Evaluarea toxicității extractului de flori de Dolichandrone Serrulata (DSF) asupra funcției renale și hepatice

pentru mai multe informații:ali.ma@wecistanche.com

Evaluarea toxicității extractului de flori Dolichandrone serrulata asupra organelor vitale și de reproducere la șobolani masculi adulți

C. Chaimontria şi S. Iamsaard

Abstract

Cu toate căFloarea Dolichandrone serrulataS-a demonstrat că extractul apos (DSF) posedă proprietăți farmacologice, toxicitatea sa sistemică trebuie încă evaluată. Prezentul studiu și-a propus să investigheze efectul de toxicitate sub-cronică al DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extract asupra parametrilor biochimici și structurilor histologice aleficat, rinichi, testicul. iar epididimul plus canalul deferent. La șobolani masculi adulți li s-a administrat DSF (Floarea Dolichandrone serrulata) la 100.300 și 600 mg/kg BW prin gavaj oral timp de 48 de zile consecutive, în timp ce controlul a primit apă distilată. La sfârșitul experimentului, sânge.ficat, rinichi, testicul și epididim plus probe de canal deferent au fost colectate pentru a determina orice modificări ale componentelor biochimice ale serului, inclusiv nivelurile de ALT, ALP și creatinina și structurile histologice. Rezultatele nu au evidențiat nicio diferență semnificativă în greutatea corporală și consumul de alimente sau apă între control și DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)-grupuri tratate. S-a constatat că DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)crește semnificativ greutatea epididimului plus canalul deferent, în timp ce celrinichișificata arătat o scădere în grupul cu doză mare (P walue< 0.05).="" histological="" changes="" in="" these="" vital="" and="" reproductive="" tissues="" including="" fibrosis="" were="" not="" observed="" after="" administration="" but="" alt,="" alp,="" and="" creatinine="" levels="" were="" significantly="" altered="" in="" the="" treated="" groups(pwlue="" <="" 0.051.="" these="" altered="" levels.="" however,="" were="" still="" within="" normal="" ranges="" in="" conclusion,="" these="" findings="" demonstrated="" that="" d.serulata="" flower="" extract="" had="" no="" sub-chronic="" toxicity="" on="" vital="" and="" reproductive="" structures="" but="" slightly="" altered="" some="">funcțiile ficatului și rinichilor.

Faceți clic pe Cistanches și Cistanche pentru boli de rinichi

Cuvinte cheie:Dolichandroneserrulata, ficat, rinichi, testicule, epididim.

1. Introducere

Folosirea plantelor medicinale pentru tratamentul bolilor este o tradiție de lungă durată. Potențialele proprietăți medicinale ale plantelor depind de tipurile și cantitățile compușilor lor chimici. Se știe că fiecare parte a plantelor medicinale individuale are compuși diferiți. În plus, tipul și cantitatea de substanțe pot varia în funcție de alți factori, cum ar fi specia de plante, mediul de plantare și perioada de recoltare (Sringeunyuan și Hongwiset, 1990). În prezent, guvernul Thailandei promovează utilizarea plantelor și ierburilor medicinale, care sunt considerate alternative medicinale la îngrijirea medicală modernă (Sringeunyuan și Hongwiset., 1990), dat fiind că produsele vegetale sunt în mare parte netoxice. Mai mult, tratamentele pe bază de plante provin din cunoștințele locale în medicina tradițională thailandeză. Khae Na sauDolichandrone serrulata(saufloare D.serrulata(DSF)) este o plantă medicinală veche despre care s-a considerat în mod tradițional că are multe proprietăți farmacologice (Sriprasert, 2016). Majoritatea părților (floare. păstaie. scoarță. și rădăcină) acestei plante sunt utile și sunt consumate pentru numeroasele lor proprietăți farmacologice (Sriprasert, 2016; Kiratipaiboon și colab., 2012). Un studiu actual a relevat efectul protector al DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)împotriva afectarii reproducerii la șobolani diabetici (Yannasithinon și colab., 2021). Studii biologice ale extractului metanolic de DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)și-a demonstrat activitățile antioxidante promițătoare (Phanthong și colab., 2015). S-a constatat că DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractele conțineau șase compuși, inclusiv haleronă, acid protocatecuic, rengyolone, cleroindicină B, în interior și izomaltoză (Phanthong și colab., 2015). Mai mult, un studiu anterior a evaluat profilurile fitochimice și activitățile biologice ale DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extracte etanolice (Sriprasert, 2016). Studiile fitochimice ale extractelor etanolice din această plantă au evidențiat metaboliți secundari, cum ar fi flavonoide, cumarine, saponine, taninuri, terpenoide, steroizi și glicozide cardiace (Sriprasert, 2016). Recent, extractul apos de DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)sa raportat că are capacitate antioxidantă și monoterpenoide, cum ar fi rengyolone și cleroindicina B (Chaimontriet al., 2021). Cu toate acestea, unele plante legate de acest D. serrulata s-au dovedit a fi toxice pentru organele vitale și de reproducere. De exemplu, extractul apos de P.alliaceum, extras cu etanol într-un studiu de toxicitate acută, a redus capacitatea globulelor albe (Granados-Echegoyenet al., 2015). Anterior, Aba și Amadi (2019) au raportat că extractul de fructe de A. carambola ar putea afecta țesuturile hepatice și renale. În plus, s-a descoperit că ginseng-ul solar ar putea modifica parametrii serici din sânge, inclusiv nivelurile de ALT, ALP și creatinina, ceea ce indicădisfuncții hepatice și renale(Kim et al. 2013). Mai mult, Azu et al. (2010) au raportat că doze mari de extract de fructe K. Africana ar putea inhiba spermatogeneza. Sa observat că consumul continuu de produse vegetale recente pe o perioadă îndelungată poate afecta organele vitale și de reproducere (Kiratipaiboon și colab., 2012; Freitas și colab., 2013; Joshi și colab., 2011; Karnati și colab., 2013; Lee și colab., 2013; 2012). Deși DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)a fost consumat de mult timp, efectele toxice ale extractului său apos asupraficat, rinichi, testiculul și epididimul nu au fost încă evaluate. Pentru a ne îmbunătăți înțelegerea acestei întrebări, prezentul studiu a căutat să investigheze toxicitatea sub-cronica a DSF. (Floarea Dolichandrone serrulata)extracte pe organele vitale și de reproducere pentru a determina posibilitatea de a consuma în siguranță această substanță pe perioade îndelungate.

Floarea Dolichandrone serrulata(DSF)

2. Materiale și metode

2.1.Animale

Patruzeci de șobolani Sprague-Dawley masculi adulți (120-150g) au fost achiziționați de la Nomura Siam International, Bangkok, Thailanda. Animalele au fost ținute în cuști din oțel inoxidabil în condiții experimentale de cameră (ciclu lumină/întuneric de 12 ore, temperatură 23±2 grade, umiditate 40-60 procente, sunet<85 decibels,="" and="" light="" intensity="" approximately="" 350-400="" lux)in="" the="" northeast="" laboratory="" animal="" center,="" khon="" kaen="" university,="" thailand.="" this="" experimental="" study="" was="" approved="" by="" the="" animal="" ethics="" committee="" research="" of="" northeast="" laboratory="" animal="" center="" khon="" kaen="" university.="" the="" code="" of="" this="" animal="" ethic="" is="">

2.2. Colectarea și prepararea florii D.serrulata

Specimenele de plante de Khae Na proaspăt au fost colectate din subdistrictul Ban Thum, districtul Mueang, provincia Khon Kaen, Thailanda și autentificate de Assist. Prof. Dr. Pimwadee Pornpongrungrueng, Departamentul de Biologie, Facultatea de Științe, Universitatea Khon Kaen (probe de D.serrulata, păstrate în Herbarul KKU cu un număr de S.lamsaard02). În extracție, DSF uscat (Floarea Dolichandrone serrulata)a fost tăiat în bucăți mici înainte de a fi înmuiat și fiert în apă distilată la 90-95 grade timp de 40 de minute. DSF apos (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul a fost liofilizat folosind liofilizatorul (M-00359-1/57,13-1011-18-2019, Labconco, Becthai Scientific Industry, Thailanda). Randamentul procentual al extractului DSF brut a fost de 40,78 la sută. Acest extract a fost obținut de la Dr. Sitthichai lamsaard, așa cum a fost descris anterior în detaliile extracției (Chaimontri și colab., 2021; Yannasithinon și colab., 2021).

2.3. Design experimental

După aclimatizare timp de 7 zile, șobolanii masculi au fost împărțiți aleatoriu în 4 grupuri (10 șobolani per grup), inclusiv control, DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)100, DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)300 și DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)600 de grupuri, respectiv. DSF-ul (Floarea Dolichandrone serrulata) dozele de extract au fost calculate pe baza dozei maxime de consum de DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)la o persoană cu o greutate medie de 60 kg. Pe scurt, doza de 600 mg/Kg BW a fost calculată din capacitatea de consum de 40 de flori/zi/persoană. Raporturile proporționale dintre dozele medii (300 mg) și cele mai mici (100 mg) au fost calculate de la 600 mg. Pentru DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)grupurile tratate, șobolanii au fost tratați cu DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)-extract dizolvat în apă distilată (DW) în doze de 100, 300 și, respectiv, 600 mg/kg BW, prin gavaj oral. Animalelor din grupul de control li sa dat doar DW. Greutățile lor corporale au fost înregistrate zilnic în timpul administrării timp de 48 de zile consecutive.

2.4. Analiza biochimică

La sfârșitul experimentului, toți șobolanii au fost anesteziați cu tiopental de sodiu (60 mg/kg BW prin ip) înainte de eutanasie prin dislocare cervicală. După deschiderea peretelui toracic, sângele a fost colectat prin puncție cardiacă și centrifugat la 12,000 r/minut timp de 10 minute la 4 grade, folosind microcentrifugă (Microfuge 22R Centrifuge, Beckman Coulter TM, SUA) pentru a separa celulele sanguine. din ser. Serul de sânge a fost trimis imediat la unitatea de imunologie, Spitalul Srinagarind, Facultatea de Medicină, Universitatea Khon Kaen, Thailanda pentru determinarea azotului ureic din sânge (BUN) și creatininei (pentrurinichifuncțiiși albumină, aspartat aminotransferază (AST), alanin aminotransferază (ALT) și fosfatază alcalină (ALP) (pentru funcțiile hepatice). Nivelurile biochimice au fost determinate prin utilizarea unui imunotest electrochemiluminiscență (Roche Diagnostics) cu Cobas și analizor imunitar (Roche Diagnostics, Mannheim, Germania).

2.5. Studiul histologic al organelor vitale

După recoltarea sângelui,ficat, rinichi, iar organele de reproducere, inclusiv testiculele și epididimul, au fost colectate și cântărite rapid. Toate țesuturile au fost fixate cu soluție de fixare cu formol 10% timp de 72 de ore. Apoi, au fost prelucrate pentru secțiuni de rutină cu parafină și colorate cu coloranți tricromi Masson pentru a investiga dezvoltarea fibrei de colagen. Pe scurt, secțiunile de țesut au fost deparafinate cu xilen și rehidratate cu alcooli descendenți în serie. Apoi, secțiunile au fost scufundate în soluția lui Bouin și colorate cu hematoxilină de fier Weigert. Ulterior, secțiunile au fost colorate cu trusele de colorare tricrom Masson (nr. catalog HT15, Sigma-Aldrich, Inc, SUA). În cele din urmă, secțiunile au fost spălate cu acid acetic 1%. Modificările histologice ale organelor vitale și ale organelor de reproducere au fost observate și fotografiate de microscopul luminos Nikon ECLIPSE E200 echipat cu o cameră digitală DXM1200.

2.6. analize statistice

Toate datele au fost exprimate ca medie ± abatere standard (SD). Pentru a compara diferențele dintre cele patru grupuri, au fost utilizate comparații multiple Post Hoc pentru date distribuite în mod normal, iar diferențele de date au fost efectuate prin utilizarea One Way ANOVA folosind programul SPSS statistics 19.0.2software(pachet statistic pentru Social Sciences, versiunea 19.0.2, SPSS Inc, Armonk, New York, SUA instalată de la KKUSoftware Center, Khon Kaen University) pentru analiza datelor. Programul SPSS a fost folosit pentru a examina diferența semnificativă dintre grupuri. Valoarea p<0.05 was="" considered="" a="" significant="">

3. Rezultate

3.1. Efectul extractului de flori D.serrulata asupra greutății corporale și asupra organelor vitale și de reproducere

Corpul mediu și-a schimbat corpul, iar greutatea testiculelor animalelor din grupurile de control și de tratament nu a arătat nicio diferență semnificativă. În schimb, greutatea epididimului plus canalul deferent în DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)Grupul tratat 600 a fost semnificativ crescut în comparație cu grupul de control. Aportul de apă și consumul de hrană pentru toate animalele nu au prezentat variații semnificative (Tabelul 1). Interesant este că ponderile relative alerinichisi ficatîn DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)300 și 600 de animale tratate au fost semnificativ scăzute în comparație cu martor (P < 0,05).

Tabelul 1. Comparații ale greutății corporale, testiculelor, epididimului plus canalele deferente, rinichilor și ficatului între control și DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)-sobolani tratati dupa 48 de zile de studiu de toxicitate subcronica.

3.2. Efectul extractului de flori D.serrulata asupra parametrilor biochimici

După analizele serului, parametrii biochimici care indică funcția hepatică au arătat că DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)a scăzut semnificativ nivelul alanin aminotransferazei (ALT) și al fosfatazei alcaline (ALP) comparativ cu grupul de control (P<0.05, table="" 2).="" by="" contrast,="" creatinine="" levels="" which="">functia rinichilor, din DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)100 și DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)300 de grupuri au fost semnificativ crescute în comparație cu grupul de control (P<0.05, table="" 2).="" interestingly,="" no="" difference="" in="" renal="" function="" was="" indicated="" by="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" albumin,="" and="" blood="" urea="" nitrogen(bun)levels="" in="" all=""> (Floarea Dolichandrone serrulata)s-au observat grupurile tratate.

Tabelul 2. Comparații ale nivelurilor parametrilor biochimici din ser între șobolanii de control și cei tratați după 48 de zile de studiu de toxicitate sub-cronică

3.3. Efectul extractului de flori D.serrulata asupra dezvoltării fibrelor de colagen în testicul, epididimul caudal, rinichii și ficatul șobolanilor

Secțiunile de țesut ale testiculului, epididimul caudal,rinichi, si ficatcolorați cu tricomul Masson nu au arătat nicio diferență în grosimea fibrei de colagen între grupurile de control și cele tratate, așa cum se arată în figurile 1-4. În schimb, fibre de colagen și fibroblaste abundente au fost găsite la lamina bazală de sub epiteliul seminifer (săgețile albastre din Figura 1). În plus, epididimul caudal prezintă fibre fine de colagen împreună cu peretele tubular și spațiile intertubulare (stelele negre din Figura 2). ). În rinichi, fibrele de colagen sunt prezente în membrana bazală a tubilor renali și în spațiul lui Bowman (săgeți albastre din Figura 3). Mai mult, țesutul hepatic al tuturor grupelor a arătat o cantitate mică de fibre de colagen care înconjoară triada portală care conține artera hepatică, vena portă și canalul biliar (săgeți albastre din Figura 4).

Figura 1. Histologia reprezentativă a testiculelor colorate cu tricomul Masson de control: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) și, respectiv, DSF600 (D). Săgeți roșii=fibre de colagen; SG=spermatogonie; RS=spermatidă rotundă.	Figura 2. Histologia reprezentativă a epididimului caudal colorat cu tricomul Masson de control: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) și, respectiv, DSF600 (D). Stele negre=fibre de colagen.
Figura 3. Histologia reprezentativă a rinichilor colorați cu tricomul Masson de control: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) și, respectiv, DSF600 (D). Săgeți albastre=fibre de colagen; RT=tubuli renali.	Figura 4. Histologia reprezentativă a ficatului care arată triada portală colorată cu tricomul Masson de control: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) și, respectiv, DSF600 (D). Săgeți albastre=fibre de colagen.

4. Discutie

Acest studiu a arătat că DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul nu a afectatficat, rinichi, și structurile organelor de reproducere după administrare timp de 48 de zile. Cu toate acestea, DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)usor alteratfuncția ficatului și a rinichilor, dar nivelurile lor serice erau încă în intervalul normal, în conformitate cu valorile standard. Sa raportat că doze mari (500 mg/kg BW) din aceeași specie a acestei plante au suprimat producția de spermă (Azuet al., 2010); cu toate acestea, o doză mare de DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)(600 mg/kg BW) nu a modificat greutatea organelor de reproducere sau structurile histologice. Acest rezultat a fost de acord cu un studiu anterior care a arătat o concentrație și o calitate crescută a spermei epididimale după DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)tratament (Chaimontri et al., 2021). Mai mult, DSF a îmbunătățit numărul de spermatozoizi și fiziologia, precum și histopatologia testiculară la șobolanii cu diabet de tip 1 (Yannasithinon și colab., 2021). Împreună cu rezultatele noastre, acele investigații sugerează că DSF apos (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul nu are toxicitate sub-cronică asupra sistemului reproducător masculin. Acest lucru ar putea fi explicat datorită DSF-ului apos (Floarea Dolichandrone serrulata)prezentând activități antioxidante și care conține conținut fenolic total, inclusiv componente terpenoide (Chaimontri et al., 2021). Într-adevăr, în literatură, multe părți din D.serrulata extrase cu etanol sau metanol s-au dovedit, de asemenea, că au capacități antioxidante și substanțe precum alcaloizi, flavonoide, glicozide, compuși fenolici, saponine și taninuri (Chatchanayuenyong și Sujayanont, 2020; Khaing). și colab., 2018; Kiratipaiboon și colab., 2012; Sinaphet și colab., 2006; Sittiwet, 2009). Aceste capacități antioxidante ale DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)ar putea scădea nivelurile ridicate ale glicemiei rapide (FBG) și malondialdehida testiculară (MDA) cu niveluri crescute de testosteron la șobolanii tratați cu DM de tip 2 (Yannasithinon și colab., 2021).

Studiile anterioare au raportat toxicitatea multor substanțe, inclusiv extracte de plante asupra depozitelor de fibre de colagen din testiculul diabetic (Ismail și colab. 2017), epididimul hipertensiv (Mazen și Zidan, 2017), distribuția celulelor stelate hepatice (Nishimura și colab., 2012; Towne). et al., 2015) șiboală cronică de rinichipacienți (Allon și colab., 2019). După cum sa demonstrat în acest studiu recent, intensitatea fibrelor de colagen prezente în testicul, epididimul caudal, ficat și țesuturile renale colorate cu tricromul Masson, nu arată nicio diferență între control și DSF. (Floarea Dolichandrone serrulata)grupuri de tratament. Aceste rezultate au indicat că DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul nu a indus fibroză histopatologică, a acumulat fibre de colagen, în țesuturile vitale și reproductive. Aceste rezultate au sugerat că consumul de DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul pentru o perioadă subcronică nu a provocat fibroză la nivelul organelor reproductive sau vitale. Sa remarcat că grosimea capsulei lui Bowman printre DSF (Floarea Dolichandrone serrulata) grupurile tratate nu au prezentat modificări evidente în comparație cu grupul de control. În plus, greutățile acelor organe nu au fost semnificativ diferite între grupuri, ceea ce a fost de acord cu un studiu anterior care a observat șoareci tratați pentru o perioadă de toxicitate acută (Katisart și Konsue, 2019).

Ficat și rinichimicrostructurile nu au prezentat modificări evidente după DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)administrare în orice doză. Cu toate acestea, funcțiile lor au fost ușor modificate din cauza nivelurilor scăzute de ALT și ATP, în timp ce nivelurile de creatinine au fost semnificativ crescute. Astfel de modificări funcționale ar putea fi explicate prin activitatea saponinei găsite în DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extract brut așa cum este descris într-un studiu anterior (Kiratipaiboon et al. 2012). Acest mecanism poate fi similar cu cel observat în tratamentul cu ginseng solar, al cărui conținut de saponină a dus la modificări ale parametrilor serului sanguin legați de ficat șirinichifuncţiecum ar fi nivelurile de ALT, ALP și creatinina (Kim et al.2013). Cu toate acestea, astfel de modificări fiziologice nu au fost suficiente pentru a afecta grav ficatul șirinichistructurilor. După cum se arată în Tabelul 2; parametrii biochimici din serul sanguin din DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)grupurile tratate au fost modificate în comparație cu cele ale martorilor, cu toate acestea, nivelurile lor erau încă în limite normale, inclusiv ALT[{{0}}U/L], ALP 62-230 U/L] și creatinina [0.2-0.5 mg/dl așa cum a fost raportat anterior într-un model animal (Hayakawa și colab., 2013; Pereira și colab., 2017). Ca o limitare a studiului, alte substanțe toxice în DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)și markerii apoptotici din țesuturi trebuie investigați în continuare pentru a determina siguranța lor pentru utilizare și consum pe perioade lungi.

5. Concluzie

Acest studiu a demonstrat că DSF apos (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul de flori nu a avut toxicitate asupra organelor vitale și a țesuturilor reproductive masculine, dar a produs modificări ușoare ale unor parametri pentruficat șirinichifuncţie.

6. Perspective de viitor

Pe baza constatărilor acestui articol, siguranța DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)a fost demonstrat consumul pe perioade îndelungate pentru microstructurile renale și hepatice. Mai exact, DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul este dovedit a fi netoxic pentru testicul și epididim. Sper, DSF (Floarea Dolichandrone serrulata)extractul poate fi dezvoltat în continuare ca supliment alimentar pentru sănătatea reproductivă masculină.

Referințe

1. ABA, PE și AMADI, AU, 2019. Evaluarea posibilelor potențiale hepatotoxice și nefrotoxice ale extractului de suc de carambolă de Averrhoa la femelele de șobolan albinos. Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology,vol.31,nr.1.https:// doi.org/10.1515jbcpp-2019-0042.PMid:31536032.

2. ALLON,M.,LITOVSKY,SH,TEYJ,SUNDBERG,CA.,ZHANG,Y,CHEN, Z.,FANG,Y.,CHEUNG,AK.și SHIU,YT,2019.Anomalii ale histologiei vasculare și ale configurației fibrelor de colagen în pacientii cu avansatiboală cronică de rinichi.The Journal of Vascular Access, vol. 20, nr.1, pp.31-40.http://dx. doi. org/10.1177/1129729818773305.PMid:29742957.

Notă:cele de mai sus nu sunt o listă completă de referință