Vârsta sub 75 de ani; Criterii de excludere1: excludeți pacienții cu tumori găsite la examenele medicale postoperatorii2, excludeți pacienții cu antecedente de diabet, gută, hipertensiune arterială, tuberculoză urinară sau respectiv infecție. Pentru AIN: Criterii de includere1: Diagnosticat clinic ca nefrită interstițială acută2 Pacienți AIN confirmați prin biopsie,3 Vârsta mai mică de 75 de ani; Criterii de excludere1: Excludeți pacienții cu creatinină sanguină anormală înainte de internare2, excludeți pacienții cu antecedente de diabet, gută, hipertensiune arterială, tuberculoză urinară sau infecție. Aceste specimene au fost apoi utilizate pentru colorarea HE, TUNEL și imunohistochimie, precum și pentru imunoprecipitare (IP) și imunoblot.

7. Imunoprecipitații

Citoplasma și mitocondriile din celulele BUMPT și țesutul renal de la șoareci și pacienții cu AKI au fost separate utilizând kitul de fracționare Mitocondria/Cytosol (Abcam, ab65320); trusa a fost folosită conform instrucțiunilor producătorului. Anticorpii (DsbA-L, VDAC1, HA sau IgG) au fost legați de perle magnetice. Apoi, am adăugat mitocondriile/lizat de citoplasmă și l-am incubat timp de trei ore. Apoi, amestecul a fost eluat și investigat pentru exprimarea markerilor asociați prin imunoblot.

8. PCR cantitativă relativă (qPCR)

ARN-ul a fost extras din celulele BUMPT sau din țesutul renal cu reactivul Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA). ARN-ul a fost apoi transcris invers în prima catenă de ADNc folosind kitul de reactiv Prime Script RT și gDNA Eraser (TaKaRa, RR037A), așa cum s-a descris anterior.31'34 În continuare, am folosit cADN ca șablon cu TB verde (TaKaRa, RR820A) și un Light cycler 96 (Roche) cu următoarele perechi de primeri: DsbA-L: 5 - AAATATGGGGCCTT TGGGCT-3'(înainte) și 5'- TAGCAACTCCAAGCGGTCA G-3'(verso); și GAPDH: 5'-GGTCTCCTCTTGACTTCACA-3'(înainte) și 5'-GTGAGGGTC TCTCTCTTCCT-3'(verso); PGC- 1a: 5'-ATGTGTCGCCTTCTTGCTTCTTCC-3 (înainte) și 5'-CTCCCGCTTCTCGTGCTCTTTG-3'(verso); NrF1:5'-TCTGCTGTGGCTGATGGAGA GG-3'(înainte) și NrF1:5'-GATGCTTGCGTCGTCTGGATGG-3 (invers);

9. BUN și detectarea creatininei

Detectarea BUN și creatininei au fost efectuate conform protocolului BUN (Urea Nitrogen Content Assay Kit Beijing Boxbio Science & Technology Co, Ltd.) și kit-ului de testare a creatininei (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China).

10. Colorație HE, colorare TUNEL, imunochimie, imunofluorescență și imunobblotare

Țesutul renal a fost încorporat în parafină și apoi tăiat în secțiuni pentru diferite tipuri de colorare, așa cum a fost descris anterior.26,35 Histologia a fost evaluată prin colorare cu hematoxilină și eozină. Criteriile utilizate pentru a marca leziunea tubulară renală au fost descrise anterior.23 Colorarea TUNEL a fost utilizată pentru a evalua apoptoza în celulele renale. Proporția (procentul) de celule TUNEL pozitive în 10-20 câmpuri microscopice per secțiune de țesut a fost utilizată ca indicator cantitativ al apoptozei.26 Pentru colorarea imunochimică, secțiunile de țesut au fost incubate peste noapte la 4 grade C cu un anticorp primar specific ( DsbA-L 1:200 sau VDAC1 1:100). În dimineața următoare, secțiunile au fost incubate cu un anticorp secundar timp de 30 de minute la 37 de grade și apoi au reacționat cu DAB timp de 5-10 min. Pentru colorarea prin imunofluorescență, secțiunile au fost incubate cu un anticorp primar specific (DsbA-L 1:200, VDAC1 1:100) peste noapte la 4 grade, urmat de un anticorp fluorescent secundar timp de 1 oră la 37 de grade în întuneric. Apoi a fost adăugat DAPI timp de 3-5 min și secțiunile au fost observate prin microscopie fluorescentă. Colorația mitocondrială a fost efectuată printr-un protocol standard. Lizatele de proteine ​​din celulele BUMPT sau rinichii au fost recoltate și apoi centrifugate pentru a colecta supernatantul care conține proteinele. Supernatantul a fost supus la SDS-PAGE și apoi transferat pe o membrană PVDF. Membranele au fost apoi incubate cu un anticorp primar peste noapte la 4 grade urmat de un anticorp secundar timp de 1 oră la temperatura camerei. Concentrația de antiCOXIV, VDAC1, PGC-1a, Bax, Cyt-c, NRF1, GAPDH și b-tubulină este de 1:1000. Concentrația de anti-Caspase3 și clivată-capază3 este de 1:2000.

Supliment Cistanche

11. Statistici

Toate datele au fost prezentate ca mijloace § SD. Testele t Student cu două cozi au fost utilizate pentru comparații cu două grupuri. ANOVA unidirecțional urmată de analiza post-hoc a lui Tukey a fost utilizată pentru comparații multiple. Testul Kruskal Walls a fost utilizat pentru datele cu distribuție nenormală. Software-ul Graph Pad 8.0 a fost folosit pentru a analiza datele și P<0.05 was considered statistically significant.

12. Rolul sursei de finanțare

Finanțatorii nu au fost implicați în proiectarea studiului, colectarea datelor, analiza, interpretarea sau scrierea manuscrisului.

Referințe

1 Zuk A, Bonventre JV. Leziuni renale acute. Annu Rev Med. 2016;67:293–307.

2 Zhou D, Tan RJ, Lin L, Zhou L, Liu Y. Activarea receptorului factorului de creștere a hepatocitelor, c-met, în tubii renali este necesară pentru renoprotecția după leziunea acută a rinichilor. Rinichi Int. 2013;84(3):509– 520.

3 O'Neal JB, Shaw AD, Billings FT. Leziune renală acută în urma unei intervenții chirurgicale cardiace: înțelegere actuală și direcții viitoare. Crit Care. 2016;20(1):187.

4 Ishimoto Y, Inagi R. Mitocondria: o țintă terapeutică în leziunea acută a rinichilor. Transplant Nephrol Dial. 2016;31(7):1062–1069. publicația oficială a Asociației Europene de Dializă și Transplant - Asociația Europeană Renală.

5 Linkermann A, Chen G, Dong G, Kunzendorf U, Krautwald S, Dong Z. Moartea celulară reglementată în AKI. J Am Soc Nephrol. 2014;25(12):2689–2701.

6 Agarwal A, Dong Z, Harris R, et al. Mecanismele celulare și moleculare ale AKI. J Am Soc Nephrol. 2016;27(5):1288–1299.

7 Morigi M, Perico L, Rota C, et al. Îmbunătățirile dinamice mitocondriale dependente de Sirtuin 3-protejează împotriva leziunilor renale acute. J Clin Investig. 2015;125(2):715–726.

8 Yu X, Xu M, Meng X și colab. Receptorul nuclear PXR vizează AKR1B7 pentru a proteja metabolismul mitocondrial și funcția renală în AKI. Sci Transl Med. 2020;12(543):7591–7605.

9 Stoppe C, Averdunk L, Goetzenich A, et al. Rolul protector al factorului inhibitor al migrației macrofagelor în leziunea renală acută după intervenția chirurgicală cardiacă. Sci Transl Med. 2018;10(441):4886–4898.

10 Wei Q, Sun H, Song S și colab. MicroARN-668 reprimă MTP18 pentru a păstra dinamica mitocondrială în leziunea renală acută ischemică. J Clin Investig. 2018;128(12):5448–5464.

11 Tran M, Tam D, Bardia A, et al. PGC-1alfa promovează recuperarea după leziuni renale acute în timpul inflamației sistemice la șoareci. J Clin Investig. 2011;121(10):4003–4014.

12 Lan R, Geng H, Singha PK și colab. Patologia mitocondrială și schimbarea glicolitică în timpul atrofiei tubului proximal după AKI ischemică. J Am Soc Nephrol. 2016;27(11):3356–3367.

13 Harris JM, Meyer DJ, Coles B, Ketterer B. O nouă glutation transferază (13-13) izolată din matricea mitocondriilor hepatice de șobolan are similaritate structurală cu enzimele de clasă theta. Biochem J. 1991;278(Pt 1):137–141.

14 Bai J, Cervantes C, Liu J, et al. DsbA-L previne inflamația indusă de obezitate și rezistența la insulină prin suprimarea căii cGAS-cGAMP-STING activată de eliberarea mtDNA. Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(46):12196–12201.

15 Chen H, Bai J, Dong F și colab. DsbA-L hepatic protejează șoarecii de hepatosteatoza indusă de dietă și de rezistența la insulină. FASEB J. 2017;31(6):2314–2326.

16 Liu M, Xiang R, Wilk SA, et al. Supraexpresia DsbA-L specifică grăsimilor promovează multimerizarea adiponectinei și protejează șoarecii de obezitatea indusă de dietă și rezistența la insulină. Diabet. 2012;61(11):2776–2786.

17 Chen X, Han Y, Gao P, și colab. Legătura disulfură O proteină asemănătoare oxidoreductazei protejează împotriva depunerilor de grăsime ectopică și a leziunilor renale legate de lipide în nefropatia diabetică. Rinichi Int. 2019;95(4):880–895.

18 Dai XG, Xu W, Li T și colab. Implicarea kinazei presupuse induse de fosfatază și omolog tensinei 1-mitofagiei mediate de Parkin în leziunile renale acute septice. Chin Med J (Engl). 2019;132(19):2340–2347.

19 Shoshan-Barmatz V, Nahon-Crystal E, Shteinfer-Kuzmine A, Gupta R. VDAC1, disfuncție mitocondrială și boala Alzheimer. Pharmacol Res. 2018;131:87–101.

20 Geisler S, Holmstrom KM, Skujat D, et al. Mitofagia mediată de PINK1/Parkin este dependentă de VDAC1 și p62/SQSTM1. Nat Cell Biol. 2010;12(2):119–131.

21 Lipper CH, Stofleth JT, Bai F, et al. Gatere dependentă de redox a VDAC de către mitoNEET. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116(40):19924–19929.

22 Li X, Pan J, Li H, et al. Fibroza tubulointerstițială renală mediată de DsbA-L la șoarecii UUO. Nat Commun. 2020;11(1):4467.

23 Zhang D, Liu Y, Wei Q, et al. P53 tubular reglează mai multe gene pentru a media AKI. J Am Soc Nephrol. 2014;25(10):2278–2289.

24 Xu X, Wang J, Yang R, Dong Z, Zhang D. Inhibarea genetică sau farmacologică a EGFR ameliorează AKI indusă de sepsis. Oncotarget. 2017;8(53):91577–91592.

25 Wang J, Li H, Qiu S, Dong Z, Xiang X, Zhang D. MBD2 reglează miR-301a{-5p pentru a induce apoptoza celulelor renale în timpul AKI indusă de vancomicină. Moartea celulară Dis. 2017;8(10):e3120.

26 Xu L, Li X, Zhang F, Wu L, Dong Z, Zhang D. EGFR conduce la progresia AKI la CKD prin supraexprimarea HIPK2. Teranostice. 2019;9(9):2712–2726.

27 Zhang P, Yi L, Qu S și colab. Biomarkerul TCONS_00016233 conduce AKI septic prin țintirea axei de semnalizare miR-22-3p/AIFM1. Acizi nucleici moli. 2020;19:1027–1042.

28 Chen J, Wang J, Li H, Wang S, Xiang X, Zhang D. p53 activează miR-192-5p pentru a media AKI indusă de vancomicină. Sci Rep. 2016;6:38868.

29 Xu X, Pan J, Li H și colab. Atg7 mediază apoptoza celulelor tubulare renale în nefrotoxicitatea vancomicinei prin activarea PKC-delta. FASEB J. 2019;33(3):4513–4524.

30 Lee HT, Emala CW. Precondiționarea și adenozina protejează celulele tubulare proximale umane într-un model in vitro de leziune ischemică. J Am Soc Nephrol. 2002;13(11):2753–2761.

31 Ge Y, Wang J, Wu D, et al. lncRNA NR_038323 Suprimă fibroza renală în nefropatia diabetică prin țintirea axei miR{-324-3p/DUSP1. Acizi nucleici moli. 2019;17:741–753.

32 Wang J, Pan J, Li H, et al. lncRNA ZEB1-AS1 a fost suprimat de p53 pentru fibroza renală în nefropatia diabetică. Acizi nucleici moli. 2018;12:741–750.

33 Song YX, Sun JX, Zhao JH, et al. ARN-urile necodificatoare participă la rețeaua de reglementare a CLDN4 prin evaziunea miARN mediată de ceRNA. Nat Commun. 2017;8(1):289.

34 Zhu M, Liu J, Xiao J, et al. Lnc-mg este un ARN lung necodant care promovează miogeneza. Nat Commun. 2017;8:14718.

35 Kishi S, Brooks CR, Taguchi K, et al. ATR tubul proximal reglează repararea ADN-ului pentru a preveni răspunsurile dezadaptative ale leziunilor renale. J Clin Investig. 2019;129(11):4797–4816.

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h și Dongshan Zhang a,b *

un Departament de Medicină de Urgență, Republica Populară Chineză

b Institutul de Medicină de Urgență și Boli Dificile, Spitalul II Xiangya, Universitatea Central South, Changsha, Hunan 410011, Republica Populară Chineză

c Departamentul de Oftalmologie, Republica Populară Chineză

d Departamentul de Chirurgie Urinară, Republica Populară Chineză

e Departamentul de Chirurgie toracică, Republica Populară Chineză

f Departamentul de Chirurgie Generală, Spitalul II Xiangya, Republica Populară Chineză

g Departamentul de Sănătate Publică, Universitatea Central South, Changsha, Hunan, Republica Populară Chineză

h Departamentul de Endocrinologie, Spitalul Popular din Shenzhen, Cel de-al doilea colegiu medical clinic al Universității Jinan, Primul Spital afiliat al Universității de Știință și Tehnologie de Sud, Shenzhen, Republica Populară Chineză

1 Xiaozhou Li și Jian Pan au contribuit în mod egal la acest studiu