Partea întâi Polimorfismele genetice ale MnSOD modifică impactul melaminei de mediu asupra stresului oxidativ și a leziunii renale precoce la pacienții cu urolitiază de calciu

Abstract

Expunerea la melamină în mediu crește riscurile de stres oxidativ și leziuni renale precoce. Mangan superoxid dismutaza (MnSOD), glutation peroxidaza și catalaza pot proteja rinichii împotriva stresului oxidativ și pot menține funcția normală. Am evaluat dacă polimorfismele lor cu o singură nucleotidă (SNP) ar putea modifica efectele melaminei. Au fost înrolați un total de 302 pacienți diagnosticați cu urolitiază de calciu. Tuturor pacienților li s-au furnizat probe de urină într-un singur loc peste noapte pentru a-și măsura nivelurile de melamină, biomarkerii urinari ai stresului oxidativ și leziunile tubulare renale. Valorile mediane au fost utilizate pentru a dihotomiza nivelurile în ridicat și scăzut. Subiecții care poartă alela T a rs4880 și niveluri ridicate de melamină au avut un risc de 3,60 ori mai mare de niveluri ridicate de malondialdehidă decât cei care au alela C a rs4880 și niveluri scăzute de melamină după ajustare. Subiecții care poartă alela G a rs5746136 și niveluri ridicate de melamină au avut un risc de 1,73 ori mai mare de niveluri ridicate de N-acetil- -D-glucozaminidază decât cei care poartă alela A a rs5746136 și niveluri scăzute de melamină. În concluzie, SNP-urile MnSOD, rs4880 și rs5746136, influențează riscul de stres oxidativ și, respectiv, leziuni tubulare renale la pacienții cu urolitiază de calciu. În contextul nivelurilor ridicate de melamină urinară, efectele acestora asupra stresului oxidativ și a leziunii tubulare renale au fost și mai mult crescute.

Cuvinte cheie

mangan superoxid dismutază; polimorfism genetic; melamina; leziuni renale; stresul oxidativ; urolitiaza de calciu.

Faceți clic aici pentru a obține extrasul de Cistanche

Introducere

Melamina este o substanță chimică sintetică utilizată în fabricarea unei varietăți de produse comerciale pentru viața de zi cu zi, inclusiv articole de uz casnic, blaturi, țesături, cleiuri și ignifuge [1,2]. Deoarece are un conținut ridicat de azot, a fost folosit abuziv în hrana animalelor și lapte pentru a crește înșelător conținutul de proteine ​​[1,2]. Efectele adverse ale expunerii la melamină au atras atenția la nivel mondial după adăugarea scandaloasă a acesteia la hrana animalelor, ducând la moartea a mii de animale de companie în SUA în 2007, precum și la formule pentru sugari, ducând la urolitiază la peste 50,{{6 }} copii și șase decese în China în 2008 [1,2]. Până în prezent, melamina rămâne prezentă omniprezent în mediul nostru. Mai multe studii au detectat melamina în apă, sol, culturi, produse alimentare zilnice și țesuturi animale [3–5], iar altele au detectat-o ​​în majoritatea probelor de urină ale mai multor populații generale din diferite țări [6–9].

După aportul de melamină, nouăzeci la sută din forma sa originală va fi excretată prin urină în 24 de ore, astfel încât rinichii pot fi mai sensibili la melamină [1]. În plus față de efectele dozelor mari de melamină asupra nefrotoxicității acute la copii în 2008, expunerea pe termen lung la doze mici de melamină a fost legată de riscul de complicații la rinichi, inclusiv formarea de calculi și deteriorarea funcției renale la adulți [10– 12]. Un mecanism probabil conform căruia expunerea cronică la doze mici de melamină ar putea duce la leziuni renale precoce și formare de calculi este efectul său advers asupra tubilor renali, așa cum a fost descoperit de două dintre studiile noastre pe oameni la lucrătorii din melamină [13] și la pacienții adulți cu urolitiază de calciu [13]. 14]. De asemenea, am efectuat un studiu in vitro utilizând celule HK-2 tubulare proximale renale umane și am constatat că melamina ar putea induce leziuni tubulare renale prin creșterea stresului oxidativ [15]. În două studii recente pe oameni, am constatat, de asemenea, că expunerea la melamină a crescut biomarkerii urinari ai stresului oxidativ, malondialdehida (MDA) și 8-oxo-20 -deoxiguanozină (8-OHdG), cu MDA. mediază 36-53% din efectul total al melaminei asupra unui biomarker al leziunii tubulare renale, N-Acetil- -D-glucozaminidaza (NAG) [16]. Aceste descoperiri sugerează că expunerea la doze mici de melamină din mediu ar putea crește stresul oxidativ și ar putea spori riscul de leziuni renale precoce la oameni.

Stresul oxidativ apare atunci când generarea de pro-oxidanți sau specii reactive de oxigen (ROS) depășește capacitatea antioxidantă endogenă. Rinichii noștri sunt deosebit de sensibili la stresul oxidativ, despre care se crede că este un factor important în inițierea, dezvoltarea și progresia majorității bolilor de rinichi [17,18]. Cauza stresului oxidativ în rinichi poate fi asociată cu interacțiunile dintre bolile medicale și expunerea mediului la substanțe chimice precum melamina [16]. S-a descoperit că sistemele antioxidante endogene, inclusiv mangan superoxid dismutaza (MnSOD), glutation peroxidaza (GPX1) și catalaza (CAT), protejează rinichii împotriva stresului oxidativ și, ulterior, ajută la menținerea funcției normale [18]. MnSOD poate descompune ROS toxici și anionii superoxid, în peroxid de hidrogen, care este apoi transformat în apă netoxică și oxigen de către GPX1 și CAT în mitocondrii [18]. Mai multe polimorfisme cu un singur nucleotide (SNP) ale acelor gene de enzime antioxidante au fost asociate cu diferite boli [19], inclusiv boli de rinichi [20-22].

Deoarece leziunile renale asociate toxicelor de mediu ar putea fi influențate de factori genetici [23], este posibil ca SNP-urile genelor enzimelor antioxidante (de exemplu, MnSOD, GPX1, CAT) să modifice efectele expunerii la melamină din mediu asupra riscului de stres oxidativ. și leziuni tubulare renale la om. Pentru a afla, am selectat cinci SNP-uri candidate ale genelor enzimelor antioxidante (MnSOD: rs4880 și rs5746136, GPX1: rs1800668, CAT: rs1001179 și rs769217), dintre care majoritatea au fost legate de studiul fiecărei boli de rinichi [20-22] efectele lor atunci când sunt combinate cu expunerea la melamină din mediu asupra 8-OHdG și MDA, doi biomarkeri ai stresului oxidativ și NAG, un biomarker al leziunii tubulare renale, în urină.

Cistanche tubulosa și pastile de Cistanche

Materiale și metode

1. Subiecte

În total, 309 de pacienți diagnosticați cu urolitiază de calciu ale tractului urinar superior au fost înrolați în perioada noiembrie 2010 și ianuarie 2015. Proiectele detaliate ale studiilor și protocoalele pentru includerea lor au fost descrise anterior [14,16]. Pe scurt, toți pacienții proveneau din spitalele afiliate la Universitatea Medicală Kaohsiung din sud-vestul Taiwanului. Pacienții eligibili erau persoane cu vârsta mai mare sau egală cu 20 de ani care fuseseră diagnosticate cu urolitiază în tractul urinar superior prin radiografie sau ultrasonografie și care au furnizat specimene de calcul confirmate că au componente de calciu prin analiza spectroscopică în infraroșu (Spectrum RX I Fourier Transform). -Infrared System, PerkinElmer, Waltham, MA, SUA). Niciunul dintre participanți nu s-a găsit, prin radiografie, să aibă pietre radiotransparente sau prin evaluarea clinică să aibă acid uric sau pietre de cistină.

Subiecții pacienți au fost excluși dacă au avut antecedente de infecție cronică a tractului urinar, diaree cronică, gută, hiperparatiroidism, acidoză tubulară renală, insuficiență renală sau cancer. Au fost, de asemenea, excluși toți subiecții care au luat în mod regulat vitamina D, suplimente de calciu, diuretice sau citrat de potasiu mai mult de o dată pe săptămână în decurs de șase luni înainte de diagnosticul de urolitiază sau interviu. Protocolul de studiu a fost aprobat de Consiliul de revizuire instituțional al KMUH și toți pacienții eligibili au furnizat formulare de consimțământ informat și semnate. Acest studiu a urmat liniile directoare ale STREGA [24] (a se vedea Materiale suplimentare Tabelul S1).

2. Colectarea datelor clinice și a probelor biologice

La internare, tuturor participanților li s-au furnizat probe de sânge și probe de urină de dimineață la primul gol după postul peste noapte și înainte de orice tratament al urolitiază pentru analize biochimice și genetice. Ei au răspuns, de asemenea, la un chestionar structurat pentru a-și colecta datele demografice, istoricul medical și consumul de substanțe (țigări, alcool și betel) [14,16]. Participanții au fost definiți ca fumători de țigări, băutori de alcool sau mestecatori de betel dacă au fumat în mod regulat Mai mult sau egal cu 10 țigări pe săptămână, au consumat orice băutură alcoolică Mai mare sau egală cu 1 dată pe săptămână sau au mestecat Mai mult sau egal cu 7 lire de betel pe săptămână, respectiv, timp de cel puțin șase luni. Utilizatorii actuali au fost cei care încă practică obiceiurile de mai sus cu un an înainte de diagnosticul de urolitiază sau de la interviu [11,25].

Informațiile clinice, inclusiv localizarea calculului, numărul calculului, diametrul calculului și episoadele de calcul, au fost, de asemenea, colectate prin chestionar și revizuite în continuare folosind fișele medicale ale pacienților de către un urolog (C.-CL) care nu cunoștea expunerea de interes, inclusiv melamină și biomarkeri ai stresului oxidativ (8-OHdG și MDA) și leziunii tubulare renale (NAG) în urină și genotiparea genelor enzimelor antioxidante.

Cistanche capsule

3. Analize ale melaminei, biomarkerilor stresului oxidativ (MDA și 8-OHdG) și leziunii tubulare renale (NAG) în urină

Melamina urinară a fost măsurată folosind o metodă izotopică de cromatografie lichidă-spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS) (API40{{20}}0Q, Applied Biosystems/MDS SCIEX , Concord, Vaughan, ON, Canada) [13]. MDA urinar a fost măsurat utilizând cromatografie lichidă de înaltă performanță cu detecție cu fluorescență (HPLC-FL) într-o coloană cu fază inversă (Luna C18, 250 × 4,6 nm) [26]. 8-OHdG urinar a fost măsurat folosind o metodă validată pentru extracția online în fază solidă (SPE) LC-MS/MS [27]. Metodele detaliate au fost descrise anterior [14,16]. Limitele de detectare (LOD) pentru melamina urinară și biomarkerii stresului oxidativ au fost 0,4 ng/ml pentru melamină, 0,02 µmol/L pentru MDA și 0,01 ng/mL pentru 8-OHdG. Toate măsurătorile urinare ale MDA și 8-OHdG au fost detectabile. În schimb, 31 (10,0 la sută) din cele 309 măsurători ale melaminei urinare au fost sub LOD și au fost înlocuite cu LOD/√ 2.

NAG urinar a fost măsurat folosind un kit de analiză NAG (Diazyme Laboratory, Poway, CA, SUA) [13,14]. Toate măsurătorile NAG urinar au fost detectabile. Creatinina urinară a fost analizată prin spectrofotometrie (U-2000; Hitachi, Tokyo, Japonia) stabilită la o lungime de undă de 520 nm pentru a măsura reacția creatinină-picrat [14]. Măsurarea tuturor parametrilor biochimici de mai sus a fost efectuată de doi tehnicieni de laborator diferiți, orbiți unul la rezultatele celuilalt, designul studiului și informațiile participanților.

4. Genotiparea a cinci SNP-uri

ADN-ul a fost extras din sânge integral periferic folosind un kit de izolare ADN Puregene (Gentra Systems Inc., Minneapolis, MN, SUA). Cele cinci SNP-uri (MnSOD-rs4880, MnSODrs5746136, GPX1-rs1800668, CAT-rs1001179 și CAT-rs769217) au fost analizate utilizând un test la cerere SNP, trusa de discriminare genotipică a sistemelor alelice pentru 5'App Taqli. , Foster City, CA, SUA). Pe scurt, testele de amplificare SNP incluzând 10 ng de probă de ADN în 25 µL de soluție de reacție au conținut 12,5 µL de amestec 2× TaqMan® Universal PCR (Applied Biosystems), în timp ce 1,25 µL de reactiv de testare pre-dezvoltat din produsul de genotipizare SNP (aplicat). Biosisteme) au conținut doi primeri. Două sonde MCB-Taqman au fost efectuate urmând instrucțiunile producătorului. Reacțiile în lanț a polimerazei (PCR) au fost efectuate utilizând un sistem de detectare a secvenței ABI Prism 7500 (Applied Biosystems) [28,29]. Aceste genotipuri au fost confirmate prin secvențierea directă după genotiparea la scară completă. În mod aleatoriu, ~10% din probele de studiu (30 de cazuri) au fost repetate pentru controlul calității, rezultatele arătând o acuratețe de 100%.

Beneficiile Cistanche

5. Analize statistice

Datele cantitative au fost exprimate ca medii ± abateri standard (SD) sau mediane cu intervale interquartile (IQR), iar datele categorice au fost prezentate ca numere (n) și procente. Echilibrul Hardy-Weinberg pentru distribuția genotipurilor a fost verificat folosind testul chi-pătrat.

Nivelurile de melamină urinară și biomarkerii urinari (MDA, 8-OHdG, NAG) au fost corectate prin valorile creatininei urinare înainte de alte analize. După corecție, biomarkerii urinari ai stresului oxidativ (MDA și 8-OHdG) și leziunii tubulare renale (NAG) au fost dihotomizați în mari sau scăzute folosind valorile lor mediane [14,16]. Modelele simple de regresie logistică au fost utilizate pentru a evalua asocierile dintre genotipurile genelor enzimelor antioxidante și biomarkerii urinari ai stresului oxidativ și leziunii tubulare renale. Dacă în analiza inițială a fost observată o relație semnificativă, efectele combinate dintre genotipurile genelor enzimelor antioxidante și nivelurile de melamină urinară dihotomizate prin valori medii au fost testate în continuare prin analize de regresie logistică multiple după ajustarea pentru covariate, cum ar fi vârsta, sexul, IMC, educația. nivelul, obiceiurile personale, numărul pietrei, dimensiunea pietrei, locația pietrei și comorbiditățile. Toate analizele statistice au fost efectuate folosind pachetul statistic SAS. Toate valorile p au fost cu două fețe și considerate semnificative dacă<0.05.

6. Analiza de sensibilitate

Pentru a examina robustețea constatărilor noastre, am efectuat analize de sensibilitate pentru a compara rezultatele când nivelurile de melamină urinară au fost împărțite în tertile. Mai mult, comparăm, de asemenea, rezultatele utilizând o nouă metodă de standardizare ajustată pe covariate plus ajustarea creatininei pentru a corecta concentrația urinei și structurile complicate de confuzie [14,30].

Referințe

1. Hau, AK; Kwan, TH; Li, PK Toxicitatea melaminei și rinichi. J. Am. Soc. Nefrol. 2009, 20, 245–250. [CrossRef]

2. Bhalla, V.; Grimm, PC; Chertow, GM; Pao, AC Nefrotoxicitatea melaminei: o epidemie emergentă într-o eră a globalizării. Rinichi Int. 2009, 75, 774–779. [CrossRef]

3. Qin, Y.; Lv, X.; Li, J.; Qi, G.; Diao, Q.; Liu, G.; Xue, M.; Wang, J.; Tong, J.; Zhang, L.; et al. Evaluarea contaminării cu melamină în culturi, sol și apă în China și riscurile acumulării de melamină în țesuturile și produsele animale. Mediul. Int. 2010, 36, 446–452. [CrossRef]

4. Zhu, H.; Kannan, K. Apariția și distribuția melaminei și a derivaților săi în apa de suprafață, apa potabilă, precipitații, apele uzate și apa piscinei. Mediul. Poluarea. 2020, 258, 113743. [CrossRef]

5. Zhu, H.; Kannan, K. Melamina și acidul cianuric în produsele alimentare din Statele Unite și implicațiile lor pentru expunerea umană. Mediul. Int. 2019, 130, 104950. [CrossRef]

6. Panuwet, P.; Nguyen, JV; Wade, EL; D'Souza, PE; Ryan, PB; Barr, DB Cuantificarea melaminei în urina umană folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță pe bază de schimb de cationi-spectrometrie de masă în tandem. J. Chromatogr. B Anal. Tehnol. Biomed Life Sci. 2012, 887–888, 48–54. [CrossRef]

7. Lin, Y.-T.; Tsai, M.-T.; Chen, Y.-L.; Cheng, C.-M.; Hung, C.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Shiea, J.; Chen, BH; et al. Pot nivelurile de melamină din probele de urină 1-spot peste noapte să prezică nivelul total de excreție de melamină în 24-orele anterioare la școlari? Clin. Chim. Acta 2013, 420, 128–133. [CrossRef]

8. Sathyanarayana, S.; Flynn, JT; Messito, MJ; Brut, R.; Whitlock, KB; Kannan, K.; Karthikraj, R.; Morrison, D.; Huie, M.; Christakis, D.; et al. Expunerea la melamină și acidul cianuric și leziuni renale la copiii din SUA. Mediul. Res. 2019, 171, 18–23. [CrossRef]

9. Shi, X.; Dong, R.; Chen, J.; Yuan, Y.; Lung, Q.; Guo, J.; Li, S.; Chen, B. O evaluare a expunerii la melamină la adulții din Shanghai și asocierea acesteia cu consumul de alimente. Mediul. Int. 2020, 135, 105363. [CrossRef]

10. Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Chen, B.-H.; Huang, S.-P.; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Wu, M.-T. Melamină urinară și urolitiaza adulților în Taiwan. Clin. Chim. Acta 2010, 411, 184–189. [CrossRef]

11. Liu, C.-C.; Wu, C.-F.; Chen, B.-H.; Huang, S.-P.; Goggins, W.; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Huang, C.-H.; Shiea, J.; et al. Expunerea scăzută la melamină crește riscul de urolitiază la adulți. Rinichi Int. 2011, 80, 746–752. [CrossRef]

12. Tsai, Y.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Lin, Y.-T.; Chiu, Y.-W.; Hwang, S.-J.; Chen, H.-C.; Wu, M.-T. Nivelurile de melamină urinară și progresia CKD. Clin. J. Am. Soc. Nefrol. CJASN 2019, 14, 1133–1141. [CrossRef]

13. Wu, C.-F.; Peng, C.-Y.; Liu, C.-C.; Lin, W.-Y.; Pan, C.-H.; Cheng, C.-M.; Hsieh, H.-M.; Hsieh, T.-J.; Chen, BH; Wu, M.-T. Expunerea ambientală la melamină și biomarkerii urinari ai leziunii renale precoce. J. Am. Soc. Nefrol. 2015, 26, 2821–2829. [CrossRef] [PubMed]

14. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Tsai, Y.-C.; Huang, S.-P.; Lee, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Shen, J.-T.; Chou, Y.-H.; Huang, C.-N.; et al. Excreția urinară de melamină și markerii crescuti ai leziunii tubulare renale la pacienții cu urolitiază de calciu: un studiu transversal. Mediul. Poluarea. 2017, 231, 1284–1290. [CrossRef]

15. Hsieh, TJ; Hsieh, PC; Tsai, YH; Wu, C.; Liu, C.; Lin, M.; Wu, M. Melamina induce leziuni ale celulelor tubulare proximale renale umane prin transformarea factorului de creștere-beta și stresul oxidativ. Toxicol. Sci. 2012, 130, 17–32. [CrossRef]

16. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Lee, C.-H.; Tsai, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Wen, S.-C.; Lee, C.-H.; Chien, T.-M.; Lee, Y.-C.; et al. Interrelația dintre expunerea la melamină din mediu, biomarkerii stresului oxidativ și leziunile renale precoce. J. Hazard Mater. 2020, 396, 122726. [CrossRef] [PubMed]

17. Gorin, Y. Rinichiul: un organ în prima linie a patologiilor asociate stresului oxidativ. Antioxid. Semnal redox. 2016, 25, 639–641. [CrossRef]

18. Ratliff, BB; Abdulmahdi, W.; Pawar, R.; Wolin, MS Mecanisme oxidante în leziuni și boli renale. Antioxid. Semnal redox. 2016, 25, 119–146. [CrossRef]

19. Crawford, A.; Fassett, RG; Geraghty, DP; Kunde, DA; Ball, MJ; Robertson, IK; Coombes, JS Relații între polimorfismele cu un singur nucleotide ale enzimelor antioxidante și boală. Gene 2012, 501, 89–103. [CrossRef] [PubMed]

20. Crawford, A.; Fassett, RG; Coombes, J.; Kunde, D.; Ahuja, K.; Robertson, IK; Ball, MJ; Geraghty, D. Genotipurile și activitățile de glutation peroxidază, superoxid dismutază și catalază și progresia bolii renale cronice. Nefrol. Apelează. Transplant. 2011, 26, 2806–2813. [CrossRef]

21. Kidir, V.; Uz, E.; Yigit, A.; Altuntas, A.; Yigit, B.; Inal, S.; Uz, E.; Sezer, MT; Yilmaz, HR Mangan superoxid dismutază, glutation peroxidază și polimorfisme ale genei catalazei și rezultate clinice în injuria acută a rinichilor. Ren. Eșuează. 2016, 38, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

22. Ewens, KG; George, RA; Sharma, K.; Ziyadeh, FN; Spielman, RS Evaluarea a 115 gene candidate pentru nefropatia diabetică prin test de transmisie/dezechilibru. Diabet 2005, 54, 3305–3318. [CrossRef]

23. Lash, LH Factori de mediu și genetici care influențează toxicitatea rinichilor. Semin. Nefrol. 2019, 39, 132–140. [CrossRef]

24. Micul, J.; Higgins, JPT; Ioannidis, JPA; Moher, D.; Gagnon, F.; von Elm, E.; Khoury, MJ; Cohen, B.; Davey-Smith, G.; Grimshaw, J.; et al. Consolidarea raportării studiilor de asociere genetică (STREGA): O extensie a Declarației STROBE. Zumzet. Genet. 2009, 125, 131–151. [CrossRef]

25. Liu, C.-C.; Huang, S.-P.; Wu, WJ; Chou, Y.-H.; Juo, S.; Tsai, L.-Y.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Impactul fumatului, consumului de alcool și mestecării betelului asupra riscului de urolitiază de calciu. Ann. Epidemiol. 2009, 19, 539–545. [CrossRef] [PubMed]

26. Hsu, KC; Hsu, PF; Chen, YC; Lin, H.; Chen, HP; Huang, Y. Stresul oxidativ în timpul creșterii bacteriene caracterizat prin prelevarea de probe prin microdializă cuplată cu detectarea HPLC/fluorescență a malondialdehidei. J. Chromatogr. B Anal. Tehnol. Biomed Life Sci. 2016, 1019, 112–116. [CrossRef] [PubMed]

27. Hu, CW; Chao, domnule; Sie, CH Analiza urinară a 8-oxo-7,8-dihidroguaninei și 8-oxo{-7,8-dihidro-2'- deoxiguanozină prin LC-MS/MS cu diluție izotopică cu extracție automată în fază solidă: Studiul stabilității 8-oxo-7,8-dihidroguaninei. Radic liber. Biol. Med. 2010, 48, 89–97. [CrossRef]

28. Liu, C.-C.; Lee, Y.-C.; Huang, S.-P.; Cheng, K.-H.; Hsieh, T.-J.; Huang, T.-Y.; Lee, C.-H.; Geng, J.-H.; Li, C.-C.; Wu, WJ Variantele factorului nuclear-4alfa P2 al hepatocitelor sunt asociate cu riscul de sindrom metabolic și deficiență de testosteron la bărbații taiwanezi în vârstă. J. Sex Med. 2018, 15, 1527–1536. [CrossRef]

29. Liu, C.-C.; Huang, S.-P.; Tsai, L.-Y.; Wu, WJ; Juo, S.-HH; Chou, Y.-H.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Impactul polimorfismelor promotorului de osteopontină asupra riscului de urolitiază de calciu. Clin. Chim. Acta 2010, 411, 739–743. [CrossRef]

30. O'Brien, KM; Upson, K.; Cook, NR; Weinberg, CR Produse chimice de mediu în urină și sânge: Îmbunătățirea metodelor de ajustare a creatininei și lipidelor. Mediul. Perspectiva Sănătății. 2016, 124, 220–227. [CrossRef]

Chia-Chu Liu 1,2,3,4 , Chia-Fang Wu 1,5, Yung-Chin Lee 2,3,6, Tsung-Yi Huang 2 , Shih-Ting Huang 1,7 , Hsun-Shuan Wang 6 , Jhen-Hao Jhan 6 , Shu-Pin Huang 2,3, Ching-Chia Li 2,3, Yung-Shun Juan 2,3 , Tusty-Jiuan Hsieh 1,7 , Yi-Chun Tsai 1,8,9, Chu- Chih Chen 1,10 și Ming-Tsang Wu 1,11,12,13,

1 Centrul de Cercetare pentru Medicina Mediului, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan; ccliu0204@gmail.com (C.-CL); cfwu27@nuu.edu.tw (C.-FW); u107800006@kmu.edu.tw (S.-TH); hsiehjun@kmu.edu.tw (T.-JH); 920254@kmuh.org.tw (Y.-CT); ccchen@nhri.edu.tw (C.-CC)

2 Departamentul de Urologie, Spitalul Universitar Medical Kaohsiung, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan; 890197@kmuh.org.tw (Y.-CL); 970417@kmuh.org.tw (T.-YH); shpihu@kmu.edu.tw (S.-PH); 850144@kmuh.org.tw (C.-CL); 840066@kmuh.org.tw (Y.-SJ)

3 Departamentul de Urologie, Școala de Medicină, Colegiul de Medicină, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan

4 Departamentul de Urologie, Spitalul Pingtung, Ministerul Sănătății și Bunăstării, Pingtung City 900, Taiwan

5 International Master Program de Translațional Medicină, Național United Universitate, Miaoli 360, Taiwan

6 Departamentul de Urologie, Spitalul Municipal Siaogang Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 812, Taiwan; 940199@kmuh.org.tw (H.-SW); 1030398@kmuh.org.tw (J.-HJ)

7 Institutul Absolvent de Medicină, Colegiul de Medicină, Universitatea Medicală Kaohsiung, Kaohsiung City 807, Taiwan

8 Departamentul de Medicină Internă, Diviziile de Nefrologie și Medicină Generală, Spitalul Universitar Medical Kaohsiung, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan

9 Departamentul de Medicină Internă, Școala de Medicină, Colegiul de Medicină, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan

10 Divizia din Biostatistică și Bioinformatică% 2c Institut din Populație Sănătate Științe , Național Sănătate Cercetare Institute, Miaoli 350% 2c Taiwan

11 Medicină a mediului și a muncii și Institutul Absolvent de Medicină Clinică, Universitatea Medicală Kaohsiung, orașul Kaohsiung 807, Taiwan

12 Departamentul de Medicină de Familie, Spitalul Universitar Medical Kaohsiung, Universitatea Medicală Kaohsiung, Orașul Kaohsiung 807, Taiwan

13 Departamentul de Sănătate Publică, Colegiul de Științe ale Sănătății, Universitatea Medicală Kaohsiung, orașul Kaohsiung 807, Taiwan