Efectele protectoare ale wogoninei asupra infamației și apoptozei induse de lipopolizaharide ale celulelor epiteliale pulmonare și mecanismele sale posibile

a lua legaturatina.xiang@wecistanche.com

Abstract

fundal: Wogonin (5,7-dihidroxi-8-metoxiflavonă) este un flavonoid di-hidroxil natural extras din rădăcina Scutellaria baicalensis Georgi. Această lucrare a fost menită să investigheze mecanismul de acțiune al wogoninei în atenuareinflamaţieșiapoptozaîn leziunea pulmonară acută (ALI).

Materiale și metode: Lipopolizaharida (LPS) a fost utilizată pentru a stabili modelul in vitro de ALl. După tratamentul cu wogonin, viabilitatea celulară și apoptoza celulelor A549 induse de LPS au fost, respectiv, măsurate prin CCK-8, TUNELassays și colorarea dublă cu portocală de acridină/bromură de etidio, în timp ce conținutul de citokine inflamatorii șistresul oxidativmarkerii au fost estimați prin RT-qPCR, test ELISA, analiză Western blot și truse comerciale. Western blot a fost, de asemenea, efectuat pentru a evalua expresia proteinelor implicate. Ulterior, a fost investigat efectul wogoninei asupra deacetilării proteinei de grup cu mobilitate ridicată mediată de sirtuina 1 (SIRT1) 1 (HMGB1). Inhibitorul SIRT1 EX527 a fost utilizat pentru a evalua efectele de reglare ale wogoninei asupra deacetilării HMGB1 mediată de SIRT1-în celulele A549 sub stimulare LPS.

Rezultate: LPS a indus inflamația, stresul oxidativ și apoptoza celulelor A549, care a fost abolită de wogonin. S-a constatat, de asemenea, că wogonina a promovat deacetilarea HMGB1, însoțită de expresia SIRT1 reglată în sus. Cu toate acestea, inhibitorul SIRT1 EX527 a inversat parțial efectele protectoare ale wogoninei asupra inflamației și apoptozei celulelor A549 induse de LPS.

Concluzie: Wogonin a atenuat inflamația și apoptoza în celulele A549 induse de LPS prin deacetilarea HMGB1 mediată de SIRT1-, ceea ce ar putea reprezenta identificarea unui mecanism nou prin care wogonina exercită efecte protectoare asupra ALI și oferă idei pentru aplicarea wogoninei la Tot tratamentul.

Cuvinte cheie: Leziune pulmonară acută, Wogonin, Inflamație, SIRT1, deacetilare HMGB1

Faceți clic aici pentru a obține mai multe informații

fundal

Leziunea pulmonară acută (AL) este documentată clinic ca rezultat al unor stări patologice, inclusiv sepsis, pneumonie, traumatisme și pancreatită acută [1]. Se întâlnește adesea la pacienții care sunt internați în secțiile de terapie intensivă și prezintă o rată ridicată a mortalității [2]. Cei care supraviețuiesc din ALI se confruntă de obicei cu o calitate inferioară a vieții [3]. Deși s-au făcut realizări în înțelegerea fiziopatologiei AL, eficacitatea tratamentului terapiilor actuale rămâne limitată, ceea ce nu poate îndeplini așteptările pacienților și ale familiilor acestora [4]. Astfel, este de mare urgență identificarea de noi terapii sau ținte pentru tratamentul LAL. Wogonin(5,7-dihidroxi-8-metoxiflavona), a cărei structură este prezentată în Fig.1A, este un flavonoid di-hidroxil natural extras din rădăcina Scutellaria baicalensis Georgi [5]. Proprietățile sale antiinflamatorii semnificative și aplicarea sa în tratamentul bolilor inflamatorii au fost raportate pe scară largă de un număr mare de studii. De exemplu, wogonin a îmbunătățit potențial edemul pulmonar la murin și i-a protejat de ALI indus de lipopolizaharide (LPS) prin blocarea proteinei kinazei activate de mitogen p38 (MAPK) și a kinazei c-Jun NH(2)-terminale (fosforilarea INK [6] Wogonin a redus, de asemenea, infiltrarea neutrofile indusă de LPS, producția de citokine proinflamatorii, expresia moleculelor de adeziune și suprimarea AL indusă de LPS la șoareci [7].Dovezile actuale au sugerat că răspunsul inflamator și ALI induse de LPS ar putea fi atenuate ca un rezultat al tratamentului cu wogonin prin calea NF-KB mediată de receptorul activat de proliferatorul peroxizomal gamma(PPARy) [8] Studiul în curs de dezvoltare a arătat că wogonina a redus ligatura cecală și proteina de grup cu mobilitate ridicată indusă de puncție (CLP) 1 (HMGB1) producția și inflamația dependentă de HMGB1-și a scăzut morbiditatea legată de sepsis și riscul de leziuni pulmonare [9]. În modelul ALI indus de LPS in vitro și in vivo, un alt raport a demonstrat că inhibarea HMGB1 și alți mediatori inflamatori prin ulinastatin au atenuat evident manifestările ALI [10]. Și studiile anterioare au confirmat că celulele epiteliale pulmonare umane induse de LPS (A549) au fost utilizate pe scară largă ca model in vitro pentru ALI [11-13]. S-a sugerat că Sirtuina 1 (SIRT1), efectorul din aval al protein kinazei activate de adenozin monofosfat (AMPK), joacă un rol semnificativ în reglarea eliberării adiponectinei [14]. Suplimentarea cu wogonin a crescut remarcabil fosforilarea AMPK și expresia SIRT1, în timp ce inhibarea AMPK sau SIRT1 a redus efectele wogoninei asupra producției sau eliberării adiponectinei [14]. S-a raportat anterior că deacetilarea HMGB1 modulată SIRT1-inhiba leziunea renală acută cauzată de sepsis [15].

În studiul de față, ne-am propus să investigăm mecanismul de acțiune al wogoninei în atenuareainflamaţieșiapoptozade celule epiteliale pulmonare umane induse de LPS, care ar putea oferi o perspectivă mai cuprinzătoare pentru tratamentul ALI cu wogonin.

Rezultate

Efectele wogoninei asupra viabilității și apoptozei celulelor A549 induse de LPS

Pentru a observa efectul wogoninului asupra ALI, am speculat mai întâi dacă viabilitatea celulelor normale A549 ar putea fi deteriorată de wogonin. Așa cum este prezentat în Fig. 1B, wogonina nu a afectat celulele A549 fără a primi niciun tratament, ceea ce sugerează siguranța tratamentului cu wogonin în celulele A549 la concentrații de O, 5, 10 și 20 μM. După stimularea LPS timp de 24 de ore, viabilitatea celulelor A549 a fost afectată semnificativ, ceea ce a fost contracarat de wogonin într-o manieră dependentă de concentrație (Fig. 1C). În plus, rezultatele testului LDH au arătat că o creștere semnificativă a activității LDH în celulele A549 tratate cu LPS a fost redusă după ce au fost administrate doze crescânde de wogonin (Fig.1D). Apoi, am testat efectul wogoninei asupra apoptozei celulelor A549 induse de LPS. După cum este prezentat în Fig. 2A, colorarea TUNEL a demonstrat că expunerea la LPS a îmbunătățit dramatic apoptoza celulelor A549 în comparație cu grupul de control, care a fost redusă de wogonin într-o manieră dependentă de doză. În plus, s-a observat o reglare descendentă aparentă a expresiei Bcl-2 și reglarea în sus în expresiile Bax, Cyto-C și a caspazei clivate 3 la grupul expus la LPS în comparație cu grupul de control, care a fost restabilit prin tratamentul cu wogonin (Fig. 2B). În mod constant, rezultatele testelor cu dublă fluorescență AO/EB prezentate în Fig. 3 au sugerat că LPS a condus la o rată crescută de apoptoză celulară în comparație cu grupul de control, în timp ce celulele EB-pozitive au fost reduse considerabil după adăugarea de wogonină în comparație cu LPS. grup. Astfel, wogonina restabilește viabilitatea și reduce apoptoza celulelor A549 indusă de LPS.

Efectele wogoninei asupra inflamației și stresului oxidativ al celulelor A549 induse de LPS

Pentru a explora abilitățile antiinflamatorii și antioxidante ale wogoninei în ALI, theinflamaţieșistresul oxidativde celule A549 induse de LPS tratate cu wogonin au fost, respectiv, detectate. După cum se vede în Fig. 4A-C, nivelurile de ARNm ale citokinelor inflamatorii (TNF-, IL-6 și IL{-1) măsurate prin RT-qPCR au crescut la niveluri considerabil ridicate la stimularea LPS, în timp ce wogonina tratamentul a dus la reducerea expresiei acestora. În mod constant, rezultatele ELISA au indicat că inducția LPS a condus la o creștere semnificativă a conținutului de TNF-, IL-6 și IL{-1 în comparație cu grupul netratat, care au fost scăzute în funcție de doză după tratamentul cu wogonin (Fig. 4D-F). Este important că ciclooxigenaza-2(Cox{-2) și factorul fosfo-nuclear (NF)-KB p65 (p-NF-KB p65), care sunt markeri legați de inflamație, au fost reglați în jos de LPS în timp ce Supreglat de wogonin (Fig. 4G). În plus, LPS a dus la scăderea activităților SOD și GSH-Px și creșterea conținutului de MDA și ROS, care a fost inversată de wogonin (Fig. 4H-K). Luate împreună, wogonina atenuează inflamația și stresul oxidativ al celulelor A549 induse de LPS.

Reglarea wogoninei în deacetilarea HMGB1 mediată de SIRT1-

Pentru a confirma speculația noastră că wogonina a exercitat efecte protectoare asupra leziunii celulelor A549 induse de LPS prin deacetilarea HMGB1 mediată de SIRT1-, am efectuat Western blot pentru a detecta nivelurile de proteine ​​ale factorilor implicați. Evident, LPS a suprimat expresia SIRT1 și a promovat translocarea HMGB1 din nucleu în citoplasmă, împreună cu acetilarea HMGB1. Cu toate acestea, această tendință a fost inversată de expunerea la wogonină la celulele A549 induse de LPS (Fig.5). Astfel, tratamentul cu wogonin reglează deacetilarea HMGB1 mediată de SIRT{10}}în celulele A549 induse de LPS.

Reglarea inhibitorului SIRT1 EX527 asupra comportamentelor celulare ale celulelor A549 induse de LPS tratate cu wogonin

Pentru a verifica rolul SIRT1 în mecanismul de bază prin care wogonina a afectat inflamația și apoptoza celulelor A549 induse de LPS, am folosit EX527, un inhibitor SIRT1, pentru a trata celulele A549 induse de LPS timp de 24 de ore. După cum se arată în Fig.6A, adăugarea EX527 a redus expresia SIRT1, a împiedicat transportul nucleo-citoplasmatic al HMGB1 și a stimulat deacetilarea HMGB1, în comparație cu grupul LPS plus Wogonin. Alte teste CCK-8 și LDH au arătat că EX527 a deteriorat efectul restaurator al wogoninei asupra viabilității celulelor A549 induse de LPS (Fig. 6B). În plus, efectele wogoninei asupra expresiei Bcl-2, Bax, Cyto-C și exprimării caspazei 3 scindate au fost parțial atenuate de EX527 în celulele A549 induse de LPS (Fig.6C). În cele din urmă, tendințele de variație ale factorilor inflamatori (TNF- , IL-6 și IL{-1 ), proteinele legate de inflamație (Cox{-2 și p-NF-kB p65) și Markerii de stres oxidativ (SOD, GSH-Px și MDA) în celulele A549 induse de LPS co-tratate cu wogonin și EX527 au demonstrat că EX527 a deteriorat efectele inhibitoare ale wogoninei asupra inflamației și stresului oxidativ în celulele A549 induse de LPS (Fig. 7A-K). Prin urmare, inhibitorul SIRT1 EX527 inversează efectele protectoare ale wogoninei asupra fenotipurilor maligne ale celulelor A549 induse de LPS.

Discuţie

În prezent, mulți experți au recunoscut wogonina ca un agent puternic pentru tratamentul bolilor inflamatorii. Eficacitatea sa în atenuarea răspunsurilor inflamatorii a fost atribuită suprimării NF-kB și activării căilor de semnalizare 2-factorului nuclear eritroid asociate factorului 2(Nrf2)[16]. Interesant, rapoartele anterioare au asociat efectul antiinflamator cu medierea expresiei iNOS și Cox-2 sau cu activarea căilor de semnalizare a speciilor reactive de oxigen (ROS)/ERK/Nrf2 [5,17]. În concordanță cu constatările anterioare care nu arătau niciun efect al wogoninei asupra viabilității condrocitelor, nu am găsit practic niciun efect citotoxic semnificativ al wogoninei asupra celulelor normale A549, susținând explorarea noastră ulterioară a mecanismului de bază prin care wogonina a afectat modelul celular ALI in vitro [17]. Stresul oxidativ și inflamația sunt două semne distinctive majore în patogeneza AL și astfel am detectat modificările indicatorilor de stres oxidativ și citokinelor inflamatorii la tratamentul cu wogonin [18]. În mod intrigant, inflamația și stresul oxidativ au fost ambele atenuate de expunerea la wogonină în modelul de celule A549 tratate cu LPS, așa cum este evidențiat de blocarea eliberării factorului pro-inflamator și producția îmbunătățită de SOD și GSH-Px, precum și scăderea producției de MDA după Tratamentul cu wogonin HMGB1 apare ca o proteină foarte conservată care a fost identificată pentru prima dată pentru a modula sepsisul într-un model murin[19]. Direcționarea HMGB1 a fost considerată o opțiune terapeutică potențială pentru tratamentul sepsisului datorită faptului că pacienții care s-au manifestat ca răspunsuri inflamatorii prelungite au prezentat frecvent niveluri ridicate de HMGB1 [10]. Rapoartele și recenziile recente au acordat multă atenție efectelor terapeutice ale HMGB1 asupra bolilor inflamatorii, nu se limitează la sepsis. De exemplu, a fost demonstrat anterior că inhibarea HMGB1 de către ulinastatin a ameliorat leziunea ALI indusă de LPS la șoareci [10,20]. După ce a fost eliberat din monocite/macrofage activate, HMGB1 a servit ca factor proinflamator prin diverși stimulenți [20]. Semnalele inflamatorii precum LPS ar putea determina translocarea HMGB1 legată de acetilare din nucleu în citoplasmă [21]. Aici, descoperirea că translocarea HMGB1 din nucleu în citoplasmă la stimularea LPS a fost contracarată de tratamentul cu wogonin a elucidat indirect că inflamația celulelor A549 declanșată de LPS a fost împiedicată puternic de wogonin.

S-a sugerat că SIRT1 joacă un rol semnificativ în diferite procese biologice [22]. În funcție de țintele sale de deacetilare, modificările activității SIRT1 erau de așteptat vizate de stresul oxidativ și inflamația [23]. HMGB1 a fost recent recunoscut ca o țintă de deacetilare a SIRT1 [20]. Dovezi substanțiale au indicat că deacetilarea SIRT1-modulată a HMGB1 a atenuat inflamația, a restabilit funcția renală și a prelungit timpul de supraviețuire al șoarecilor cu leziuni renale acute legate de sepsis [15]. Într-un studiu experimental de leziuni cerebrale traumatice, acidul gras polinesaturat Omega-3 a atenuat inflamația prin modularea polarizării microgliei prin deacetilarea modulată SIRT1-a căii HMGB1/NF-KB [24]. În plus, acidul oleanolic a prevenit modelul de șobolan de la hemoragia subarahnoidiană prin deacetilarea HMGB1 modulată SIRT1-[25]. Inhibarea NLRP3/NF-kB de către Aloin prin activarea SIRT1 a atenuat ALI provocat de LPS la șoareci [26]. Prin reglarea semnalizării SIRT1/HMGB1/NF-KB, kaempferolul a îmbunătățit leziunea pulmonară indusă de ischemie-reperfuzie prin stres antiinflamator și antioxidant 27I. Ca o moleculă importantă în aval de HMGB1, NF-kB este o cale de semnalizare majoră implicată în reglarea mediatorilor inflamatori prin activarea genelor factorului proinflamator și eliberarea unui număr mare de factori inflamatori, inclusiv TNF-, IL{34}} și TNF. -a[28,29].În plus, NF-KB poate participa și la procesul de stres oxidativ prin reglarea producției de ROS și afectând nivelurile de SOD, MDA și GSH-Px [30]. În studiul de față, scăderea expresiei p-NF-kB p65 a fost observată după adăugarea de wogonină, care a fost restabilită de inhibitorul SIRT1, EX527. În plus, am descoperit că HMGB1 deacetilat de către wogonin a fost însoțit de expresia SIRT1 activată, ceea ce a condus la speculația noastră că wogonina ar putea exercita efecte protectoare asupra inflamației induse de LPS a celulelor A549 prin deacetilarea HMGB1 mediată de SIRT{50}}. Utilizarea EX527 în următoarele experimente a demonstrat în continuare că inhibarea SIRTl a inversat efectele protectoare ale wogoninei asupra inflamației celulelor A549 induse de LPS.

Concluzie

În concluzie, am demonstrat că wogonina a atenuat inflamația, stresul oxidativ și apoptoza modelului de celule ALI indus de LPS. Acest mecanism de acțiune pare să se datoreze reglării deacetilării HMGB1 mediată de SIRT1-declanșată de wogonină. Aceste descoperiri ar putea identifica un mecanism nou prin care wogonina exercită efecte protectoare asupra ALI și să ofere o bază experimentală pentru aplicarea wogoninei la tratamentul clinic al ALI.

Materiale și metode

Cultură celulară și medicamente

Human lung epithelial cells(A549) were purchased from the Cell Bank of Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology at the Chinese Academy of Sciences (Shanghai, China) and cultured in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco, Paisley, UK) containing 10% heat-inactivated fetal bovine serum(Gibco, Paisley, UK), 100 U/ml penicillin, and 100 g/ml streptomycin at 37 ℃ with 5% CO. The cells were collected after 10 μg/mL LPS（Sigma Chemical Co., St Louis, MO）stimulation for 24 h. Wogonin (purity>99 la sută), izolat din Scutellaria baicalensis Georgi, a fost cumpărat de la Biotic Chemical (Taipei, Taiwan). A fost dizolvat în dimetilsulfoxid (DMSO), depozitat la -20 grade C și diluat cu DMEM. inhibitor SIRT1 EX527（10 μM; MedChemExpress, Shanghai, China) a fost utilizat pentru a trata celulele cu 24 de ore înainte de administrare conform studiului anterior [31].

Kit de numărare a celulelor-8 (CCK-8).

După stimularea LPS timp de 24 de ore și diferite concentrații de expunere la wogonină pentru încă 4 ore, celulele au fost însămânțate într-o placă de 96-godeuri și s-a efectuat un test de viabilitate celulară prin adăugarea a 10μL de reactiv CCK-8 (Dojindo). , Kumamoto, Japonia）în fiecare godeu la 37 de grade timp de 4 ore. Absorbanța la 450 nm a fost monitorizată folosind un cititor de microplăci (Bio-Rad Laboratories, Inc.).

Testul de eliberare a lactat dehidrogenazei (LDH).

Supernatantul celular tratat cu wogonin a fost însămânțat în plăci de cultură 96-godeuri și incubat timp de 24 de ore la 37 de grade cu 5% CO, înainte ca 100 μL de soluție LDH Kit de detectare a citotoxicității (Roche Diagnostics, Franța) să fie adăugate la fiecare. 15 min mai târziu, supernatantul celular a fost diluat, cu valoarea densității optice monitorizată la 450 nm.

Testul TUNEL a fost efectuat pentru a evalua apoptoza celulelor A549 induse de LPS, cu sau fără tratament cu wogonin, prin kitul colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit (Beyotime, Shanghai, China) bazat pe operație. instrucțiuni. După spălarea cu soluție salină tampon fosfat (PBS) de două ori și fixarea cu 4% paraformaldehidă timp de 0,5 h,0,3% peroxid de hidrogen în PBS a fost folosit pentru a incuba celulele încă 20 de minute la temperatura camerei. Celulele au fost apoi tratate cu diaminobenzen (DAB) timp de 10 minute și contracolorate cu hematoxilină (Solarbio, Beijing, China) timp de 30 de secunde. Celulele apoptotice-pozitive au fost observate cu un microscop cu fluorescență (Olympus Corporation) și rata apoptotică a fost calificată de software-ul Image-J (NIH, Bethesda, MD, SUA).

Colorare dublă cu portocală de acridină/bromură de etidio

Au fost efectuate teste cu dublă fluorescență portocalie de acridină/bromură de etidio (AO/EB) pentru a evalua alterarea apoptozei celulare. Pe scurt, celulele A549 au fost crescute pe lamele de sticlă în plăci de 24-godeuri. Celulele au fost pre-incubate timp de 24 de ore cu mediu fără ser și apoi incubate cu LPS și diferite concentrații de wogonin la 37C. Celulele au fost spălate cu PBS și furnizate cu 5 μL AO/EB soluție mixtă (100 ug/ml de AO și 100 ug/ml de EB amestecate în PBS, Aladdin, China) în decurs de 3 minute. Celulele au fost observate și au făcut o fotografie la o lungime de undă de excitare de 510 nm sub un microscop cu fluorescență (Olympus Corporation).

Analiza Western blot

Proteinele au fost extrase din celulele A549 folosind tampon de liză RIPA (Beyotime, Shanghai, China) și concentrațiile de proteine ​​au fost măsurate cu un kit de analiză a proteinelor acid bicinchoninic (BCA) (Thermo Fisher Scientific, SUA). După aceea, s-a efectuat electroforeză în gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă cu 10% (SDS-PAGE) pentru a separa 40 ug de proteine, iar proteinele au fost apoi transferate în membranele de difluorură de poliviniliden (PVDF). Aceste membrane au fost apoi blocate de lapte degresat și apoi incubate la 4 grade C peste noapte cu anticorpi primari. Ulterior, anticorpul secundar conjugat cu HRP a fost utilizat pentru a incuba membranele timp de 1,5 ore la temperatura camerei. În cele din urmă, benzile au fost vizualizate printr-un kit de chemiluminiscență (ECL) îmbunătățită (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, Marea Britanie), în timp ce intensitatea benzii a fost monitorizată folosind software-ul Image-J (NIH, Bethesda, MD, SUA). GAPDH a fost considerată ca referință internă.

PCR cantitativ cu transcripție inversă (RT-gPCR)

Celulele A549 au fost lizate în 1 ml de reactiv TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA) pentru extragerea ARN total. După colectarea ARN total, transcripția inversă a fost efectuată pentru sinteza ADN-ului complementar (ADNc) cu ajutorul kit-ului de reactivi PrimeScript RT (Takara Bio, Inc.). Condițiile au fost următoarele: 50 grade C timp de 15 minute, 85 grade C timp de 5 secunde, și conservarea la 4 grade .SYBR Premix Ex Taq TM (TaKaRa, Japonia) a fost utilizat pentru a seta condițiile de reacție PCR și sistemul de reacție pe baza sugestiilor producătorului. Pentru qPCR a fost utilizat un instrument ABI 7500 (AB-4351107; Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Au fost utilizate următoarele condiții de termociclare: denaturare inițială la 95 de grade timp de 10 min; urmat de 40 de cicluri de denaturare la 95 de grade C timp de 15 s și de recoacere la 60 de grade timp de 1 min; și o prelungire finală de 10 minute la 72 de grade C. GAPDH a fost acceptat ca control de normalizare al expresiei relative a genelor. Calculul expresiei relative a genelor a fost efectuat prin metoda 2-AAct.

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA)

Nivelurile celulare de interleukină-6(IL{-6), IL{-1 și factorul de necroză tumorală (TNF-) din supernatantul celular au fost măsurate utilizând kitul ELISA IL{-6 , IL-1 ELISA Kit și TNF-ELISA Kit bazate pe sugestiile producătorului (Shanghai Xi Tang Biotechnology, Shanghai, China).

Detectarea stresului oxidativ

Pentru detectarea stresului oxidativ, activitățile markerilor de stres oxidativ, inclusiv malondialdehida (MDA), specii reactive de oxigen (ROS), glutation peroxidaza (GSH-Px) și superoxid dismutază (SOD) au fost detectate urmând instrucțiunile producătorului (Nanjing Jiancheng Biotechnology). Institutul, China).

analize statistice

Toate datele au fost prezentate ca medie ± abatere standard (SD) a cel puțin trei experimente independente. Pentru comparații între mai multe grupuri, a fost efectuată analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) cu testul post-hoc al lui Tukey, în timp ce cele dintre două grupuri au fost efectuate prin testul t Student. P<0.05 was="" deemed="" as="" statistically="">

Abrevieri

AL: Leziune pulmonară acută; LPS: lipopolizaharidă; HMGB1: cutie de grup cu mobilitate ridicată 1 proteină; PPARy. receptor-gama activat de proliferator de peroxizomi; MAPK: Protein Kinaza activată de mitogen; JNK: C-Jun NH(2)-kinaza terminală; CLP: ligatură și puncție cecală; DMEM: mediu Vultur modificat de Dulbecco; DMSO: dimetilsulfoxid; CCK-8:kit de numărare a celulelor-8; LDH: Lactat dehidrogenază; TUNEL: marcare terminal-deoxinucleotidil transferază mediată de nick-end; PBS: tampon fosfat salin; DAB: Diaminobenzen; AO/EB: portocală de acridină/bromură de etidio; BCA: acid bicinchoninic; SDS-PAGE: Electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă; PVDF: difluorură de poliviniliden; ECL: chemiluminiscență îmbunătățită; cADN: ADN complementar; ELSA: Test imunosorbent legat de enzime; IL: Interleukina; TNF-a: factor de necroză tumorală-a; MDA: Malondialdehidă; GSH-Px Glutation peroxidază; SOD: Superoxid dismutază; SD: Abatere standard; ANOVA: Analiza varianței; Cox-2:Ciclooxigenază-2; Nrf2: factorul nuclear eritroid 2-factor 2 asociat; ROS: Specii reactive de oxigen.

Referințe

1. Mokra D, Kosutova P. Biomarkeri în leziunea pulmonară acută. Respir Physiol Neurobiol. 2015;209:52–8.

2. Hayes M, Curley G, Ansari B, Laffey JG. Revizuire clinică: Terapii cu celule stem pentru leziunea pulmonară acută/sindromul de detresă respiratorie acută — speranță sau exagerare? Crit Care. 2012;16(2):205.

3. Angus DC, Clermont G, Linde-Zwirble WT, Musthafa AA, Dremsizov TT, Lidicker J și colab. Costurile asistenței medicale și rezultatele pe termen lung după sindromul de detresă respiratorie acută: un studiu de fază III cu oxid nitric inhalat. Crit Care Med. 2006;34(12):2883–90.

4. Hu JT, Lai J, Zhou W, Chen XF, Zhang C, Pan YP și colab. Hipotermia a atenuat leziunea pulmonară acută indusă de LPS la modelele de șobolani prin calea TLR2/MyD88. Exp Lung Res. 2018;44(8–9):397–404.

5. Chi YS, Lim H, Park H, Kim HP. Efectele wogoninei, o flavonă vegetală din Scutellaria radix, asupra inflamației pielii: reglarea in vivo a expresiei genelor asociate inflamației. Biochem Pharmacol. 2003;66(7):1271–8.

6. Wei CY, Sun HL, Yang ML, Yang CP, Chen LY, Li YC și colab. Efectul protector al wogoninei asupra leziunii pulmonare acute induse de endotoxină prin reducerea fosforilării p38 MAPK și JNK. Environ Toxicol. 2017;32(2):397–403.

7. Yeh YC, Yang CP, Lee SS, Horng CT, Chen HY, Cho TH și colab. Leziunea pulmonară acută indusă de lipopolizaharide este inhibată de wogonină la șoareci prin reducerea fosforilării Akt și a activării RhoA. J Pharm Pharmacol.2016;68(2):257–63.